结核分枝杆菌北京基因型菌株与耐药表型的关系

目的 研究我国结核分枝杆菌北京基因型菌株的分布以及与耐药表型的关系.方法 2008年4～12月从我国6个区域收集痰涂片阳性的结核病患者的临床分离株,每一患者的一份分离株经生化方法鉴定为结核分枝杆菌复合群.收集患者的性别、年龄、病史、菌株耐药谱和菌株来源资料.药物敏感性实验采用比例法.运用间隔区寡核苷酸分型方法或基因dnaA-dnaN之间插入序列136110鉴定北京基因型菌株.结果 在410份结核分枝杆菌分离株中,67.1%(275/410)的分离株属于北京基因型菌株,东北部区域感染北京基因型菌株患者的比例高于中西部区域(χ2=20.50,P=0.000).患者的年龄、性别和治疗史与感染北京基因型菌株无关.在耐多药菌株和耐利福平菌株中,北京基因型菌株的比例显著高于非北京基因型(P=0.002,P=0.005).结论 患者的年龄、性别和治疗史与感染北京基因型菌株无关,东北部区域北京基因型菌株分布比例显著高于中西部区域.北京基因型菌株与利福平耐药和耐多药有关.     

结核分枝杆菌北京基因型菌株与重庆地区结核患儿耐药表型的相关分析

目的 研究结核分枝杆菌北京基因型菌株与结核患儿耐药表型及其相关因素.方法 采用定向缺失多重酶链聚合反应技术(deletion-targeted multiplex PCR,DTM-PCR)对从143例患儿分离得到的结核分枝杆菌进行北京基因型菌株鉴定,并使用绝对浓度法进行药敏实验.收集患者的性别、年龄、居住地、卡介苗接种史和结核性脑膜炎病史等相关因素资料.采用χ2检验和Fisher确切概率法分析北京基因型与相关因素以及耐药表型之间的关系.结果 在143株结核分枝杆菌中,91株为北京基因型,占63.6%,北京基因型菌株与年龄、性别、居住地、卡介苗接种和结核性脑膜炎无关(P>0.05).北京基因型菌株在耐链霉素菌株(16.5%,15/91)和耐异烟肼菌株(15.4%,14/91)中的比例显著高于非北京基因型(3.8%,2/52;3.8%,2/52)(P<0.05).结论 北京基因型菌株是重庆地区儿童结核患者中流行的优势菌群,患儿的年龄、性别、居住地、是否接种卡介苗和是否为结核性脑膜炎与北京基因型菌株无关,感染北京基因型菌株的结核患儿更易出现链霉素和异烟肼耐药.     

结核分枝杆菌的进化与致病性的研究

分子流行病学是研究结核分枝杆菌传播和种群进化的有力工具.特别是近年来建立起来的单核苷酸多态性分型方法,能将结核分枝杆菌临床菌株分为三大家族,并且确立其种系发生关系.研究表明,不同进化分支上的结核分枝杆菌在不同的国家和地区流行,不同基因型菌株的致病性和传播力不尽相同.如细胞和动物模型都证明在东亚流行的北京基因型菌株比其他基因型菌株具有更高的毒力,能抑制宿主的免疫反应.本文综述近年来在结核分枝杆菌进化、分型及菌株致病性方面的研究成果.     

耐乙胺丁醇结核分枝杆菌基因型研究

目的研究青海地区耐乙胺丁醇结核分枝杆菌菌株embB基因突变特征,并比较耐乙胺丁醇(Ethambutol,EMB)菌株中耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug resistance,MDR)与非结核分枝杆菌菌株的embB基因突变差异。方法采用聚合酶链式反应方法对63株耐乙胺丁醇的结核分枝杆菌的embB高突变区进行扩增,并分析embB基因突变特征。结果 63株耐乙胺丁醇的结核分枝杆菌中,28株在embB基因发生突变,突变率为44.44%(28/63);53株结核分枝杆菌且耐乙胺丁醇菌株中,22株(45.51%,22/53)在embB基因发生突变;10株非结核分枝杆菌耐乙胺丁醇菌株中,6株(60.00%,6/10)在embB基因发生突变。位点embB306和embB406为高突变点,分别占突变菌株的67.86%(19/28)和21.43%(6/28)。耐乙胺丁醇菌株中,结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌菌株的embB基因突变差异无统计学意义(χ~2=0.536,P=20.464)。结论青海地区对乙胺丁醇耐药的结核分枝杆菌常见突变位点为embB306和embB406。单测embB基因不能非常有效地快速检测出乙胺丁醇耐药状况,增加emb A及其调控区的检测,能提高耐乙胺丁醇菌株的检出率。     

非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌皆培养阳性病例的分析

目的：探讨非结核分枝杆菌与结核分枝杆菌皆培养阳性病例特点的分析及防治对策。方法：对2008年-2012年住院病例32例为研究对象,进行分析。结果：32例中均有药敏试验结果,均对1种以上一线抗结核药物（异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇）耐药占比3．2％,其中耐多药15例占比46．8％,对左氧氟沙星、克拉霉素敏感16例占比50％。结论：NTM感染和发病率,随着生活、工作环境不同而有不同程度的改变,特别强调沿海及沿海地区,从事石场作业人员较多,应多次进行痰培养及菌种鉴定以明确诊断。     

非结核分枝杆菌肺病分析

目的：了解非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria,NTM）肺病流行情况及耐药特点。方法：收集2003年9月～2006年5月门诊痰菌阳性标本,按《全国结核病细菌学检验规程》的要求,用改良罗氏法进行痰结核菌培养、菌种鉴定和药物敏感性试验。结果：非结核分枝杆菌分离率为10.3%,35岁以上分离率高于35岁以下人群,性别无明显差异。耐药率达100%,明显高于结核分枝杆菌,耐多药率51.7%,与结核分枝杆菌无明显差异。结论：非结核分枝杆菌在肺病患者中分离率高,且多耐药,因此对难治性肺病患者进行菌株鉴定及药敏试验非常重要。     

非结核分枝杆菌肺病分析

目的了解非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)肺病流行情况及耐药特点.方法收集2003年9月～2006年5月门诊痰菌阳性标本,按《全国结核病细菌学检验规程》的要求,用改良罗氏法进行痰结核菌培养、菌种鉴定和药物敏感性试验.结果非结核分枝杆菌分离率为10.3%,35岁以上分离率高于35岁以下人群,性别无明显差异.耐药率达100%, 明显高于结核分枝杆菌,耐多药率51.7%,与结核分枝杆菌无明显差异.结论非结核分枝杆菌在肺病患者中分离率高,且多耐药,因此对难治性肺病患者进行菌株鉴定及药敏试验非常重要.     

乙型肝炎病毒基因型与表型的相关性研究

目的：对乙型肝炎病毒（HBV）在人体内的分散情况进行调查,然后讨论它和感染临床表型是否有关系。方法：对PCR进行测序,测序之前先对其进行扩增,然后分析300例乙肝病毒感染者的HBV基因型,对HBV的基因型和临床表型之间的关系用t检验法和X^2检验法分析。结果：在300例的病毒感染者中,含有B基因型的患者180例,占60％,含有C基因型的患者120例,占40％。B基因型患者年龄（29．5±9．8）岁明显高于C基因型患者（35．2±11．4）岁,差异有统计学意义（P〈0．05）;在这些男女受访患者中,HBV的基因型分散情况差异无统计学意义（P〉0．05）。C基因型在无症状病毒携带者的比例是31．2％,在慢性乙肝患者中比例为30．2％,明显低于肝癌患者的58．6％和肝硬化患者的60．0％,差异均有统计学意义（P〈0．05）;B基因型HBeAg阳性率55．6％明显低于C基因型的71．7％,差异有统计学意义（P〈0．05）;B基因型患者血清的HBV—DNA含量（5．62±0．92）log值明显低于C基因型患者的（5．98±0．76）log值,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：临床患者的身体状况和HBV的基因型有着密不可分的关系。从患者的年纪、HBeAg阳性比例和病毒水平来看,C基因型患者明显比B基因型多,因此C基因型患者的病情很可能进一步转为肝硬化,甚至是肝癌。     

致病性速生型非结核分枝杆菌MIC法检测及药敏结果分析

目的研究致病性速生型非结核分枝杆菌(RGM)的菌种分布及耐药性,为临床有针对性治疗RGM病提供实验依据。方法用添加阳离子的MH2(Mueller-Hiuton)肉汤为培养基,采用快速生长分枝杆菌药敏试验微量稀释MIC法对就诊患者的痰和支气管冲洗液标本中分离出的202株致病性RGM进行菌种分布分析及8种非传统结核药物耐药性检测分析。结果分离鉴定出龟分枝杆菌128株(2010年67株,2011年61株),脓肿分枝杆菌56株(2010年31株,2011年25株),偶然分枝杆菌9株(2010年5株,2011年4株),龟-脓肿及龟-偶发复合群9株(2010年6株,2011年3株)。龟分枝杆菌为引起RGM感染的第1位病原菌。药敏结果显示对RGM敏感的药物为阿米卡星98.0%(198/202),克拉霉素94.6%(191/202),利奈唑胺73.3%(148/202),头孢西丁57.9%(117/202),妥布霉素57.4%(116/202)。2年来,5种敏感药物对龟分枝杆菌敏感性无明显变化,但头孢西丁和妥布霉素对脓肿分枝杆菌敏感性差异有统计学意义(P<0.05),呈下降趋势。结论致病性RGM耐药性强,治疗困难。开展更多更广泛的药物敏感试验的技术手段和提高药敏技术水平,组合有效的治疗方案,才能更好地控制日趋增长的非结核分枝杆菌疾病的发展。     

结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌3种鉴定方法的比较

目的评估MPB64免疫胶体金法、PNB试验和Xpert MTB/RIF在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)和非结核分枝杆菌(non-tuberculous mycobacterium,NTM)鉴定中的应用价值。方法收集2017年5～11月在重庆市公共卫生医疗救治中心就诊经分枝杆菌菌种鉴定(PCR-反向点杂交法)诊断的肺结核或疑似肺结核病人BACTEC MGIT960培养阳性标本178份,分别用MPB64胶体金法、PNB试验和Xpert MTB/RIF鉴定MTB和NTM,以PCR-反向点杂交法的鉴定结果为金标准,比较3种方法的敏感度和特异度。结果 PCR-反向点杂交法鉴定结果为154株MTB,6株MTB与NTM混合感染,18株NTM。PNB试验、Xpert MTB/RIF试验、胶体金试验鉴定MTB的敏感度分别为96. 1%、100. 0%、96. 7%,3种方法的敏感度差异有统计学意义(P <0. 05); PNB试验、Xpert MTB/RIF试验、胶体金试验鉴定MTB的特异度分别为88. 8%、100. 0%、100. 0%,检测结果特...     

应用基因芯片技术检测结核分枝杆菌耐异烟肼基因型

目的研制一种新型DNA芯片,用于快速检测结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因突变。方法根据结核分枝杆菌katG基因序列设计探针并制作DNA芯片,用四甲基罗丹明标记的引物扩增结核分枝杆菌katG基因突变热点的片断,与DNA芯片杂交,同时以聚合酶链反应-单链构象多态性(pdymerase chain reaction-single stranded conformation polymorphism,PCR-SSCP)和DNA测序法为对照。结果153株结核分枝杆菌临床分离株中30株异烟肼敏感株的PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同,123株异烟肼耐药株中有85株检测到katG基因突变,占69.1%(85/123)。其中83株为315位密码子AGC→ACC突变,2株为315位密码子AGC→AAC突变,该突变与PCR-SSCP和DNA芯片杂交结果一致;余38株未检测到突变,经测序证实其中1株PCR-SSCP有不同突变的为279位密码子GGC→GAC突变,因芯片上未点该位点的探针,所以杂交结果为阴性。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐异烟肼分离株的katG基因突变,可用于临床耐药性的检测,指导临床用药。     

应用基因芯片技术检测耐利福平结核分枝杆菌基因型

目的研制一种新型DNA芯片，用于快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计探针并制作DNA芯片，用TAMRA标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的片断，与DNA芯片杂交，同时以PCR-SSCP和DNA测序法为对照。结果240株结核分枝杆菌临床分离株中，55株全敏感株和66株耐其他药物的利福平敏感株的PCK—SSCP和DNA芯片杂交结果与结核分枝杆菌标准株完全相同；119株耐RFP临床分离株中DNA芯片杂交有117株检测到rpoB基因突变，其中111株单位点突变，78株为531住密码子TCG→TTG（Ser→Leu）、TCG→TGG（Ser→Trp）和TCG→TAC（Ser→Tyr）突变；24株为526位蓉码子CAC→TAC（His→Tyr）、CAC→GAC（His→Asp）、CAC→CCC（His→Pr0）、CAC→CTC（His→Leu）和CAC→CGC（His→A职）突变；4株为516住客码子GAC→GTC（Asp→Val）和GAC→GGC（Asp→Gly）突变；3株为533位密码子CTG→CCG（Leu→Pro）突变；1株为511位密码子CTG→CCG（Leu→Pro）突变；1株为513位密码子CAA→AAA（Gln→Lys）突变；6株为双位点突变，其中3株511和516位联合突变，2株533和515住联合突变，1株517位密码子CAG→CAC（Gln→His）和518位密码子AAC→GAC（Asn→Asp）联合突变。DNA测序结果与DNA芯片杂交结果完全一致。1株516位GAC—TAC（Asp→Tyr）突变的分离株及1株516位GAC—TAC（Ssp→Tyr）和518住AAC—CAC（Asn→His）联合突变的分离株DNA芯片检测阴性，是因为芯片上无相应的探针。结论用DNA芯片可快速、特异地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变。可用于临床耐药性的检测，指导临床用药。     

49例非结核分枝杆菌分析

目的:分析本所2000年至2004年非结核分枝杆菌(NTM)的流行情况和耐药状况。方法:用酸性罗氏培养基对痰标本进行培养分离出菌株,再用对硝基苯甲酸(PNB)鉴定均为NTM,采用绝对浓度法对其进行抗结核药物敏感性测试。结果:NTM对异烟肼(INH/H)和力克肺疾(DP/D)呈高度耐药,对利福平(RFP/R)、丙硫异烟胺(TH1321/T)、链霉素(SM/S)、和乙胺丁醇(EMB/E)的耐药性较高,对阿米卡星(AN/A)较为敏感。NTM感染率有逐年上升的趋势。结论:本所由NTM引起的肺病比例较小,平均仅为0.92%,明显低于全国水平,但NTM高耐药率和逐年上升趋势应引起重视,有待解决的是研制新药与更有效的治疗手段。     

非结核分枝杆菌耐药情况分析

目的探讨非结核分枝杆菌(non-tuberculosis mycobacterium,以下简称NTM)的流行病学特征,观察和分析NTM的耐药情况,为NTM肺病的防治策略提供科学依据。方法对2006～2010年期间收集的分枝杆菌进行药物敏感性测定、菌种鉴定,对鉴定为NTM的病例进行综合分析。结果 5年间对765个菌株进行了结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌的菌型鉴,确诊为NTM的为79株(10.32%),其中77株对异烟肼、对氨基水杨酸钠、乙胺丁醇、利福平、链霉素等常用抗结核药物存在不同程度的耐药,耐药率高达97.46%,且大多菌株同时对多种抗结核药物耐药。结论 NTM对抗结核药物具极高的耐药性。为此,对可疑肺结核患者应尽可能进行痰分离培养和多种抗结核药物敏感性测定。研究、探索抗NTM的新药及更为有效的诊断方法是当务之急。     

海南地区484株结核分枝杆菌菌株基因型特征分析

目的 了解海南地区结核分枝杆菌不同基因型流行特征,探讨基因分型用于评价本地区结核病控制中的应用价值。方法 本研究选取海南医学院第二附属医院自2013-2016年所有培养阳性结核分枝杆菌484株,采用SNP和Gao等推荐的12位点可变数目串联重复序列（variable number tandem repeat, VNTR）进行基因分型。结果 2013-2016年期间,484株结核分枝杆菌菌株中,北京基因型菌株279株,占57.6%,非北京基因型菌株205株,占42.4%,北京基因型菌株中包括91株(32.6%)古代北京基因型和188株(67.4%)现代北京基因型。北京基因型所占比例在四年间无显著变化,从2013年的59.6%到2016年的57.6%。采用3个高变VNTR位点基因分型后,成簇菌株数为0。结论 海南地区结核分枝杆菌存在明显的VNTR基因多态性,主要流行株仍以北京基因型为主,北京基因型所占比例在四年期间无显著性变化,且菌株成簇率较低,提示近期传播率低。     

非结核分枝杆菌肺病与肺结核的鉴别

当患者痰涂片检查发现抗酸杆菌（AFB）,又具有临床相关症状及影像学改变时,常被诊断为涂阳肺结核而开始抗结核治疗。但有一些患者疗效欠佳,除考虑有原发耐药性的可能、治疗方案不合理以及患者对治疗的依从性差等因素外,还需考虑有无非结核分枝杆菌肺病的可能,这是临床医生值得关注的问题。     

青岛地区结核分枝杆菌rpoB变异与耐药相关性研究

目的：探讨青岛地区结核分枝杆菌的rpoB变异特征与利福平耐药的关系。方法应用聚合酶链反应（PCR）直接测序法对来自青岛地区54株利福平耐药的结核分枝杆菌和14株利福平敏感的结核分枝杆菌的rpoB基因片段进行分析。结果14株利福平敏感菌株中均未发生rpoB变异,而54株利福平耐药菌株中有46株发生了rpoB变异,变异率为85.19%（46/54）;rpoB变异在利福平敏感菌株和利福平耐药菌株中的分布差异有统计学意义（χ^2=33.072,P=0）;16株利福平低浓度耐药菌株中有10株发生rpoB变异,而38株利福平高浓度耐药菌株中有36株发生rpoB变异,rpoB变异在利福平低浓度耐药菌株和利福平高浓度耐药菌株中的分布差异有统计学意义（χ^2=6.893,P=0.009）;30株单耐利福平菌株中有24株发生rpoB变异,而24株多耐药菌株中有22株发生rpoB变异,rpoB变异在单耐利福平菌株和多耐药菌株中的分布差异有统计学意义（χ^2=5.022,P=0.025）。结论 rpoB的变异是青岛地区结核分枝杆菌对利福平耐药的主要机制,且可能与耐药浓度及是否多耐药相关。     

非结核分枝杆菌肺病的影像学特点

非结核分枝杆菌(NTM)肺病的临床和影像学表现与肺结核十分相似[1],为提高对NTM肺病影像学特征的认识,总结我院2005-2011年住院治疗的30例NTM肺病患者的影像学特点,报告如下. 对象与方法 1.一般资料:本组(NTM肺病组)30例,均为非艾滋病患者,男21例,女9例;年龄38 ～65岁,平均51.4岁.对照组为连续随机抽取年龄及肺部病变程度与NTM肺病组相匹配的继发型肺结核患者30例,男17例,女13例;年龄32～68岁,平均54.2岁.两组一般资料的差异无统计学意义(P＞0.05).     

非结核分枝杆菌肺病的诊疗研究进展

非结核分枝杆菌（non-tuberculosis mycobacteria,NTM）肺病为临床多发病,其发病率呈现逐渐上升态势,其诊疗问题备受关注。本文通过搜集国内外相关研究资料,综述NTM诊断、治疗研究现状,总结研究成果,分析现有研究不足,希望为NTM临床诊疗提供参考,并为今后研究的进一步开展提供参考依据。