miR-106a对胶质瘤增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨微小RNA（miR）-106a对人胶质瘤细胞中腺瘤样息肉（APC）基因的靶向调控作用以及对细胞增殖和凋亡的影响。方法 收集2020年1月至2021年12月浙江省立同德医院减压切除的10例胶质瘤组织和10例对照组织。采用实时荧光定量PCR法检测miR-106a在胶质瘤组织和对照脑组织中、在胶质瘤LN229、U251和U87等细胞系中的表达水平并作比较。使用miR-106a抑制物转染LN229和U251细胞,采用克隆形成实验检测细胞增殖能力,通过流式细胞术检测细胞凋亡水平。通过TOP/FOP荧光素酶实验检测荧光素酶活性,采用Western blot法检测Wnt通路相关蛋白和核内β-连环蛋白（β-catenin）的表达。采用qRT-PCR和Western blot法检测APC的mRNA和蛋白表达水平。利用双荧光素酶报告基因实验确认miR-106a和APC的靶向关系。通过表型拯救实验检测miR-106a靶向APC对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。结果 miR-106a在胶质瘤组织和细胞系中高表达。抑制miR-106a表达降低胶质瘤细胞的增殖水平,提高胶质瘤细胞的凋亡水平,并抑制了Wnt/...     

MicroRNA-25表达下调对神经胶质瘤U87细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨microRNA-25（miR-25）表达下调对神经胶质瘤U87 细胞增殖与凋亡的影响,以及miR-25 与B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2 基因（Bcl-2）在胶质瘤细胞增殖与凋亡过程中的调节作用。方法通过慢病毒介导反义miR-25 寡聚核苷酸转染U87 细胞;分为3 组,实验组（转染anti-miR-25）、对照组（转染negative control）和空白组（空白PBS）;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-25 和Bcl-2 的mRNA 表达水平;CCK-8 法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果实验组miR-25 和Bcl-2 的mRNA 表达量与空白组和对照组比较,差异具有统计学意义（P <0.05）,实验组降低;实验组相对于空白组和对照组,细胞增殖活性降低,细胞周期延缓,细胞凋亡率升高。结论在胶质瘤U87 细胞,miR-25 表达下调通过作用于Bcl-2 靶基因,延缓细胞周期,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。     

MiR-218在宫颈癌组织中的表达及对HeLa细胞凋亡及转移的影响

目的 探讨miR-218在宫颈癌组织中的表达,以及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测23 例正常子宫颈组织和114 例宫颈癌组织中miR-218 mRNA的表达,分析与临床病理特征的关系;HeLa细胞分为3组:对照组（细胞不转染）、转染空脂质体阴性对照组(NC组)和 转染miR-218类似物 (miR-218M组)。MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移; qRT-PCR和Western blot分别检测Bcl-2、Bax、NF-κB和E-cadherin mRNA和蛋白表达。结果 miR-218 mRNA在宫颈癌组织中表达下调,在宫颈癌不同病理类型、分期分级、有无淋巴结转移及间质浸润深度间表达差异有统计学意义（P Bax mRNA和蛋白表达水平上调, E-cadherin mRNA和蛋白表达上调,NF-κB mRNA和蛋白表达下调。结论 MiR-218低表达可能与宫颈癌的病理分级分期等生物学行为有关,上调miR-218表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭转移。     

miRNA-376c-3p调控CASP-7表达抑制人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞生长和迁移

目的:探讨miRNA-376c-3p(miR-376c-3p)对人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞迁移、增殖和凋亡的影响及其可能的调控机制。方法:qRT-PCR法检测13例胃间质瘤患者肿瘤和癌旁对照组织中miR-376c-3p表达;将miR-376c-3p类似物(mimic)、抑制物(inhibitor)和各自阴性对照分别转染GIST-T1细胞,另设空白对照组;qRT-PCR检测转染细胞miR-376c-3p表达;然后用CCK8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移能力;通过Western Blot及qRT-PCR法检测miR-376c-3p对CASP-7(Caspase-7)表达量的影响。结果:在胃间质瘤患者癌组织中,miR-376c-3p表达水平显著降低,为癌旁对照组织的58.7%(P<0.01);qRT-PCR显示:转染miR-376c-3p mimic后,GIST-T1细胞miR-376c-3p表达明显上调(P<0.01),而转染miR-376c-3p inhibitor后表达受抑制(P<0.01);miR-376c-3p mimic转染组细胞增殖活性、迁移能力明显抑制(P<0.01),凋亡率增强(P<0.05);另外miR-376c-3p过表达后CASP-7mRNA和蛋白水平出现上调,相反地,miR-376c-3p抑制却导致CASP-7mRNA和蛋白水平下调(P<0.05)。结论:在人胃肠道间质瘤GIST-T1细胞中miR-376c-3p可以间接调控CASP-7的表达,抑制细胞增殖、迁移能力,促进细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子α诱导蛋白3在胶质瘤中的表达特性及其对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞侵袭、迁移的影响。方法 采用实时荧光定量法(qRT-PCR)检测人星形胶质细胞NHA和胶质瘤细胞株U87、U251、SNB19、T98和LN229中TNFAIP3的表达,以U87和SNB19为实验对象。使用阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导小干扰RNA(siRNA)转染U87和SNB19以下调TNFAIP3的表达;采用Transwell检测下调TNFAIP3对U87及SNB19侵袭的影响;运用划痕实验检测下调TNFAIP3对U87及SNB19迁移的影响。结果 和NHA(0.144±0.008)相比,TNFAIP3在U87(1.380±0.066)、U251(0.663±0.062)、SNB19(1.405±0.032)、T98(1.002±0.068)、LN229(0.667±0.027)中的表达均升高(均P<0.05)。si-TNFAIP3转染U87及SNB19可下调TNFAIP3的表达,继续培养24 h, U87及SNB19侵袭和迁移能力均下降(均P<0.05)。结论 ...     

MicroRNA-204 在非小细胞肺癌患者组织中的表达及对癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察microRNA-204（miR-204）在非小细胞肺癌（NSCLC）患者体内的表达水平及对癌细胞增殖的影响,探讨miR-204 在非小细胞肺癌中的临床意义及可能分子机制。方法 实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-204 在肺癌及癌旁组织中的表达情况;用化学合成的miR-204 模拟物和抑制物转染人非小细胞肺癌A-549 肺癌细胞,CCK-8 法检测细胞增殖的情况,流式检测细胞凋亡情况,qRT-PCR、Western blot 法分别检测Bcl-2 的mRNA 和蛋白表达。结果 miR-204 在肺癌组织中表达水平与对应癌旁组织比较,差异有统计学意义（P <0.05）,肺癌组织低于癌旁组织;肺癌组织中miR-204 低表达与分期、肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移相关（P <0.05）;miR-204 可抑制A-549 细胞的增殖,促进细胞凋亡,并下调Bcl-2 的mRNA 与蛋白表达水平。结论 miR-204 在非小细胞肺癌组织中表达下调并与肺癌恶性临床病理特征有关,miR-204 可能通过调节Bcl-2 的表达从而影响非小细胞肺癌细胞的增殖及凋亡。     

MicroRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能

目的检测MicroRNA-218(miR-218)在肝细胞癌中的表达情况并研究其在肝癌中的功能。方法收集46例肝细胞癌及对应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-218在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况;应用miR-218 mimic转染人肝癌细胞系HepG2,MTT和流式细胞术检测转染后细胞活力和凋亡变化,qRT-PCR和Western blot检测miR-218潜在靶点的表达变化。结果 miR-218在肝癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织(P<0.05);miR-218低表达与肿瘤大小(>5 cm)和高TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)具有显著相关性(P<0.05);在HepG2细胞中,miR-218抑制细胞增殖和诱导凋亡,并下调Bmi-1和CDK6 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论 miR-218低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,miR-218可能通过下调Bmi-1和CDK6表达抑制肝癌细胞增殖和促进凋亡。     

siRNA干扰Geminin基因对脑胶质瘤放疗敏感性的影响

目的 观察敲低Geminin对人脑胶质瘤细胞放疗敏感性的影响。方法 利用GEPIA和CGGA数据库分析Geminin在脑胶质瘤组织中的表达及与生存期的相关性。实验分为两组：si-GL2组(对照组)和si-Gem组(干扰组),设计siRNA干扰序列(si-Gem)和阴性对照序列(si-GL2),分别转染脑胶质瘤细胞LN229和U87,qRT-PCR和Western blot检测转染效率及蛋白表达水平。流式细胞术检测碘化丙啶(PI)染色后DNA含量分布，进而分析敲低Geminin对DNA再复制的影响。通过AnnexinⅤ-FITC/PI法，用流式细胞术检测敲低Geminin对细胞凋亡的影响。CCK-8细胞增殖实验检测敲低Geminin对胶质瘤细胞LN229和U87放疗敏感性的影响。Western blot检测Geminin相关分子Cdt1和DNA相关损伤蛋白γ-H2AX的表达水平。结果 脑胶质瘤组织中Geminin的表达水平高于癌旁正常组织，且Geminin表达越高，脑胶质瘤患者预后越差(P<0.05)。与si-GL2组相比，si-Gem组Geminin在LN229和U87细胞中的表...     

miR-195表达调控对大肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-195对大肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法:应用脂质体转染的方法,将miR-195 mimics转染入HT-29细胞,q RT-PCR检测转染后miR-195的表达,分别采用CCK-8法及流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,qRT-PCR和Western blot检测转染后VEGFA mRNA和蛋白表达变化。结果:与NC组比较,miR-195 mimics转染组明显上调HT-29细胞miR-195的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,下调VEGFA mRNA及蛋白表达,两组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:上调HT-29细胞的miR-195表达,可明显抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与抑制其靶基因VEGFA表达相关。     

MicroRNA-218在肝细胞癌中的表达及功能

目的检测MicroRNA-218（miR-218）在肝细胞癌中的表达情况并研究其在肝癌中的功能。方法收集46例肝细胞癌及对
应癌旁组织,运用qRT-PCR技术检测miR-218 在肝癌及对应癌旁组织中的表达情况;应用miR-218 mimic转染人肝癌细胞系
HepG2,MTT和流式细胞术检测转染后细胞活力和凋亡变化,qRT-PCR和Western blot检测miR-218潜在靶点的表达变化。结
果miR-218在肝癌组织中的表达显著低于对应的癌旁组织（P<0.05）;miR-218低表达与肿瘤大小（>5 cm）和高TNM分期（Ⅲ+
Ⅳ）具有显著相关性（P<0.05）;在HepG2细胞中,miR-218抑制细胞增殖和诱导凋亡,并下调Bmi-1和CDK6 mRNA及蛋白表达
（P<0.05）。结论miR-218低表达与肝癌的恶性临床病理特征相关,miR-218可能通过下调Bmi-1和CDK6表达抑制肝癌细胞增
殖和促进凋亡。