丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1对缺氧诱导因子-1转录活性调节机制的研究

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)参与缺氧诱导因子-1(HIF-1)转录活性调节的机制。方法采用Western印迹检测常氧及缺氧状态下磷酸化细胞外信号调节激酶ERK和总ERK在胃癌细胞系SGC7901中的表达;利用脂质体将正义真核表达载体及针对MKP-1的小干扰RNA载体转入SGC901细胞;借助双荧光素酶基因报告系统(dual luciferase reporter,DLR)检测ERK通路抑制剂PD98059对SGC7901细胞中HIF-1转录活性的影响。结果(1)缺氧时磷酸化ERK在SGC901中的含量增加,而总ERK的表达不变;(2)缺氧12h时不同浓度的PD98059均能抑制HIF-1的转录活性;而p38通路抑制剂SB203580对HIF-1的转录活性无影响;(3)将针对MKP-1的小干扰RNA载体和空载体分别瞬时转入SGC7901细胞,转染24h后,缺氧12h时磷酸化ERK在小干扰。RNA载体转染细胞(U6M2)的表达高于空载体转染细胞(U6);(4)不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞中HIF-1的转录活性,当PD98059浓度达50μmol／L以上时,U6和U6M2细胞中HIF-1的转录活性差异无统计学意义。(5)不同浓度的PD98059均能够抑制U6和U6M2细胞血管内皮生长因子(VEGF)的产生,当PD98059浓度达50μmol／L以上时,VEGF的分泌量在U6和U6M2细胞中差异无统计学意义。结论在胃癌细胞系SGC7901中,缺氧时MKP-1通过灭活ERK的途径参与HIF-1转录活性的调节。     

姜黄素对人结肠癌Lovo细胞VEGF表达的影响

目的 研究姜黄素体外对人结肠癌Lovo细胞血管内皮生长因子VEGF表达的影响。方法不同浓度（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L）姜黄素处理2013年8月—2014年2月中南大学提供的人结肠癌细胞株Lovo24 h后,用Real-time PCR检测姜黄素对人结肠癌细胞株血管内皮生长因子VEGF m RNA表达的变化,用Western blot法检测姜黄素对人结肠癌细胞株VEGF蛋白表达的变化。结果人结肠癌Lovo细胞经过姜黄素处理24 h后,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L姜黄素组VEGF m RNA及蛋白的表达均明显下降,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论姜黄素能下调人结肠癌Lovo细胞VEGF的表达,并呈剂量依赖,这可能是姜黄素抑制结肠癌Lovo细胞增殖及侵袭性的机制之一。     

细胞外信号调节激酶1/2在Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应中的作用

目的 观察Aβ诱导星形胶质细胞激活炎症细胞因子表达及细胞外信号调节激酶1/2的表达.探讨细胞外信号调节激酶1/2是否参与了星形胶质细胞激活炎症细胞因子作用及其作用机制.方法 传代体外培养的大鼠星形胶质细胞,分别用终浓度为10μmol/L和20μmol/L的Aβ25-35作用30分钟.在PD98059组,加入Aβ25-3520μmol/L前1小时,加入PD培养.用Western blot分析iNOS、COX-2、IL-1β、P-ERK1/2的改变.结果 Aβ25-35可使体外培养星形胶质细胞P-ERK1/2蛋白表达明显增加,同时,Aβ25-35也可使iNOS、COX-2、IL-1β表达明显增加,ERK1/2上游激酶MEK特异性阻滞剂PD98059可完全阻断Aβ25-35引起的ERK1/2表达增加,也可抑制Aβ25-35引起的iNOS、COX-2、IL-1β蛋白表达增加.结论 ERK1/2信号转导通路参与Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应的作用.     

Src激酶抑制剂-1对人软骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的探讨Src激酶抑制剂-1对人软骨肉瘤SWl353细胞生长、凋亡和迁移等生物学行为的影响及其机制。方法体外培养人软骨肉瘤SWl353细胞，分为对照组和实验组，分别采用MTT法、流式细胞术和细胞迁移实验观察Src激酶抑制剂-1对人软骨肉瘤SWl353细胞生长、凋亡和迁移等生物学行为的影响，并通过Western—blot检测Src激酶抑制剂-1作用后Src及下游信号通路蛋白的影响。结果0．5、1、5、10μmol／L的Src激酶抑制剂-1均能明显抑制SWl353细胞的增殖（P〈0．01）；1、5、10μmol／L的Src激酶抑制剂-1均能明显促进SWl353细胞的凋亡（P〈0．01）；Sre激酶抑制剂-1能明显限制SWl353细胞的迁移；Sre激酶抑制剂-1能明显抑制SWl353细胞Src（Tyr416）及下游信号ERK，bAkt和FAK（F397）的磷酸化。结论Src激酶抑制剂-1具有抑制人软骨肉瘤SWl353细胞生长和迁移的能力，可能对软骨肉瘤具有一定的治疗效果，这是通过直接抑制Src酪氨酸激酶的活性，进而抑制其下游信号通路的激活来实现的。     

MAPK抑制因子对HSC中Smad2/3磷酸化及Smad4核转位的影响

目的 探究3种丝裂原活化蛋白激酶( MAPK)抑制因子对转化生长因子-β( TGF-β)活化的大鼠肝星状细胞( HSC)中Smad2/3磷酸化及Smad4 核转位的影响. 方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位肝灌流法分离正常大鼠HSC并传代培养,分别用细胞外信号调节激酶( ERK)、c-Jun氨基末端激酶( JNK )、p38 抑制因子( PD98059、SP600125、SB203580 )与HSC共同培养,再加入TGF-β1活化细胞,采用免疫沉淀和 Western blot 法检测 pSmad2C、pSmad2L、pS-mad3L蛋白表达;采用细胞免疫荧光法检测Smad4 蛋白表达及细胞内定位情况. 结果 Western blot显示静息状态下HSC几乎不表达 pSmad2C 而低表达 pSmad2L、pSmad3L, TGF-β1刺激后显著上调上述磷酸化蛋白表达, p38 抑制因子(1、3 μmol/L)、ERK 抑制因子(1 μmol/L)对 Smad2C、Smad2L、Smad3L 磷酸化无显著影响;p38 抑制因子( 10μmol/L)降低了 pSmad3L 蛋白表达;ERK 抑制因子( 3、10μmol/L)降低了pSmad2C蛋白表达;JNK抑制因子(1、3、10μmol/L)减少了 pSmad2C、pSmad2L、pSmad3L 蛋白表达.TGF-β1刺激可明显诱导Smad4核转位,而3种MAPK抑制因子不同程度地抑制TGF-β1 诱导的Smad4 转位入核. 结论 在 HSC 细胞中 TGF-β1 可能通过活化 JNK 通路促进Smad2/3磷酸化,活化ERK、JNK、p38 通路促进Smad4 核转位.     

灯盏乙素对乳腺癌细胞中细胞周期调控分子的基因表达

目的探索灯盏乙素对肿瘤细胞周期的影响,进一步阐述灯盏乙素对肿瘤细胞的增殖抑制的作用机制.方法采用实时荧光定量PCR的方法,检测不同浓度下灯盏乙素对乳腺癌MDA-MB-231细胞周期中最重要检查点的相关因子CDK1、CDK2、cyclin A2、cyclin E2和p21的m RNA相对表达量.结果灯盏乙素的剂量低于25μmol/L时,CDK1 m RNA的相对表达量显著增加,趋势随着剂量增加而降低;CDK2 m RNA在低剂量下相对表达量显著降低,在100μmol/L浓度下表达量显著增加;cyclin A2在剂量低于50μmol/L时m RNA的相对表达量显著增加;cyclin E2的m RNA的相对表达量在低剂量时相对表达量显著增加;p21的m RNA相对表达量在灯盏乙素剂量为50μmol/L、100μmol/L时显著增加.结论灯盏乙素显著影响CDK1、CDK2、cyclin A2、cyclin E2和p21的m RNA相对表达量,并且与剂量相关.     

β-葡聚糖对巨噬细胞的增殖及ERK5通路的影响

目的:探讨β-葡聚糖对于小鼠巨噬细胞RAW 264.7的生长增殖和诱导细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,以及细胞外信号调节激酶5(ERK5)信号通路在这一过程中的表达。方法:以不同浓度(12.5,25,50,100,200和400μg/m l)的β-葡聚糖刺激体外培养小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞后,用四唑盐比色实验(MTT)检测细胞的生长增殖;瑞氏染色法检测RAW 264.7细胞的吞噬活性;用ELISA方法测定培养上清液中TNF-α的表达量;蛋白质印迹法检测ERK5及磷酸化ERK5(p-ERK5)表达情况。结果:MTT实验结果显示不同浓度的β-葡聚糖对细胞的增殖有不同程度的促进作用,其中以100μg/m l浓度时促进作用最大,大剂量时则对细胞增殖产生抑制作用。在浓度为100μg/m l时,TNF-α的表达量达到峰值,ERK5和p-ERK5被活化。结论:一定浓度的葡聚糖对小鼠巨噬细胞的增殖和吞噬有明显的促进作用,细胞外信号调节激酶5信号通路参与了这一过程。     

PP2可增强乳腺癌Hs578T细胞缝隙连接功能

目的:探讨Src激酶抑制剂PP2对乳腺癌细胞Hs578T缝隙连接功能的影响。方法:MTT法检测PP2对乳腺癌细胞生长的影响;细胞接种荧光示踪法观察PP2对乳腺癌细胞之间荧光传递功能的影响;Western blot法检测PP2对乳腺癌细胞Src激酶表达的影响。结果:1~8μmol/L浓度的PP2对乳腺癌细胞生长几乎无影响;细胞接种荧光示踪结果显示,1~8μmol/L的PP2能显著增强细胞荧光传递功能(P<0.01),8μmol/L的PP2作用6、12和24 h后细胞荧光传递功能亦明显增强(P<0.01);Western blot结果显示,PP2(1~8μmol/L)可显著降低Src激酶表达(P<0.05~0.01),8μmol/L PP2作用6、12和24 h后Src激酶的表达亦明显降低(P<0.01)。结论:PP2能增强乳腺癌细胞Hs578T的缝隙连接功能,这种增强作用可能与其降低Src激酶表达有关。     

EPHB6受体型酪氨酸蛋白激酶对ERK信号通路的调控效应

目的:探讨促红细胞生成素产生肝细胞B6(EPHB6)对于胞外信号调节激酶(ERK)信号转导通路的作用.方法:以非小细胞肺癌细胞系A549作为研究对象,采用Western Blot法检测ERK的磷酸化水平及通路检测(PathDe-tect)法检测ERK下游分子和Ets结构域蛋白1(Elk-1)转录因子的活性.结果:A549细胞中EPHB6的表达导致ERK的磷酸化.相反,siRNA干涉EPHB6的表达可以逆转ERK的磷酸化.并且,EPHB6导致的ERK磷酸化与Elk-1转录因子脱偶联.结论:表明EPHB6对于ERK信号通路具有调控作用.     

Tumstatin肽对视网膜微血管内皮细胞增殖及ERK蛋白表达的影响

目的 观察Tumstatin肽对体外培养的视网膜微血管内皮细胞增殖及细胞外信号调节激酶(ERK) 蛋白表达的影响。方法　采用MTT比色法测定Tumstatin肽（T8肽）对血管内皮生长因子（VEGF）诱导下的恒河猴视网膜血管内皮细胞（RF/6A细胞）增殖的干预作用;采用Western-blot检测T8肽对VEGF刺激后15min、30min、45 min和60min的RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达水平的变化。 结果　T8肽浓度在5μg/ml 以上时对RF/6A细胞有抑制作用,且抑制作用随着浓度的增大而增高,各组OD值和抑制率比较差异均有显著性意义（P均<0.05）;T8肽可抑制VEGF对RF/6A细胞的促增殖作用;在1～40μg /ml相同浓度条件下,T8肽对VEGF条件下的RF/6A细胞增殖抑制率显著大于无VEGF条件下的抑制率（P均<0.01）。VEGF可刺激RF/6A细胞ERK1/2蛋白表达增加,T8肽可抑制VEGF诱导的RF/6A细胞ERK1/2蛋白的表达。 结论　Tumstatin抑制视网膜微血管内皮细胞的增殖,机制可能与VEGF信号转导通路上的ERK1/2细胞信号转导通路有关。     

阿托伐他汀经ERK信号转导通路抑制CD40L诱导的内皮细胞E-选择素的表达

目的 探讨阿托伐他汀对CD40L诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达E-选择素的影响及其信号转导通路的关系.方法 原代培养HUVEC,给予CD40L刺激和不同浓度阿托伐他汀干预.应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术分别检测阿托伐他汀对CD40L诱导的HUVEC的E-选择素mRNA和细胞表面E-选择素表达情况.同时通过蛋白印迹法检测细胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白磷酸化的表达.结果 0.1、1、10μmol/L阿托伐他汀可浓度依赖性下调CD40L诱导的HUVEC E-选择素mRNA及蛋白的表达.1 μmol/L阿托伐他汀可使E-选择素蛋白下调48.68%,10μmol/L阿托伐他汀可使E-选择素蛋白下调70.25%.同时不同浓度阿托伐他汀均能抑制CIM0L诱导的ERK1/2磷酸化水平,其表达分别下凋至CD40L刺激组的81%±6%、73%±5%和41%±5%.结论 阿托伐他汀能通过ERK1/2信号转导通路抑制CD4OL诱导的内皮细胞E-选择素表达.     

塞来昔布通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞株SMMC-7721增殖、凋亡的影响

目的:观察COX-2抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨该作用与ERK1/2信号通路之间的关系。方法:用不同浓度的塞来昔布溶液(0、25、50、75和100μmol/L)处理对数生长期的肝癌SMMC-7721细胞,MTT比色法检测不同时间点各药物浓度组细胞增殖情况;流式细胞术分析不同浓度的塞来昔布溶液对SMMC-7721细胞凋亡的影响;RT-PCR检测COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA表达的变化;Western blot检测COX-2、VEGF和ERK1/2蛋白表达的变化。结果:塞来昔布对SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,该作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强;流式细胞术检测结果显示出明显的细胞凋亡,且凋亡率随着塞来昔布浓度的增高而升高;随着塞来昔布剂量的增加,COX-2、VEGF和ERK1/2mRNA及蛋白的表达水平逐渐降低。结论:塞来昔布可抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖、促使瘤细胞凋亡,且作用呈时间和剂量依赖性,其机制可能与下调ERK1/2信号通路及抑制新生血管生成有关。     

环孢素引起肾小管上皮细胞培养液中肾损伤分子-1水平升高的机制

目的：探讨环孢素（CsA）引起人肾小管上皮细胞(HKC)培养液中肾损伤分子-1（KIM-1）水平升高的作用机制,阐明KIM-1表达与p38 MAPK通路和EKR1/2 MAPK通路的关系。方法：将处于对数生长期的HKC分为空白组、CsA损伤组、CsA与p38激酶抑制剂合用组、p38激酶抑制剂组、CsA与ERK1/2激酶抑制剂合用组和ERK1/2激酶抑制剂组。MTT法检测各组HKC增殖抑制率,ELISA法测定各组HKC上清液中KIM-1水平,流式细胞术检测各组细胞存活率、细胞凋亡率和细胞坏死率。结果：与空白组比较,CsA损伤组细胞上清液中KIM-1水平显著升高（P<0.05）,细胞存活率显著降低（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞坏死率显著升高（P<0.05）;p38激酶抑制剂组和ERK1/2激酶抑制剂组中细胞存活率、细胞凋亡率和细胞坏死率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与CsA损伤组比较,CsA与p38激酶抑制剂合用组、CsA与ERK1/2激酶抑制剂合用组细胞上清液中KIM-1水平显著降低（P<0.05）,细胞存活率显著升高（P<0.05）,细胞凋亡率和细胞坏死率显著降低（P<0.05）。结论： p38 MAPK通路和ERK1/2 MAPK通路参与CsA素引起肾小管上皮细胞培养液中KIM-1水平升高的过程,KIM-1的表达可能成为临床监测CsA肾毒性的生化指标。     

ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶对醛固酮促进肾小管上皮细胞合成转化生长因子β1的作用

目的探讨ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径在醛固酮(ALDO)促进肾小管上皮细胞系(HKC)合成转化生长因子β1(TGF-β1)中的作用。方法利用体外培养的HKC细胞行如下试验。(1)不同浓度MAPK三种支通路特异性阻滞剂对其分别进行阻断,以酶联免疫吸附方法(ELISA)检测外源性ALDO作用下HKC合成TGF-β1量的改变。(2)不同浓度及不同作用时间的外源性ALDO刺激HKC,以Western印迹方法检测细胞裂解物中磷酸化ERK1/2以及总ERK1/2表达,并对ERK1/2相对表达量(磷酸化ERK1/2/总ERK1/2)与相应刺激条件下TGF-β1合成量进行相关分析。(3)在不同浓度的安体舒通和糖皮质激素受体阻滞剂RU486作用细胞后,以外源性ALDO刺激HKC,同上方法检测细胞裂解物中磷酸化ERK1/2及总ERK1/2表达。结果(1)15μmol/L及25μmol/LERK1/2通路阻滞剂(U0126)分别使TGF-β1的合成量减低至(87±11)pg/ml及(75±19)pg/ml,而仅使用10-7mol/LALDO刺激作用下HKC中TGF-β1的合成量(121±10)pg/ml,与前者比较差异有统计学意义(P<0·05),而JNK和P38两条支通路阻滞剂(SP600125、SB203580)未使TGF-β1合成量出现显著性变化(均P>0·05)。(2)外源性ALDO可使HKC对ERK1/2相对表达量呈现剂量依赖性增加。10-9及10-7mol/LALDO刺激组ERK1/2相对表达量分别为0·67±0·06及0·80±0·05,显著高于0mol/LALDO组(P<0·05或0·01)。相应浓度醛固酮刺激下ERK1/2相对表达量与TGF-β1合成量之间具有显著正相关关系(R=0·793,P<0·01);10-7mol/LALDO刺激HKC15min后,磷酸化ERK1/2开始出现显著性增加并达到高峰(P<0·01),其相对表达量为0·84±0·06,此后逐渐减低,至360min时其表达量为0·49±0·08,与0min比较差异无统计学意义(P>0·05)。(3)10-7mol/LALDO与10-9、10-7mol/L安体舒通共同孵育HKC30min,可使ERK1/2的相对表达量分别为0·62±0·08及0·60±0·04,显著低于0mol/L安体舒通组(P<0·05或P<0·01),但其表达量仍显著高于未加任何刺激的对照组(P<0·05);10-7mol/LALDO与相应浓度的RU486共同刺激HKC30min未使ERK1/2相对表达量显著低于0mol/LRU486组(P>0·05)。结论ERK1/2信号转导通路可能是介导醛固酮促HKC合成TGF-β1的主要通路之一,醛固酮与胞质内受体结合是其通过活化ERK1/2途径而发挥上述病理作用的重要条件。     

Rho激酶信号转导通路对醛固酮诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响?

目的：探讨Rho激酶对醛固酮( ALD)诱导的人肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法人肾小管上皮细胞( HK-2)培养于含15%FBS的 RPMI-1640培养液中,依普利酮(10μmol/L )和 Rho激酶抑制剂Y27632(1μmol/L)预处理细胞30 min后,100 nmol/L ALD作用HK-2细胞24或48 h, ELISA法测定培养上清液中Rho激酶蛋白的含量,实时定量PCR检测细胞α-SMA、E-cadherin mRNA的表达,Western blot测定细胞α-SMA、E-cadherin蛋白的表达。结果 ALD显著上调HK-2细胞Rho激酶蛋白的表达及α-SMA mRNA和蛋白的表达,减低E-cadherin mRNA和蛋白的表达。 Rho激酶抑制剂Y27632及依普利酮可拮抗上述效应。结论ALD可激活HK-2细胞Rho激酶的活化,并通过Rho激酶诱导HK-2细胞间质转分化而加速肾小管间质纤维化的进展。     

PI-3K和MEK1/ERK信号通路在碱性纤维母细胞生成因子诱导乳腺癌细胞低氧诱导因子活化中的作用及机制

目的 探讨碱性纤维母细胞生成因子(bFGF)活化低氧诱导因子(HIF—1)的机制及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。方法 以人乳腺癌细胞系T47D为对象,采用Western印迹方法检测细胞内HIF-let及磷酸化Akt,ERK1／2,p38蛋白质的表达;采用双萤光素酶系统检测HIF-1转录活性。结果 bFGF以时间和剂量依赖性的方式诱导HIF—1α蛋白表达,同时激活PI-3K／Akt和MEK1／ERK信号通路。分别应用FGFR1阻断剂SU5402以及PI-3K激酶抑制剂LY294002,MEK1激酶抑制剂PD98059,p38激酶抑制剂SB203580可以明显阻断bFGF对PI-3K／Akt,MEK1／ERK及p38信号通路的激活,但只有SU5402和LY294002可以阻断bFGF对HIF-1α蛋白表达的刺激作用,阻断效率达100％。bFGF增加HIF-1的转录活性,这一作用分别被PI-3K和MEK1激酶抑制剂抑制,抑制率分别为94．8％和81．7％。结论bFGF对HIF-1有明显活化作用。PI-3K／Akt和MEK1／ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI-3K／Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

丝裂原活化蛋白激酶通路对脂多糖诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α基因表达的协同调节作用

目的 探讨脂多糖（LPS）诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的协同调节作用及其分子机制。方法 用蛋白激酶活性测定分析LPS刺激RAW264．7细胞引起的激酶活性变化;用报告基因技术和反转录聚合酶链反应（RT－PCR）方法研究LPS诱导的TNF－α基因转录的分子机制。结果 LPS刺激RAW264．7细胞可引起细胞外信号调节激酶1（ERK1）、c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）和p38MAPK的一过性激活,用MAPK上游激酶的活性突变体分别转染RAW264．7均可不同程度地诱导TNF－α启动子转录活性;而且,这些MAPK通路激活诱导的TNF－α启动子转录活性表现出明显的协同效应;三种MPAPK的无活性突变体均显示出对LPS刺激引起的TNF－α启动子转录激活的抑制效应;RT－PCR的结果证实,ERK、JNK和p38MAPK的特异性抑制剂对TNF－αmRNA表达具有不同程度的抑制作用。结论 LPS刺激引起的TNF－α启动子转录活性增加,可能涉及了ERK、p38和JNK三条通路的激活;这些通路通过协同效应共同发挥对TNF－α基因表达的调控。     

细胞外信号调节激酶1/2信号通路调控细胞侵袭性的研究进展

细胞外信号调节激酶(ERK)1/2是一种蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶，参与Ras-Raf有丝分裂原激活蛋白激酶-ERK的信号转导级联，通过影响基因的转录和表达，参与细胞的生长、增殖甚至侵袭作用。肺癌、肝癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜异位症及子痫前期等多种疾病的发生，以及其疾病的转移和病情的进展，均与ERK1/2信号通路调控细胞侵袭性密切相关。因此通过探索ERK1/2信号通路侵袭性在相关疾病发病过程中可能发挥的重要作用，从而寻找更加有效的治疗方案。本文根据近些年国内外的最新研究，介绍ERK1/2信号通路侵袭性这一特性在各个疾病中所发挥的相关调控作用，以期为相关疾病的临床治疗研究提供新启示。     

Research of Apoptosis Mechanism of NCIH460 Cells Induced by the Effective Component Quercetin in Zhoushi Kejinyan Fang

目的 观察周氏克金岩方有效成分槲皮素诱导肺癌细胞NCI-H460凋亡的相关作用机制.方法 采用Hoechst33258染色及透射电镜(TEM)观察槲皮素诱导细胞凋亡的形态学变化,结合Western blot法检测槲皮素对细胞内EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2及凋亡相关通路的影响.结果 各浓度的槲皮素处理细胞24 h后,以25、50μmol/L 2个药物浓度处理组的凋亡特征更为显著,荧光显微镜下可见细胞核或细胞质内浓染致密的颗粒块状荧光;在25 μmol/L槲皮素处理细胞48h后在透射电镜的观察图片中也呈现出了细胞凋亡的特征;Western blot法对信号通路相关蛋白的检测结果表明,12.5μmol/L的槲皮素能显著抑制c-Raf的活化,而在25μmol/L下能促进caspase-3和caspase-7的活化.结论 槲皮素能通过抑制c-Raf的激活,抑制EGFR-Ras-Raf-MEK/ERK1/2信号通路,同时诱导肺癌细胞凋亡.     

组胺上调THP-1细胞IL-37的表达

目的探讨组胺对单核细胞THP-1的白介素-37(IL-37)表达的影响。方法分别用1、10、100μmol/L等不同浓度的组胺作用THP-1细胞1 h,用实时荧光定量PCR检测THP-1细胞中IL-37 m RNA表达水平的变化,然后分别用10和100μmol/L组胺作用THP-1细胞20 h,用Western blot检测THP-1细胞中IL-37蛋白表达水平的变化。结果实时荧光定量PCR检测显示THP-1细胞分别经1、10和100μmol/L等不同浓度组胺刺激后,与对照组比较,THP-1细胞IL-37 m RNA表达水平分别升高约2.7倍、5.8倍、18.6倍,差异均有统计学意义(P0.05)。Western blot检测显示THP-1细胞分别经10和100μmol/L组胺作用后,其IL-37蛋白表达水平均明显上升。结论组胺诱导THP-1细胞IL-37的上调表达。