用聚合酶链反应技术诊断儿童呼吸道腺病毒感染

用聚合酶链反应技术诊断儿童呼吸道腺病毒感染郑永晨，傅文永（白求恩医科大学第一临床学院儿科，长春１３００２１）腺病毒（Ａｄｖ）是儿童肺炎的主要病原［１］，特别是我国北方地区，目前尚无一种较理想的常规实验室诊断方法，以往报道的血清方法存在灵敏性低和特异性...     

一起腺病毒引起的急性呼吸道感染暴发疫情分析

目的调查潼南县米心小学流感样病例暴发疫情。进行暴发流行病学和疾病传播模式描述,研究暴发危险因素和控制措施。方法对所有疑似病例开展流行学调查和采集血,咽拭子标本进行实验室检测,同时隔离治疗病例和采取应急接种措施控制疫情蔓延。对收集到的数据进行暴发流行病学描述。结果全校共报告急性呼吸道感染病例44例(8.32%),18例现症患者的鼻咽拭子进行实验室检测,腺病毒核酸检测为阳性,其中2例合并甲型H1N1流感病毒核酸阳性。     

2010—2011年兰州地区5岁以下腹泻患儿杯状病毒和腺病毒感染的流行特征

目的了解兰州地区腹泻患儿中杯状病毒和腺病毒感染的分子流行病学及临床特点。方法收集兰州大学第一医院2010年7月至2011年6月腹泻患儿粪便标本295份,采用RT-PCR或PCR的方法检测杯状病毒及腺病毒,腺病毒阳性标本利用多重PCR及巢式PCR的方法分型,并对序列进行分析。结果295份粪便标本中杯状病毒的检出率为13．2％（39／295）,腺病毒的检出率是5．1％（15／295）。分型结果显示：杯状病毒中69．2％为诺如病毒,其余是札如病毒,诺如病毒中以GII-3（13例）为主,其次为GII-4（12例）,GII-6（2例）;腺病毒主要以F组的41型（10／15）为主,同时还检测到1例A组的31型,2例B组的3型及C组的1例5型和1例6型,两种病毒均主要感染2岁以下儿童,无明显的季节高峰。结论杯状病毒和腺病毒是2010—2011年兰州地区病毒性腹泻患儿的重要病原,长期监测具有重要意义。     

2010—2012年韶关市儿童呼吸道感染病毒病原学分析

目的探讨韶关市儿童常见呼吸道感染的病原学特点和分布特征。方法采集2010年7月至2012年7月因呼吸道感染于粤北人民医院的住院患者呼吸道标本171份,采用荧光定量PCR方法,对呼吸道标本同时进行甲型流感病毒（FluA）,乙型流感病毒（FluB）,腺病毒（ADV）,博卡病毒（BoV）,副流感病毒1型（PIV1）、2型（PIV2）、3型（PIV3）,鼻病毒（HRV）,呼吸道合胞病毒（RSV）,冠状病毒229E、0C43、HKUl、NL63,偏肺病毒（MPV）等14种常见呼吸道病毒核酸检测。结果171份标本中检出阳性标本93份,核酸阳性率为54．4％（93／171）,其中FluA占首位,阳性率为8．2％（14／171）,其他依次为ADV7．6％（13／171）,HRV7．6％（13／171）,PIVI／II／III 7．0％（12／171）,RSV 6.4％（11／171）,FluB5．8％（10／171）,BoV5．3％（9／171）,MPV3．5％（6／171）,冠状病毒（HCoV—OC43／HKUl）2．9％（5／171）。不同性别问患儿呼吸道病毒阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。≥6月龄组阳性率最低（37．5％）,1—3岁年龄组阳性率最高（62．1％）。结论韶关地区儿童发热呼吸道病毒感染病例的病原体以甲型流感病毒、腺病毒和鼻病毒为主。     

2011-2012年深圳市呼吸道腺病毒分子分型及其流行特征

目的了解2011—2012年深圳地区致病性呼吸道腺病毒（AdV）的病原体基因亚型和遗传进化及其流行特征．分析深圳地区呼吸道腺病毒的流行规律和传播途径。方法收集2011年1月至2012年12月深圳地区31个流感样病例监测哨点2822份样本,先用荧光定量PCR方法筛查流感样病例,筛查后的阴性样本进一步进行呼吸道腺病毒等13种常见呼吸道病毒的核酸检测。对检测出的109份腺病毒阳性标本进行病毒分离,感染Hep-2受体细胞后共获得71份AdV稳定细胞毒株,用腺病毒六邻体基因作为靶基因,扩增其中的50份腺病毒阳性标本,纯化扩增产物后直接用于序列分析,在GenBank上进行序列比较,确定其病毒亚型并进行系统进化分析。结果2011—2012年深圳市腺病毒感染患者的高发年龄段人群为小于7岁的儿童,1～2岁婴幼儿发病率最高;4-6月和10—12月为每年发病高峰期。在2822份流感样病例咽拭子标本中,经定量PCR方法确定为AdV核酸阳性共109份,核酸阳性率为3．86％,从109份核酸阳性样本中分离病毒7l份,病毒分离率为68．93％。50份分离的呼吸道腺病毒分子分型结果为1型AdV6例,占12％;2型AdV4例,占8％;3型AdV27例,占54％;4型AdV3例,占6％;5型AdV4例,占8％;7型AdV5例,占10％;另外有复合型AdV（HAdV—un）1例,占2％。结论近两年来深圳地区呼吸道Adv感染以3型为主,腺病毒引起的呼吸道疾病主要发生在每年的4—6月,感染人群主要是1~2岁婴幼儿。     

呼吸道腺病毒快速检测方法探讨

腺病毒(adenovirus，Adv)是引起婴幼儿下呼吸道感染的较为重要的病原之一，引起的肺炎病情危重，具有较强的传染性，故对其进行早期快速诊断，以便临床尽快地进行治疗和隔离显得尤为重要。     

2010-2011年兰州地区5岁以下腹泻患儿杯状病毒和腺病毒感染的流行特征

目的 了解兰州地区腹泻患儿中杯状病毒和腺病毒感染的分子流行病学及临床特点.方法 收集兰州大学第一医院2010年7月至2011年6月腹泻患儿粪便标本295份,采用RT-PCR或PCR的方法检测杯状病毒及腺病毒,腺病毒阳性标本利用多重PCR及巢式PCR的方法分型,并对序列进行分析.结果 295份粪便标本中杯状病毒的检出率为13.2％( 39/295),腺病毒的检出率是5.1％ (15/295).分型结果显示:杯状病毒中69.2％为诺如病毒,其余是札如病毒,诺如病毒中以GⅡ-3(13例)为主,其次为GⅡ-4(12例),GⅡ-6(2例);腺病毒主要以F组的41型(10/15)为主,同时还检测到1例A组的31型,2例B组的3型及C组的1例5型和1例6型,两种病毒均主要感染2岁以下儿童,无明显的季节高峰.结论 杯状病毒和腺病毒是2010 -2011年兰州地区病毒性腹泻患儿的重要病原,长期监测具有重要意义.     

2011—2020年兰州市住院严重急性呼吸道感染病例常见呼吸道病毒监测结果分析

目的:了解兰州市住院严重急性呼吸道感染(severe acute respiratory infection, SARI)病例常见呼吸道病毒病原谱及流行病学特征,为兰州市SARI病例的防控和治疗提供参考依据。方法:收集2011年1月至2020年12月兰州大学第一医院SARI病例的咽拭子、痰液及少量肺泡灌洗液样本2 57...     

2007—2011年长沙地区急性下呼吸道感染住院儿童人偏肺病毒的流行状况

目的了解人偏肺病毒（hMPV）在长沙地区急性下呼吸道感染住院患儿中的流行病学特点。方法收集2007年9月至2011年2月因急性下呼吸道感染在湖南省人民医院儿科医学中心住院儿童的鼻咽抽吸物（nasopharyngealaspirates,NPA）样本2613份,采用逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）检测hMPVM基因,将阳性PCR扩增产物测序并与GenBank中已知的hMPV参考株进行比对、分析。结果2613份标本中hMPV阳性检出数135例,检出率为5．2％,男女之间的检出率比较有统计学差异（x2=8．007,P=0．003）,hMPV阳性检出患儿的年龄以1岁以内多见（63．2％）。hMPV阳性检出率在春季呈现高峰,从检出季节分布显示A2b型主要在冬春季节流行,而B2型主要在春夏季流行。135例hMPV长沙株分为A型和B型两个主要的基因型,其中A2b亚型在2007--2008年为优势流行型别,2009--2010年A2b和B2型共同流行,B2亚型在2011年呈优势流行型别。135例hMPV检出阳性患儿中有66例（48．9％）存在混合病毒感染,其中与HBoV混合检出率最高。结论长沙地区部分儿童的急性下呼吸道感染与hMPV有关,且阳性检出患儿年龄主要集中在1岁以下,男多于女,主要流行季节在春季,A2b型和B2型优势基因型在长沙地区共同流行,与其他病毒混合检出率较高。     

长沙地区住院儿童人冠状病毒NL63的感染状况及临床特征

目的 了解HCOV-NL63在长沙地区急性下呼吸道感染住院儿童中的流行状况以及临床特征.方法 采集长沙地区2008年9月至2010年10月因急性下呼吸道感染住院儿童NPA样本1185份,用RT-PCR方法检测HCOV-NL63N基因,阳性扩增产物经测序确认,统计分析临床资料.结果 1185份NPA样本中,HCOV-NL63检出阳性10份,检出率为0.8％,其中春季检出1例、夏季检出6例、秋季检出2例、冬季检出1例;阳性检出病例患儿年龄最大2岁半,最小2个月,平均月龄12.5个月;男童7例,女童3例;临床诊断为支气管肺炎6例、毛细支气管炎3例、急性喉气管支气管炎1例;10例中有4例病情危重;4例有基础疾病;7例合并其他病毒混合感染;阳性扩增产物经测序分析与HCOV-NL63参考株同源性为97％～100％.结论 本资料HCOV-NL63阳性检出患儿年龄均在3岁以下;夏季检出率高;男童感染为主;单一基因型在长沙地区流行;HCOV-NL63可能也是我国儿童急性下呼吸道感染中的一种病原.     

重症急性呼吸道感染儿童中人博卡病毒的分型检测与基因进化分析

目的 了解重症急性呼吸道感染住院儿童中人博卡病毒（HBoV）的感染状况,流行病学特征及其进化特征.方法 采用巢式PCR的方法,对来自北京儿童医院重症急性呼吸道感染住院儿童的259份鼻咽抽吸物,进行人博卡病毒（HBoV）分型检测与测序,同时进行了合并感染检测、流行病学、临床特点及基因多态性分析.结果 共检出56份人博卡病毒感染阳性标本,阳性率为21.6％,[95％ CI（16.0％～27.3％）,P＜0.0001],其中2岁以下儿童感染率较高.与其他呼吸道常见病毒的合并感染率为94.6％.HBoV阳性产物测序分析发现,人博卡病毒1型占96.4％ （54/56）,2、3型各1份.HBoV阳性株分型区（VP1/VP2）序列变异不明显.结论 人博卡病毒是儿童急性呼吸道感染常见的病原体,以I型最为常见,分型区（VP1/VP2）序列较保守.HBoV在重症急性呼吸道感染儿童中是否起到真正的致病作用还需进一步的研究.     

儿童急性呼吸道博卡病毒感染的病毒载量与临床特征相关性研究

目的 研究急性呼吸道感染患儿人博卡病毒（ human bocavirus,H BoY）病毒载量与临床特征的相关性。方法 对2009年l1月至2010年12月间956例呼吸道感染的患儿及251例健康对照组儿童鼻咽部抽吸物、咽拭子采用PCR法进行HBoV检测,进而对阳性样本进行实时荧光定量PCR法测定博卡病毒DNA载量,并结合患儿的临床检查进行综合分析。结果 实验组与对照组HBoV阳性率存在显著差异,下呼吸道感染病例HBoV的病毒载量水平与上呼吸道感染病例及对照组儿童差异均有统计学意义,上呼吸道感染病例与对照组儿童病毒载量无统计学意义,重症下呼吸道感染患儿与普通下呼吸道感染患儿HBoV的病毒载量无统计学差异,HBoV混合感染与独立感染患儿病毒载量亦无统计学差异。结论 博卡病毒常年均可引起发病,是儿童呼吸道感染的重要病原体之一,但可能不是儿童急性呼吸道感染的唯一因素。HBoV病毒载量并不能独立反映临床疾病感染的严重程度。     

儿童博卡病毒感染的临床特点

目的了解儿童博卡病毒(Human bocavirus,HBoV)感染的临床特征,探讨博卡病毒感染的疾病相关性。方法收集从2005年10月至2006年2月因急性呼吸道感染住院儿童鼻咽抽吸物(nasopharyngeal aspirates,NPA)148份,并采集了2份博卡病毒呼吸道样本阳性患者的血清。采用聚合酶链式反应(PCR)扩增的方法,对鼻咽抽吸物及血清标本进行了检测,并进行序列测定。结果从148份急性呼吸道鼻咽抽吸物中检出11份博卡病毒感染阳性,阳性检出率为7.4%,所获得的2例博卡感染血清核酸扩增也呈阳性。该11例博卡病毒阳性患者临床主要表现为支气管炎,支气管肺炎或肺炎症状,部分患者伴随有腹泻症状。结论博卡病毒感染患者均有下呼吸道感染表现,博卡病毒可能是引起下呼吸道感染的一个重要病原;博卡病毒血清阳性提示,博卡病毒有可能引起病毒血症;博卡病毒感染除表现下呼吸道症状外,有可能引起肠道等其他相关症状。     

南京地区儿童人偏肺病毒感染的流行病学及临床特征分析

目的了解南京地区儿童人偏肺病毒（hMPV）感染的流行病学特点及临床特征。方法收集2009年8月至2010年7月南京医科大学附属南京儿童医院住院及门诊呼吸道感染患儿的鼻咽抽吸物（NPA）及咽拭子（NPS）共642例,采用逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）检测hMPVM基因,将阳性PCR扩增产物进行测序、同源性和进化分析。结果642例标本中共检出hMPV阳性扩增产物35份,检出率为5．5％。系统进化分析显示南京地区hMPVB1型占51．4％,A2b型占31．4％。hMPV的发病高峰在4月份。其致呼吸道感染以1岁以内多见（71．4％）。35例hMPV感染患儿中有15例（42．8％）存在混合感染,其中与HRV的混合感染检出率最高。临床诊断以肺炎（17例,48．6％）最为常见。结论人偏肺病毒是南京地区儿童急性呼吸道感染的重要病原之一,该年度其优势流行型别为B1型,南京地区A、B两型hMPV感染患儿临床特征无明显差异。     

应用序列非依赖扩增技术检测儿童呼吸道标本中潜在病毒病原体

目的 应用序列非依赖扩增技术(sequence-independent amplification,SIA)检测常见病毒筛查阴性的5岁以下急性呼吸道感染患儿的呼吸道标本中可能存在的潜在病毒病原体,了解SIA扩增文库中各种背景核酸的组成.方法 随机选择45份常见病毒筛查阴性的5岁以下急性呼吸道感染患儿的鼻咽吸出物,0.45μm过滤和DNase/RNase处理去除病毒颗粒外的各种外源性核酸,再通过序列非依赖扩增技术对处理后的标本提取的核酸进行扩增,继而对扩增产物进行克隆、测序和BLAST比对.结果 测序403个克隆,获得有效序列368个,检出16个(16/368,4.3％)真核病毒同源序列,分别与Torque teno mini virus,Torque teno midi virus和Human bocavirus同源.此外,还检出1个真菌病毒( sclerotinia sclerotiorum hypovirulence associated DNA virus 1)同源序列和5个细菌病毒(噬菌体)同源序列.其余检出序列包含206个( 206/368,56.0％)与人基因组DNA同源的序列,11个(11/368,3.0％) rRNA同源序列,72个(72/368,19.6％)细菌同源序列,4个(4/368,1.1％)真菌同源序列,5个(5/368,1.4％)寄生虫同源序列,6个(6/368,1.6％)食源性序列,以及36个(36/368,9.8％)未能确定分类的序列.结论 核酸消化结合SIA方法可以检出常规检测方法所无法检出的潜在病毒病原体,本研究为后续系统性的查找和监测未知病毒提供了基础.     

长沙地区呼吸道感染儿童Saffold心肌炎病毒的调查

目的了解长沙地区Saffold病毒（以下简称为SAFV）在儿童呼吸道感染中的流行情况,探讨其与儿童呼吸道感染的相关性。方法选取湖南省人民医院儿科医学中心2007年11月至2008年10月间643名因呼吸道感染住院儿童的鼻咽抽吸物。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Realtime．PCR）方法扩增SAFV的5UTR的基因片段,并且统计分析临床资料。结果643份样本中共检测出SAFV阳性67份,阳性检出率为10．42％（67／643）,5岁以上未检测出该病毒。31例患迁延性肺炎和慢性肺炎的患儿标本检出SAFV8例（25．81％）,差异有统计学意义。结论本研究表明长沙地区下呼吸道感染住院儿童存在SAFV感染;SAFV可能与下呼吸道感染及病程迁延相关。     

兰州地区急性呼吸道感染患儿冠状病毒NL63的检测与临床研究

目的 探讨兰州地区冠状病毒NL63(HCoV-NL63)在急性呼吸道感染患儿中的流行现状及临床特点.方法 收集2006年11月至2009年10月兰州大学第一附属医院急性呼吸道感染(ARTIs)患儿1169例鼻咽分泌物,应用RT-PCR方法检测HCoV-NL63以及其余7种常见呼吸道病毒:鼻病毒(HRV),呼吸道合胞病毒(RSV),偏肺病毒(hMPV),流感病毒(IFVA,IFVB)副流感病毒1-3(HPIV1-3)及PCR方法检测腺病毒(ADV),博卡病毒(HBoV).结果 检测出HCoV-NL63阳性标本35例,检出率2.99％,2007年8、9月,2009年7、8月检测阳性标本阳性率较高,分别为23.53％、17.65％,50％、33.33％.2007年12月至2009年2月未检出HCoV-NL63阳性标本.25(25/35)例混合其他病毒感染,混合感染率为71.43％,最常见的混合感染病毒是HRV.3岁及以下和3岁以上HCoV-NL63感染组感染率差异无统计学意义.HCoV-NL63阳性患儿主要的诊断是支气管肺炎和毛细支气管炎,主要的症状是发热和咳嗽.HCoV-NL63单独感染组和混合感染组除消化道症状外,在其余症状和临床诊断方面,差异均无统计学意义.结论 HCoV-NL63是兰州地区呼吸道感染患儿的重要病原,夏季是兰州地区HCoV-NL63感染高峰期,HCoV-NL63的流行存在年度差异.HCoV-NL63感染存在很高的混合感染率,混合感染并不加重HCoV-NL63感染的病情.     

呼吸道感染患者肺炎支原体抗体检测结果分析

目的研究肺炎支原体（MP）感染发病率与患者年龄、性别和季节的关系。方法用被动凝集法检测呼吸道感染患者血清中肺炎支原体抗体（MP-Ab）,并对2010年患者MP-Ab检测结果进行分析。结果5年检测结果阳性率为30．10％;男、女性患者阳性率分别为30．74％、36．12％,差异有统计学意义（P〈0．05）;各年龄组差异有统计学意义（P〈0．001）,3～14岁阳性率最高;季节发病率差异无统计学意义;阳性滴度〉1：640的患者占10．18％。结论MP感染逐年增加,3～14岁儿童为高危人群,女性感染机会高于男性,全年均可发病;大多患者预后良好。