一株人肺鳞癌细胞系的建立及其生物学特性

我国肺癌的发病率高，鳞癌为最常见的病理类型。然而目前尚无一套行之有效的治疗方法。因此，通过体外建立稳定的瘤细胞系，并对其进行组织形态、生长、遗传等一系列生物学行为的研究，将为肺鳞癌的临床诊治提供有益的实验资料。国内自1962年何申首次报道了人肺鳞状上皮癌细胞建系工作［‘似后，仅有几例肺鳞庙建系的成功报道「‘］，材料均不全面。本文报告1例肺鳞癌细胞系体外建株的实验条件及其生物学特性。材料和方法一、标本患者男，sl岁，1993年5月16日于上海医科大学附属中山医院胸外科手术。手术标本经病理证实为肺鳞状上皮细胞癌。…     

人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞系的建立及其生物学特性

舌癌高发于东南亚,尤其是印度。在我国,据上海市区1963～1977年恶性肿瘤死亡统计,舌癌占口腔癌肿死亡率的26.4％;上海第二医学院附属第九人民医院口腔颌面外科,1957～1976年舌癌占口腔鳞癌住院病人的37.2％。口腔癌组织体外培养的研究,国外开展较早,Hela细胞株建立后1954年就有口底癌的KB细胞株和颊粘膜癌的HEp-3细胞株的建立;以后相继有牙     

人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214的建立及其生物学特性

目的 建立人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214,为子宫颈癌研究提供实验模型。方法 无菌切除人子宫颈癌的手术标本,用组织块贴壁法体外培养,连续传代稳定生长后,绘制细胞生长曲线。采用光镜、电镜观察细胞形态,并进行细胞周期和染色体核形分析。用免疫组化法测定细胞系肿瘤标记物的(ER、PR、Keratine、PCNA)表达情况。结果 组织块贴壁法体外培养获得人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC-0214(简称H),细胞维持培养16个月,传代131代,生长稳定,群体倍增时间为35．48h,细胞呈上皮镶嵌状贴壁生长,趋向复层生长,无接触抑制。超微结构显示,具有典型的桥粒结构和较多的张力原纤维。染色体数目35—156条,主流范围58—80条(64．8％),结构为人类染色体。细胞的肿瘤标记物(ER、PR、Keratine、PCNA)检测呈高表达,DNA指数为1．931。裸鼠移植瘤组织病理形态学与患者原始肿瘤一致,无血清培养成功。结论 通过组织块贴壁法体外培养建立的人子宫颈鳞状细胞癌细胞系HCC—0214,与原发癌保持相同的生物学特性,体外连续传代16个月以上,细胞形态不变,生长周期恒定,可望作为一个稳定的细胞系。     

食管癌细胞株高侵袭力亚系的建立及其生物学特性研究

目的:建立具有不同转移潜能的高侵袭能力食管癌细胞株亚系并研究其生物特性.方法:利用Transwell侵袭小室从人食管鳞癌Eca-109细胞株筛选高侵袭能力食管癌亚系,HE染色比较细胞形态;四甲基偶氯唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力的变化;流式细胞术( FCM)检测细胞周期;蛋白质印迹法检测与侵袭能力相关基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白醇组织抑制因子-2(TIMP-2)蛋白表达.结果:利用Transwell侵袭小室从食管癌Eca-109细胞株中筛选出高侵袭能力食管癌细胞株亚系,命名为Eca-109 T4.2个细胞系细胞形态没有明显差异.MTT法检测显示,亚系Eca-109 T4增殖能力强.细胞周期显示,增殖指数(PI)高,PI=41.0％,且MMP-2蛋白表达相比增高,P=0.023;TIMP-2蛋白表达相比增高,但差异无统计学意义,P=0.392.结论:建立了不同转移潜能的高侵袭能力食管癌细胞株亚系,将可以用于探讨食管癌转移机制的研究.     

放射耐受性结肠癌细胞亚株的建立及其生物学特性

背景与目的：结肠癌是消化系统的常见肿瘤,放疗是其重要的治疗手段之一。诱导并筛选具有放射耐受性的结肠癌细胞亚株,为研究结肠癌放射耐受的机制提供实验模型。方法：应用梯度递增剂量的γ射线对SW620细胞株进行诱导照射,筛选得到放射耐受细胞亚株SW620/R。观察细胞的形态变化和生长情况,通过CCK8法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞照射的周期及凋亡的变化,克隆形成实验检测细胞克隆形成率和放射敏感性。结果：通过照射剂量梯度递增的诱导方法,成功建立了SW620/R细胞亚株。SW620/R细胞亚株形态与亲本细胞明显不同,并且在高剂量射线照射后仍能继续生长;鉴定实验显示SW620/R细胞亚株与亲本细胞相比倍增时间明显延长,克隆形成率显著下降;在细胞周期上S期的比例显著上升,并且在照射后未出现周期的阻滞现象,同时发现其自发凋亡率显著下降;克隆形成实验显示其放射耐受性明显升高。结论：成功建立了放射耐受的细胞亚株SW620/R,经鉴定其放射敏感性显著降低,且两者在增殖、克隆形成率、细胞周期和自发凋亡上差异有统计学意义(P<0.05)。     

阿霉素诱导人肝癌细胞多药耐药株的建立及其生物学特性评价

背景与目的:多药耐药(multidrugresistance,MDR)是肿瘤治疗的主要障碍,为探讨体外逆转肿瘤MDR的新方法,本研究建立人肝癌细胞多药耐药模型HepG2/Adm,并研究其生物学特性。方法:以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,用阿霉素(adriamycin,ADM)浓度梯度递增诱导法,建立HepG2/Adm。观察细胞的生长规律;用MTT法检测多药耐药性;流式细胞术检测细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因(mdr1)的表达产物P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrugresistance-associatedprotein,MRP)、肺耐药蛋白(lung-relatedprotein,LRP)及谷胱甘肽S-转移酶(glutathioneS-transferase,GST)的表达;逆转录PCR半定量检测4种MDR基因mRNA表达量。结果:与HepG2细胞比较,HepG2/Adm细胞倍增时间延长30.01h,S期细胞减少(5.6±0.03)%,G1、G2期细胞增多犤(4.2±0.09)%,(1.5±0.08)%犦。该细胞对多种抗肿瘤药物耐药,HepG2/Adm对阿霉素的耐药指数是亲本细胞的26倍,细胞表面多药耐药蛋白P-gp、MRP及GST的表达显著增加,LRP表达有一定的增加;上述四种耐药蛋白基因的表达均明显增加。结论:HepG2/Adm细胞具有多药耐药特性,其耐药性与P-gp、MRP及GST的过表达有关。     

人恶性淋巴瘤细胞Raji长春新碱耐药株Raji/VCR的建立及其生物学特性

目的：建立人恶性淋巴瘤细胞Raji长春新碱（VCR）耐药株Raji/VCR并初步研究其生物学特性。方法：采用大剂量VCR间歇诱导法建立耐药株Raji/VCR。MTT法测定其对VCR、足叶乙甙(VP-16）和阿霉素（ADM）的药物敏感度,Real-time RT-PCR法测定细胞DMR1mRNA水平,流式细胞仪检测P-gp表达和细胞内柔红霉素（DNR）浓度。结果：历时近8月建成人恶性淋巴瘤多药耐药株Raji/VCR,其对VCR、ADM、VP-16的耐药倍数分别为8、5和3。Raji/VCR的DMR1mRNA及P-gp表达明显高于亲本细胞,而细胞内DNR浓度明显下降。结论：耐药株Raji/VCR具有多药耐药细胞的基本生物学特性,可用于肿瘤多药耐药的相关研究。     

人胃粘膜上皮细胞系GES－1的建立及其生物学特性

原代培养的胎儿正常胃粘膜上皮细胞用ＳＶ４０病毒感染，３周左右分离出了转化细胞克隆，并建立了可在体外长期稳定传代的细胞系ＧＥＳ－１。对此细胞的生物学特性分析表明：细胞的基因组中整合了ＳＶ４０Ｔ基因，并在细胞核中表达。染色体为近三倍体（５０～６０之间）。除了转化特性之外，ＧＥＳ－１细胞基本保留了正常的细胞骨架结构（微丝、微管、角蛋白），粘蛋白反应阳性。接种在裸鼠中６个月观察无致瘤性。此细胞系将为深入研究胃上皮细胞癌变提供重要的模式系统。     

两株裸大鼠人肝癌模型的建立和生物学特性的观察

为了深入研究人肝癌,我室在大鼠肝癌模型研究的基础上,开展了裸鼠人体肝癌模型的研究。1982年建成我国第一株裸小鼠人肝癌移植模型。至今,5例人肝癌手术标本已成功移植于裸小鼠,并进行了肿瘤形态学、甲胎蛋白、铁蛋白、阳性扫描等多种研究。但裸小鼠人肝癌模型仍有一定的不足之处:1.所获瘤组织较少;2.所能提供的血量较少;3.裸小鼠难于施行某些外科小手术及肝内移植。为了弥补上述不足,我室于1983年引入     

高侵袭转移Lovo细胞亚系的建立及其生物学特性的研究

目的 :建立高侵袭 L ovo细胞亚系以及研究其生物学特性。方法 :应用裸鼠体内连续传代法 ,筛选并建立高侵袭 L ovo细胞亚系 ,并测量 L ovo亚系电泳泳动速率、细胞周期和 DNA含量。结果 :L ovo亚系细胞电泳泳动速率明显高于其母系 L ovo细胞 ;其增殖周期 (S G2 M)百分率为 5 7.4 % ,高于其母系 L ovo细胞的 4 1.7% ,且其 DNA含量也远高于其母系细胞。结论 :L ovo亚系细胞比 L ovo母系细胞具有更高侵袭力和更快的增殖能力     

人胃粘膜上皮细胞系GES—1的建立及其生物学特性

原代培养的胎儿正常胃粘膜上皮细胞用ＳＶ４０病毒感染，３周左右分离出了转化细胞克隆，并建立了可在体外长期稳定传代的细胞系ＧＥＳ－１。对此细胞的生物学特性分析表明：细胞的基因组中整合了ＳＶ４０Ｔ基因，并在细胞核中表达。染色体为近三倍体（５０～６０之间）。除了转化特性之外，ＧＥＳ－１细胞基本保留了正常的细胞骨架结构（微丝、微管、角蛋白），粘蛋白反应阳性。接种在裸鼠中６个月观察无致瘤性。此细胞系将为深入研     

小鼠乳腺癌细胞系Ca761-03的建立及其生物学特性研究

目的：建立体外培养的小鼠乳腺癌细胞系，明确其生物学特性。方法：利用乳腺癌移植瘤组织，进行体外原代培养，并对其纯化和反复传代，进行生长曲线，倍增时间，软琼脂集落形成，细胞周期，染色体众数，免疫组织化学染色及体内成瘤率，转移率等鉴定。结果：建立了一个小鼠乳腺癌细胞系，命名为Ca761-03。其生长迅速，呈贴壁生长。倍增时间为25．98h；平均软琼脂克隆形成率为5．39％；G1期31.8％，S期57.3％，G2＋M期10．9％；CK染色为阳性，ER，PR均为阴性；体内移植成瘤率100％，肺转移率100％，未见淋巴结转移。结论：成功建立了小鼠乳腺癌细胞系．并对其生物学特性进行了较系统的观察与研究。     

小鼠子宫颈癌U14细胞系的建立及生物学特性研究

目的: 建立小鼠宫颈癌肿瘤细胞系,观察其生物学特性。 方法: 采用肿瘤原代培养法对小鼠U14肿瘤进行体外传代培养,定期对培养细胞进行形态学观察,进行免疫组织化学鉴定、细胞周期检查、染色体检测、细胞生长测定,进行615、C57BL/6j小鼠移植观察体内成瘤情况,并用pEGFP-N1质粒转染U14细胞。 结果: 细胞呈贴壁和悬浮混合生长,CK阳性特征。体外连续培养10个月,传代50代,细胞倍增时间为21.83h,细胞周期测定G₁期为34%,G₂期为26.4%,S期为39.6%。培养U14细胞3～4天处于对数生长期,染色体为亚四倍体核型,众数为64～84条。615小鼠、C57BL/6j小鼠移植成瘤率均为100%,无支原体污染。建立了GFP(+)的U14-GFP单克隆细胞株。 结论: 成功建立了小鼠U14子宫颈癌细胞系及GFP标记的U14-GFP细胞株,体内移植可建立常规及带荧光标记的肿瘤模型,可用于体内体外相结合的肿瘤研究。     

小鼠子宫颈癌U14细胞系的建立及生物学特性研究

目的:建立小鼠宫颈癌肿瘤细胞系,观察其生物学特性。方法:采用肿瘤原代培养法对小鼠U14肿瘤进行体外传代培养,定期对培养细胞进行形态学观察,进行免疫组织化学鉴定、细胞周期检查、染色体检测、细胞生长测定,进行615、C57BL/c小鼠移植观察体内成瘤情况,并用pEGFP-N1质粒转染U14细胞。结果:细胞呈贴壁和悬浮混合生长,CK阳性特征。体外连续培养10个月,传代50代,细胞倍增时间为21.83小时,细胞周期测定G1期为34%,G2期为26.4%,S期为39.6%。培养U14细胞3-4天处于对数生长期,染色体为亚四倍体核型,众数为64～84条。615小鼠、C57BL/c小鼠移植成瘤率均为100%,无支原体污染。建立了GFP( )的U14-GFP单克隆细胞株。结论:成功建立了小鼠U14子宫颈癌细胞系及GFP标记的U14-GFP细胞株,体内移植可建立常规及带荧光标记的肿瘤模型,可用于体内体外相结合的肿瘤研究。     

一株对LAK细胞杀伤耐受的胃癌细胞株的建立及其相关生物学特性的研究

人胃癌细胞系MGC-803经反复与LAK细胞共培养获得对LAK细胞杀伤耐受的特性。在反复共培养十个周期后，残留细胞数量逐渐增多并达到稳定。在八小时^3H-TdR释放细胞毒实验中，当效靶比为40：1时，LAK细胞对亲代细胞MGC-803^p杀伤率为90%，而对耐受株MGC-803^R的杀伤率仅为40%。     

裸小鼠人骨肉瘤细胞移植瘤株建立及其特性观察

将人骨肉瘤细胞株移植到NC和BALB/c-nu/nu裸鼠体内,已传20代,移植成功率99％。移植瘤的病理学形态和超微结构均和原骨肉瘤细胞相似,连续传代后也未发生变异。将~(125)Ⅰ标记的OS-McAb注射到荷瘤裸鼠体内,72h后γ-扫描移植瘤显像清楚。该瘤株具有局部浸润和转移能力。     

人SCF基因转染NK细胞系的生物学特性研究

目的；研究SCF基因转染NK细胞系的生物学特性。方法：利用LipofecTAMINE将SCF真核表达载体pcDNA3-hSCF转染NK－92细胞系，RT－PCR鉴定表达SCF的细胞克隆并以SCF依赖细胞株TF－1激活，MTT法检测增殖和杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面分子CD3，CE16和CD56。结果：建立表达hSCF基因的NK－92－hSCF细胞株，在IL－15培养条件下，其增殖能力显著高于NK－92，并且低剂量的IL－15可以维持其较高的杀伤活性流式细胞术检测细胞表面分子CD3，CD16和CD56。结论：可以通过SCF基因修饰NK－92，改变其生物学特性，提高其增殖能力，使NK细胞系有更实用的应用价值。     

转基因人腺癌细胞株的建立及其生物学特性的研究

自Rosenberg等把Neo~R、TNF基因导入肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)对晚期黑色素瘤患者进行治疗以来,肿瘤基因治疗开始问世并多集中于对细胞因子基因(IL-2,TNF,IFN-α,GM-CSF等)转导后抗肿瘤的研究.常用的方法是选择适当载体把细胞因子基因导入抗肿瘤的免疫效应细胞(TIL,LAK,CTL)或肿瘤细胞中,回输或接种机体,直接或间接杀伤肿瘤细胞,增强机体的免疫调节作用,从而达到治疗肿瘤的目的.     

人肝细胞癌细胞系-HHC-98的建立及生物学特性

目的利用人肝细胞癌的裸鼠皮下移植瘤组织在体外建立一人肝细胞癌细胞系HHC-98,并对其一般生物学特性进行研究.方法将剪碎的癌组织移入培养瓶中,用加有15%～20%胎牛血清的1640培养液建成该细胞系,采用电镜观察细胞的超微结构,采用流式细胞术分析DNA含量及细胞周期分布,采用放免分析和免疫组化方法检测甲胎蛋白表达,利用染色体G显带方法进行遗传学分析.结果 HHC-98具有上皮细胞特有的桥粒结构和张力原纤维,形态为典型的上皮细胞形态,其G-6PD同功酶与人肝细胞癌细胞BEL-7402和BEC-7405相同.无血清培养48小时后,培养液中AFP呈现阳性.免疫组化染色细胞AFP及CEA表达均阳性.染色体检测HHC-98细胞均为异倍体,染色体结构异常复杂,从核型分析中发现有5个恒定出现的异常染色体,其中明确的为4q+.该细胞经皮下及腹腔接种均可使裸鼠致瘤.结论 HHC-98具有人肝细胞癌的生物学特性,可作为人肝细胞癌体外研究的对象.     

耐药人肺癌细胞模型D6/MVP的建立及其生物学特性

目的　培养建立耐药肺癌细胞模型D6 /MVP并研究其生物学特性。方法　应用人肺癌细胞株D6 (简称D6细胞 ) ,采用MVP(MMC +VDS +DDP)大剂量间歇诱导法 ,建立耐药人肺癌细胞模型D6 /MVP(简称D6 /MVP细胞 ) ,观察该细胞的生长规律 ;用MTT法鉴定其对多种抗癌药物的多药耐药性 ;以流式细胞技术检测其细胞周期分布、细胞表面多药耐药基因 (MDR)的表达产物P 糖蛋白 (P gp)、多药耐药相关蛋白 (MRP)及谷胱甘肽硫转移系统 (GSH/GST)的表达等。结果　经MTT法鉴定 ,D6 /MVP细胞较D6细胞的MVP半数致死浓度 (IC50 )增大 13.3倍。经流式细胞仪检测 ,D6 /MVP细胞倍增时间明显延长 ,S期细胞减少 ,G2 期细胞增多 ;P gp和MRP的表达显著升高 (P <0 .0 1) ,而GSH/GST的表达无明显变化 (P <0 .0 5 )。结论　D6 /MVP细胞是一个明确的多药耐药细胞模型 ,具有耐药细胞的基本生物学特性。