星点设计—效应面法优化苦参方的醇提工艺

目的优化苦参方的乙醇提取工艺。方法以乙醇浓度、溶剂倍量、提取时间为自变量,以K(苦参碱与氧化苦参碱总和)提取率及干膏得率的总评"归一值"为因变量,通过对自变量各水平进行多元线性回归及二项式拟合,选择合适的拟合方程模型,采用效应面法优选最佳工艺,并进行预测分析。结果最优提取工艺条件为8倍量65%乙醇,提取2次,每次2.5 h,总评"归一值"实测值与预测性偏差为-2.26%,二项式拟合复相关系数R2=0.949 9。结论星点设计-效应面法优选的提取工艺稳定可行,预测性良好。     

超滤-纳滤联用优化益母草生物碱的浓缩工艺

采用超滤-纳滤联用技术浓缩益母草中生物碱,通过响应面法建立二次回归模型,优化浓缩工艺。实验表明通过超滤预处理,益母草水提液中总蛋白去除率94.38%,纳滤技术相较于传统热浓缩优势明显,益母草生物碱的最佳浓缩工艺为截留相对分子质量450,p H 3.07,盐酸水苏碱质量浓度80.15 mg·L-1,总生物碱质量浓度285.73 mg·L-1,在此条件下,盐酸水苏碱和总生物碱的截留率分别为93.37%,95.85%,相对误差为0.79%,1.16%,Box-Behnken试验设计方法可以用于益母草生物碱的浓缩工艺优化,纳滤浓缩为热敏性中药成分的分离精制提供技术支撑。     

响应面分析法优化慢性湿疹搽剂提取工艺

目的优选慢性湿疹搽剂的提取工艺参数。方法以不同提取方法所得样品溶液的固体得率和苦参碱的量的综合评分为考察指标,通过响应面分析法对慢性湿疹搽剂提取工艺参数进行优选。结果加水量、提取时间、提取次数对提取工艺考察指标具有显著性影响,结合单因素优化实验与生产实际,慢性湿疹搽剂最佳提取工艺为加水倍数12倍,提取时间130 min,提取次数3次。结论通过响应面分析建立的模型能很好地预测慢性湿疹搽剂的提取效果,且建立的工艺稳定、提取率高、重现性好。     

Box-Behnken响应面法优化川芎水提液纳滤工艺

目的通过Box-Behnken响应面法优化川芎Ligusticum chuanxiong Hort.水提液纳滤工艺。方法在单因素试验基础上,以纳滤膜截留分子量、提取液质量浓度、p H值为影响因素,阿魏酸截留率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化工艺。结果最佳条件为纳滤膜截留分子量100 Da,提取液质量浓度20.58μg/m L,p H值7.69,阿魏酸截留率达93.00%,与实测值(91.23%)接近。结论该方法合理可行,可用于纳滤川芎水提液。     

响应面分析法优化牛蒡根多糖提取工艺

目的:优化牛蒡根多糖的提取工艺.方法:采用水提醇沉法提取多糖,以多糖得率为考察指标;采用响应面分析法研究影响牛蒡根多糖测定的因素,以多糖提取率为响应值作响应面和等高线.结果:牛蒡多糖提取工艺的最佳条件为料液比1∶14.43,浸提温度84.85℃,浸提时间3.81 h.此条件下,牛蒡多糖的提取率为6.16％.结论:该优选工艺稳定、可行.     

响应面分析法优化石香薷总黄酮提取工艺研究

目的:确定石香薷总黄酮的最佳提取工艺条件。方法:以乙醇回流提取法提取石香薷总黄酮。采用分光光度法测定总黄酮的含量,以总黄酮提取得率为考察指标,考察溶媒浓度、倍数、提取时间、提取次数等因素对石香薷总黄酮提取得率的影响,利用响应面分析法优化提取工艺,确定总黄酮的最佳提取工艺。结果:石香薷总黄酮的最佳提取工艺为:加药材33倍量的60%乙醇,于90℃水浴回流提取1次,每次2.2h。此工艺下小鱼仙草总黄酮的提取得率达37.85 mg/g。结论:该工艺提取得率高、操作简便,易于工业化大生产。     

响应面分析法优化金银花的纳滤浓缩工艺

目的:利用响应面分析方法对金银花的纳滤浓缩工艺进行优化。方法:以绿原酸截留率为指标,在明确压力、温度、平衡体积等因素影响的基础上,采用Box-Behnken中心组合设计建立数学模型,考察截留分子量、浓度、pH,得出各因素对绿原酸截留率的影响程度。结果:金银花纳滤浓缩的最佳工艺为:纳滤膜截留分子量450 Da,pH5.70,药液浓度59.98μg/mL,绿原酸理论截留率为98.70%,实测截留率为96.74%。结论:Box-Behnken试验设计方法可以用于金银花浓缩工艺优化,为热敏性中药成分的纳滤浓缩提供基础。     

响应面分析法优化白苏中总黄酮的超声提取工艺

目的:确定白苏总黄酮的最佳提取工艺条件。方法:以白苏总黄酮提取率为指标,采用响应面分析法优化超声提取工艺条件,考察乙醇浓度、固液比、提取次数等三因素对白苏总黄酮提取率的影响。结果:白苏总黄酮最佳提取工艺条件为,加60%乙醇超声提取4次,每次18 min,固液比为1∶15,总黄酮提取率为24.65 mg/g。结论:超声法对白苏总黄酮有较好的提取作用,工艺简单,易于工业化大生产。     

Box-Behnken响应面分析法优化乌苏里瓦韦中绿原酸提取工艺

目的:优选乌苏里瓦韦中绿原酸的提取工艺。方法:在单因素试验基础上,选取料液比、乙醇体积分数、提取时间为自变量,绿原酸提取量为响应值,根据Box-Benhnken试验设计原理,利用响应面分析法优化乌苏里瓦韦中绿原酸的醇提工艺。结果:最佳提取工艺为加68倍量75%乙醇提取2次,每次41 min;绿原酸提取量达8.26 mg·g-1,与理论预测值8.47mg·g-1偏差较小。结论:醇提法与传统工艺比较,具有提取率高、能耗少、时间短和低成本等特点。优选的工艺稳定可行,为乌苏里瓦韦的工业化生产提供参考。     

响应面分析法优化川芎藁本内酯提取工艺的研究

目的优选川芎藁本内酯提取工艺条件。方法在单因素试验的基础上,选取提取温度,乙醇浓度和提取时间3个因素进行Box-Benhnken中心组合设计,利用响应面分析法对藁本内酯提取工艺参数进行优化。结果川芎藁本内酯最佳提取工艺为:提取温度88.87℃,含乙醇量70.72%,提取时间2.32 h,料液比1∶25,提取2次,藁本内酯理论质量分数可达6.87 mg/g,实际测得平均值为6.83 mg/g,与理论值较为接近。结论 Box-Behnken设计结合响应面分析法优选川芎中藁本内酯的提取工艺,预测性好;优选工艺提取效率高。     

苦参开花和授粉生物学特性的研究

目的 研究苦参开花和授粉特性,以及小花发育的特点。方法 通过形态学观察,结合花粉活力和柱头可授性等生理活性的测定,研究苦参开花和授粉习性。结果 根据花器官的形态和生理活性变化,把苦参的小花发育分为S1～S7阶段。在S3～S5阶段,花朵尚未开放时,花粉和柱头逐渐发育成熟,具有活力且柱头的发育滞后于花粉的发育;在S6阶段之后,小花开放,花药迅速失活,但是柱头继续伸长并维持活力。小花开放后的72 h内,花粉保持较高活力。柱头活力在9：00最高。结论 苦参的柱头和花粉在花蕾开放前已具有生理活性且花粉已经释放,显示出典型的闭花授粉特征,但是花蕾开放之后,柱头继续伸长,并保持活性,表明也有异花授粉的特征,这对苦参种子生产、遗传资源保存、杂交育种等具有重要的理论指导意义。     

苦参水提物激活Nrf2/HO-1信号通路抑制炎症和氧化应激机制研究

目的研究苦参水提物(WSF)抑制脂多糖(LPS)诱导大鼠巨噬细胞RAW264.7炎症和氧化应激的分子机制。方法采用CCK-8法检测WSF对RAW264.7细胞的最佳给药质量浓度;以LPS刺激RAW264.7细胞制备体外炎症模型,随机分为对照组、模型组、WSF组和WSF对照组,流式细胞术检测活性氧(ROS)及一氧化氮(NO)水平,通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)在分子水平上的变化;最后检测细胞培养上清中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10的含量。结果通过CCK-8实验确定WSF质量浓度为0.01 mg/mL对细胞无毒性。与对照组比较,LPS刺激能够显著地增加细胞中NO和ROS产生,IL-6和TNF-α水平也明显升高,iNOS和COX-2蛋白表达水平明显提高(P0.01、0.001),而Nrf2和HO-1蛋白表达水平降低(P0.05)。与模型组比较,WSF干预后细胞NO、ROS、IL-6和TNF-α水平显著降低,iNOS和COX-2蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01、0.001),Nrf2和HO-1蛋白表达水平和IL-10水平显著升高(P0.05、0.01、0.001)。结论 WSF可通过激活Nrf2/HO-1通路在LPS诱导的RAW264.7细胞炎症和氧化应激反应中发挥保护效应。     

苦参提取工艺优选

目的:优选苦参提取工艺参数。方法:以苦参总生物碱和干膏率为考察指标,单因素试验考察提取溶媒、溶媒pH;采用正交试验法,选取溶媒用量、提取时间、提取次数为考察因素,以苦参总碱总量和固含物总量的总权重为考察指标,优选苦参提取工艺。结果:优选的提取工艺为加0.2%盐酸溶液提取3次,每次加6倍量溶媒,每次提取2 h。结论:该优选工艺稳定可行,可用于苦参的工业化提取。     

基于UPLC-MS/MS的苦参总黄酮自微乳大鼠体内药动学研究

目的建立超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)同时测定大鼠血浆中苦参酮(Kur)、槐属二氢黄酮G(SFG)和异黄腐醇(Iso)3个成分的分析方法,研究苦参总黄酮(TF)及苦参总黄酮自微乳(TF-SMEDDS)在大鼠体内的药动学过程和药动学参数。方法色谱柱采用ACQUITY UPLC~?HSST3C18,流动相为乙腈-0.1%甲酸水梯度洗脱,体积流量0.2m L/min,待测血浆样品采用醋酸乙酯液-液萃取法制备。电喷雾离子化电离源(ESI)以多反应离子监测(MRM)模式进行负离子方式检测,芦丁为内标(IS),DAS 2.0软件处理数据。结果 TF提取物中Kur、SFG、Iso分别在(0.02～1 600.00)、(0.015～1 200.000)、(0.01～800.00)ng/m L有良好的线性关系(r2均大于0.995 9);精密度、准确度、平均提取回收率以及基质效应等均符合生物样品分析要求。TF给药后,Kur、SFG和Iso的半衰期(t1/2z)分别为(7.04±2.46)、(4.54±2.13)、(4.73±1.67)h,药时曲线下面积(AUC0～∞)分别为(3 469.57±555.37)、(2 524.48±425.83)、(1 006.47±85.46)ng·h/mL;TF-SMEDDS给药后,Kur、SFG和Iso的t1/2z分别为(13.10±2.67)、(11.47±4.17)、(12.67±4.97)h,AUC0～∞分别为(13 002.49±2 498.09)、(8 070.80±2 264.62)、(3 918.85±429.76)ng·h/mL。TF-SMEDDS中Kur、SFG和Iso的相对生物利用度分别为374.76%、319.70%、389.37%。结论所建立的UPLC-MS/MS分析方法可用于苦参中3个成分在大鼠体内药动学研究,制成自微乳后能够显著提高TF在大鼠体内的生物利用度。     

苦参不同组织中生物碱类成分的LC-MS分析

目的 通过对苦参Sophora flavescens不同组织样品中生物碱类成分的LC-MS分析,探讨苦参中生物碱类成分的质谱裂解规律及其在不同样品中的异同。方法 首先利用UPLC-Q-Exactive-OrbitrapMS对5年生苦参根中的生物碱类成分进行全面的鉴定分析。再利用UPLC-QQQ-MS/MS技术,对苦参无菌幼苗不同组织部位（根、茎、叶）、苦参愈伤组织中的生物碱类成分进行定量分析,比较各样品中生物碱类成分的异同。结果 从5年生苦参根中共鉴定出47个生物碱类成分;利用UPLC-QQQ-MS/MS对其中17个主要的生物碱类成分进行了定量分析,发现不同苦参样品中生物碱类成分差异明显,其中苦参无菌幼苗各组织部位中生物碱的含量相对较高。结论 建立了一种苦参生物碱类成分快速定性定量分析方法,从5年生苦参根中快速鉴定出47种生物碱;通过对苦参不同组织样品中17个生物碱类成分的定量分析,为后续利用比较转录组测序技术,挖掘并鉴定苦参中生物碱类成分生物合成关键酶的研究奠定基础。     

苦参提取物的质量标准研究

作为2015年版《中国药典》科研任务的一部分,拟建立新增品种苦参提取物的质量标准.参照《中国药典》2010年版附录相关方法,对不同批次苦参提取物的水分、灰分进行测定;以三叶豆紫檀苷、槐属二氢黄酮G、氧化苦参碱和氧化槐果碱为指标,采用薄层色谱法进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱与槐果碱的含量;以槐属二氢黄酮G为指标,采用紫外分光光度法测定总黄酮的含量.结果表明薄层色谱斑点清晰,分离度好;苦参提取物中含氧化苦参碱、苦参碱、氧化槐果碱和槐果碱的质量分数分别为3.87%~11.1%,0.970%~4.33%,1.30%~2.59%,0.260%~1.14%,含总黄酮的质量分数为3.88%~7.93%.首次建立的苦参提取物质量控制方法重复性好,起草的质量标准可行,能够用于苦参提取物及其制剂的质量控制.     

HPLC测定苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱的含量

目的：建立用HPLC同时测定苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱的含量测定方法。方法：用氨基键合柱，以乙腈-3％磷酸溶液-无水乙醇（80：10：10）为流动相，检测波长：220nm。结果：苦参碱在0．050-0．61μg范围内有良好的线性关系，氧化苦参碱在0．372-4．464μg范围内有良好的线性关系。结论：山西黎城、山西左权、山西临汾和陕西太白苦参药材中氧化苦参碱含量较高，均大于3．0％，各地药材的苦参碱含量差异不大。     

苦参根中化学成分及其体外抗肿瘤活性研究

目的 研究苦参Sophora flavescens根的化学成分及其体外抗肿瘤活性.方法 利用大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、ODS柱色谱及半制备型HPLC等进行分离纯化,结合理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构;评估了从苦参根提取物中分离得到的11个化合物对人乳腺鳞状癌HCC1806细胞,人乳腺癌MCF-7细胞,宫颈癌HeL...     

妇舒保凝胶中黄柏、苦参的提取工艺优选

目的:优选妇舒保凝胶中黄柏、苦参的提取工艺。方法:以出固率和盐酸小檗碱、苦参碱的得率为指标,单因素试验考察水煎煮法、乙醇回流法及乙醇渗漉法对黄柏、苦参提取效率的影响;选取乙醇体积分数、乙醇用量、提取次数、提取时间为考察因素,采用正交试验优选妇舒保凝胶中黄柏、苦参的提取工艺。结果:选择乙醇回流法进行提取,最佳提取工艺为加8倍量50%乙醇提取3次,每次1.5 h,总生物碱得率约2.47%。结论:该优选工艺稳定可行、重复性良好,为妇舒保凝胶中有效成分的提取提供试验依据。     

苦参黄酮抑制血管新生活性成分的虚拟筛选

血管新生是一个动态的、多步骤的过程,现在已知大约70种疾病与血管新生紊乱相关。作者前期研究及文献报道均表明苦参黄酮类成分有明显抑制血管新生的作用,但其药效物质基础和作用机制尚未明确。该研究应用分子对接技术虚拟筛选苦参黄酮抑制血管新生的药效物质,搜集现已分离鉴定的126个苦参黄酮类化合物组成配体数据库,选择VEGF-a,TEK,KDR等6个与血管新生密切相关的靶点组成受体数据库,以DrugBank中对各靶点有抑制作用并已上市的小分子药物为参照,设定各靶点对应的已上市小分子药物最低打分为阈值,应用Discovery Studio 2.5(DS2.5)软件的LibDock模块进行分子对接,虚拟筛选出打分高于阈值且排名前10%的化合物共37个。对比分析了原配体、已上市药物和苦参黄酮作用于各靶点的主要活性位点,初步揭示了苦参黄酮抑制血管新生的作用机制,为研发血管新生抑制剂类药物提供了一定的参考。