Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的：检测Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达规律,为阐明其在胚胎着床中的作用打下基础。方法：利用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot分别检测未孕、假孕及孕d1~d7小鼠子宫内膜中Dicer基因mRNA和蛋白质的表达。结果：在小鼠着床窗期及着床后（d4～d7）,小鼠子宫内膜中Dicer基因mRNA和蛋白质表达均明显升高,d5达到高峰（PmRNA=0.000,P蛋白= 0.000）;且Dicer表达主要定位于子宫内膜基质细胞。结论：Dicer基因在早孕小鼠子宫内膜组织中的表达存在时间与空间差异,这种规律性表达所调控的细胞生长、增殖和分化可能是胚胎正常着床的分子机制之一。     

血管内皮生长因子在正常月经周期子宫内膜及早孕蜕膜中的表达

目的　观察血管内皮生长因子 (VEGF)在正常人子宫内膜增殖期、分泌期和早孕蜕膜组织的表达及其定位。方法　应用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白 -过氧化酶连接法 (SP法 )检测 7例正常增殖期、12例分泌期、11例早孕蜕膜VEGF的表达。VEGF阳性计数分级为 :阳性细胞数≤2 0 %为Ⅰ级、2 0 %～ 4 0 %为Ⅱ级、>4 0 %～ 6 0 %为Ⅲ级、>6 0 %为Ⅳ级。在统计学处理时将Ⅰ级作为阴性 ,Ⅱ～Ⅳ级作为阳性。通过检测比较 3组VEGF表达有无差别。结果　 3组年龄 (岁 )差别无统计学意义 ,分别是 2 6 0 0± 4 12、2 8 6 9± 3 0 0、2 8 73± 6 5 9(P >0 0 5 )。VEGF在 7例增殖期子宫内膜中 2例表达阳性 (2 8 6 % ) ,12例分泌期子宫内膜全部表达阳性 (10 0 % ) ,11例早孕蜕膜 10例阳性 (90 9% ) ,三者率的差异有统计学意义 (P <0 0 1)。增殖期与分泌期VEGF阳性率比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ;分泌期与蜕膜期VEGF阳性率比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。VEGF表达主要位于内膜腺上皮细胞 ,棕染颗粒定位于细胞浆内。结论　VEGF在人月经周期子宫内膜变化及胚胎着床中可能起一定作用。VEGF在子宫内膜主要表达于腺体细胞 ,染色定位于细胞浆。     

维生素D受体在小鼠子宫内膜中的表达及功能研究

目的 研究维生素D受体(VDR)在小鼠子宫内膜中的表达及其对胚胎着床的影响。方法 免疫组化及Western Blot法检测孕1～6 d小鼠子宫内膜VDR表达;孕2 d小鼠一侧子宫角注入25μl 1 mM Calcifediol(VDR抑制剂)处理,另一侧子宫角注入等体积溶剂对照,孕4 d收获小鼠子宫组织,检测子宫内膜接受态标志分子白血病抑制因子(LIF)和整合素ανβ3的表达,或孕6 d观察胚胎着床情况。结果 VDR在孕1～5 d小鼠子宫内膜中的表达呈现动态变化,孕1～2 d主要在上皮表达,基质表达较弱,孕3～4 d开始基质表达逐渐增强,孕5 d达到高峰,孕6 d着床区VDR表达显著高于非着床区(P<0.01);与对照侧比较,VDR抑制剂Calcifediol处理组孕4 d小鼠子宫内膜LIF和整合素ανβ3蛋白的表达均显著下降(P<0.05),孕6 d胚胎着床数亦明显下降(P﹤0.05)。结论 VDR在孕1～6 d小鼠子宫内膜中呈动态表达,着床区VDR表达显著高于非着床区,而抑制子宫内膜VDR可降低子宫接受态使胚胎着床受损。     

早孕小鼠胚胎着床窗口期子宫内膜mmu-miR-106b表达规律及其作用

目的：探讨mmu-miR-106b在早孕小鼠胚胎着床过程中的表达规律,阐明其对胚胎着床的调控作用。方法：应用real-time PCR和原位杂交检测mmu-miR-106b在早孕小鼠孕4 d、孕5 d及孕6 d子宫内膜中的表达;子宫内膜基质细胞转染mmu-miR-106b的模拟物和抑制剂后,MTT和流式细胞仪检测细胞的增殖凋亡情况;结合靶基因预测数据库,利用Western blot确定mmu-miR-106b在子宫内膜中的靶基因。结果：mmu-miR-106b在小鼠孕6 d子宫内膜的表达较孕4 d明显下调（P=0.039）,孕5 d着床点与着床旁组织表达无明显差异（P=0.606）,定位于子宫内膜基质细胞;上调mmu-miR-106b会促进子宫内膜基质细胞的增殖,下调其表达会促进细胞凋亡;通过miRGen、Targetscan、Pictar数据库筛查获得与胚胎着床相关的靶基因核磷蛋白1、肿瘤易感基因１０１（tumor susceptibility gene 101,Tsg101）和10号染色体缺失的同源性磷酸酶张力蛋白等,其中Tsg101的表达受到mmu-miR-106b负调控（P=0.042）。结论：mmu-miR-106b可能通过靶向Tsg101,影响胚胎着床过程中子宫内膜基质细胞增殖,对胚胎着床发挥调控作用。     

HOXa-10在早孕小鼠子宫内膜中的表达

目的:探讨HOXa-10基因在小鼠胚胎着床过程中的作用.方法:分别应用FQ-PCR和免疫组化方法检测未孕及早孕第1、2、3、4、5、7天小鼠子宫内膜HOXa-10基因及蛋白的表达.结果:FQ-PCR测得随着小鼠妊娠天数的增加,子宫内膜HOXa-10基因表达量也逐渐增高,在孕4天达到峰值.免疫组化分析显示HOXa-10蛋白在子宫内膜的表达规律与FQ-PCR结果一致.结论:在小鼠胚胎着床过程中,HOXa-10在子宫内膜中高表达,可能对子宫内膜容受性变化有重要的调节作用.     

肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1基因在小鼠子宫内膜的动态表达

0 引言 原癌基因/癌基因的激活和/或抑癌基因(包括肿瘤侵袭转移抑制基因)的失活、基因突变等是胚胎植入这一正常生理过程信号转导通路所必需的[1]. 本实验我们观察小鼠动情周期和妊娠早期,CD82/KAI1 mRNA和蛋白在子宫组织中的表达情况,探讨它们在胚胎植入信号转导通路中的作用.     

S100A2在围着床期小鼠子宫内膜表达的动态观察

目的:了解S100A2 mRNA及蛋白在围着床期小鼠子宫的表达情况,为阐明S100A2在胚胎着床过程中的作用积累实验依据。方法:应用荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫组化技术分别检测S100A2 mRNA和蛋白的表达情况。结果:①S100A2mRNA在妊娠第1～6天子宫中均有表达,且表达量逐渐降低;同时,在第5天,着床点的含量明显低于非着床点。②S100A2蛋白主要表达于小鼠子宫内膜基质细胞的胞浆中,其表达量在第1、2天很丰富,第3、4、5天很低。③子宫内膜的腔上皮和腺上皮细胞未见S100A2表达。结论:在胚胎着床过程中,S100A2在小鼠子宫中的表达呈动态变化,提示可能参与了子宫内膜对滋养层细胞侵袭的调控。     

S100A2在围着床期小鼠子宫内膜表达的动态观察

目的：了解S100A2 mRNA及蛋白在围着床期小鼠子宫的表达情况,为阐明S100A2在胚胎着床过程中的作用积累实验依据。方法：应用荧光定量PCR（FQ-PCR）和免疫组化技术分别检测S100A2 mRNA和蛋白的表达情况。结果：①S100A2 mRNA在妊娠第1～6天子宫中均有表达,且表达量逐渐降低;同时,在第5天,着床点的含量明显低于非着床点。②S100A2蛋白主要表达于小鼠子宫内膜基质细胞的胞浆中,其表达量在第1、2天很丰富,第3、4、5天很低。③子宫内膜的腔上皮和腺上皮细胞未见S100A2表达。结论：在胚胎着床过程中,S100A2在小鼠子宫中的表达呈动态变化,提示可能参与了子宫内膜对滋养层细胞侵袭的调控。     

子宫内膜离子通道对子宫内膜容受性的影响

子宫内膜容受性是自然妊娠和辅助生殖技术成功妊娠的关键因素之一.子宫内膜离子通道是调节子宫内膜接受性和胚胎植入的重要方法.子宫内膜接受性是指在一定的时间内,胚囊能够定位、黏附并穿透子宫内膜,从而引起子宫内膜间质的一系列变化,即胚胎植入的能力.离子通道的异常表达可导致子宫内膜接受损伤和(或)植入失败.进一步研究探讨子宫内膜...     

趋化因子受体-1在妊娠早期小鼠子宫内膜腔上皮的表达

目的:研究妊娠早期小鼠子宫内膜腔上皮趋化因子受体-1(CXCR-1)的表达。方法:用免疫组织化学染色法及图像分析技术,对CXCR-1在妊娠1 d、4 d、5 d、6 d小鼠子宫内膜腔上皮的表达进行定位和半定量分析。结果:CXCR-1主要定位表达于妊娠早期小鼠子宫内膜腔上皮细胞的游离面,其表达呈一定的规律性,妊娠4 d时表达最强,妊娠6 d时降至妊娠1 d水平。结论:CXCR1可能与小鼠胚泡着床时子宫内膜的接受性有关。     

血管内皮生长因子在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)在围植入期小鼠子宫内膜的表达分布状况和规律.方法 应用免疫组化SP法检测妊娠3～6 d昆明小鼠围植入期子宫内膜VEGF的表达情况,并以动情期未孕小鼠子宫做对照.结果 在小鼠子宫内膜中可检测到VEGF的表达,其表达具有时间特异性和细胞特异性.孕3 d,VEGF在子宫内膜的腔上皮和基质细胞中呈弱表达;孕4～5 d,VEGF在基质细胞和腔上皮上表达最强;孕6 d,VEGF表达较强,但主要表达于蜕膜细胞.结论 围植入期小鼠子宫内膜持续表达VEGF,且在植入前后表达最强,提示VEGF可能在小鼠胚胎的植入过程中发挥重要作用.     

降钙素受体在小鼠早期胚胎及围植入期子宫内膜的表达

目的：检测降钙素受体（calcitonin receptor,CTR）在不同发育阶段小鼠胚胎和植入期子宫内膜表达的变化。方法：取小鼠早期胚胎、未孕、真孕及假孕3～7d小鼠子宫．利用免疫组织化学染色结合图像分析法,检测CTR在不同发育阶段早胚及植入期子宫内膜中的表达。结果：①CTR在小鼠植入前胚胎表面呈阳性表达．随着妊娠进展,其表达逐渐加强;②真孕组孕3d,小鼠子宫内膜CTR呈弱阳性表达,孕4～5d表达达到高峰．此后腔上皮CTR表达水平下降;假孕组,小鼠子宫内膜CTR呈弱阳性表达;未孕组小鼠子宫内膜CTR呈阴性表达。结论：①CTR参与了早期胚胎发育分化的调节以及子宫内膜容受性的形成;②启动子宫内膜容受性形成的信号不仅来自母体及交配刺激,还来自胚胎。     

胰岛素样生长因子结合蛋白-4在围植入期小鼠子宫内膜的表达及意义

目的 检测胰岛素样生长因子结合蛋白-4(IGFBP-4)在围植入期小鼠子宫内膜的表达分布及其生物学作用.方法取未孕动情期、真孕及假孕3～6 d小鼠子宫做切片,采用免疫组化SP法检测IGFBP-4在小鼠子宫内膜的表达情况.结果 IGFBP-4在小鼠子宫内膜主要分布于腺上皮细胞、腔上皮细胞、基质细胞及蜕膜细胞.IGFBP-4在真孕组小鼠子宫内膜于孕3 d出现阳性表达;孕4～5 d中等强度表达;孕6 d表达最强,主要分布于整个蜕膜区细胞.未孕动情期小鼠子宫内膜IGFBP-4呈弱表达.假孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4只在孕5～6 d有微弱表达.真孕组小鼠子宫内膜IGFBP-4表达明显强于同期假孕组.结论 IGFBP-4在围植入期小鼠子宫内膜持续表达,提示IGFBP-4可能在小鼠胚泡植入过程发挥重要生物学作用.     

巨噬细胞移动抑制因子在围植入期小鼠子宫内膜中的表达

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在围植入期小鼠子宫内膜中的表达分布状况及其意义。方法应用免疫组化SP法检测妊娠1～8d小鼠子宫内膜MIF的表达情况,并以动情期非妊娠小鼠子宫做对照。结果在小鼠子宫内膜的所有组织均可检测到MIF的表达,主要表达于腺上皮、腔上皮及基质中的细胞团。MIF在妊娠1～3d表达较强,妊娠4～5d表达较弱,主要表达于子宫内膜的腔上皮和腺上皮;妊娠6～8d,MIF表达再次增强,但主要表达于基蜕膜和次级蜕膜区。结论妊娠1～8d小鼠子宫持续表达MIF,提示MIF可能参与小鼠胚泡植入及胚泡植入后的发育过程。     

成纤维细胞生长因子受体1在小鼠肾发育中的表达

目的:观察成纤维细胞生长因子受体1(Fibroblast growthfactor receptors 1,FGFR1)在小鼠肾发育中的时空性表达,探讨FGFR1与肾发育的关系.方法:应用免疫组织化学技术结合体视学方法和免疫印迹法,测定不同胚龄(E)11.5、13.5、15.5 d和17.5 d及生后日龄(P)1、7、14、21d和40d小鼠肾组织内FGFR1的表达及其含量变化.结果:免疫组织化学结果显示FGFR1在各期肾小体、远端小管及集合管内均有表达,但在各期远端小管和集合管表达较强,而在各期肾小体表达较弱.体视学测量和免疫印迹结果均显示随着胚日龄的增加,FGFR1在各期肾小体、远端小管及集合管的表达量逐渐增加.结论:FGFR1可能对肾各结构的发育以及成熟肾的形态维持起重要作用.     

子宫内膜异位症患者肝细胞生长因子及其受体c-Met的表达

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-Met在子宫内膜异位症发病机制中的作用。方法 采用mRNA原位杂交和免疫组织化学技术检测经腹腔镜手术及病理证实的54位子宫内膜异位症妇女(Ⅰ/Ⅱ期患者28例,Ⅲ/Ⅳ期患者26例)在位和异位内膜组织及24例正常对照组妇女在位内膜HGF、c-Met的分子和蛋白表达。结果 子宫内膜异位症患者在位内膜HGF、c-met基因和蛋白阳性表达与异位内膜一致,但阳性切片中,异位内膜阳性细胞数及表达强度高于在位内膜。增生期和分泌期的内膜细胞HGF/c-Met mRNA和蛋白的表达相近,无明显差异。对照组、Ⅰ/Ⅱ期患者在位、异位内膜与Ⅲ/Ⅳ患者在位、异位内膜比较,HGF、c-met基因和蛋白阳性表达频率依次上升,组间差异显著(P<0.01)。Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期患者在位和异位内膜与对照组比较,HGF、c-met基因和蛋白阳性表达频率有显著差异;Ⅰ/Ⅱ期患者与Ⅲ/Ⅳ期患者比较,HGF/c-Met阳性表达频率和表达强度均无显著差异。Ⅲ/Ⅳ期患者c-Met强阳性表达频率与对照组比较,有显著差异。结论 HGF、c-met基因和蛋白表达与子宫内膜异位症发病机制相关,在位内膜性质的改变可能是子宫内膜异位症发病机制的关键环节。     

小鼠孕早期Cyclin-E表达规律及意义

目的:探讨细胞周期素E(Cyclin-E)在早孕小鼠子宫内膜的的表达及其对小鼠胚胎着床数的影响.方法:应用RT-PCR及免疫组织化学的方法检测早孕小鼠子宫内膜细胞Cyclin-E基因和蛋白的表达规律;观察子宫角注射抗Cyclin-E抗体后对小鼠胚胎着床数的影响.结果:妊娠第1～7d小鼠子宫内膜组织均有Cyclin-E表达,自妊娠2d起表达增强,5d表达量达高峰.小鼠妊娠期Cyclin-E在子宫内膜腔上皮、腺上皮及内膜基质中均有表达.单侧子宫抗Cyclin-E抗体注射后双侧胚胎着床数差值较对照组(注射等体积生理盐水)明显增大.结论:在小鼠胚胎着床过程中,Cyclin-E可能参与调节子宫内膜的增殖分化,在子宫内膜蜕膜化及胚胎着床过程发挥作用.