人参皂苷Rg5通过下调Bcl-2蛋白促进食管癌Eca-109细胞凋亡

目的研究人参皂苷Rg5对于人食管癌细胞Eca-109凋亡的影响以及相关机制。方法传代培养人食管癌细胞Eca-109,应用CCK8法检测人参皂苷Rg5对于Eca-109细胞增殖的影响。应用流式细胞仪检测人参皂苷Rg5作用后Eca-109细胞的凋亡变化。使用Western blot法检测C-caspase3、C-caspase9、C-parp、Bcl-2、Bax相关凋亡蛋白的变化情况。结果人参皂苷Rg5明显抑制Eca-109细胞的生长,同时促进细胞凋亡,且均呈现剂量依赖性。Western blot显示,随着人参皂苷Rg5浓度的增高,细胞中的C-caspase3、C-caspase9、C-parp蛋白表达增多,而Bcl-2表达明显降低。结论人参皂苷Rg5抑制人食管癌细胞Eca-109增殖并促进其凋亡,发挥该作用与Bcl-2蛋白下调有关。     

柴胡对人食管癌细胞株Eca-109的抑制作用

目的:探讨中药柴胡对人食管癌细胞株Eca-109的抑制作用。方法:体外培养人食管癌细胞株(Eca-109),分别给以不同浓度的柴胡溶液对体外培养的Eca-109细胞株进行干预。以MTT比色法测定柴胡溶液对Eca-109细胞株的抑制增殖的作用,计算其细胞增殖存活率。结果:MTT实验显示柴胡溶液可以明显抑制Eca-109细胞株的增殖。用药后Eca-109细胞增殖存活率下降幅度与剂量呈正相。结论:中药柴胡在体外具有抗肿瘤作用,其机制是抑制肿瘤细胞增殖,及抑制细胞的分化而达到抗肿瘤的目的。     

体外血管内皮生长因子单克隆抗体对C6胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移力的影响

目的:在体外观察血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体对C6胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移力的影响。方法:采用氯化钴(Co Cl2)模拟缺氧环境,予以0、0.1、1、10μg/m L的VEGF抗体,对常氧或缺氧条件下对C6胶质瘤细胞进行处理。通过MTT实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting检测HIF-1α蛋白、FAK/Pyk2总蛋白及磷酸化FAK-Tyr397/Pyk2-Tyr402表达水平变化。结果:200μmol/L Co Cl2明显抑制C6细胞增殖(P<0.05),10μg/m L VEGF抗体可明显抑制C6细胞增殖(P<0.05)。与常氧相比,缺氧可使C6细胞的迁移、侵袭能力增强(P<0.05)。常氧和缺氧下,VEGF抗体的干预均增强C6细胞的迁移、侵袭能力(P<0.05),且相对于常氧,缺氧可进一步增强VEGF抗体促C6细胞迁移、侵袭的作用(P<0.05)。Co Cl2干预可增加C6细胞中HIF-1α的含量;在常氧和缺氧情况下,只有1μg/m L VEGF抗体可降低FAK的总蛋白量(P<0.05);在缺氧情况下,VEGF抗体可明显增高Pyk2-Tyr402位点的磷酸化水平。结论:在缺氧情况下,VEGF抗体的干预可使Pyk2-Tyr402位点的磷酸化水平增高,引起C6细胞的侵袭迁移能力进一步增强。     

华蟾素对肾癌细胞增殖的影响

目的探讨华蟾素对人肾癌786-0细胞的影响及机制。方法用不同浓度的华蟾素(浓度分别为1、10、100、1 000μg/m L)作用于人肾癌786-0细胞株,采用CCK-8法检测华蟾素对肾癌786-0细胞增殖效应的影响,采用流式细胞术(FCM)检测华蟾素对肾癌786-0细胞周期的影响,采用蛋白印迹法检测华蟾素对Survivin蛋白表达水平的影响。结果CCK-8法结果提示,不同浓度的华蟾素均可显著抑制肾癌786-0细胞的增殖,且抑制率呈时间、剂量依赖关系。FCM检测发现华蟾素可使肾癌786-0细胞周期中的G0/G1期比例增加,S期缩短。蛋白印迹法显示,华蟾素可使肾癌786-0细胞中Survivin蛋白表达水平降低。结论华蟾素能够抑制人肾癌786-0细胞的增殖,并阻滞细胞周期在G0/G1期,其机制可能与影响蛋白Survivin的表达相关。     

苦参碱对胶质瘤C6细胞血管生成相关因子的影响

目的探讨缺氧条件下苦参碱对胶质瘤C6细胞血管生成相关因子的影响。方法胶质瘤C6细胞培养至对数生长期,分别加入0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0g/L苦参碱溶液,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;对数生长期胶质瘤C6细胞随机分为CoCl_2正常组、常氧正常组、CoCl_2苦参碱组、常氧苦参碱组,其中CoCl_2正常组和CoCl_2苦参碱组采用CoCl_2培养液培养,常氧正常组和常氧苦参碱组采用正常DMEM培养液培养,采用倒置显微镜观察各组细胞形态学改变,采用Western blot方法检测各组细胞血管生成相关因子缺氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、金属蛋白酶组织抑制因子-3(tissue inhibitor of metalloproteinase-3,TIMP-3)表达情况。结果 CoCl_2处理后苦参碱对胶质瘤C6细胞有明显抑制作用,且随苦参碱浓度增加细胞抑制率明显升高(24h:R~2=0.9897,IC_(50)=1.468g/L);常氧正常组细胞狭长,梭形,贴壁生长;CoCl_2正常组细胞呈三维空间分布;常氧苦参碱组细胞变小、变圆,出现碎裂;CoCl_2苦参碱组细胞较轻程度变小、变圆,出现碎裂;CoCl_2正常组和CoCl_2苦参碱组HIF-1α(1.660±0.171、1.331±0.112)、VEGF(1.161±0.020、0.932±0.016)、TIMP-3(1.464±0.047、1.785±0.043)蛋白表达量明显高于常氧正常组(1.092±0.082、0.784±0.042、0.603±0.052)和常氧苦参碱组(0.734±0.080、0.637±0.022、1.203±0.069)(P0.05),CoCl2苦参碱组HIF-1α和VEGF蛋白表达量低于CoCl2正常组,TIMP-3蛋白表达量高于CoCl_2正常组(P0.05);常氧苦参碱组HIF-1α和VEGF蛋白表达量低于常氧正常组,TIMP-3蛋白表达量高于常氧正常组(P0.05)。结论缺氧条件下苦参碱能抑制胶质瘤C6细胞增殖,使VEGF蛋白表达下调、TIMP-3蛋白表达上调,其抗肿瘤机制可能与抑制血管生成相关。     

粉防己碱对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及ERK/NF-kB通路的影响

目的:观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及ERK/NF-kB信号通路的影响.方法:培养增生性瘢痕成纤维细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、[3H]-TdR掺入率测定不同浓度Tet对细胞增殖的抑制作用;免疫沉淀法纯化蛋白并ERK<,1/2>试剂盒测定ERK活性;Western-blot测定P-ERK<,1/2>、NF-kB(p65)及NF-kB抑制物(I-kBα)的表达.结果:Tet作用下,细胞胞体收缩、变圆,间隙增宽,药物浓度高时,细胞碎裂、浮起.MTT实验、[3H]-TdR掺入率均显示Tet明显抑制细胞增殖,Western-blot显示Tet明显抑制p-ERK<,1/2>及NF-kB(p65)表达及增强I-KBα表达.结论:Tet可抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖,其途径与下调ERK/NF-kB信号通路有关.     

裙带菜多糖对人食管癌Eca-109细胞抑制作用的实验研究

目的观察裙带菜多糖（PUP）体外抑制食管癌细胞增殖的作用及其作用机制。方法以食管癌Eca—109为研究对象,MTT法检测PUP对其增殖的抑制作用;用流式细胞术分析Eca-109细胞的凋亡率和检测Survivin蛋白的表达水平。结果不同浓度的裙带菜多糖均可明显抑制食管癌细胞的增殖（P均〈0．05）,浓度越高细胞凋亡率越高,100μg／ml的裙带菜多糖可诱导Eca-109细胞凋亡率达72．25％,可使Eca-109细胞Survivin蛋白表达水平均明显降低（P〈0．01）。结论裙带菜多糖可抑制Eca-109细胞生长,诱导细胞凋亡,其作用可能与下调细胞Survivin蛋白的表达有关。     

沙利度胺抑制卵巢癌细胞株SKOV3体外生长机制的研究

目的:探讨沙利度胺(Thal)单药及联合顺铂(cDDP)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、依托泊苷(VP-16)对卵巢癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用.方法:(1)MTT法检测细胞增殖抑制:(2)流式细胞术检测细胞周期:(3)半定量RT-PCR检测血管内皮生长因子(VEGF)mRNA、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)mRNA的表达.结果:(1)MTT法示Thal单药及联合用药对细胞增殖有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性.(2)流式细胞术示Thal能阻滞细胞于G<,0>/G<,1>期,联合用药可增强cDDP、5-FU、VP-16的疗效,显著阻滞细胞于S期.(3)半定量RT-PCR示200、100、50 μg/mL Thal能抑制VEGF mRNA表达;所有浓度Thal均不影响PPAR-γ mRNA的表达.结论:Thal可抑制卵巢癌细胞株SKOV3体外增殖、阻滞细胞周期、抑制VEGF mRNA表达.联合用药可增强cDDP、5-FU、VP-16的疗效.     

外源性PDGF-DD蛋白对肝癌细胞株BEL-7402的体外作用

目的:探讨外源性PDGF-DD蛋白对PDGF-D和β-PDGFR阳性表达的人肝癌细胞株BEL-7402增殖和转移相关基因VEGF及CXCR4表达的影响.方法:浓度为0 ～ 100 pg/mL PDGF-DD蛋白作用于肝癌细胞株BEL-7402 48 h,MTT检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR检测VEGF mRNA和CXCR4 mRNA表达.结果:外源性PDGF-DD蛋白干预细胞后,可促进细胞增殖,且在0 ～ 100 pg/mL范围内呈剂量依赖性;周期分布显示G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例增多;且上调VEGF mRNA和CXCR4 mRNA的表达.结论:外源性PDGF-DD能促进BEL-7402细胞增殖,上调VEGF、CXCR4 mRNA的表达.提示PDGF-D及其信号传导系统在肝癌的发生、发展及转移中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点.     

缺氧对成牙骨质细胞增殖、凋亡及缺氧相关基因的影响

目的：探讨不同时间缺氧微环境对成牙骨质样细胞OCCM-30增殖、凋亡及缺氧相关基因的影响,了解缺氧在正畸导致的牙骨质吸收中所起的作用。方法利用三气培养箱构建细胞缺氧模型,以常氧条件培养为对照组,利用MTT法测定细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测HIF-1α、VEGF mRNA等相关基因的表达变化。结果缺氧可以抑制OCCM-30细胞的增殖,明显提高细胞的凋亡率,并能显著诱导HIF-1α和VEGF mRNA基因的表达,HIF-1αmRNA的表达水平在24 h达到顶峰后进入平台期;而VEGF mRNA的表达水平在36 h后开始逐步上调。结论缺氧微环境能抑制OCCM-30细胞增殖,促进调亡及缺氧相关基因的表达。     

去甲斑蝥素通过NF-κB/IκBα途径增强阿霉素的抗骨髓瘤效应

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)联合阿霉素(ADR)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以U266细胞为研究对象,采用NCTD(10 μmol/L)和ADR(0.25 μmol/L)单独或联合处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测核因子-κB P65( NF-κB P65)、磷酸化NF-κB P65( p-NF-κB P65)、NF-κB抑制因子IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白水平,免疫组化法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平.结果 ①NCTD能增强ADR的细胞毒和诱导凋亡作用,二者具有协同作用;②与ADR单药组比较,联合用药组胞核NF-κB P65和胞质p-IκBα的表达量分别由2.08±0.29和0.39±0.07降至0.48±0.08和0.02±0.01,胞质NF-κB P65和IκBα表达无变化;③联合用药组与ADR单药比较,survivin和Bcl-2的表达水平分别由0.31±0.05和0.23±0.05降至0.03±0.02和0.05±0.02,而Bax的表达由0.46±0.06升至0.62±0.08;④ADR组和联合用药组VEGF的阳性率分别为(44.6±4.4)％和(27.0±2.1)％,NCTD增强ADR对VEGF表达的抑制作用.结论 NCTD通过抑制NF-κB/IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2、Bax和VEGF的表达,增强ADR的抗骨髓瘤效应.     

川芎嗪可影响肿瘤坏死因子α刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达

背景：川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚。目的：观察川芎嗪对肿瘤坏死因子α刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB及其相关基因产物白细胞介素6表达的影响。方法：体外培养HSC-T6细胞株,取对数生长期的细胞用于实验。实验分为4组：对照组仅加入细胞;TNF-α组加入10μg/L TNF-α;川芎嗪干预组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1000mg/L;PDTC组先加入终浓度为10μg/L的TNF-α作用30min后,再加入终浓度18μmol/L的核因子κB阻断剂PDTC。结果与结论：MTT结果显示100,200,400,600,1000mg/L的川芎嗪均能抑制HSC-T6增殖,且呈剂量依赖性。免疫细胞化学染色及Western blot检测发现10μg/L的肿瘤坏死因子α刺激后,HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达明显增多（P〈0.01或P〈0.05）,200,400,600mg/L的川芎嗪及18μmol/L的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子α刺激后HSC-T6细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达（P〈0.01）,且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用最明显。相关性分析结果显示HSC-T6细胞结缔组织生长因子和核因子κB的表达呈正相关（r=0.980,P〈0.01）。说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及白细胞介素6的表达,抑制肝星状细胞的增殖。     

高三尖杉酯碱对K562细胞NF-κB和BCL-2蛋白表达的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱（HHT）对K562细胞增殖、凋亡及BCL-2和NF-κB蛋白表达的影响。不同浓度HHT作用K562细胞后用MTT法、流式细胞仪、Western blot等方法分别检测细胞增殖、凋亡、BCL-2及NF-κB蛋白表达水平。结果表明,HHT作用48h,浓度依赖性抑制K562细胞增殖,Ic50为43．89rig／ml。HHT10ng／ml作用48h,K562细胞凋亡率明显增高;细胞周期阻滞于G0／G1期;BCL-2和NF-κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论：HHT对K562细胞有显著的增殖抑制、细胞周期阻滞和凋亡诱导作用,抑制NF-κB和BCL-2表达可能是其抗CML的机制之一。     

多肽cSN50通过核质转运受体Importinα抑制HepG2细胞核因子-KB及其下游因子的表达

目的 研究乙醇、内毒素是否通过核转录因子NF-kappaB即IκB-NF-κB-importinα途径引起细胞炎症、凋亡和诱导下游基因TNF-α、Caspase-3的表达;cSN50作为一种穿膜多肽通过阻断NF-κB与importinα结合,从而抑制NF-κB核转位及其下游基因的表达,起到保护细胞的作用.方法 应用流式细胞仪观察HepG2经不同浓度乙醇、内毒素刺激后的细胞凋亡率;分光光度计法测Caspase-3活性;ELISA法检测细胞培养上清TNF-α;Western blot法检测NF-κB p50、importinα3、IκBα,间接免疫荧光法测p50、IκBα、importinα3的活化水平.结果 乙醇、内毒素刺激后TNF-α、Caspase-3的值量效上与空白对照组比差异均有统计学意义(P均＜0.05),细胞核内p50显著增加(P＜0.05),胞浆IκBα下降(P＜0.05),cSN50( 100 μmol/L)能部分阻断P50的核转位及其下游因子的表达(P＜0.05).结论 急性酒精肝损伤中,NF-κB的核转位在此损伤中起重要作用,cSN50能部分抑制被刺激后的HepG2细胞核中NF-κB活性及其下游基因的表达.     

黄芪多糖胶原干预周围组织中核因子κB与血管内皮细胞生长因子表达而促进毛细血管新生

背景：补气生血类中药具有与生长因子促血管生成作用相近的功效。目的：观察黄芪多糖胶原促血管新生的疗效,及其对血管内皮细胞生长因子基因表达的核因子κB通路的影响。方法：采用大鼠背部皮下植入模型,分别将黄芪多糖胶原和空白胶原植入大鼠背部两侧,于植入后3,7,14,21d处死大鼠,取胶原周围肉芽组织进行检测。结果与结论：造模后3d时,大鼠肉芽组织中微血管数开始增加,7～14d时达到峰值,之后下降。在造模后3,7,14d,植入黄芪多糖胶原的大鼠周围肉芽组织中毛细血管数、血管内皮细胞生长因子mRNA及核因子κB蛋白的表达均显著高于植入空白胶原的大鼠（P〈0.01）,且核因子κB蛋白的表达早于毛细血管新生与血管内皮细胞生长因子mRNA的表达。说明黄芪多糖胶原促血管新生作用有可能是通过活化核因子κB信号通路而上调血管内皮细胞生长因子mRNA表达实现的。     

人睫状肌细胞核因子κB在曲伏前列腺素作用下的变化

背景：核因子κB可能与葡萄膜巩膜房水流出通道的多种细胞信号调控有关。目的：观察前列腺素类曲伏前列腺素药物作用下，体外培养的人睫状肌细胞核因子KB及其抑制因子（inhibitor，IκB）的变化。设计、时间及地点：对比观察实验，于2005-03，2006-11在中山眼科中心实验室完成。材料：供体取自中山眼科医院，摘自死亡1h内无眼疾青年尸体眼球。患者家属对实验知情同意，并自愿捐献。方法：在人睫状肌细胞培养基中加1umol／L曲伏前列腺素，根据孵育时间的不同分为4组，即0h对照组和6，12，24h组。主要观察指标：采用real-time RT-PCR、免疫荧光半定量分析和ELISA法分别检测上述时间组核因子κBp65、IκBa在基因和蛋白水平的表达。结果：①与对照组比较，6，12，24h组核因子κBp65 mRNA表达均下降（F=17．068，P=0．001）：IκBαmRNA6h组、12h组较对照组改变不明显（P〉0．05），24h组较对照组表达增加（F=32．742，P=0．000）。②免疫荧光半定量分析表明：核因子KBp65荧光强度6，12，24h组均较对照组减少（F=17．216，P=0．000）；IκBQ6h组较对照组没有明显改变（P=0．134）、12h组较对照组轻微下降（P=0．032），24h组较对照组明显增加（F=17．346，P=0．001）。③ELISA法检测磷酸化核因子κBp65随药物作用时间延长而逐渐下降（F=15．4，P=0．001）。结论：曲伏前列腺素作用于人睫状肌细胞后，核因子κBp65的基因表达下调，核易位抑制，IκBα的基因表达上调。     

顺铂抑制IL-8诱导人卵巢癌SKOV-3细胞的迁移作用及相关机制的研究

目的 观察外源性人白细胞介素-8 （IL-8）对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移的影响,及顺铂对它的干预作用,初步探讨顺铂抑制细胞迁移的机制.方法 顺铂处理SKOV-3细胞,MTT法确定顺铂使用的最佳作用浓度;Transwell法观察顺铂对IL-8诱导SKOV-3细胞迁移的干预作用;ELISA法检测顺铂分泌IL-8情况;Western blot法检测NF-κB蛋白表达水平.结果 MTT结果显示：与对照组相比,顺铂浓度为100μg/ml对细胞增殖有显著抑制作用（P＜0.05）.浓度区间在200～400μg/ml的顺铂对细胞的增殖也有抑制作用,该范围内对细胞的生长抑制率无统计学差异（P＞0.05）.浓度为100μg/ml的顺铂,分别作用于SKOV-3细胞24 h、48 h、72 h,各时间组比较无统计学差异（P＞0.05）.IL-8（100 ng/L）处理细胞后,SKOV-3细胞的迁移能力增强,顺铂（100 μg/ml）具有抑制IL-8诱导的SKOV-3细胞迁移的作用,随着浓度的增高,迁移的细胞数由241.67减少到155.99,差异有统计学意义（P＜0.05）.顺铂刺激细胞后,与空白对照组相比,NF-κB蛋白表达水平降低（64.04±4.6）.结论 IL-8具有促进人卵巢癌SKOV-3细胞迁移的作用,顺铂可能是通过NF-κB细胞信号通路对卵巢癌细胞的迁移起抑制作用.     

LHRH-PE40诱导分化胃癌细胞凋亡的研究

目的研究NF-κB mRNA和Caspase-3mRNA及其蛋白在诱导分化BGC-823细胞中的表达,探讨LHRH-PE40与胃癌细胞凋亡的关系。方法应用RT-PCR、Western blot法检测BGC-823细胞中NF-κB P65mR-NA、Caspase-3mRNA表达及其蛋白的表达情况。结果 LHRH-PE40诱导BGC-823细胞凋亡时,NF-κB mRNA和Caspase-3mRNA表达水平有所增加,NF-κB P65和Caspase-3P20活性片段也增加。结论 LHRH-PE40可以诱导胃癌细胞内NF-κB的活化;引起Caspase-3级联反应,促进细胞凋亡。     

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导L1210细胞凋亡及其机制研究

为了观察蛋白酶体抑制剂MG-132对淋巴细胞白血病细胞株L1210的致凋亡作用,探讨MG-132的致凋亡机制,分别以不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理L1210细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,应用Annexin-Ⅴ和PI双染色细胞流式细胞术检测细胞凋亡率,比色法测定细胞中caspase3的活性,采用Western-blot法检测细胞NF-κB P65核蛋白的表达。结果表明:在相同的作用时间下,随着MG-132浓度的增高(0、2.5、5、10、20μmol/L),细胞增殖抑制率、凋亡率、caspase3活性逐渐升高;Western-blot法检测显示,细胞NF-κB P65核蛋白表达水平降低。结论:蛋白酶体抑制剂能够诱导L1210细胞凋亡,其机制可能是通过下调NF-κB的表达,进一步活化caspase3的活性而诱导凋亡。