荧光定量PCR技术在小儿尿液巨细胞病毒检测中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测尿液巨细胞病毒在儿童CMV感染诊断中的意义。方法分别应用FQ-PCR和ELISA法检测75例确诊或高度怀疑为CMV感染和25例对照儿童尿CMV-DNA和血清CMV-IgM,比较病毒DNA与血清抗体的平行性和敏感性。结果75例确诊或疑诊CMV活动性感染患儿中,检测到CMV-DNA 66例;检测到CMV-IgM 54例。两种方法阳性符合率为77%,FQ-PCR和ELISA法阳性检出率分别为88%和72%,有统计学差异(P<0.05)。结论FQ-PCR法检测尿CMV-DNA对诊断活动性CMV感染具有良好的应用价值。     

应用FQ-PCR及ELISA技术诊断孕妇巨细胞病毒感染的研究

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及ELISA检测孕妇血清的CMV-DNA、抗CMV-IgM、抗CMV-IgG在诊断CMV感染中的意义.方法用FQ-PCR和EISA同时检测168例孕妇血清标本的CMV-DNA、抗CMV-IgM、抗CMV-IgG.结果CMV-DNA阳性57例(33.9%),CMV-IgM阳性11例(6.6%),CMV-IgG阳性152例(90.5%),三种检测结果间比较有显著性差异(P＜0.01).结论FQ-PCR检测CMV-DNA灵敏度高,可作为CMV感染的筛选指标.ELISA检测抗CMV-IgM的灵敏度低,仍是CMV现症感染的指标.因此,联合FQ-PCR、ELISA测CMV-DNA、抗CMV-IgM及抗CMV-IgG对筛选CMV感染及判断是否现症感染意义较大.     

病理性黄疸新生儿巨细胞病毒感染的临床研究

目的 分析病理性黄疸患儿巨细胞病毒(CMV)感染情况,探讨母乳CMV-DNA检测的临床意义。方法 选取庆阳市人民医院住院的病理性黄疸新生儿300例,用FQ-PCR方法检测患儿血浆、外周血单个核细胞(PBMC)、尿液和母乳的CMV-DNA,ELISA法检测患儿血清CMV-IgM和IgG,分析CMV感染患儿的临床数据。结果 300例病理性黄疸新生儿中,CMV感染的阳性率为13.33%(40例),其中患儿血清CMV-IgM阳性率为4.33%(13例),CMV-IgG阳性率为80.85%(228例)。母乳CMV-DNA阳性率为46.00%(138例),患儿血浆CMV-DNA阳性率为4.00%(12例),PBMC CMV-DNA阳性率为6.67%(20例),患儿尿液CMV-DNA阳性率为10.00%(30例)。患儿尿液CMV-DNA的阳性率与乳汁CMV-DNA的阳性率有显著相关性(P<0.01)。40例CMV感染患儿中,婴儿肝炎综合症为13例(32.50%),新生儿肺炎12例(30.00%),缺血缺氧性脑病6例(15.00%),听力损伤5例(12.50%),腹股沟斜疝2例(5.00%)。结论 CMV感染是新生儿病理性黄疸主要原因之一;检测产妇母乳中CMV-DNA对母乳喂养具有临床指导意义,有助于预防CMV感染。     

尿巨细胞病毒定量检测在婴幼儿巨细胞病毒感染诊治中的应用

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法在婴幼儿巨细胞病毒感染诊治中的应用价值。方法以住院的130例巨细胞病毒感染患儿为观察组,同期80例正常体检婴幼儿为对照组,检测尿CMV-DNA、血细胞pp65抗原、血清CMV-IgM,同时观察临床表现。结果①210例标本FQ-PCR、CMV-IgM法的阳性符合率为92.0%,FQ-PCR、CMV-IgM法的阴性符合率为64.9%。FQ-PCR、pp65、血清CMV-IgM方法检测的灵敏性分别是93.8%,90.8%,80.0%,特异性分别为97.5%,96.3%,60.0%,与其他两种方法比较,FQ-PCR法灵敏性和特异性高(均P<0.05);②对照组婴幼儿尿液标本中也存在尿CMV-DNA阳性;③观察组患儿治疗后2周复查,130例患儿FQ-PCR、pp65法的阳性符合率为94.7%,FQ-PCR、CMV-IgM法的阳性符合率为81.8%。结论FQ-PCR法检测尿CMV-DNA可广泛用于CMV感染诊治过程的动态观察。     

荧光定量PCR技术在白血病化疗后患者巨细胞病毒感染检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR检测在白血病化疗后患者巨细胞病毒感染中的诊断价值。方法对50例白血病化疗后患者,取静脉血用FQ-PCR检测CMV-DNA,ELISA法检测CMV-IgM。结果50例标本中19例CMV-DNA阳性。阳性率为38%。阳性标本CMV-DNA在1.30×10^3～4.21×10^5拷贝/ml之间,平均6.43×10^4拷贝/ml。CMV-IgM阳性12例,阳性率为24%。2种方法阳性检出率差异有统计学意义（χ^2=8.01,P〈0.01）。结论在连续动态CMV检测多种指标时,结合DNA检测具有更高的临床应用价值,尤其是FQ-PCR方法可快速、灵敏、特异、定量地检测CMV,在CMV感染的诊断、治疗方案选择和疗效观察方面必将有广泛的应用前景。     

婴幼儿巨细胞病毒感染肺炎42例临床分析

目的:探讨婴幼儿巨细胞病毒(CMV)感染肺炎的临床特点、治疗方法。方法:通过ELISA法检测血清CMV特异性抗体IgM,荧光定量PCR检测痰液CMV-DNA,结合临床症状,胸片确诊42例婴幼儿CMV感染肺炎。结果:婴儿CMV感染肺炎的临床表现复杂多样,缺乏特异性。表现为反复咳喘、伴或不伴发热、两肺细湿罗音和哮鸣音,常合并其他肺外表现如肝功能异常,血小板减少等。常规解痉剂、干扰素等治疗难以控制病情,给更昔洛韦治疗后治愈。结论:对临床表现不典型而又有多系统受累的婴幼儿肺炎应注意CMV感染,ELISA法检测血清CMV-IgM,荧光定量PCR检测CMV-DNA简便易行,特异性强。更昔洛韦治疗CMV感染肺炎疗效好。     

联合检测CMV-IgM及CMV-DNA对婴幼儿巨细胞病毒肝炎的诊断价值

目的 探讨联合检测巨细胞病毒(CMV)-IgM及CMV-DNA对婴幼儿巨细胞病毒肝炎的诊断意义.方法 采用化学发光法检测聊城市人民医院122例确诊巨细胞病毒肝炎患儿(病例组)的血清CMV-IgM,同时用荧光探针PCR法检测患儿血清与尿液的CMV-DNA;另选择该院同期186例无感染症状健康儿童为对照组.分析各组肝炎患儿CMV-IgM和CMV-DNA的阳性率差异,并通过受试者工作特征(ROC)曲线比较单独及联合检测CMV-IgM、CMV-DNA在诊断婴幼儿巨细胞病毒肝炎中的价值.结果 病例组CMV-IgM和CMV-DNA的阳性率均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).根据年龄分组,1d至6个月组CMV-IgM及CMV-DNA联合检测的总阳性率最高;在以临床特征分组中,黄疸组CMV-IgM及CMV-DNA联合检测的总阳性率最高,以上差异均有统计学意义(P＜0.05).经ROC曲线分析病例组CMV-IgM及CMV-DNA联合检测的曲线下面积最大,灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均最大,诊断价值最高.结论 联合检测CMV-IgM、CMV-DNA比单独检测对婴幼儿巨细胞病毒肝炎有更好的诊断价值.     

CMV感染病儿实时荧光定量PCR检测及意义

目的 探讨实时荧光定量PCR法检测病儿尿液中巨细胞病毒(CMV)-DNA含量在诊断和动态监测CMV感染中的意义.方法 应用PE 5700全自动PCR扩增分析仪,检测35例临床高度怀疑有CMV感染病儿(病儿组)尿液中的CMV-DNA拷贝数,随机选择45例同年龄段患非感染性疾病病儿作为对照组,比较两组CMV阳性标本中CMV-DNA含量,并测定治疗后的病毒载量.同时与血清CMV-IgM抗体检测结果进行比较.对部分病儿进行临床观察和随访.结果 病儿组CMV感染27例,阳性检出率为77.14%;对照组CMV感染12例,阳性检出率为26.67%.治疗后两组病儿尿液中CMV-DNA拷贝数下降幅度均较大,与治疗前比较, 差异有显著性(t=4.159、5.438,P<0.01).实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率高于血清CMV-IgM检测方法.9 例病儿随访2年,1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载量仍在较高水平,1年后发展为肝硬化;4例CMV 肝炎经治疗后, 1 例CMV-DNA转阴,3例仍阳性;4例无症状性感染病儿CMV-DNA转阴或降至低水平.结论 实时荧光定量PCR技术检测CMV感染具有快捷、灵敏度高、特异度高等优点,量化结果便于对治疗过程进行连续监测,为病儿治疗和随访提供有效帮助.     

59例小儿巨细胞病毒感染IL-2检测分析

目的:了解小儿巨细胞病毒感染特征及与白细胞介素-2(IL-2)的关系。方法:应用荧光定量PCR方法对就诊的151例疑似巨细胞病毒感染病例,进行尿液标本中巨细胞病毒(CMV)DNA检测,同时两组患儿应用ELISA法检测血清CMVIgM及血清IL-2。结果:观察组婴幼儿CMV感染59例;CMV-DNA浓度在6.02×102~9.80×107copy/ml之间,基因定量值中位数为5.61×104copy/ml。CMV-IgM抗体阳性48例。感染组CMV-DNA平均IL-2浓度水平低于对照组,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CMV感染时,IL-2浓度水平减低。     

FQ—PCR和ELISA法检测婴幼儿巨细胞病毒感染的临床价值探讨

目的 探讨两种不同的方法检测婴幼儿巨细胞病毒（HCMV）感染及在临床诊断与治疗中的应用价值.方法 采用FQ-PCR检测126例临床疑似HCMV感染婴幼儿尿液中HCMV-DNA水平,同时采用ELISA法检测以上婴幼儿血清HCMV-IgM抗体.结果 FQ-PCR检测尿液HCMV-DNA的阳性率为35.71％,ELISA法检测婴儿血清HCMV-IgM阳性率为16.67％.两种方法对HCMV感染诊断的阳性率差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 FQ-PCR检测尿液HCMV-DNA是早期诊断婴幼儿HCMV感染的敏感有效的方法.     

血PP65抗原检测在诊断巨细胞病毒感染上的应用

目的探讨血PP65抗原、尿CMV-DNA和血IgM抗体检测对婴儿巨细胞病毒(CMV)活动性感染的诊断价值.方法通过免疫荧光技术对142例CMV病毒性感染患儿进行血PP65抗原检测,同时用实时荧光定量PCR方法测定尿CMV-DNA,并用ELISA法检测血清CMV-IgM,比较三种方法的检测结果;对25例PP65阳性患儿进行短期随访,分析PP65的临床应用价值.结果142例CMV感染患儿中,PP65抗原阳性率89.4%(127/142),阳性细胞范围7-145/2×105个多形核白细胞.PP65与尿CMV-DNA两种方法检测的结果差异无统计学意义(χ2=0.125,P>0.05),但PP65与血CMV-IgM检测结果差异有统计学意义(χ2=53.16,P<0.01).PP65抗原和尿PCR的阳性符合率98.4%(127/129),阴性符合率86.7%(13/15),与IgM抗体阳性符合率是51.2%(65/127),阴性符合率19.5%(15/77).PP65相对于PCR的敏感性为98.4%(127/129),特异性为97.6%(124/127);PP65抗原水平与CMV感染的病情程度有明显相关性,高水平PP65感染患儿多发全身性感染,低水平PP65抗原血症多为单脏器感染(χ2=49.03,P<0.005).在感染恢复期,PP65转为阴性或明显下降.结论 PP65抗原检测是诊断活动性CMV感染的快速、敏感、特异的有效方法,量化结果有助于监测病情,评价感染状态.     

不同标本巨细胞病毒DNA检测在小儿巨细胞感染中的应用

目的不同标本血液、尿液、母乳HCMV-DNA检出率比较,探讨荧光定量PCR法与ELISA法对HCMV感染的诊断价值。方法 378例疑似HCMV感染婴儿,为金乡县人民医院2014年7月至2015年6月新生儿科及儿科住院患儿,根据年龄分为两组:新生儿组(0-28天)116例,婴儿组(29天~12月)262例;其中男230例,女148例。选择未感染HCMV病毒的新生儿血清标本100例作为正常对照组。分别收集血液、尿液及母乳。分别应用荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)检测DNA,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)比较,并进行统计学处理。结果不同标本血液、尿液、母乳HCMV-DNA检出率比较,新生儿组母乳检出率最高,血液次之尿液最低;婴儿组尿液检出率最高。荧光定量PCR法检测尿液DNA含量较酶联免疫法检测血清Ig M抗体阳性率高,两者比较有统计学意义(P0.01)。结论血液检测是有创检查,尤其是新生儿采血又很困难,通过本试验得出可以用尿液HCMV-DNA检测代替巨细胞病毒的初筛;荧光定量PCR法阳性检出率高于酶联免疫法检测血清Ig M抗体,两者比较有统计学意义,表明荧光定量PCR法在临床上对巨细胞病毒的诊断更有优势和价值。     

肾移植受者巨细胞病毒隐性感染的筛查方法及应用

目的探讨肾移植受者巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)隐性感染的筛查方法,为临床早期发现CMV活动性感染提供诊断依据。方法收集笔者医院2009年10～12月期间门诊随访233例肾移植受者外周静脉血标本450份,分别采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、巢式PCR(nPCR)以及酶联免疫吸附(ELISA)法对标本进行检测,同时采用ELISA法检测他克莫司(Tac)浓度。结果 233例肾移植受者CMV-IgG均为阳性,CMV-IgM则均为阴性;Real-time PCR技术检测CMV-DNA阳性85例(36.48%),以低拷贝数为主。nPCR技术检测CMV-DNA阳性10例(4.29%),两种技术检测总阳性率存在显著性差异(P<0.05);随着Tac药物浓度升高,CMV-DNA阳性率呈增高趋势,药物高浓度组CMV-DNA阳性率高于低浓度组(P<0.05)。结论 Real-time PCR是筛查肾移植受者CMV隐性感染较为理想的方法,尤其在受者药物浓度偏高时更具有临床应用价值。     

新生儿高胆红素血症与巨细胞病毒感染的关系

目的 探讨巨细胞病毒(CMV)感染在新生儿高胆红素血症发病机制中的意义.方法 采用ELISA法和实时荧光PCR法分别检测315例高胆红素血症新生儿和152名健康新生儿血清CMV-IgM和尿液PCR-CMV-DNA,并用常规方法 测定巨细胞病毒感染新生儿及健康新生儿肝功能状况.结果 高胆红素血症新生儿血清CMV-IgM及尿液CMV-DNA阳性率较对照组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).CMV感染阳性的高胆红素血症患儿与CMV感染阴性的高胆红素血症患儿黄疸水平的差异无统计学意义(P>0.05),但前者消退时间显著长于后者,且肝功能存在明显的受损情况,差异有高度统计学意义(P<0.01).结论 巨细胞病毒感染是新生儿高胆红素血症的重要病因,可引起肝功能损害及黄疸消退延迟.     

472例患者巨细胞病毒感染的分析

目的:了解人类巨细胞病毒(CMV)感染与流产、死(畸)胎、肾炎、冠心病、糖尿病和婴儿黄疸的关系.方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测CMV-IgM抗体,对472例患者和60例健康对照者CMV感染状态进行调查分析.结果:CMV-IgM抗体阳性率患者组17.58 %(83/472),对照组1.67 %(1/60),两组阳性率比较,差异非常显著(χ2=10.144,P<0.01).结论:CMV感染与流产、死(畸)胎、肾炎、冠心病、糖尿病和婴儿黄疸等疾病的部分患者的发病有关.     

婴儿巨细胞病毒感染146例临床分析

目的 探讨婴儿巨细胞病毒(CMV)感染的临床特点、治疗及预防.方法 146例CMV患儿,男86例,女60例;年龄1～12月;母乳喂养94例,混合喂养52例.经血清学CMV-IgM定性检测或尿CMV-DNA定量检测确诊为CMV感染;母乳CMV-DNA 检测100％阳性.临床表现为高胆红素血症48例(32 9％),腹泻病40例(27.4％),婴儿肝炎28例 (19.2％),急性支气管肺炎24例( 16.4％),中枢神经系统损害6例(4.1％).所有病例静脉给予更昔洛韦(GCV,5 mg/kg,每12h1次,疗程7～10 d)诱导治疗;中枢神经系统损害者其后增加维持治疗.结果 高胆红素血症48例治愈26例,好转22例;婴儿肝炎28例治愈20例,好转8例;腹泻病40例、支气管肺炎24例及中枢神经系统损害6例均治愈.除个别患儿ALT增高停药后很快恢复外,未见其他GCV治疗的不良反应.结论 要儿CMV感染临床表现多样,严重者可致中枢神经系统损害;血清特异性CMV-IgM抗体、尿CMV-DNA定量检测是实验室诊断依据,GCV是治疗首选药物,早期母乳CMV-DNA筛查是其预防的有效手段.     

母乳人巨细胞病毒定量检测在婴儿巨细胞病毒肝炎中的应用

目的了解母乳人巨细胞病毒（HCMV）感染状况及HCMV通过母乳对婴儿的传播情况。方法应用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法分别检测156份母乳和与其配对确诊或疑诊HCMV肝炎患儿尿液中HC-MV-DNA含量。结果确诊或疑诊HCMV肝炎患儿母亲母乳HCMV-DNA阳性率为72.44%;尿HCMV-DNA阳性母乳喂养的婴儿HCMV-DNA阳性率为72.57%,明显高于HCMV-DNA阴性母乳喂养的婴儿（48.84%）（P〈0.01）。结论HCMV感染母乳是婴儿后天获得性HCMV感染的重要途径。     

应用FQ-PCR及ELISA技术诊断孕妇巨细胞病毒感染的研究

目的　探讨荧光定量聚合酶链反应 ( FQ- PCR)及 ELISA检测孕妇血清的 CMV- DNA、抗CMV- Ig M、抗 CMV- Ig G在诊断 CMV感染中的意义。方法　用 FQ- PCR和 ELISA同时检测 1 68例孕妇血清标本的 CMV- DNA、抗 CMV- Ig M、抗 CMV- Ig G。结果　 CMV- DNA阳性 5 7例 ( 33.9% ) ,CMV- Ig M阳性1 1例 ( 6.6% ) ,CMV- Ig G阳性 1 5 2例 ( 90 .5 % ) ,三种检测结果间比较有显著性差异 ( P <0 .0 1 )。结论　FQ-PCR检测 CMV- DNA灵敏度高 ,可作为 CMV感染的筛选指标。ELISA检测抗 CMV- Ig M的灵敏度低 ,仍是CMV现症感染的指标。因此 ,联合 FQ- PCR、ELISA测 CMV- DNA、抗 CMV- Ig M及抗 CMV- Ig G对筛选CMV感染及判断是否现症感染意义较大。     

流式细胞术检测PP65抗原血症在巨细胞病毒性肝炎诊断中的意义

目的:探讨流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测PP65抗原血症对巨细胞病毒(human cytomegalovirus,CMV)肝炎的诊断价值.方法:采用流式细胞仪对41例CMV肝炎患儿进行血PP65抗原检测,同时用PCR方法测定尿CMV-DNA并用ELISA法检测血清CMV-IgM,比较3种方法的检测结果,对部分患儿进行短期随访,分析PP65的临床应用价值.结果:41例CMV肝炎中36例检出PP65抗原阳性,阳性率达87.8%,CMV-DNA及IgM的阳性率分别为92.6%及36.6%.全身性感染伴高水平抗原血症,单纯肝炎抗原水平相对较低(P＜0.01).PP65在肝炎恢复期转为阴性或低水平,病情恶化时明显增高.结论:PP65抗原血症检测是诊断活动性CMV感染的有效手段,量化结果有助于监测病情.     

巨细胞病毒在乙型肝炎患者中感染状况的探讨

目的：了解巨细胞病毒在乙型肝炎中感染状况。方法：在病例组及对照组中应用酶联免疫法(ELISA)法及CMV-IgM及CMV-DNA(PCR)法检测巨细胞病毒(CMV)。结果与结论：提示PCR技术敏感性高于ELISA法，用PCR技术检测乙肝患者血清中CMV-DNA是一种早期、快速、准确诊断CMV活动性感染的有效方法之一。