子癎前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响

目的 探讨子癎前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响。方法采用组织块贴壁法培养人早孕期（孕6～8周）细胞滋养细胞,传代后待细胞长满至70％～80％,分别加入正常孕妇血清（正常组）和子癎前期患者血清（子癎前期组）培养24h;CCK-8法测定细胞活力;Transwell技术检测细胞滋养细胞的浸润功能;RT—PCR法检测滋养细胞MMP-2、MMP-9和PAI-1 mRNA的表达。结果子癎前期组细胞滋养细胞活力和浸润能力均低于正常组（P〈0．05和P〈0．01）。与正常组比较,子癎前期组细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达明显下降,而PAI-1 mRNA的表达明显升高,差异均有统计学意义（P〈0．01）。正常组和子痴前期组中,MMP-2 mRNA与PAI-1 mRNA的表达均呈负相关（r=-0．985,P〈0．01;r=-0．933,P〈0．05）;MMP-9 mRNA与PAI-1 mRNA的表达无相关性。结论子癎前期患者血清可能通过调节细胞滋养细胞中MMP-2、MMP-9 和PAI-1的表达而影响细胞的浸润能力。     

HLA-G蛋白在滋养层细胞的表达及意义

目的 探讨人类白细胞抗原G（HLA-G）蛋白在妊娠不同阶段和不同种类滋养细胞的表达差异及生物学意义。方法 应用免疫组化法（SP）检测30例早孕绒毛、30例中孕胎盘、36例晚孕胎盘中HLA-G蛋白的表达情况。结果 在表达的时间上，HLA-G蛋白强表达于早期绒毛和中期妊娠胎盘中，而在晚期胎盘为弱表达，差异显著（P〈0．01）；在表达的部位上，HLA-G蛋白仅表达于绒毛外滋养层细胞。结论 HLA-G蛋白在不同孕期及不同种类滋养层细胞表达的差异．提示其可能参与了滋养细胞的有节制侵袭。     

表皮生长因子受体表达与葡萄胎恶变相关性分析

目的研究表皮生长因子受体（EGFR）在妊娠滋养细胞疾病的表达,探讨EGFR对预测葡萄胎恶变的价值. 方法采用免疫组化方法,检测石蜡包埋的105例妊娠滋养细胞疾病和20例正常早孕绒毛组织EGFR蛋白表达水平. 结果在合体滋养层中,妊娠滋养细胞疾病和正常早孕绒毛组织均强烈表达EGFR蛋白;在细胞滋养层,正常早孕绒毛、非恶变组葡萄胎的EGFR蛋白表达显著高于恶变组葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌（P＜0.01, P＜0.01, P＜0.01）,而恶变组的EGFR蛋白表达显著高于侵蚀性葡萄胎和绒癌（P＜0.05, P＜0.05）,EGFR蛋白表达在侵蚀性葡萄胎和绒癌之间差异无显著性（P＞0.05）. 结论 EGFR表达降低在妊娠滋养细胞疾病发生发展过程中起重要作用并有可能成为预测葡萄胎恶变的一项新的指标.     

基质金属蛋白酶-9在妊娠高血压疾病中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在妊高征发病机制中的作用。方法收集孕30～35周孕妇300例,采用免疫组化法检测MMP-9在血清及胎盘绒毛上皮组织中的表达,并定期随访。300例孕妇中发展为妊高征67例(妊高征组),其余233例中早产25例,至孕足月分娩208例(正常妊娠组)。结果妊高征组血清MMP-9的阳性表达明显低于正常妊娠组(P<0.05),且胎盘绒毛上皮组织合体滋养细胞MMP-9阳性率低于正常妊娠组(P<0.05)。结论妊高征孕妇血清及胎盘滋养层细胞中MMP-9的表达明显减少,表明MMP-9可能参与妊高征的发生和发展。     

表皮生长因子受体表达与预测葡萄胎恶变相关性研究

目的研究表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）在妊娠滋养细胞疾病中的表达,探讨EGFR对预测葡萄胎恶变的价值。方法采用免疫组化方法,检测石蜡包埋的105例妊娠滋养细胞肿瘤组织和20例正常早孕绒毛组织EGFR蛋白表达水平。结果在合体滋养层,妊娠滋养细胞肿瘤组织和正常早孕绒毛组织均强表达EGFR蛋白;在细胞滋养层,正常早孕绒毛、非恶变组葡萄胎的EGFR蛋白表达高于恶变组葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达（P〈0.05,P〈0.05,P〈0.05）;而恶变组的EGFR蛋白表达强于侵蚀性葡萄胎和绒癌的表达（P〈0.05,P〈0.05）;EGFR蛋白表达在侵蚀性葡萄胎和绒癌之间差异无显著性（P〉0.05）。结论EGFR表达降低在妊娠滋养细胞疾病发生发展过程中起重要作用,并有可能成为预测葡萄胎恶变的一项新的指标。     

基质金属蛋白酶-9在妊娠高血压中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在妊娠高血压发病机制中的作用。方法采用酶联免疫吸附（EHSA）法检测20例妊娠高血压疾病患者（实验组）和20例正常妊娠孕妇（对照组）血清MMP-9水平。采用SP免疫组化法检测两组胎盘滋养层细胞MMP-9水平。结果实验组血清MMP-9水平低于正常对照组（P〈0．05）,胎盘绒毛上皮组织合体滋养细胞MMP-9阳性率低于对照组（P〈0．05）。结论妊娠期高血压疾病患者血清及胎盘滋养层细胞MMP-9表达水平下降,提示其在妊娠高血压疾病发病机制中有重要作用。     

基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及其组织抑制剂TIMP-1、TIMP-2与滋养细胞疾病关系的研究

目的通过研究基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及其组织抑制剂TIMP—1、TIMP-2在不同类型滋养细胞疾病中的表达,探讨基质金属蛋白酶系统与滋养细胞及滋养细胞疾病的关系。方法应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学方法对20例正常早孕（〈12周）绒毛组织、15例部分性葡萄胎、55例完全性葡萄胎、15例侵蚀性葡萄胎、8例绒毛膜癌组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2进行检测。结果（1）MMP-2在不同类型滋养细胞中的表达差异无统计学意义（x^2：0．926,P=0．921）;（2）MMP-9在正常早孕绒毛组织、部分性葡萄胎、完全性葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌中均100％表达,但随着滋养细胞恶性程度的增加其表达显著升高,差异有统计学意义（x^2=26．421,P=0．0001）;（3）TIMP—1在正常早孕绒毛组织均有表达,而在部分性葡萄胎、完全性葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌中分别有6．67％、5．45％、6．67％、12．50％不表达,且随着肿瘤恶性程度的升高,其染色程度和染色细胞百分率减少,差异有统计学意义（x^2=9．575,P=0．048）;（4）TIMP-2在各组织中的表达差异无统计学意义（x^2=1．462,P=0．833）。结论随着滋养细胞疾病恶性程度的增加,MMP-9表达上调而TIMP-1表达下调。MMP-2、TIMP-2与滋养细胞浸润无密切关系。     

人类白细胞抗原G、E在人胎盘组织中的表达及其意义

用原位杂交法分别检测人类白细胞抗原G、E（HLA—G、E）mRNA及蛋白质在人正常早孕绒毛组织、晚孕胎盘组织中的表达。结果：在人正常早孕绒毛组织中的绒毛细胞滋养细胞、合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞（EVCT）内均有HLA—G、EmRNA及HLA-E蛋白质表达，而HLA-G蛋白质仅在EVCT内表达：晚孕胎盘组织中HLA-G、EmRNA及蛋白质表达于蜕膜板内的EVCT及羊膜上皮细胞。结论：HLA-E表达于人正常早孕绒毛组织中所有类型的滋养细胞及晚孕胎盘组织中的EVCT和羊膜上皮细胞。抗人HLA-G单克隆抗体4H84仅能检出人胎盘组织中EVCT及羊膜上皮细胞内的HLA-G蛋白。图12参10     

妊娠滋养细胞疾病中EMT相关蛋白CK-18、波形蛋白的表达及意义

目的 检测上皮细胞间质细胞转化（EMT）相关蛋白--细胞角蛋白18（CK-18）和波形蛋白（vimentin）在正常早孕绒毛、葡萄胎及妊娠滋养细胞肿瘤中的表达及与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化法（SP法）检测39例正常早孕绒毛组织、33例葡萄胎组织和32例妊娠滋养细胞肿瘤组织（侵袭性葡萄胎27例、绒毛膜癌5例）中CK-18、vimentin的定位及表达情况。结果 CK-18在各种类型滋养细胞中呈强阳性表达,正常绒毛组的CK-18表达水平高于葡萄胎组及妊娠滋养细胞肿瘤组,差异有统计学意义（P<0.01）,葡萄胎组CK-18表达高于滋养细胞肿瘤组,差异有统计学意义（P<0.01）;vimentin于各组滋养细胞中呈弱阳性表达,各组间的表达差异无统计学意义（P>0.05）。在葡萄胎滋养细胞轻度增生组,CK-18蛋白的相对表达量高于滋养细胞中或重度增生组（P<0.01）。在滋养细胞肿瘤解剖学Ⅰ期组CK-18蛋白的相对表达量高于解剖学Ⅱ期及以上组（P<0.001）。结论 伴随着滋养细胞恶性度的升高CK-18的表达逐渐降低,提示EMT可能与滋养细胞的恶性转化有相关性。     

妊娠高血压综合征患者胎盘滋养层细胞中血红素氧合酶-1的表达

目的 观察正常晚孕妇女（NTP）及妊娠高血压综合征（PIH）患者胎盘滋养层细胞中血红素氧合酶-1（HO-1）的表达.方法 取15例NTP和PIH患者剖宫产术的胎盘绒毛小叶进行培养,应用免疫印迹法（Western Blot）检测胎盘组织中HO-1的蛋白含量.取正常早孕妇女胎盘绒毛小叶进行细胞培养,然后分别加入NTP血清（NTP组）及中重度PIH患者血清（PIH组）,进行分组培养.应用Western Blot检测HO-1的蛋白含量.结果 PIH组胎盘组织中HO-1的蛋白含量与NTP组比较差异有统计学意义（P＜0.01）;PIH患者血清培养的滋养细胞中HO-1的蛋白含量低于正常组.结论 PIH患者胎盘滋养细胞中HO-1的蛋白表达明显减少.     

Talin1在输卵管妊娠患者的输卵管和绒毛中高表达并促进妊娠滋养细胞的侵袭

目的 验证Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达差异及对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响,探讨其作用机制。方法 采用免疫组化及Western blot检测Talin1在妊娠输卵管组织及输卵管妊娠绒毛中的表达定位及蛋白表达差异;HTR-8/SVneo细胞内转染Talin1 siRNA,划痕实验及Transwell实验检测Talin1对HTR-8/SVneo细胞侵袭、迁移的影响;qRTPCR及Western blot检测HTR-8/SVneo细胞中MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Snail的表达。结果 正常输卵管组织及妊娠输卵管组织中均可检测到Talin1的阳性表达,主要表达于纤毛细胞的细胞质中;妊娠输卵管组织中Talin1的蛋白表达高于正常输卵管组织（P<0.01）;输卵管妊娠绒毛中Talin1表达高于宫内妊娠绒毛（P<0.01）;沉默Talin1抑制HTR-8/SVneo细胞的侵袭（P<0.01）和迁移（P<0.05）;Talin1下调HTR-8/SVneo细胞中N-cadherin、MMP-2、Snail的表达（P<0.05）,上调MMP-9的表达（P<0.05）。结论 输卵管妊娠患者的输卵管组织及绒毛中Talin1的表达显著升高,输卵管妊娠的发生可能和Talin1调控妊娠滋养细胞的侵袭相关。     

HLA-G蛋白在滋养层细胞的表达及意义

目的 探讨人类白细胞抗原G(HLA-G)蛋白在妊娠不同阶段和不同种类滋养细胞的表达差异及生物学意义。方法 应用免疫组化法(SP)检测30例早孕绒毛、30例中孕胎盘、36例晚孕胎盘中HLA-G蛋白的表达情况。结果 在表达的时间上,HLA-G蛋白强表达于早期绒毛和中期妊娠胎盘中,而在晚期胎盘为弱表达,差异显著(P<0.01);在表达的部位上,HLA-G蛋白仅表达于绒毛外滋养层细胞。结论 HLA-G蛋白在不同孕期及不同种类滋养层细胞表达的差异,提示其可能参与了滋养细胞的有节制侵袭。     

早孕胎盘组织中PPARγ和MMP-2的表达及意义

目的探讨PPARγ和MMP-2与早孕细胞滋养细胞浸润的关系;方法本研究通过免疫组织化学技术检测早孕早期和早孕晚期绒毛组织中PPARγ和MMP-2蛋白的表达;结果PPARγ蛋白主要定位在早孕绒毛细胞滋养细胞核及绒毛外滋养细胞柱和细胞岛的细胞滋养细胞核内,MMP-2阳性颗粒主要存在绒毛细胞滋养细胞和合体细胞滋养细胞胞浆内,绒毛间质细胞内亦有阳性染色,且早孕早期绒毛PPARγ表达量高于早孕晚期(P<0.05),而MMP-2表达量在早孕晚期高于早期(P<0.05),与PPARγ呈负相关(r=-0.74,P<0.01);结论PPARγ在调节滋养细胞浸润过程中起重要作用,而且其作用可能是通过调节MMP-2的表达实现的,为深入探讨PPARγ及配体在滋养细胞浸润机制中的作用提供实验基础。     

骨桥蛋白在母胎界面中表达的研究

目的 通过检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)在正常早、中、晚孕期绒毛及蜕膜组织中的定位及表达情况来探讨其在妊娠期的可能作用.方法 分别采用免疫组化染色法(SP法)及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测早、中、晚孕期绒毛及蜕膜中OPN的表达.结果 OPN在正常早、中、晚孕期绒毛及蜕膜中均有表达,其主要定位于细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞及蜕膜细胞的胞膜和胞质中,此外在绒毛间质及血管中亦呈阳性表达.OPN mRNA及其蛋白表达水平的比较,在绒毛组织中,早孕期低于中孕期(P<0.05),中孕期低于晚孕期(P<0.05);蜕膜组织中,早孕期的表达量最高,与中、晚孕期比较差异均有统计学意义(均P<0.05),而在中、晚孕期组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在胚胎发育进程中.绒毛中OPN的表达量随孕周增加而增加,而蜕膜中以早孕期表达最强,推测它在孕早期可能更多是参与调节侵袭作用,而在中晚孕期可能更多的是维持免疫调节作用.     

不明原因早期自然流产患者绒毛和蜕膜组织中Bcl-2和Fas蛋白的表达

目的探讨Bcl-2和FAS蛋白在人不明原因早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的表达及其意义。方法应用免疫组化SABC法和图像分析检测Bcl-2和FAS蛋白在孕5~9周绒毛和蜕膜组织中的分布和变化规律。结果 Bcl-2和Fas蛋白均主要分布于绒毛合体滋养层、细胞滋养层和蜕膜细胞的胞质内。Bcl-2蛋白在正常妊娠组的水平显著高于自然流产组（P（0.05）,Fas蛋白在自然流产组的水平显著高于正常妊娠组（P（0.05）。结论 Bcl-2和FAS蛋白在人不明原因早期自然流产过程中可能发挥重要作用。     

子癇前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响

目的 探讨子(癎)前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响.方法 采用组织块贴壁法培养人早孕期(孕6-8周)细胞滋养细胞,传代后待细胞长满至70%-80%,分别加入正常孕妇血清(正常组)和子(癎)前期患者血清(子(癎)前期组)培养24 h;CCK-8法测定细胞活力;Transwell技术检测细胞滋养细胞的浸润功能;RT-PCR法检测滋养细胞MMP-2、MMP-9和PAI-1 mRNA的表达.结果 子(癎)前期组细胞滋养细胞活力和浸润能力均低于正常组(P<0.05和P<0.01).与正常组比较,子(癎)前期组细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达明显下降,而PAI-1 mRNA的表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01).正常组和子(癎)前期组中,MMP-2 mRNA与PAI-1 mRNA的表达均呈负相关(r=-0.985,P<0.01;r=-0.933,P<0.05);MMP-9 mRNA与PAI-1 mRNA的表达无相关性.结论 子(癎)前期患者血清可能通过调节细胞滋养细胞中MMP-2、MMP-9和PAI-1的表达而影响细胞的浸润能力.     

基质金属蛋白酶抑制基因RECK在早孕自然流产绒毛组织中的表达及意义

目的观察早期自然流产患者绒毛组织中RECK基因（基质金属蛋白酶（MMP）抑制基因）的表达及其与MMP-2、-9之间的关系。方法采用半定量RT-PCR和Western blotting法检测20例早期自然流产患者和20例正常早期妊娠绒毛组织中RECK、MMP-2和MMP-9基因的表达情况。结果①早期自然流产患者绒毛组织中MMP-2及MMP-9的mRNA表达水平低于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）;RECKmRNA的表达高于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）。②自然流产患者绒毛组织中MMP-2、MMP-9蛋白表达低于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）;RECK蛋白表达高于正常早期妊娠者,差异有统计学意义（P〈0.05）。③RECK蛋白与MMP-2、MMP-9蛋白之间存在明显的负相关。结论RECK表达的增加进而抑制MMP-2、MMP-9的活化,致使滋养细胞侵袭能力下降,可能与孕早期自然流产的发生有关。     

四分子交联体家族成员9在滋养细胞中的表达及其意义

目的 探讨四分子交联体家族成员9(TM4SF9)蛋白在滋养细胞巾的表达及意义.方法 应用免疫组化方法检测TM4SF9蛋白在早孕绒毛,葡萄胎,侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌中的表达情况.结果 (1)在早孕绒毛,TM4SF9蛋白仅表达于细胞滋养层细胞,而在合体滋养层细胞则未见表达;(2)TM4SF9蛋白在早孕绒毛、葡萄胎和侵蚀性葡萄胎,绒癌中的表达依次增强,强阳性率分别为0,10%,36.4%,100%,差异有统计学意义(P<0.001).结论 TM4SF9蛋白的表达可能与滋养细胞的侵袭行为有关,TM4SF9在滋养细胞肿瘤的侵袭中有一定作用.     

SHH信号通路对子痫前期患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响及其机制

目的：探讨激活SHH信号通路对子痫前期（PE）患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法：将HTR8/SVneo细胞分为正常对照组、缺氧/复氧（H/R）处理组和purmorphamine+H/R处理组。Western blotting法检测PE胎盘组织和正常妊娠晚期胎盘组织及各组HTR8/SVneo细胞中SHH信号通路相关蛋白SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平,流式细胞术（FCM）检测各组HTR8/SVneo细胞的凋亡率,Transwell小室法检测各组HTR8/SVneo细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组HTR8/SVneo细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）蛋白表达水平。结果：PE胎盘组织HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平均明显低于正常妊娠晚期胎盘组织（P<0.05）;H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显低于正常对照组,细胞凋亡率明显高于正常对照组（P<0.05）;purmorphamine+H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显高于H/R处理组（P<0.05）,细胞凋亡率明显低于H/R处理组（P<0.05）。结论：激活SHH信号通路可减少PE患者胎盘组织中HTR8/SVneo细胞凋亡,并通过上调MMP-2和MMP-9表达提高细胞的侵袭能力。     

MMP-25在早孕绒毛和蜕膜中的表达及意义的研究

目的研究基质金属蛋白酶-25 (matrix metalloproteinase-25,MMP-25)在正常早期妊娠和自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达特点,探讨其在胚胎植入中的作用及其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测60例正常早期妊娠和40例自然流产患者绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA及蛋白的表达。结果① MMP-25mRNA在正常早期妊娠的绒毛及蜕膜组织中均有表达,且绒毛组织中MMP-25mRNA表达水平随妊娠周数的增加逐渐上升,各孕周组间相比差异有统计学意义(P＜0.05)。自然流产组绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA的表达明显低于正常妊娠组(P＜0.05)。② 正常妊娠组的绒毛组织中,MMP-25主要定位于细胞滋养细胞和合体滋养细胞,并且随妊娠周数增加表达逐渐增强,与RT-PCR结果吻合;自然流产组仅在合体滋养细胞中有表达,两组平均光密度分别为0.21±0.02和0.13±0.04,差异有统计学意义(P＜0.05)。蜕膜组织中MMP-25主要在腺上皮细胞表达,自然流产组的表达微弱,两组平均光密度分别为0.25±0.13和0.21±0.12,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论MMP-25表达变化与滋养细胞浸润能力相吻合,且蜕膜组织中呈阳性表达,推测其参与胚胎植入及胎盘形成过程中滋养细胞浸润活性调控及子宫内膜组织重构;自然流产患者MMP-25表达水平降低,造成滋养细胞浸润能力下降,可能与自然流产的发生有关。