反义IGF-I寡核苷酸转染抑制人肝癌细胞生长的实验观察

胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulin like growth factor Ⅰ,IGF-Ⅰ)是一种多效的生长因子,在肿瘤的生长、分化和转移过程中起重要作用[1].肿瘤细胞通过自分泌方式过度产生IGF-Ⅰ,激活IGF-Ⅰ受体,使自身不断生长,因此IGF-Ⅰ成为反义核酸治疗的良好靶分子.利用反义寡核苷酸(ASON)技术人工合成IGF-Ⅰ寡核苷酸片段,脂质体包裹并转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞,可以抑制肿瘤细胞IGF-Ⅰ的过度表达,为IGF-Ⅰ反义核苷酸治疗肝细胞癌提供依据.     

反义VEGF寡核苷酸抑制小鼠肺癌作用的实验研究

目的:观察阳离子脂质体介导反义血管内皮生长因子(VEGF)寡核苷酸对肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用.方法:取肺癌细胞悬液建立小鼠肺癌动物模型后,选择40只随机分成4组,分别为空白对照组、实验对照组、VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组和VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组.治疗结束后行大体、HE染色观察,并观察小鼠营养状况和症状.结果:对照组、VEGF反义寡核苷酸治疗组和VEGF正义寡核苷酸治疗组平均瘤质量分别为(7.14±1.68)、(4.26±1.37)和(7.33±1.56)g,VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为58.2%和7.4%,ASODN组与对照组及SODN组比较差异有统计学意义,x2分别为8.21和8.04,P值均<0.01.结论:阳离子脂质体介导反义VEGF寡核苷酸对小鼠肺癌的生长具有显著抑制作用,未发现明显的毒副反应,阳离子脂质体介导的基因转染技术有望成为治疗癌症的新方法.     

Ⅰ型胰岛素样生长因子受体的反义寡核苷酸对胰腺癌细胞生长的抑制作用

I型胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)是肿瘤治疗特别是基因治疗的良好靶体.本研究首先应用免疫细胞化学SP法检测IGF-1R在体外培养的胰腺癌细胞系SW1990上的表达,然后合成针对IGF-1R的反义寡核苷酸(ASON).所有反     

cFLIP反义寡核苷酸对人肺腺癌SPCA-1细胞作用的探讨

目的:研究脂质体介导的反义寡核苷酸cFLIP对人肺腺癌细胞系SPCA-1凋亡的影响,探讨反义技术选择性封闭目的基因表达进而发挥抗肿瘤作用的机制.方法:用脂质体lipofectamineTM2000将反义寡核苷酸cFLIP(Lipo-ASODN)和无义寡核苷酸cFLIP(Lipo-NASODN)片断导入人肺腺癌细胞系SPCA-1,通过MTT法分别检测细胞生长情况;应用RT-PCR检测cFLIP基因表达,并用Western Blot检测cFLIP蛋白表达,同时原位末端标记(TUNEL)和流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:MTT实验显示浓度为0.5μmol/L时Lipo-ASODN组细胞生长曲线逐渐降低,24h细胞抑制率可达71.52%,显著高于Lipo-NASODN组和Liposome对照组(P＜0.01);转染24h后LipoASODN组RT-PCR可见cFLIP基因表达量明显少于对照组(P＜0.01),Western Blot可见cFLIPS蛋白表达呈下降趋势,但cFLIPL变化不明显;TUNEL检测可见反义寡核苷酸组细胞核内出现阳性染色,流式细胞仪检测可见明显凋亡峰,且其作用呈一定的剂量依赖性.结论:反义寡核苷酸转染SPCA-1细胞后,cFLIPL/S基因与蛋白表达显著下调,表明此途径是cFLIPL/S mRNA基因片段诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一.     

C-myc反义寡核苷酸对结肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响

目的:观察脂质体介导的c-myc正反义寡核苷酸对结肠癌细胞SW480增殖和凋亡的影响.方法:通过脂质体将c-myc反义寡核苷酸转入人结肠癌细胞SW480,western blot动态监测c-myc蛋白的表达情况,MTT法、流式细胞仪测定c-myc正反义寡核苷酸对SW480细胞增殖和凋亡的影响.结果:c-myc反义核苷酸对SW480细胞有明显的促进凋亡和抑制增殖的作用,而正义寡核苷酸没有这样的作用.结论:c-myc反义核苷酸具有明显的抗肿瘤作用,可以抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,可能成为治疗肿瘤的药物.     

胰岛素样生长因子-1受体在恶性肿瘤中的研究进展

胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)是胰岛素样生长因子家族蛋白系统主要成员之一,在人类大部分肿瘤组织中存在过度表达。其在肿瘤形成机制上具有促进肿瘤细胞生长增殖,抑制凋亡的作用,与恶性肿瘤的发生转移有密切关联。本文就IGF-1R在肿瘤中的表达、发生、发展及以IGF-1R作为靶点诊断治疗恶性肿瘤的进展作一综述。     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体肿瘤靶向治疗

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-ⅠR)介导胰岛素样生长因子Ⅰ和胰岛素样生长因子Ⅱ的活性,促进细胞增殖、转化,抑制细胞凋亡,与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。通过抑制 IGF-ⅠR治疗肿瘤已经成为肿瘤治疗的新途径。现从反义分子、小分子酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体等方面综述以IGF-ⅠR为靶点肿瘤治疗的研究现状及进展。     

端粒酶RNA的反义寡核苷酸抑制裸鼠移植瘤生长的研究

背景与目的许多研究已证明:端粒酶的激活在肺癌的发生、发展中具有重要作用,因而成为肺癌基因治疗的重要靶点之一。本研究旨在探讨针对人端粒酶RNA成分的反义寡核苷酸对裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法应用人肺腺癌细胞株A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,18只荷瘤裸鼠随机分为反义寡核苷酸组(Antisense Oligodeoxynucleotide Group,Group ASODN)、正义寡核苷酸组(Sense Oligodeoxynucleotide Group,Group SODN)和生理盐水对照组(Normal Saline Group,Group NS),每组6只,瘤体内分别注射反义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物、正义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物和生理盐水,均为每日1次,共14次,观察移植瘤的生长情况。结果反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组的体积抑瘤率分别是43.94%、6.91%,统计学检验有非常显著性差异(t=6.17,P<0.001)。治疗过程中裸鼠对药物耐受良好,无恶心、呕吐等消化道症状,未见皮下出血,治疗结束时各组裸鼠的体重较治疗开始时略有增加。结论瘤体内注射脂质体包封的端粒酶RNA的反义寡核苷酸能够明显抑制裸鼠体内移植瘤的生长。     

C-myc反义寡核苷酸对结肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响

目的：观察脂质体介导的c—myc正反义寡核苷酸对结肠癌细胞SW480增殖和凋亡的影响。方法：通过脂质体将c—myc反义寡核苷酸转入人结肠癌细胞SW480，western blot动态监测c—myc蛋白的表达情况，MTT法、流式细胞仪测定c—myc正反义寡核苷酸对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果：c—myc反义核苷酸对SW480细胞有明显的促进凋亡和抑制增殖的作用，而正义寡核苷酸没有这样的作用。结论：c—myc反义核苷酸具有明显的抗肿瘤作用，可以抑制肿瘤细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡，可能成为治疗肿瘤的药物。     

反义寡核苷酸-萘二酰亚胺偶联物对多药耐药性肿瘤细胞的抑制作用

目的：针对人表皮癌细胞阿霉素耐药株（KB－A－1）的多药耐药性问题,探讨天然反义寡核苷酸与寡核苷酸－萘二酰亚胺偶联物对多药耐工 肿瘤细胞的抑制作用及mdr1基因表达的影响,方法：利用S－烷基化反应成功地合成了反义寡核苷酸－萘二酰亚胺偶联物,并通过MTT法和ELISA法测定天然反义寡核苷酸与寡核苷酸－萘二酰亚胺偶联物对多药耐药物性肿瘤细胞的抑制作用。结果：作用靶点不同的反义寡核苷酸对KB－A－1细胞生长的抑制能力不同。针对mdr1基因翻译起始区的寡核苷酸片段1－4对KB－A－1细胞细胞生长的抑制率分别为13．34％、14．32％、26．00％和25．37％,其中片段3的效果最好（P＜0．01）。与单独使用反义寡核苷酸相比较,萘二酰亚胺对寡核苷酸的共价修饰 提高了反义寡核苷酸对KB－A－1细胞生长的抑制。凝胶电泳实验结果也表明萘二酰亚胺对寡核苷酸的化学修饰能提高寡核苷酸抵逆解的能力。寡核苷酸及寡核苷酸－萘二酰亚胺偶联物专一性地抑制KB－1－A细胞生长,而对非多药耐药性的KB－3－1细胞株无明显影响,是由于寡核苷酸及寡核苷酸－萘二酰亚胺偶联物选择性地抑制mdr1基因表达所致。ELISA法检测结果表明寡核苷酸寡核苷酸－萘二酰亚胺偶联物可使KB－A－1细胞膜表面的mdr1基因表达产物P-gp量降低,并且寡核苷酸－萘二酰亚胺偶联物P－gp表达的程度比天然片段强烈。结论：反义寡核苷酸可专一性地抑制mdr1基因表达,使多药耐性肿瘤细胞生长受到抑制。寡核苷酸与萘二酰亚胺共价偶联能提高天然反义寡核苷酸抑制多药耐性及抵抗核酸酶降解的能力。     

卵巢癌组织IGF-1表达及其与凋亡和侵袭相关性分析

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达,观察IGF-1反义寡核苷酸对卵巢癌细胞系3AO凋亡及侵袭能力的影响。方法:免疫组织化学方法检测60例卵巢上皮性癌、20例卵巢上皮性交界性肿瘤、20例卵巢良性肿瘤及20例正常卵巢组织中IGF-1蛋白表达;将3AO分为4组,用脂质体介导方法将IGF-1反义寡核苷酸转入其中,流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染色法检测其凋亡,Boyden小室检测其侵袭能力。结果:IGF-1在卵巢上皮性癌组、交界性组、良性组及正常卵巢组的阳性表达率分别为61.6%、25.0%、15.0%和10.0%,上皮癌组与其他3组比较差异有统计学意义,P<0.05;后3组之间比较差异无统计学意义,P>0.05。临床期别晚组及组织分化低组IGF-1阳性表达率为67.4%和81.8%,高于临床期别早组及组织分化高组的35.7%和52.6%,差异有统计学意义,P<0.05。IGF-1的阳性表达与发病年龄、有无腹水无关,≥50岁组阳性表达率为59.8%,<50岁组阳性表达率为54.0%,P>0.05;有腹水组阳性表达率为66.0%,无腹水组阳性表达率为52.0%,P>0.05。IGF-1反义寡核苷酸组卵巢癌细胞的凋亡率为(45.5±0.1)%,与对照组的(16.5±0.4)%比较差异有统计学意义,P<0.05;IGF-1反义寡核苷酸组癌细胞穿透Matri-gel胶的细胞数目为(42±6)个,与对照组的(132±26)个比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:IGF-1表达与卵巢上皮性肿瘤的分期、分化有关,抑制IGF-1的表达能增加卵巢癌细胞凋亡,降低其侵袭能力。     

bFGF反义寡核苷酸对肾癌细胞凋亡的影响

目的: 探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)反义寡核苷酸对肾癌细胞凋亡的影响,以期寻找肾癌反义治疗的合适药物.方法: 以脂质体作为转染载体,将bFGF反义寡核苷酸转染人肾癌细胞系786-0,应用RT-PCR和Western印迹法检测转染bFGF反义寡核苷酸后肾癌细胞中bFGF mRNA及其蛋白的表达,应用流式细胞仪检测转染bFGF反义寡核苷酸后肾癌细胞的凋亡率.结果: 与转染错义寡核苷酸组相比,转染bFGF反义寡核苷酸组786-0细胞中bFGF mRNA及其蛋白的表达有明显下降,且转染bFGF反义寡核苷酸可明显提高786-0细胞的凋亡率(P<0.01).结论: 经bFGF反义寡核苷酸作用后,肾癌细胞bFGF的表达受到了抑制,同时促进了肾癌细胞的凋亡,因此应用bFGF反义寡核苷酸治疗肾癌可能是一种较有希望的肿瘤治疗新方法.     

端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的影响

背景与目的:近年研究表明,端粒及端粒酶与肿瘤发生密切相关。端粒酶反义寡核苷酸直接作用于端粒酶或诱导肿瘤细胞分化均可使端粒酶活性下降,抑制肿瘤生长。而用端粒酶反义寡核苷酸直接抑制端粒酶活性是否可引起肿瘤细胞再分化,尚不清楚。由于端粒DNA重复序列是以端粒酶RNA为模板合成的,因此端粒DNA可以和端粒酶正义寡核苷酸互补结合。这种结合是否也能影响肿瘤细胞的生长,值得研究。本研究正是要探讨端粒酶正义及反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞生长分化的作用。方法:脂质体介导正、反义寡核苷酸转染鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞株,MTT法检测细胞增殖能力,免疫组化法检测细胞角蛋白表达,同时观察细胞形态学变化。结果:端粒酶正义寡核苷酸与反义寡核苷酸一样可抑制CNE1和CNE2Z细胞的生长,且呈剂量和时间依赖性。1.5、3.0、4.5、6.0μmol/L正义寡核苷酸处理CNE1细胞,6h抑制率分别为16.28%、19.38%、22.48%和23.26%,48h分别达26.26%、38.89%、39.90%和38.89%;CNE2Z细胞6h抑制率分别为7.69%、8.24%、18.13%和20.32%,48h分别为28.84%、28.88%、32.89%和31.54%。正、反义寡核苷酸组细胞角蛋白表达显著增加(P<0.01),细胞形态趋向分化成熟。结论:端粒酶正、反义寡核苷酸均可抑制鼻咽癌细胞的生长,并促进细胞分化。     

碱性成纤维细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞凋亡的影响

目的 检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸对肝癌细胞凋亡的影响,探讨bFGF作为肝癌治疗靶点的有效性.方法 以脂质体作为转染载体,转染bFGF反义寡核苷酸于HepG2细胞,用共聚焦显微镜和Western blot方法,检测转染bFGF反义寡核苷酸后肝癌细胞株HepG2中bFGF蛋白的表达,用流式细胞仪检测转染bFGF反义寡核苷酸后HepG2细胞的凋亡率.结果 与转染错义寡核苷酸组相比,bFGF反义寡核苷酸对HepG2细胞中bFGF蛋白表达有明显抑制作用,转染bFGF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 bFGF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,可作为肝癌增敏治疗的有效靶点.     

反义IGF—Ⅱ对人肝癌细胞株HepG2恶生表型的抑制

目的探讨反义胰岛素样生长因子Ⅱ(反义IGF-Ⅱ)对人肝癌细胞株HepG2恶性表型的抑制.方法化学合成人IGF-Ⅱ5'端部分cDNA片段,将其克隆于真核表达载体pcDNA3,通过脂质体介导转人体外培养的HepG2人肝癌细胞,观察细胞生物学特性的改变.结果将反义IGF-Ⅱ转导入HepG2肝癌细胞后,细胞内IGF-Ⅱ表达量减少(荧光强度由19.9±3.1降至6.2±1.8,(P＜0.01),细胞增殖率下降、凋亡率增加(由4.3%±0.50%增加至8.6%±0.50%,(P＜0.01)、AFP分泌水平降低(由5.47μg/l±0.56μg/l降至1.95μg/l±0.10μg/l,(P＜0.01).结论反义IGF-Ⅱ可显著抑制人肝癌细胞恶性表型,对于治疗原发性肝癌可能具有潜在应用价值.     

VEGF反义寡核苷酸治疗小鼠Lewis肺癌的研究

肺癌与其它实体瘤一样,其生长、转移和预后均依赖血管生成,以新生血管为靶点,抑制肿瘤血管生成,阻断肿瘤的营养来源和迁移通道,已成为癌症治疗的新策略.有研究发现,血管内皮生长因子(Vascular en-dothelial growth factor,VEGF)为一高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素,可直接诱导肿瘤血管生成[1].我们利用近年兴起的反义技术,设计VEGF反义寡核苷酸片断,使其特异性封闭肿瘤细胞中的VEGF mRNA,通过研究它对肿瘤细胞合成VEGF及对肿瘤生长的影响,探讨其对肺癌治疗新途径的可能性.     

磁性载药微球联合反义寡核苷酸对人胰腺癌裸鼠模型的疗效观察

目的 探讨辐射促细胞转染的多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因mdr1反义寡核苷酸(ASON)联合5-氟尿嘧啶磁性载药微球(PEG-5-FU-MAMS)治疗裸鼠人胰腺癌的效果.方法 通过构建裸鼠人胰腺癌耐药肿瘤模型基础上,肿瘤局部以2 Gy60 Coγ辐射,瘤内注射阳性脂质体介导的mdr1反义寡核苷酸(ASON),经磁导下利用磁性载药微球(PEG-5-MAMS)联合化疗.结果 联合辐射组与未联合辐射组及对照组肿瘤生长曲线肿瘤生长曲线差异有显著性(P<0.01).联合组能显著抑制肿瘤的生长,联合组肿瘤重量抑制率为85.00%,肿瘤体积抑制率为87.74%.结论 辐射促转染的mdr1ASON联合磁性载药微球对肿瘤细胞具有较好的耐药逆转作用.     

乳腺癌中ErbB/HER家族和胰岛素样生长因子1受体信号转导通路的交互作用

正胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)是受体酪氨酸激酶家族成员,可被胰岛素样生长因子(IGF)1z和2激活,该受体过度活化或信号转导通路增强与乳腺癌的发生发展、化疗和放疗耐药性的产生及预后不良密切相关,目前已被作为治疗乳腺癌的潜在靶点。已有实验证实IGF-1R过表达可诱导小鼠乳腺细胞迅速转化,而当IGF-1R表达下调时,大部分肿瘤细胞可逆转。因此,针对IGF的靶向     

MTT法检测C-FLIP反义寡核苷酸对BGC823细胞的抑制效果

目的探讨脂质体Lipofectamine2000介导下c-FLIP反义寡核苷酸对胃癌细胞系BGC823生长的抑制作用.方法 RT-PCR和Western Blot方法检测c-FLIPL/S的mRNA和蛋白的表达变化;原位末端标记法、流式细胞术检测细胞凋亡;MTT法检测细胞抑制率.结果 Western Blot可见c-FLIPL和c-FLIPS蛋白表达显著下降;反义寡核苷酸作用细胞36 h后,TUNEL检测可见明显阳性染色,流式细胞分析发现在G1峰前出现凋亡峰;MTT显示脂质体介导反义寡核苷酸可显著抑制BGC823细胞增殖.结论 c-FLIPL、c-FLIPS mRNA和蛋白在Hela、BGC823细胞中表达.脂质体介导c-FLIP反义寡核苷酸转染BGC823细胞后抑制目的蛋白表达,抑制细胞生长、促进凋亡,其作用呈剂量依赖性.研究靶向c-FLIP的反义基因治疗药物可能为胃癌的临床治疗提供新的方法和思路.     

c-raf-1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞受照后Ki-67表达的影响

[目的]探讨癌基因c-raf-1的反义寡核苷酸埘人卵巢癌细胞受照后Ki-67表达的影响。[方法]设立c-raf-1正义寡核苷酸组和非处理组（仅加入等量的脂质伴)作对照，用RT-PCR检测卵巢癌细胞处理前后c-raf-1表达水平的变化，用免疫组化技术检测人卵巢癌细胞株SKOV3在脂质体-c-raf-1反义寡核苷酸作用前后受^60Coγ射线照射后细胞Ki-67的表达情况。[结果]c-raf-1反义寡核苷酸能抑制c-raf-1癌基因的表达，经脂质体介导的c-raf-1反义寡核苷酸作用的卵巢癌细胞经γ射线照射后其Ki-67表达较转染正义寡核苷酸组及单纯照射组明显下调，而转染c-raf-1正义寡核苷酸组和单纯照射组相比无明显差异。[结论]c-raf-1反义寡核苷酸通过抑制c-raf-1的表达降低人卵巢癌细胞株SKOV3受照射后的增殖能力。该作刚可能与c-raf-1反义寡核苷酸抑制了引起肿瘤细胞辐射抗拒的细胞信号传导途径有关。