应用PCR检测HL—60细胞诱导分化前后c—myc癌基因的扩增

应用ＰＣＲ方法研究了维甲酸（ＲＡ）和二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）诱导ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ基因扩增的变化。结果：ＨＬ－６０细胞内ｃ－ｍｙｃ基因扩增为１１，经ＲＡ诱导６ｄ后，其扩增程度无明显变化，而ＤＭＳＯ诱导３ｄ后，ｃ－ｍｙｃ基因扩增出现下降，至５ｄ，较未诱导分化前下降约３０％。提示了ＲＡ和ＤＭＳＯ对ＨＬ－６０细胞不同的诱导分化机制。     

反义寡核苷酸对HL60细胞c—myc基因表达的抑制和诱导分化作用

研究ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞中ｃ－ｍｙｃ基因的表达及ＨＬ６０细胞分化的影响。方法 采用针对原癌基因ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ５’非翻译区的一个１８ｂｐ的反义寡核苷酸５‘ｄ（ＣＴＴ ＣＴＣ ＧＡＧ ＧＣＡ ＧＧＡ ＧＧＧ）３「与人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞共培养５ｄ，检测ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ量的变化及其对ＨＬ６０细胞分化的影响。     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（１８ｍｅｒ，２１ｍｅｒ）对人白血病ＨＬ－６０细胞中ｃ－ｍｙｃ基因表达的抑制作用。用ＨＬ－６０活细胞计数，ＲＮＡ含量的ＲＴ－ＰＣＲ测定和ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的免疫组化染色检查，结果：两个反义核苷酸都以抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，增殖抑制率为１１－７５％。反义核酸还抑制ｃ－ｍｙｃＲＮＡ和Ｍｙｃ蛋白的表达，而对ｃ－ｍｙｃ基因正常表达的红白血病细胞Ｋ５６２的增殖和ＰＨＡ刺激的人淋巴细胞的增殖     

人早幼粒白血病细胞系HL—60体外诱导分化研究

用体外短期液体培养技术，观察ＲＡ和不同来源的造血调控因子对ＨＬ－６０细胞增殖与分化的影响。以生长曲线和倍增时间作为观察各种试剂对ＨＬ－６０细胞增殖作用的指标；以ＮＢＴ还原反应和细胞形态变化作为分化成熟的指标。结果是ＲＡ、ＰＨＡ－ＬＣＭ单用时对ＨＬ－６０细胞均有抑制增殖和诱导分化作用，ＰＷＭ－ＳＣＭ、ＬＰ３－ＣＭ仅部分抑制增值、而ＦＧＦ、Ｈｕ－ＣＳＦ和ＥＰＯ等无效。各种造血生长因子分别与ＲＡ合用时，     

亚硒酸钠对HL—60细胞的分化诱导作用

目的观察亚硒酸钠对人急性髓系白血病ＨＬ－６０细胞系的诱导分化作用。方法ＨＬ－６０细胞在含８×１０－６ｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠的ＲＰＭＩ１６４０培养液中置３７℃、５％ＣＯ２、９５％空气、饱和湿度培养５天，于第５天查细胞形态学及硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）试验。结果硒在上述条件下可使ＨＬ－６０细胞形态学分类中较成熟细胞的比例增高（Ｐ＜０．０５），ＮＢＴ试验阳性率增高（Ｐ＜０．０１）。结论硒在一定条件下可能有潜在的诱导分化作用     

二次PCR检测HL60细胞系PML—RARα融合mRNA

急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）具有染色体易位ｔ（１５；１７）而产生的特异的融合基因ＰＭＬ－ＲＡＲα。本研究应用二次聚合酶链反应（ｂｏｓｔｅｒ－ＰＣＲ）技术检测了ＡＰＬ细胞系ＨＬ６０细胞中ＰＭＬ－ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ。结果表明，ＨＬ６０细胞系中同时具有二种ＰＭＬ－ＲＡＲα融合ｍＲＮＡ异构体（Ｌ型和Ｓ型）。本实验的敏感度可达１０＾－６个细胞水平，同时检测了结果具有高度的特异性。提示本方法可作为今后检测     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（18mer，21mer）对人白血病HL—60细胞中c－myc基因表达的抑制作用。用HL－60活细胞计数，RNA含量的RT－PCR测定和c－myc基因蛋白的免疫组化染色检查。结果：两个反义寡核苷酸都能抑制HL－60细胞的增殖，增殖抑制率为11％～75％。反义核酸还抑制c－mycmRNA和Myc蛋白的表达，而对c－mcy基因正常表达的红白血病细胞K562的增殖和PHA刺激的人淋巴细胞的增殖没有影响。结论：反义寡核苷酸能抑制c－myc基因的过度表达。     

鬼臼叉甙诱导HL－60细胞分化时c－myc蛋白的表达

目的：观察小剂量鬼臼叉甙对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用和对ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的影响。方法：应用加入鬼臼叉甙（ＶＰ－１６）和维甲酸（ＲＡ）的含２０％小牛血清的培养基培养人类早幼粒细胞株（ＨＬ－６０），分别在培养后１、２、４、６ｄ测定细胞各时相的ｃ－ｍｙｃ蛋白水平。结合细胞形态、细胞化学和氯化硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验，观察ＶＰ－１６、ＲＡ对ＨＬ－６０细胞的诱导分化作用及其与ｃ－ｍｙｃ蛋白表达的关系。结果：与ＲＡ一样，小剂量ＶＰ－１６能诱导ＨＬ－６０细胞向粒系分化。并且在ＨＬ－６０细胞分化过程中ｃ－ｍｙｃ蛋白水平明显降低。ＶＰ－１６处理的ＨＬ－６０细胞其ｃ－ｍｙｃ蛋白降低与其诱导分化作用呈负相关。结论：实验结果提示，ｃ－ｍｙｃ原癌基因表达的变化可能是ＶＰ－１６诱导ＨＬ－６０细胞分化的机制之一。     

有机汞亲和层析观察HL－60细胞核小体c－myc基因分布

应用有机汞亲和层析柱分离经微球菌核酸酶有限制消化的ＨＬ－６０细胞核，得到有机汞层析柱亲和及不亲和的２个核小体组分。琼脂糖凝胶电泳显示这２个组分均含１７０ｂｐ左右的核小体单体，其ＤＮＡ经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹和３２Ｐ标记的ｃ－ｍｙｃ外显子Ⅱ探针杂交，显示有机汞柱亲和的组分有相当于２００ｂｐ位置的杂交带，而汞未结合的组分在１７０ｂｐ有杂交带。     

联苯双酯对HL—60白血病细胞的诱导分化作用

为探讨抗肝炎药物联苯双酯对人早幼粒白血病细胞株ＨＬ－６０的影响。应用细胞生物学的方法进行ＨＬ－６０细胞生长曲线，ＮＢＴ还原能力，细胞吞噬活力，酸性磷酸酶活力测定。ＤＤＢ能抑制ＨＬ－６０细胞增殖。ＨＬ－６细胞用ＤＤＢ处理６天后，近５０％的细胞可获得硝基蓝四氮唑还原能力，同样浓度的ＤＤＢ处理４天后，其ＨＬ－６０细胞的吞噬能力也明显增强；细胞形态学观察发现ＤＤＢ处理的ＨＬ－６０细胞分化趋向于成熟的中笥粒     

VP-16诱导PC-3细胞凋亡和bcl-2及c-myc基因表达的研究

目的　研究 VP- 1 6诱导 PC- 3细胞凋亡和癌基因 bcl- 2及 C- myc表达的关系。方法　用末端标记法(TUNEL )和流式细胞术 (FCM)研究 PC- 3细胞凋亡 ,以免疫组化方法研究 bcl- 2及 C- myc蛋白的表达。结果　 TUNEL和FCM检测表明 ,PC- 3细胞的凋亡率随 VP- 1 6作用浓度增加和作用时间延长而升高 ;免疫组化结果显示 :bcl- 2和 c- myc基因表达的阳性百分率随 VP- 1 6作用浓度增加和作用时间延长而降低。结论　VP- 1 6能够诱导 PC- 3细胞凋亡和抑制其bcl- 2和 c- myc基因的表达 ,且具有作用浓度和作用时间依赖性。     

反义寡核苷酸对HL60细胞c-myc基因表达的抑制和诱导分化作用

目的研究ｃｍｙｃ反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞中ｃｍｙｃ基因的表达及ＨＬ６０细胞分化的影响。方法采用针对原癌基因ｃｍｙｃ的ｍＲＮＡ５’非翻译区的一个１８ｂｐ的反义寡核苷酸５’ｄ（ＣＴＴＣＴＣＧＡＧＧＣＡＧＧＡＧＧＧ）３’与人早幼粒白血病细胞系ＨＬ６０细胞共培养５ｄ，检测ｃｍｙｃｍＲＮＡ量的变化及其对ＨＬ６０细胞分化的影响。结果用ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测出ＨＬ６０细胞ｃｍｙｃｍＲＮＡ的含量减少；细胞形态学变化以及非特异性酯酶（ＮＳＥ）染色、硝基四氮唑蓝（ＮＢＴ）还原试验均提示ＨＬ６０细胞出现了分化，部分细胞向粒细胞方向分化，部分细胞向单核细胞方向分化。结论ｃｍｙｃ反义寡核苷酸能够抑制ｃｍｙｃ基因的表达并能诱导ＨＬ６０细胞分化。     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c－fos，c－myc异常表达的实验研究

我们观察了不同浓度的胰岛素对体外培养人血管平滑肌细胞增殖的影响，及其该过程中原癌基因ｃ－ｆｏｓ，ｃ－ｍｙｃ的表达。结果表明，胰岛素能促进血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖，即：ＳＭＣ数目的增多，ＳＭＣＤＮＡ的合成；胰岛素能促进原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ的异常表达；且以上作用均存在着剂量－效应关系。这些结果提示，高胰岛素血症促进动脉粥样硬化（ＡＳ）发生、发展可能是通过促进某些原癌基因异常表达，进而促进ＳＭＣ增殖而实现的。这也许是某些基因治疗ＡＳ的基础。     

反义c-myc寡脱氧核苷酸对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

为研究硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃ寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖、迁移及凋亡的影响。应用脂质体分别介导硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃＯＤＮ、正义ｃｍｙｃＯＤＮ和错配ｃｍｙｃＯＤＮ进入体外培养的大鼠主动脉ＳＭＣ内，观察其对ＳＭＣ细胞ｃｍｙｃ表达、增殖、迁移和凋亡的影响。结果：①反义ＯＤＮ降低ｃｍｙｃ蛋白的表达。②反义ｃｍｙｃＯＤＮ抑制ＳＭＣ增殖、迁移，并诱导ＳＭＣ凋亡。而正义ＯＤＮ及错配ＯＤＮ则无上述作用。结果提示：应用反义技术抑制ｃｍｙｃ表达在防治经皮腔内冠状动脉成形术（ＰＴＣＡ）术后再狭窄中具有潜在作用。     

去甲斑蝥素诱导HL60细胞凋亡的研究

探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人早幼粒白血病细胞株HL60细胞增殖的抑制作用。用流式细胞仪测定NCTD对HL60细胞体外培养过程中细胞毒性、细胞凋亡及细胞周期的影响。结果显示 :NCTD作用 4 8h对HL60细胞有较强生长抑制作用 ,作用 2 4h后达到凋亡高峰 ;1、5、10、50 μmol L的NCTD作用 2 4h后 ,G1期细胞百分数均减少 ,S期与G2 M期细胞百分数均增加 ,呈现G2 M期阻滞现象。说明NCTD可诱导HL60细胞凋亡 ,抑制瘤细胞分裂生长 ,且有明显的时间和剂量效应     

c—myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响

目的 研究c-myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响。方法 用针对c-myc mRNA 5'端非翻译区的一个18bp的反义寡核苷酸与HL60细胞、分离的急性粒细胞白血病病人白细胞共培养10h,用凋亡细胞计数、DNA凝胶电泳、ELISA、流式细胞仪等方法测白血病细胞的调亡。结果 c-myc反义寡核苷酸能够诱导HL60细胞凋亡,且此作用随着作用浓度的提高而增加;此反义核酸只诱导白血病患者的白血病细胞凋亡,对正常白细胞的凋亡无影响。结论 c-myc反义核酸可以通过诱导白血病细胞凋亡来治疗急性粒细胞白血症,且该作用的特异性好。     

c—myc基因特异核酶的设计及其对靶mRNA的切割

目的：针对ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分序列设计核酶，探讨生理温度下核酶的切割活性，方法：计算机模拟分析ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分二级结构，选择核酶切位点，设计核酶，分别构建ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分序列和核酶体外转录载体并经双脱氧末端终止法测定核酶序列正确无误，体外转录核酶和靶ＲＮＡ分子，生理温度下测定核酶切割活性，结果：所设计的核酶可有效地切割靶ｍＲＮＡ分子。结论：所设计的核酶在生理温度下具     

亚硒酸钠对HL—60细胞生长,分化和环核苷酸水平的影响

研究亚硒酸钠对人急性白血病细胞（ＨＬ－６０细胞，ＡＭＬ－Ｍ２型白血病细胞）生长、分化及胞内环核苷酸水平的影响。方法ＨＬ－６０细胞用ＲＰＭＩ１６４０培养液培养，对比研究加与不加亚硒酸钠的差别，环磷酸腺苷（ｃＡＭＰ）、环磷酸鸟苷（ｃＧＭＰ）水平的测定用放射免疫分析法。结果１．５×１０－５ｍｏｌ／Ｌ或３．０×１０－５ｍｏｌ／Ｌ的亚硒酸钠能显著抑制ＨＬ－６０细胞的生长，且呈剂量依赖性，１．５×１０－５ｍｏｌ／Ｌ的亚硒酸钠能促进ＨＬ－６０细胞的分化，对静息的胞内ｃＧＭＰ水平有明显的降低作用，对照组（０．０７±０．０２９）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ，亚硒酸钠组（０．０６±０．０１７）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ（Ｐ＜０．０５）。对肾上腺素刺激的胞内ｃＧＭＰ水平也有明显的降低作用，对照组（０．０７±０．０１８）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ，亚硒酸钠组（０．０５±０．０１４）ｐｍｏｌ／１０６ｃｅｌｓ，３０ｍｉｎ（Ｐ＜０．０５）。结论亚硒酸钠的抑瘤作用可能与降低细胞内ｃＧＭＰ水平有关。     

水蛭提取物对人白血病HL60细胞体外抑制作用研究

目的：研究水蛭提取物对人白血病HL-60细胞的体外抑制作用.方法：用液氮快速冻融法制备水蛭提取物,将不同浓度提取物作用HL-60细胞,观察提取物对HL60生长与增殖的影响、诱导调亡效应、并计算出水蛭提取物作用HL-60的半数抑制浓度（IC50）.结果：浓度高于0.1mg/mL的水蛭提取物对HL60有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性;水蛭提取物作用HL60细胞48h的IC50为1.4mg/mL;另外水蛭提取物也具有诱导HL60细胞凋亡作用.结论：水蛭提取物可抑制HL60细胞增殖并诱导调亡.     

聚合酶链反应检测小细胞肺癌myc族癌基因扩增的研究

应用通用引物ＰＣＲ技术检测１６例小细胞肺癌组织ｍｙｃ族癌基因（ｃ－ｍｙｃ，Ｌ－ｍｙｃ，Ｎ－ｍｙｃ）扩增状况，１６例小细胞肺癌中，５例有ｍｙｃ基因扩增（３１％）。其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期小细胞肺癌ｍｙｃ癌基因扩增发生率分别为２５％（１／４），２９％（２／７）和４０％（２／５）。并且，有ｍｙｃ癌基因扩增的病例平均生存期较无扩增者短。研究结果提示ｍｙｃ族癌基因扩增是小细胞肺癌发展过程中产生的遗传学改变，并可影响患者的预后。