高氧对胎鼠肺成纤维细胞p53和增殖细胞核抗原表达的影响

目的 探讨高氧对胎鼠肺成纤维细胞（LFs）p53 和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法 原代培养胎鼠肺 LFs,待生长至亚汇合状态时,随机分为：空气组和高氧组（95% O2/5% CO2）。于培养 12 h 和 24 h 时,采用噻唑蓝（MTT）实验测定细胞增殖状况,半定量 RT-PCR 方法检测 p53 mRNA 表达,Western blot 技术检测 p53 和 PCNA 蛋白的表达。结果（1）与空气组比较,高氧组 12 h 和 24 h 的 LFs 生长抑制率分别为 8% 和 23%;（2）高氧组在 12 h 和 24 h 时 p53 mRNA 表达明显高于空气组（PPP结论 高氧暴露抑制 PCNA 表达、促进 p53 表达,从而抑制 LFs 增殖和 DNA 复制,是导致肺发育异常的重要因素。     

细胞色素氧化酶mRNA在高氧暴露早产大鼠肺组织中的表达变化

目的观察85％高浓度氧（高氧）暴露下早产新生大鼠肺组织的病理改变及线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基（COXI、COXII、COXIII）mRNA表达的动态变化，探讨其在早产大鼠高氧肺损伤发生、发展中的可能作用。方法早产SD大鼠生后1d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于85％氧气中，空气组置于同一室内常压空气中。两组分别于暴露满1、4、7、10和14d时，每组取动物8只，行肺组织病理学检查，半定量逆转录聚合酶链反应测定COXI、COXII和COXIIImRNA的表达。结果（1）高氧暴露4d即可见肺泡炎和肺发育滞后的改变。（2）与同时问点空气组相比，高氧暴露1d和4d时，COXImRNA的表达显著增强（P〈0．05和P〈0．01），其后开始下降，7d时两组差异无显著性（P〉0．05），10d时较空气组显著降低（P〈0．01），14d时复又增高，且明显高于空气组，差异有非常显著性（P〈0．01）。COXII和COXIIImRNA在各时间点的表达差异无显著性。结论85％高氧暴露诱导早产新生大鼠肺组织线粒体DNA编码COX亚基异常表达，这种变化可能参与了高氧肺损伤的发生。     

高氧、维甲酸对胎鼠肺角化细胞生长因子及其受体表达的影响

目的　探讨高氧、维甲酸 (RA)对胎鼠肺成纤维细胞 (LFs)和肺泡II型上皮细胞 (AECII)角化细胞生长因子 (KGF)及其受体 (KGFR)表达的影响。方法　原代培养胎鼠肺LFs及AECII ,待生长至亚汇合状态时 ,随机分为 :空气组 ,空气 +RA组 ,高氧组 ,高氧 +RA组。于培养 2、6、12、2 4、4 8(AECII)和 72h(LFs)时 ,采用半定量RT -PCR方法检测KGF和KGFR的mRNA表达。结果　与空气组比较 ,高氧 2h时 ,胎鼠LFsKGFmRNA表达即明显下降 ,6h时达极点 ,以后下降趋势逐渐减弱 ,至 4 8h后已无显著性差异 ;高氧 2、6、12和 2 4h时 ,其下降幅度分别为 3 0、5 2、2 3和 2 1倍 (P <0 0 5、0 0 1、0 0 1和 0 0 5 )。RA可上调高氧状态下胎鼠LFsKGFmRNA表达 ,与高氧组比较 ,高氧 +RA组在 2、6、12和 2 4h时KGFmRNA表达分别是高氧组的 2 4、3 4、1 7和 1 8倍 (P <0 0 5、0 0 1、0 0 1和 0 0 5 )。高氧对胎鼠AECIIKGFRmRNA表达影响较小 ,与空气组比较 ,仅在高氧 12h和 2 4h时其表达量分别是空气组的 2 3和 1 3倍 (P <0 0 5 ) ;RA对AECIIKGFRmRNA表达没有影响。结论　促进KGF的表达是RA发挥高氧肺损伤保护作用的重要机制之一     

急性白血病患儿骨髓血管内皮生长因子与增殖细胞核抗原的表达及其意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF)在儿童急性白血病(AL)中的表达及其意义。方法采用S-P免疫组织化学方法,检测59例AL患儿骨髓细胞PCNA和VEGF表达,比较不同类型白血病、初治组与复发难治组、治疗缓解组与未缓解组间的表达差别。选择同期住院15例非白血病患者正常骨髓作为对照组。结果PCNA、VEGF在AL患儿中表达均明显高于对照组(t=5.59,6.67 P均<0.05);PCNA在初治ALL中表达显著高于ANLL(t=2.681 P<0.05),VEGF表达无差异(t=0.970 P>0.05);初治组与复发难治组、缓解组与未缓解组两者表达均有显著性差异(P均<0.05)。结论PCNA和VEGF在儿童AL中存在高表达,以不同机制参与AL发生、发展,与疾病预后有关。     

维甲酸、血小板衍生生长因子对早产新生大鼠高浓度氧肺损伤的影响

目的观察维甲酸（RA）和血小板衍生生长因子（PDGF）对高浓度氧（简称高氧）抑制早产新生大鼠肺发育的影响，探讨其作用机制。方法1日龄早产SD大鼠随机分为：空气＋生理盐水组（Ⅰ组）、高氧＋生理盐水组（Ⅱ组）、空气＋RA组（Ⅲ组）、高氧＋RA组（Ⅳ组）。Ⅱ、Ⅳ组持续暴露于85％氧气中。Ⅲ、Ⅳ组每目腹腔注射RA500μg／kg，Ⅰ、Ⅱ组注射相同剂量的生理盐水。应用RT—PCR和免疫组织化学法检测各时间点（生后4、7、10、14及21d）各组大鼠肺组织PDGFmRNA和蛋白表达水平。结果随日龄的增加，PDGF—A、-B mRNA及蛋白表达发生不同的变化。与Ⅰ组比较，高氧暴露下PDGF-B mRNA和蛋白表达显著增高（P〈0．05），但PDGF-A mRNA及蛋白表达却显著降低（P〈0．05）。RA上调PDGF—A mRNA及蛋白表达（P〈0．05），但对PDGF—B mRNA及蛋白表达作用不显著（P〉0．05）。结论高氧暴露下，PDGF—AmRNA及蛋白表达受抑，PDGF—BmRNA及蛋白表达增强。PDGF-A、-B共同参与了高氧暴露下肺组织损伤过程。RA上调PDGF—AmRNA及蛋白表达，能部分逆转高氧引起的肺损伤。     

高氧对早产大鼠肺组织细胞色素氧化酶亚基Ⅰ表达的影响

目的探讨85%高体积浓度氧暴露对早产新生大鼠肺组织中线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)动态表达的影响。方法早产SD大鼠生后d2随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于85%氧气中,空气组置于同一室内常压空气中。两组分别于暴露满1、4、7、10和14 d时,提取肺组织RNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定COXⅠmRNA表达;采用免疫组织化学、免疫印迹(Western-blot)法检测COXⅠ蛋白表达。结果1.与空气组相比,高氧d1和d4 COXⅠmRNA的表达显著增强(P<0.05,0.01),其后开始下降,d7时两者无显著性差异(P>0.05),d10时较空气组显著降低(P<0.01),d14时又增高(P<0.01)。2.COXⅠ蛋白水平表达,与空气组相比,高氧d1和d4时,COXⅠ表达显著增强(P<0.01,0.05),d7时两者无显著性差异(P>0.05),其后开始下降,d10和d14时较空气组显著降低(P<0.01,0.05)。结论85%高体积浓度氧暴露诱导早产新生大鼠线粒体DNA编码COXⅠ异常表达,这种变化可能参与高氧肺损伤的发生。     

增殖细胞核抗原在肾母细胞瘤中的表达及其临床意义

为明确增殖细胞核抗原在肾母细胞瘤中的表达及其临床意义。对３５例肾母细胞瘤采用免疫组化染色进行回顾性研究。结果；３５例肾母细胞瘤采用免疫组化染色进行回顾性研究。结果；３５例肾母细胞瘤中ＰＣＮＡ表达阳性者１２例，其中Ⅱ级５例，Ⅲ级４例，Ⅳ级３例，阳性率为３４．２９％，其阳性率随临床分期升高而增加，ＰＣＮＡ阳性者其Ｓ期细胞指数及增殖指数均显著高天ＰＣＮＡ阴性者，而其五年生存率，１６．６７％，则显著低于Ｐ     

细胞色素b在早产新生大鼠高氧肺损伤肺组织中的表达和意义

目的探讨细胞色素b（cytochrome b，Cytb）与高氧肺损伤发生、发展的关系。方法早产新生SD（Sprague-Dawley）大鼠生后1d随机分为空气组、高氧组，高氧组持续暴露于常压氧舱中，氧浓度〉85％；空气组置于同一室常压空气中。两组分别于高氧或空气暴露后1、4、7、10和14d时提取肺组织RNA，采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定CytbmRNA表达；同时应用免疫组化方法检测肺组织切片中Cytb蛋白表达；应用Western-blot检测高氧肺损伤肺组织中Cytb蛋白水平的表达变化。结果与空气组相比，高氧暴露1d、4d CytbmRNA含量及其表达显著增强（P〈0．05）；7d后Cytb呈下降趋势，其表达较空气组减弱，但两者相比差异无统计学意义（P〉0．05）。高氧暴露后，随日龄变化肺组织Cytb免化结果与CytbmRNA表达相似；与空气组相比，高氧暴露1d、4d肺组织Cytb表达显著增强（P〈0．05）；7d后Cytb呈逐渐下降趋势，其表达较空气组减弱，但7、10d两组相比差异无统计学意义，14d极显著减弱（P〈0．01）。Western-blot实验结果：与空气组相比，高氧暴露1d、4dCytb蛋白水平表达增强但两组相比差异无统计学意义（P〉0．05）；7d后Cytb呈下降趋势，其表达较空气组减弱，但7、10d两组相比差异无统计学意义（P〉0．05），而14d显著减弱（P〈0．05）。结论85％高浓度氧暴露诱导早产新生大鼠线粒体编码的Cytb异常表达，这种变化可能参与高氧肺损伤的发生。     

先天性胫骨假关节病变组织增生活性的研究

目的 明确先天性胫骨假关节（ＣＰＴ）不同部位病变组织增生生强弱和ＰＣＮＡ表达与年龄及复发的关系。方法 采用免疫组化方法（ＳＡＢＣ法）对２１例ＣＰＴ的三个不同聚材部位所获得的６３个标本进行了ＰＣＮＡ检测。结果 ＣＰＴ病变软组织的ＰＣＮＡ阳性表达率比创伤性假关节高,相差非常显著（Ｐ〈０．０１）。ＰＣＮＡ的阳性表达与呈负相关,与得发呈正相关。结论 ＣＰＴ病变组织具有较强细胞增生活笥,为临床上年龄越小越易     

Prognostic value of proliferating cell nuclear antigen immunostaining in pediatric rhabdomyosarcomas

Background : The levels of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) are almost negligible in long-term quiescent cells and increase dramatically during the cell cycle. Recently, the monoclonal antibodies to PCNA have been used to demonstrate the proliferative component of paraffin-embedded tumor tissues. It has been shown to be available as a simple histological marker of proliferative activity and the PCNA labeling index has been correlated with the prognosis of several malignant neoplasms. Methods : Formalin fixed, paraffin embedded tissue specimens of 29 primary pediatric rhabdomyosarcomas were immunostained by using an anti-PCNA monoclonal antibody (DAKO PCNA PC 10). The relationship between the PCNA index and prognosis, clinicopathological features and survival were assessed retrospectively. Results : The mean PCNA index for the whole series was 54%. There was no correlation between PCNA index and any of the clinicopathological characteristics. However, patients having tumors with a high (> 54%) PCNA index demonstrated significantly lower survival rates than tumors with a low (< 54%) PCNA index (P- 0.01). Moreover, there were significantly more patients with relapse or progressive disease in the high PCNA index group (P = 0.005). Conclusion : The PCNA labeling index can be a useful prognostic factor and a good indicator of recurrence and/or survival in patients with rhabdomyosarcoma.     

N-乙酰半胱氨酸对高氧性肺损伤新生未成熟大鼠肺纤维化的抑制作用

目的 探讨高氧性肺损伤新生未成熟大鼠肺纤维化过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积情况,并观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预效果,以期为临床防治高氧性肺损伤后肺纤维化提供一条新的有效途径.方法 将200只孕21 d(足月为22～23 d)剖宫产出生的新生SD大鼠随机分为空气组(Ⅰ组)、高氧组(Ⅱ组)、高氧+生理盐水(NS)组(Ⅲ组)、高氧+小剂量NAC组(Ⅳ组)、高氧+大剂量NAC组(Ⅴ组)共5个组,每组40只.每组又随机分为3 d、7 d、14 d和21 d共4个亚组,每个亚组10只.Ⅰ组在空气中饲养;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组置于同一室的高浓度氧(﹥95%)箱中饲养;Ⅳ、Ⅴ组大鼠以灌胃方式给予NAC(大剂量组每天给予6.25×10-5 g NAC/g体重,小剂量组是大剂量的1/4);Ⅲ组给予相同容量的NS.光镜观察各组大鼠肺组织病理形态学;应用图像分析方法检测肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,并比较各组大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的差别.结果 3、7 d时各组大鼠肺组织Ⅰ型胶原免疫组化PU值的差异均无统计学意义(P均﹥0.05);14、21 d时Ⅱ组较Ⅰ组明显增高(P均﹤0.01),Ⅴ组则较Ⅱ组明显降低(P分别为0.015、0.001).3 d时各组大鼠肺组织Ⅲ型胶原免疫组化PU值的差异无统计学意义(P＞0.05);7、14、21 d Ⅱ组较Ⅰ组显著增加(P均＜0.01),Ⅴ组则显著低于Ⅱ组(P均＜0.01).对各时间点Ⅳ组与Ⅱ组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量之间进行比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 高氧性肺损伤新生未成熟大鼠肺纤维化过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积增加,NAC对高氧性肺损伤后肺纤维化具有抑制作用,其作用具有剂量依赖性.     

表皮生长因子对新生未成熟大鼠高氧性损伤肺组织纤维化的影响

目的 探讨外源性表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）对新生大鼠高氧性损伤肺组织纤维化的影响。方法 取胎龄21d剖宫产出生的新生Sprague-dawley（SD）大鼠持续吸入95％的O2制作未成熟肺高氧性损伤模型，随机分为高氧＋EGF组和高氧＋生理盐水（NS）组，另设空气＋NS对照组；所有组按给药（或NS）时间分为3个亚组，即：a亚组（1—3d）、b亚组（4～6d）、c亚组（1～6d）；各亚组均于生后3、7、14d分批处死采取肺组织标本。应用Masson三色染色、纤维化评分及羟脯氨酸含量测定判断肺组织纤维化的程度。结果 空气＋NS组未见胶原沉积增多现象，高氧＋NS组生后7d胶原沉积明显增多，14d程度加重，7、14d高氧＋EGF组较高氧＋NS组胶原沉积明显减少；羟脯氨酸（HYP）的含量和纤维化评分也表明7、14d时高氧＋EGF组胶原纤维的含量较高氧＋NS组明显减少（P〈0．01）；在高氧＋EGF组中b亚组效果不及a亚组和c亚组。结论 表皮生长因子可以减轻新生未成熟大鼠高氧性损伤肺组织纤维化程度，在肺损伤早期应用效果更好。     

表皮生长因子对新生未成熟大鼠高氧性损伤肺组织纤维化的影响

目的探讨外源性表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)对新生大鼠高氧性损伤肺组织纤维化的影响。方法取胎龄21d剖宫产出生的新生Sprague-dawley(SD)大鼠持续吸入95%的O2制作未成熟肺高氧性损伤模型,随机分为高氧 EGF组和高氧 生理盐水(NS)组,另设空气 NS对照组;所有组按给药(或NS)时间分为3个亚组,即:a亚组(1~3d)、b亚组(4~6d)、c亚组(1~6d);各亚组均于生后3、7、14d分批处死采取肺组织标本。应用Masson三色染色、纤维化评分及羟脯氨酸含量测定判断肺组织纤维化的程度。结果空气 NS组未见胶原沉积增多现象,高氧 NS组生后7d胶原沉积明显增多,14d程度加重,7、14d高氧 EGF组较高氧 NS组胶原沉积明显减少;羟脯氨酸(HYP)的含量和纤维化评分也表明7、14d时高氧 EGF组胶原纤维的含量较高氧 NS组明显减少(P<0·01);在高氧 EGF组中b亚组效果不及a亚组和c亚组。结论表皮生长因子可以减轻新生未成熟大鼠高氧性损伤肺组织纤维化程度,在肺损伤早期应用效果更好。     

N-乙酰半胱氨酸对高氧性肺损伤新生未成熟大鼠肺纤维化的抑制作用

目的探讨高氧性肺损伤新生未成熟大鼠肺纤维化过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原的沉积情况,并观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)的干预效果,以期为临床防治高氧性肺损伤后肺纤维化提供一条新的有效途径。方法将200只孕21d(足月为22~23d)剖宫产出生的新生SD大鼠随机分为空气组(Ⅰ组)、高氧组(Ⅱ组)、高氧 生理盐水(NS)组(Ⅲ组)、高氧 小剂量NAC组(Ⅳ组)、高氧 大剂量NAC组(Ⅴ组)共5个组,每组40只。每组又随机分为3d、7d、14d和21d共4个亚组,每个亚组10只。Ⅰ组在空气中饲养;Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组置于同一室的高浓度氧(>95%)箱中饲养;Ⅳ、Ⅴ组大鼠以灌胃方式给予NAC(大剂量组每天给予6·25×10-5gNAC/g体重,小剂量组是大剂量的1/4);Ⅲ组给予相同容量的NS。光镜观察各组大鼠肺组织病理形态学;应用图像分析方法检测肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,并比较各组大鼠肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的差别。结果3、7d时各组大鼠肺组织Ⅰ型胶原免疫组化PU值的差异均无统计学意义(P均>0·05);14、21d时Ⅱ组较Ⅰ组明显增高(P均<0·01),Ⅴ组则较Ⅱ组明显降低(P分别为0·015、0·001)。3d时各组大鼠肺组织Ⅲ型胶原免疫组化PU值的差异无统计学意义(P>0·05);7、14、21dⅡ组较Ⅰ组显著增加(P均<0·01),Ⅴ组则显著低于Ⅱ组(P均<0·01)。对各时间点Ⅳ组与Ⅱ组Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达量之间进行比较,差异均无统计学意义(P>0·05)。结论高氧性肺损伤新生未成熟大鼠肺纤维化过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积增加,NAC对高氧性肺损伤后肺纤维化具有抑制作用,其作用具有剂量依赖性。     

结缔组织生长因子在高氧致早产鼠慢性肺疾病中的表达及其作用

目的：肺纤维化是高氧致慢性肺疾病(chroniclungdiseases,CLD)的最终结局,结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)是近年来发现的与纤维化形成密切相关的因子,但其在CLD肺纤维化中的作用目前尚未见报道。该实验旨在研究CTGF在高氧致CLD中的动态表达规律,并探讨其在CLD中的作用。方法：将50例早产鼠随机分为实验组(高氧组)和对照组(空气组),分别于建立模型后1,3,7,14,21d应用免疫组化技术动态检测肺组织中CTGF的表达部位和强度,对肺组织纤维化程度进行病理组织学评分。结果：对照组小鼠CTGF仅在血管内皮细胞、支气管、细支气管上皮细胞有微弱表达;实验组于建立模型后1,3,7d表达部位与对照组相似,表达强度与对照组无差异(P>0.05),14d表达增强(P<0.01),在部分肺上皮细胞、肺泡间隔、成纤维细胞中出现表达,21d表达明显增强(P<0.01)。高氧组14d和21dCTGF表达水平与肺组织纤维化程度呈明显正相关(分别为r=0.903,r=0.926,均P<0.01)。结论：随着高氧暴露时间的延长和纤维化的发展,CTGF表达增强,其与高氧所致CLD肺纤维化的发生密切相关。     

血管内皮生长因子在新生大鼠高氧肺损伤模型中的表达及意义

目的探讨高浓度氧暴露致新生大鼠急性肺损伤时血管内皮生长因子（VEGF）的表达及其对肺发育的影响,为临床防治支气管肺发育不良提供理论依据。方法生后2—3日龄新生Sprague—Dawley（SD）大鼠48只随机分为空气组和高氧组各24只,分别置于空气及常压氧气（I〉95％）喂养,采用荧光定量PCR和Western Blot方法检测第1、3、7天时各组大鼠肺组织VEGF mRNA和蛋白表达水平,HE染色动态观察新生大鼠肺组织形态结构变化。结果两组大鼠肺组织第1、3、7天VEGF mRNA和蛋白表达水平均逐渐降低,高氧组明显低于空气组,第1天差异无统计学意义（P〉0．05）,第3、7天差异有统计学意义（P〈0．05）[VEGF mRNA：1天（0．86±0．35）比（1．00±0．28）,3天（0．54±0．26）比（0．92±0．34）,7天（0．32±0．20）比（0．61±0．12）;VEGF蛋白：1天（0．78±0．33）比（1．00±0．16）,3天（0．60±0．08）比（0．85±0．27）,7天（0．34±0．12）比（0．56±0．18）]。与空气组相比,高氧组肺组织显著发育不良,肺泡结构简单,肺泡数目减少,肺微血管发育受阻。结论VEGF对肺发育起重要作用,其确切作用机制有待进一步研究。