杏仁核注射KA诱导的边缘叶发作致海马神经元凋亡及黄芩苷干预研究

目的：建立杏仁核注射红藻氨酸(kainic acid，KA)诱导的大鼠边缘叶发作模型，检测特异性脑电活动和脑血流与海马神经元凋亡的关系，以及黄芩苷对神经元损伤的保护作用。方法：采用脑立体定位注射技术，杏仁核注射KA诱导癫痫发作，以深部电极持续记录脑电和激光多普勒血流测定仪记录局部脑血流(regional cerebral blood flow，r—CBF)，发作1h后静脉注射30mg／kg安定终止发作，TUNEL染色观察应用黄芩苷和非用药组海马神经元的变化。结果：药物注射15—20min后动物均有癫痫发作，脑电图有高频高波伏丛集棘波，发作终止8h时，同侧海马CA3区出现TUNEL染色阳性细胞，24h达高峰，72h下降。黄芩苷治疗后TUNEL染色阳性细胞数明显减少。发作前后r—CBF无明显变化。高频高波伏丛集棘波时程越长，CA3区TUNEL染色阳性细胞越多。结论：癫痫发作导致选择性海马CA3区神经元凋亡，可能与特异性脑电活动有关，但与脑缺血无关。黄芩苷对癫痫发作导致的脑损伤有保护作用。     

杏仁核内注射KA诱导的边缘叶发作大鼠海马中caspase-9的表达

目的 :红藻氨酸 (kainicacid ,KA)诱导的大鼠边缘叶发作模型 ,检测半胱氨酸天冬酶 9(caspase 9)在癫大鼠海马神经元表达。方法 :立体定位杏仁核注射KA诱导癫发作 ,以持续记录脑电、局部脑血流 (regionalcerebralbloodflow ,r CBF) ,用TUNEL染色和cresylviolet染色观察海马神经元存活和凋亡 ;用免疫荧光和Westernblot检测海马caspase 9的表达。结果 :发作终止 4h时caspase 9出现裂解片段 ,8h时出现TUNEL阳性细胞 ,2 4h时达高峰。脑室内注射caspase 9抑制剂z LEHD fluoromethylketone(z LEHD fmk)可减少TUNEL阳性细胞 ,增加存活神经元 ;发作后在KA注射同侧海马的CA3区神经元caspase 9免疫反应性增强 ;对侧海马未见TUNEL阳性细胞及caspase 9的上述变化。发作前后r CBF无明显变化。结论 :癫发作可诱导caspase 9的激活。caspase 9可能是癫潜在的治疗靶点。     

辛醇预处理对红藻氨酸诱导的癫(癎)大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 观察缝隙连接阻断剂辛醇预处理对红藻氨酸(KA)诱导的癫(癎)大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 160只雄性SD大鼠随机分为KA组、辛醇组、生理盐水(NS)组和二甲基亚砜(DMSO)组,应用KA右侧杏仁核注射制作癫(癎)大鼠模型;制模前30 min辛醇组腹腔注射辛醇溶液;制模后3h、6h、12 h、24 h和7d应用原位末端标记(TUNEL)法和免疫组化染色法分别检测各组大鼠海马CA3区TUNEL和GFAP阳性细胞数.结果 KA组制模后6h海马CA3区有TUNEL阳性细胞表达,并逐渐增多,7d达高峰;辛醇组制模后在6 h～7 d TUNEL阳性细胞数明显少于KA组(均P＜0.01);KA组海马CA3区GFAP阳性细胞数随时间而逐渐增多,各时间点明显多于辛醇组(均P＜0.01).结论 辛醇神经保护作用的机制可能与抑制细胞缝隙连接间通讯,切断凋亡信号传播,以减少神经元凋亡有关.     

辛醇预处理对红藻氨酸诱导的癫疒间大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察缝隙连接阻断剂辛醇预处理对红藻氨酸(KA)诱导的癫疒间大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法 160只雄性SD大鼠随机分为KA组、辛醇组、生理盐水(NS)组和二甲基亚砜(DMSO)组,应用KA右侧杏仁核注射制作癫疒间大鼠模型;制模前30 min辛醇组腹腔注射辛醇溶液;制模后3 h、6 h、12 h、24 h和7 d应用原位末端标记(TUNEL)法和免疫组化染色法分别检测各组大鼠海马CA3区TUNEL和GFAP阳性细胞数。结果 KA组制模后6 h海马CA3区有TUNEL阳性细胞表达,并逐渐增多,7 d达高峰;辛醇组制模后在6 h～7 d TUNEL阳性细胞数明显少于KA组(均P<0.01);KA组海马CA3区GFAP阳性细胞数随时间而逐渐增多,各时间点明显多于辛醇组(均P<0.01)。结论辛醇神经保护作用的机制可能与抑制细胞缝隙连接间通讯,切断凋亡信号传播,以减少神经元凋亡有关。     

神经干细胞移植于慢性癫痫鼠海马CA3区对其癫痫发作影响的研究

目的 研究神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植到慢性海人酸(kainic acid,KA)癫痫鼠海马CA3区后对大鼠癫痫发作的影响.方法 用KA脑审注射制作慢性癫痫模型.将原代培养的、EGFP标记的NSCs移植到慢件癫痫鼠的海马CA3区.分别在移植后第2周、第4周、第8周和第12周连续进行7天观察大鼠癫痫发作频率和程度,在移植后第10周进行发作间期右侧海屿深部脑电监测.然后取脑冰冻切片,在倒置荧光显微镜下直接观察移植细胞的存活和迁移,用免疫荧光染色观察移植细胞分化情况,Timm's染色观察海马齿状回异常苔状纤维发芽.结果 移植后12周仍有大量移植细胞存活(65,045.00±881.72).NSCs在移植区以胶质细胞分化为主,在齿状回和海马各区以神经元分化为主,γ-氨基丁酸(GABA)能神经元在齿状回门区和海马CA3区分化比率较高.NSCs移植后第4周移植组癫痫鼠的发作次数与对照组相比开始减少,Timm's染色计分和发作程度也有明显改善,两组发作问期脑电图尖、棘波在每个观察期的发放次数分别是3.83±4.96和27.16±21.08,,结论 将NSCs移植到慢性KA癫痫鼠的海马CA3区,移植细胞不仪能够长期存活、迁移到海马齿状回的各区,而且能够分化为神经元和神经胶质细胞,特别是GABA能神经元,同时还能够抑制齿状回颗粒细胞的苔状纤维发芽,从而减少癫痫发作次数,减轻癫痫发作程度.     

脑内局部给药建立颞叶癫疒间模型的研究

目的研究脑内局部给药建立颞叶癫疒间(EP)模型的方法。方法通过立体定向技术向大鼠海马局部注射海人酸(KA)4μg/kg,观察注射后大鼠的行为学、脑电图和病理学改变。结果KA注入海马后大鼠表现为凝视、湿狗样抖动、咀嚼运动、点头、肢体阵挛等;随后出现阵发性旋转、向上窜跳、四肢抽搐,反复间歇性发作,约10h后发作停止。以后每周约自发性发作1～3次,主要为Ⅱ～Ⅳ级发作。EEG记录到大脑皮质丛集放电,棘波或尖波持续发放。光镜下KA致疒间鼠海马结构的CA1区和CA3区锥体细胞变性及坏死,实验侧CA3区神经元丢失尤为明显。结论大鼠脑内局部注射KA可成功建立颞叶EP模型,其行为症状、电生理及海马病理改变类似人颞叶EP,是很好的研究颞叶EP的工具。     

雌激素和姜黄素对海人酸杏仁核点燃大鼠行为学、脑电图及海马神经元损伤的影响

目的了解雌激素和姜黄素对海人酸(kainic acid,KA)杏仁核点燃大鼠癫痫发作的影响。方法给去势的雌性大鼠添加雌激素治疗,添加姜黄素治疗,或添加雌激素和姜黄素治疗,比较各组大鼠致痫后癫痫发作的行为学、脑电图和海马神经元损伤的变化。结果给雌激素治疗的大鼠重型发作(Racine 4/5级)评分最高,而雌激素加姜黄素治疗组评分最低(P<0.05)。脑电图的变化与行为学的改变基本一致。致痫后大鼠注射KA侧海马CA3区、CA4区可见到明显的细胞损伤,而该侧海马CA1区、齿状回区(DG)及对侧海马CA3区、CA1区及DG区神经元损害不明显。雌激素组大鼠双侧海马CA3区均出现加重的神经元损害,姜黄素组及雌激素加姜黄素组大鼠海马注射对侧CA3区存活神经元较雌激素组明显增加(P<0.01)。结论高水平的雌激素可以加重癫痫的发作,给姜黄素治疗可以减轻大鼠海马CA3区神经元损害。     

海人酸致痫大鼠海马神经元凋亡研究

目的　研究大鼠癫痫发作后海马神经元凋亡的时空分布。方法　采用海人酸 (KA)诱导大鼠癫痫模型 ,以原位末端标记 (TUNEL)及透射电镜检测癫痫发作后 6h、1d、3d、7d海马神经元凋亡。结果　对照组及KA致痫后 6h组 ,海马区均未发现凋亡细胞。KA致痫后 1d ,海马CA1、CA3及CA4区开始出现凋亡细胞 ,3d时明显增多 ,7d时最多。KA致痫后 1d、3d、7d ,海马CA1锥体层线性长度1mm的TUNEL阳性细胞数分别为 (6 .6 0± 3.6 9)个、(13.5 7± 5 .17)个和 (2 5 .96± 4 .87)个 ;CA3区分别为 (6 .4 8± 2 .4 5 )个、(13.89± 2 .5 2 )个和 (2 8.80± 5 .39)个 ;CA4区分别为 (4 .6 0± 1.4 5 )个、(12 .2 0± 2 .0 4 )个和 (2 5 .2 0± 5 .83)个。 3个时间组相应区域凋亡神经元数比较均存在显著性差异(P <0 .0 0 1)。透射电镜观察可见典型的凋亡细胞形态学改变。结论　凋亡参与KA致痫大鼠癫痫发作后海马神经元迟发性死亡过程。     

海马内注射内皮素-1导致大鼠痫性发作和海马硬化的初步研究

目的 观察大鼠海马内注射内皮素(endothelin,ET)-1是否导致大鼠痫性发作和海马硬化.方法 立体定位在成年大鼠海马CA3区内分别注射1 μL ET-1(200 pmol,15只)、海人酸(kainate,KA 5 pmol,15只)或磷酸盐缓冲液(PBS,0.01 mol,8只),观察大鼠行为学、脑电及对侧海马病理学改变.结果 海马注射PBS后大鼠未见痫性发作,脑电图呈10～15 Hz、150-200μV基本节律.注射ET-1或KA 2 h内大鼠出现不同程度的痫性发作和脑电图异常改变(尖波或尖慢波),KA组3-5级发作率高于ET-1组(86.67% vs 16.67%,P<0.05).部分ET-1和KA组大鼠在给药后2～3周可见癫痫样发作行为学改变.与PBS组比较,El-1和KA组给药后48 h对侧海马各区Nissl染色细胞数明显减少,GFAP表达增强(P<0.05);给药后30 d,对侧CA3区和门齿区苔藓纤维出芽评分高于PBS组(P<0.05).结论 海马注射ET-1可以导致大鼠癫痫样行为改变和海马硬化.     

大鼠海马干细胞移植治疗颞叶癫痫的初步研究

目的 通过神经干细胞移植至癫痫鼠后与宿主细胞的整合及其对损伤宿主的修复作用，为神经干细胞移植治疗癫痫提供理论依据。方法 分离、培养新生鼠海马干细胞，移植至海人酸(KA)所致癫痫模型鼠的右侧海马内，应用Timm、Nissl、HE染色及动态脑电记录仪记录脑电图。在光镜及电镜下比较正常对照组、移植组及KA未移植组大鼠，在移植后的1周、4周、8周及24周苔状纤维发芽(MSF)、海马CA3区锥体神经元损伤情况及海马、杏仁核的脑电变化。结果 海马干细胞的移植可以显著抑制KA引起的MFS，其抑制作用从移植后第4周开始，第8周时最强，持续至第24周；同时亦明显的减轻了KA所致的CA3区锥体细胞缺失，其作用在第8周最强；KA所致CA3区锥体神经元超微结构的损伤亦得到一定程度的修复；但是，干细胞的移植并未使宿主恢复到损伤前的水平，海马干细胞移植可减少癫痫动物脑电的痫性发放，并降低其癫痫波的波幅约50％。结论 神经干细胞移植对于KA诱发癫痫鼠具有显著的修复作用，其具体作用机制还有待于进一步的研究。