阻断PKA信号通路对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响

目的观察蛋白激酶A（PKA）信号通路在食管癌EC9706细胞增殖和凋亡中的作用。方法利用PKA特异性阻断剂H89作用于食管癌EC9706细胞,倒置显微镜下观察食管癌EC9706细胞形态学改变;WST-8检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC和PI双染法检测细胞凋亡。结果与对照组相比,H89作用于食管癌EC9706细胞24 h后,部分细胞出现细胞形态缩小,细胞增殖减慢;细胞增殖实验显示,吸光度值降低（P〈0.05）,细胞存活率下降;细胞凋亡检测结果显示,阻断PKA通路,促进细胞早期凋亡和晚期凋亡（P〈0.05）。结论利用H89阻断PKA信号通路,可以改变食管癌EC9706细胞生物学特性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

辛伐他汀对食管癌EC9706细胞增殖及核因子κB的影响

目的：探讨辛伐他汀对人食管癌EC9706细胞增殖及核因子κ B 表达的影响。方法：培养食管癌EC9706细胞株,采用二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测辛伐他汀在不同浓度和不同作用时间下对人食管癌EC9706细胞增殖的影响,透射电镜、激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪检测辛伐他汀对肿瘤细胞凋亡率和细胞周期的影响,免疫组化技术研究辛伐他汀对人食管癌EC9706细胞NF-κ B 表达的影响。结果：二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法证实辛伐他汀在0～20μ mol/L 浓度区间内,随浓度增加和时间的延长,辛伐他汀对食管癌EC9706细胞的抑制率逐渐增加。透射电镜、激光共聚焦显微镜下可见细胞出现典型凋亡细胞形态学改变。流式细胞仪检测细胞凋亡率,细胞周期阻滞于G0/G1 期。不同浓度（0,5,10,20μ mol/L）辛伐他汀与EC9706细胞作用 72h,NF-κB 胞核染色阳性率（%）分别为（46.2±5.0,38.3±4.8,30.8±4.0,23.4±2.1）（P<0.05,P<0.01）,以及 20μmol/L的辛伐他汀与 EC9706作用不同时间（0,24,48,72h）后,NF-κ B 胞核染色阳性率（%）分别为（37.8 ± 2.8,31.6 ± 2.6,25.6 ± 2.2,16.8 ± 2.0）（P<0.05,P<0.01）。 随着辛伐他汀作用浓度增加和作用时间延长,食管癌EC9706细胞NF-κ B 的表达逐渐降低。结论：辛伐他汀对食管癌EC9706细胞的增殖具有显著抑制作用,且与辛伐他汀的浓度和作用时间呈正相关,其作用机制可能与通过抑制食管癌EC9706细胞NF-κB 的表达而使细胞发生凋亡有关。     

大蒜素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用

目的： 研究大蒜素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用。方法：0、18 μg/mL大蒜素处理人食管癌EC9706细胞,应用细胞计数、流式细胞仪、Hoechst33258染色、HE染色和电镜观察经大蒜素诱导处理后EC9706细胞的凋亡情况。结果：与对照组比较,经18 μg/mL大蒜素诱导处理7 d后,EC9706细胞的增殖活动受到明显抑制,细胞生长抑制率达75.89％ (P<0.05);细胞周期检测出现亚二倍体 (亚G1期)细胞峰值,细胞凋亡率达23.8％ (P<0.05),并发生G2/M期阻滞;经Hoechst33258 染色出现细胞核浓染及致密的固缩形态和颗粒状荧光;光镜和电镜观察结果均显示,大蒜素处理组细胞体积缩小,细胞核固缩,出现染色质凝聚、边集化等显著的凋亡特征。结论：大蒜素对人食管癌EC9706细胞具有凋亡诱导作用。     

三氧化二砷对食管癌细胞系EC9706作用的研究

目的探讨不同浓长三氧化二砷（As2O3）对食管癌细胞系EC9706的生长抑制作用及其机理。方法不同浓度三氧化二砷作用于细胞EC9706,采用MTT法检测细胞生长,倒置显微镜观察细胞形态,并通过DNA梯状电泳和流式细胞仪检测凋亡。结果三氧化二砷剂量依赖性抑制细胞生长;观察到典型的细胞凋亡形态学特征性改变;琼脂糖电泳呈现凋亡DNA梯状条带;流式细胞仪分析。细胞株EC9706存在明显的G0／C1期阻滞。结论As2O3具有抑制食管癌细胞株EC9706生长作用,其机理是诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。     

LNC01852通过调控Bcl-2对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响及作用机制

目的:探究长链非编码RNA LNC01852对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:选取人食管癌细胞系EC9706、KYSE30、TE-13和人食管黏膜上皮细胞系HET-1A为研究对象,分别采用siRNA基因敲减技术、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）、MTS细胞增殖实验、克隆形成实验和流式细胞术细胞凋亡实验观察LNC01852对食管癌EC9706细胞增殖和凋亡能力以及对p53-Bcl-2/Bax凋亡信号通路标志分子mRNA和蛋白表达的影响。结果:qRT-PCR结果表明,人食管癌细胞系中LNC01852的表达较食管黏膜上皮细胞系HET-1A明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;MTS细胞增殖实验、克隆形成实验和流式细胞术细胞凋亡实验结果表明,转染siLNC01852能够明显抑制人食管癌EC9706细胞中LNC01852的表达,同时抑制细胞的增殖能力和菌落形成能力,并促进细胞发生凋亡;此外,qRT-PCR和Western blot结果进一步证实,敲减LNC01852能够明显上调人食管癌EC9706细胞中促凋亡分子p53和Bax的mRNA和蛋白表达,同时明显抑制抗凋亡分子Bcl-2的mRNA和蛋白表达,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:LNC01852通过介导p53-Bcl-2/Bax凋亡信号影响人食管癌细胞增殖和凋亡,提示靶向LNC01852及其下游p53-Bcl-2/Bax凋亡信号,有望为临床食管癌治疗提供新的靶点和理论依据。     

丹参酮IIA 通过调控上皮间质转化抑制食管癌EC9706 和KYSE70 细胞的凋亡、侵袭和迁移

目的:探讨丹参酮IIA 对食管癌EC9706 和KYSE70 细胞侵袭和迁移的影响及其调控机制。方法:食管癌细胞系EC9706 和KYSE70 培养完成后分为4 组：对照组（加DMSO）和2、4、6 μg/ml 丹参酮组。采用CCK-8 法检测EC9706 和KYSE70 细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell 实验检测细胞侵袭能力,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,qRT-PCR和Western blotting 实验检测EMT相关蛋白E-cadherin、Snail-2、Vimentin 和N-cadherin mRNA和蛋白表达水平。结果：小于6 μg/ml的丹参酮IIA 不影响食管癌EC9706 和KYSE70 细胞增殖活力;4、6 μg/ml 丹参酮IIA 组细胞凋亡率明显高于对照组（均P<0.01）;2、4、6 μg/ml 丹参酮组每个视野下的侵袭细胞数及划痕愈合率明显低于对照组（均P<0.01）,且EC9706 和KYSE70 细胞形态由纺锤状的间充质形态转变为上皮形态。与对照组相比,2、4、6 μg/ml 丹参酮组E-cadherin 表达明显升高,Snail-2、Vimentin 和N-cadherin表达明显下降（均P<0.01）。结论：丹参酮IIA 通过抑制EMT促进食管癌EC9706 和KYSE70 细胞凋亡,并减弱其侵袭和迁移能力。     

Notch1基因在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及其对细胞凋亡的影响

背景与目的:早期的研究显示,Notch1信号途径与肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、增殖、分化和凋亡中起着十分重要的作用.本研究旨在研究Notch1基因在食管鳞癌EC9706细胞中的表达及其对EC9706细胞凋亡的影响.方法:通过免疫细胞化学方法检测Notch1基因在EC9706细胞中的表达.采用RT-PCR技术扩增Notch1基因,构建真核表达载体pcDNA3.1-Notch1(命名为pcNICD),转染EC9706细胞,利用RT-PCR及Western blot检测稳定转染pcNICD 载体、转染pcDNA3.1空载体及未处理的EC9706细胞中Notch1的表达,另通过流式细胞仪检测未处理、转染pcDNA3.1和转染pcNICD的EC9706细胞的凋亡.结果:EC9706细胞中发现Notch1基因的表达.与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比,转染pcNICD的EC9706细胞中Notch1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显增加,大约增加3倍(P＜0.05);但未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中Notch1的表达差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞检测结果显示,在未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞中,细胞凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05);但与与未处理的和转染pcDNA3.1的EC9706细胞相比.转染pcNICD的EC9706细胞转染后24 h、48 h和72 h时细胞凋亡率明显增加(P＜0.01).结论:Notch信号途径的激活引起食管鳞癌EC9706 细胞的凋亡.提示Notch1基因有可能成为治疗食管鳞癌的新靶点.     

CEA基因沉默对基因工程腺病毒(H101)杀伤食管癌EC9706细胞的影响

目的: 研究癌胚抗原(CEA)特异性基因沉默对基因工程腺病毒(H101)杀伤食管癌EC9706细胞作用的影响,以探讨影响H101敏感性的内在因素。 方法: 利用RNA干扰技术,构建针对人食管癌EC9706细胞的CEA siRNA载体,通过基因转染,在EC9706细胞中建立稳定的CEA基因沉默体系(干扰1组及干扰2组),并以空载体转染和未进行转染的EC9706细胞作对照,用H101在体外进行细胞毒性实验。 结果: 在此实验任何病毒浓度下,干扰2组与空载体组和对照组比较,生存率明显下降,有统计学意义(P<0.05);而干扰1组在低病毒浓度(≤1vp/cell)下,与空载体组和对照组比较,生存率下降,有统计学意义(P<0.05),当病毒浓度>1vp/cell时,无统计学意义(P>0.05)。 结论: 提示CEA在H1001感染并杀伤肿瘤细胞过程中可能起一定作用,为进一步从基因水平探讨CEA的作用机制和提高溶瘤腺病毒的治疗效果打下基础。     

索拉非尼对食管癌EC9706细胞的生长抑制作用

目的 探讨索拉非尼（sorafenib）体外对EC9706细胞生长抑制作用及其机制。方法 qRTPCR检测sorafenib作用后MMP-2、MMP-9、TIMP1、AKT和Bcl-2 mRNA的表达;Western blot检测sorafenib作用后AKT、p-AKT、Bcl-2、MMP-2和TIMP1蛋白表达水平的变化;Hoechst/PI 染色荧光显微镜观察sorafenib诱导的细胞凋亡/坏死;细胞划痕实验观察sorafenib对EC9706细胞的迁移抑制作用。结果 与对照组相比,qRT-PCR显示sorafenib下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2 mRNA表达,上调TIMP1 mRNA 表达（P<0.05）;Western blot显示sorafenib降低MMP-2、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的表达水平,上调TIMP1蛋白表达水平（P<0.05）;荧光显微镜观察发现sorafenib诱导红染细胞增加（P<0.05）;细胞划痕实验发现sorafenib作用后划痕明显变宽,并且具有浓度依赖性（P<0.05）。结论 索拉非尼能够上调TIMP1表达水平、下调MMP-2、MMP-9、AKT、Bcl-2表达水平,可以抑制食管鳞癌EC9706细胞的迁移、促进凋亡坏死,这些可能是其产生抗肿瘤作用的机制之一。     

环六亚甲基双乙酰胺诱导EC9706细胞分化中细胞增殖与形态结构的变化

目的：观察环六亚甲基双乙酰胺（hexamethylene bisacetamide,HMBA）对人食管癌EC9706细胞的增殖以及形态结构的影响。方法：采用不同浓度的HMBA（3、5、8、10mmol/L）处理人食管癌EC9706细胞,实验同时设立对照组（未加HMBA）。测定各组细胞的生长曲线、分裂指数,并在光镜下观察HMBA诱导前后细胞增殖以及形态结构的变化。结果：与对照组比较,经3、5、8、10mmol/L的HMBA处理后,EC9706细胞的生长和增殖受到抑制,其抑制率依次分别为52.875%、80.579%、83.617%、90.272%,差异均具有统计学意久（P〈0.05或P〈0.01）,且呈浓度-效应关系。光镜下观察HMBA处理组的EC9706细胞较对照组细胞的体积增大,且趋于扁平铺展状态,细胞大小较为一致,排列较为规则。结论：经HMBA诱导处理后的人食管癌EC9706细胞出现了与同组织来源的正常上皮细胞相似的形态与结构特征,表现出肿瘤细胞恶性表型逆转的特征。     

核酶对食管癌EC9706细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的 :观察针对人端粒酶RNA模板区的核酶对食管癌细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法 :利用脂质体Lipofectamine介导 ,将已构建好的带有端粒酶核酶基因的重组质粒pBBS2 12Rz及空载质粒pBBS2 12转染食管癌EC970 6细胞 ,采用TRAP ELISA法检测端粒酶活性 ,用倒置相差显微镜及流式细胞仪观察细胞生长和凋亡情况。结果 :重组质粒pBBS2 12Rz转染的食管癌EC970 6细胞的端粒酶活性明显下降 ,细胞生长速度明显变慢 ,凋亡加速。结论 :端粒酶核酶对食管癌细胞端粒酶活性和细胞生长有抑制作用 ,可望成为食管癌基因治疗的新方法     

番茄红素对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究番茄红素(lycopene,LP)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法:体外培养并取对数生长期人非小细胞肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的LP(2.5、5、10、20 μg/ml)和顺铂(40 μg/ml)进行干预,48 h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定吸光度值并计算细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞凋亡状况,逆转录PCR法(RT-PCR)检测细胞中凋亡相关基因(BaxmRNA、bcl-2 mRNA)表达,免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白(caspase-3)表达.结果:与空白对照组比较,LP能够剂量依赖性地提高人非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制率,延长细胞周期中G0/G1期并缩短G2/M期,提高A549细胞凋亡率(AI),上调Bax mRNA表达、下调bcl-2 mRNA表达,提高Bax/bcl-2比值,上调caspase-3蛋白表达.结论:LP具有抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖并促进其凋亡的作用,其机制可能与LP能够阻滞细胞周期并调节凋亡相关基因蛋白表达有关.     

下调FAM111B对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨下调FAM111B对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:构建siR-FAM111B慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231和MCF7细胞,qRT-PCR检查转染组与对照组FAM111B mRNA表达,Western blotting法检测各组细胞FAM111B蛋白表达。用CCK-8法检测细胞的增殖能力。流式细胞术检测Annexin-V/PI双染各组细胞的凋亡情况。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:siR-FAM111B成功转染MDA-MB-231和MCF7细胞,转染后应用qRT-PCR和Western blotting检测,结果显示,FAM111B mRNA与蛋白水平均下调。siR-FAM111B能抑制两种细胞的增殖。Annexin-V/PI双染结果显示,下调FAM111B诱导两种细胞凋亡。Western blotting结果显示,下调FAM111B可以促进两种细胞Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:下调FAM111B能够抑制乳腺癌细胞的增殖,通过调节线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。     

Bmi-1在食管鳞癌细胞株EC9706中的表达及初步功能研究

Background and Objective:Previous studies have shown that Bmi-1 is overexpressed in a variety of tumors,suggesting that Bmi-1 plays an important role in tumorigenesis.In this study,we investigated the effect of Bim-1 siRNA on cell proliferation,cell cycle,cell apoptosis and migration of human esophageal carcinoma EC9706 cells,and explored its potential mechanisms.Methods:Bmi-1 small interfering RNA(siRNA) was transferred into EC9706 cells.Then,cell proliferation was measured using cell counting kit-8(CCK-8)...     

人参多糖与他莫昔芬联合对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及其机制研究

目的： 探讨人参多糖 (ginseng polysaccharide,GPS)与他莫昔芬 (tamoxifen,TAM)联合对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响及其机制。方法：以不同浓度 (0、20、40、80和160 μg/mL)GPS作用于人乳腺癌MCF-7细胞株48 h,以MTT法检测细胞增殖抑制情况,以GPS的最小有作用剂量与不同浓度 (0、0.5、1、2和4 μg/mL)TAM联合处理细胞48 h,以金氏公式筛选出协同抑制作用最明显的联合剂量,以该联合剂量处理MCF-7细胞48 h后,用DAPI染色法、流式细胞术检测细胞凋亡情况;用Giemsa染色检测细胞有丝分裂指数;用Western blot检测细胞中Fas、Caspase-9 以及Parp的表达情况。结果：MTT法检测提示GPS在48 h对MCF-7细胞的最小有作用剂量为40 μg/mL,金氏公式计算结果提示40 μg/mL GPS+1 μg/mL TAM联合用药协同抑制细胞增殖作用最强 (q=1.82);与GPS或TAM单独作用相比,DAPI染色发现联合用药组镜下可见大量凋亡小体;流式细胞仪检测发现,联合用药能够协同增加细胞凋亡率 ( q=2.19,P <0.05);Giemsa染色结果显示联合用药能够协同抑制细胞有丝分裂 (均P<0.05);Western blot检测发现,联合用药能增加细胞中Fas表达,促进Caspase-9以及Parp的活化。结论：GPS与TAM联合能够协同通过Fas信号通路促进人乳腺癌MCF-7细胞发生凋亡。     

黄芩苷对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的:检测黄芩苷对骨肉瘤MG-63细胞增殖活性、凋亡指数、超微结构以及Survivin、VEGF、CAS-3蛋白表达水平的影响,评估黄芩苷对骨肉瘤的治疗学效应,并探讨其分子生物学机制。方法:骨肉瘤MG-63细胞培养成功后,分别采用0、50、100、200μg/ml浓度黄芩苷作用于骨肉瘤MG-63细胞。MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡指数,透射电镜检测细胞超微结构改变,Western blot法检测Survivin、VEGF及CAS-3蛋白的表达。结果:MTT结果显示,黄芩苷对MG-63细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示,治疗组中MG-63细胞凋亡指数显著高于对照组。透射电镜观察细胞超微结构,可见黄芩苷对MG-63超微结构有明显的影响。Western blot分析显示,随着黄芩苷浓度的增加,Survivin及VEGF蛋白的表达逐渐下降,而CAS-3表达增加,呈剂量依赖性。结论:黄芩苷可抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过抑制肿瘤新生血管形成或通过调控CAS-3的表达、下调Survivin信号通路来完成的。     

miRNA21对人肺癌 A549细胞增殖及迁移的影响

目的：探讨抑制 miRNA21对人肺癌 A549细胞体外增殖、迁移及凋亡的影响。方法：采用体外转染法将 miRNA21－5p 瞬时转染 A549细胞后,应用 Real －time PCR 特异探针法检测人肺癌细胞系中 miRNA21的表达情况;应用 MTT 法检测人肺癌 A549细胞的增殖情况;应用 Transwell 小室检测人肺癌 A549细胞的迁移情况;流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测细胞的凋亡情况;Western blot 检测人肺癌 A549细胞中表皮因子生长受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达。结果：与正常对照组和 miRNA21－NC 阴性对照组相比,miRNA21－5p 转染组人肺癌 A549细胞中 miRNA21表达水平显著降低,EGFR 表达显著下调,细胞生长显著受抑制,且促进人肺癌 A549细胞的凋亡（P ＜0．05）。结论：抑制 miRNA21在人肺癌 A549细胞中的表达,能够抑制 A549细胞的生长,促进其凋亡,miRNA21有可能作为治疗肺癌的新靶标之一。     

miRNA-375对胰腺癌细胞Panc-1增殖和凋亡的影响

  目的  探讨miRNA-375的外源性表达对人胰腺癌细胞Panc-1增殖和凋亡的影响。   方法  将miRNA-375表达质粒或对照质粒转染Panc-1细胞, qRT-PCR方法检测miRNA-375在转染细胞中的表达水平, 细胞计数法、流式细胞术分别检测外源性miRNA-375表达后Panc-1细胞增殖、凋亡和周期的变化情况。   结果  miRNA-375表达质粒组与对照组比较, 其miRNA-375表达诱导性升高, 细胞增殖受到抑制, 细胞凋亡率增加, 细胞周期阻滞于G₀~G₁期。   结论  在胰腺癌细胞Panc-1中增加miRNA-375的表达, 可抑制细胞增殖, 促进细胞凋亡和细胞周期阻滞, miRNA-375在胰腺癌细胞Panc-1中可能发挥潜在的抑癌基因作用。      

抑制骨保护素表达对乳腺癌细胞增殖及TRAIL致其凋亡的影响

目的观察抑制肿瘤细胞骨保护素（OPG）表达对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL）致其凋亡的影响。方法采用M1Tr法检测对照MDA-MB-231和MDA-MB-231i细胞（OPG表达抑制）增殖;流式细胞术分析对照MDA-MB-231细胞和TRAIL作用24h后MDA-MB-231、MDA-MB-231i细胞凋亡率。结果前2组细胞倍增时间分别为43．5±2．9小时和45．8±3．6小时,差异无统计学意义;后3组细胞凋亡率分别为6．4％±1．3％、16．1％±1．7％和24．4％±3．3％,每2组之间差异均有统计学意义（P值分别为0．001、0．01和0．018）。结论抑制乳腺癌细胞OPG表达不影响其增殖能力。TRAIL可以诱导乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞OPG表达可显著增强TRAIL诱导其凋亡的能力。