雷帕霉素对哮喘小鼠气道重塑的影响

目的利用雷帕霉素探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在支气管哮喘小鼠气道重塑中的作用机制。方法30只♂清洁级BABL/c小鼠,随机数字表法分为3组,每组10只,分别为生理盐水对照组、卵蛋白(OVA)哮喘组、雷帕霉素治疗组。在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色,PAS染色及mTOR免疫组织化学染色。分别用酶联免疫吸附法(ELISA)和Western blot检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、IL-13含量以及右肺组织mTOR蛋白表达。应用小鼠肺功能仪检测气道阻力的变化。结果哮喘模型组小鼠与对照组相比较BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平增高;肺组织mTOR蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.01)。雷帕霉素治疗组与哮喘模型组相比较BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量及肺组织mTOR表达水平均降低,差异具有显著性(P<0.05)。结论雷帕霉素可抑制哮喘小鼠气道重塑的发生,其机制有可能是通过阻断mTOR信号通路而实现的。     

白细胞介素-1β在气道重塑中作用的实验研究

目的研究前炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)对气道上皮细胞(BEC)转化生长因子-β1(TGF-β1)的调控,以探讨其在气道重塑中的作用。方法选择原代分离新西兰种白兔的BEC作为研究对象,体外培养,将培养细胞随机分4组:对照组和IL-1β处理A、B、C组。A、B、C组分别加入终浓度为0·1、1、10mg/L的IL-1β作用24h,对照组加入等量无血清培养液,采用原位杂交和免疫细胞化学染色的方法观察各组TGF-β1mRNA和蛋白的表达。结果TGF-β1mRNA和蛋白表达IL-1β处理A组(0·162±0·023、0·156±0·003)、B组(0·318±0·013、0·614±0·020)、C组(0·644±0·016、0·917±0·050)均较对照组(0·098±0·020、0·138±0·009)显著增强,差异有统计学意义(P均<0·01),A、B、C组两两比较差异有统计学意义(P均<0·01),其中IL-1β处理C组TGF-β1mRNA和蛋白表达均最强,随IL-1β浓度的增加,TGF-β1mRNA和蛋白表达呈剂量依赖性增加。结论前炎症因子IL-1β可上调气道上皮细胞TGF-β1的表达,当过度调节后可导致气道重塑。     

布地奈德对哮喘气道重塑大鼠气道平滑肌细胞间质IL-13及IFN-γ表达的影响

目的探讨布地奈德对哮喘气道重塑大鼠原代培养的气道平滑肌细胞(ASMCs)上清液中白细胞介素13(IL-13)及干扰素γ(IFN-γ)含量的影响。方法 60只Wistar大鼠随机分为三组,每组20只。A组吸入卵清蛋白制作哮喘气道重塑模型,B组在A组基础上隔日1次吸入布地奈德气雾剂,C组吸入生理盐水作对照。8周后取材行苏木素-伊红(HE)染色,测量各组大鼠肺内支气管气道壁面积(Wat)/气道基膜周长(Pbm)及平滑肌层面积(Was)/Pbm;原代培养大鼠ASMCs,ELISA法检测各组ASMCs上清液中IL-13及IFN-γ含量。结果 A、B组Wat/Pbm及Was/Pbm均较C组增加,但B组较A组降低(P<0.05)。A组IL-13含量较C组增加,IFN-γ含量较C组降低(P<0.05);B组IL-13含量较A组降低,IFN-γ含量较A组增加(P<0.05)。结论布地奈德通过降低哮喘大鼠ASMCs间质中IL-13及增加IFN-γ的表达来减轻气道重塑。     

布地奈德对哮喘大鼠气道重塑和平滑肌肌动蛋白-α表达的影响

目的 :探讨哮喘大鼠气道平滑肌肌动蛋白 α(SMA α)表达与气道重塑的关系 ,评价布地奈德治疗对两者的影响。方法 :SD大鼠分为正常对照组 (A组 ,n =8)、哮喘模型组 (B组 ,n =8)和哮喘模型布地奈德驱动雾化吸入治疗组 (C组 ,n =8) ;采用二步法免疫组化技术和计算机图象分析系统对大鼠气道SMA α表达和气道重塑进行研究。结果 :①与A组比较 ,B组大鼠气道平滑肌 (ASM )厚度和上皮厚度均显著增加 (P <0 .0 0 1) ,而气道直径显著减小 (P <0 .0 0 1) ;②与B组比较 ,C组大鼠平滑肌厚度和上皮厚度均显著下降 (P <0 .0 0 1) ,而气道直径显著增大(P <0 .0 0 1) ;③与A组比较 ,B组大鼠气道SMA α表达水平显著升高 (P <0 .0 0 1) ,C组亦升高 (P <0 .0 5 ) ;与B组比较 ,C组大鼠气道SMA α表达水平显著下降 (P <0 .0 5 ) ;结论 :气道SMA α表达水平的上调可能是导致气道重塑反应发生的机制之一 ,布地奈德治疗可延缓该反应的发生。     

支气管哮喘的气道重塑

支气管哮喘是一种多细胞因子参与调节,以嗜酸性粒细胞浸润为主的多细胞参与的慢性气道炎症性疾病。气道重塑是重要的病理特征之一,这种重塑涉及到气道各层组织,包括气道壁增厚和基质沉积,胶原沉积,上皮下纤维化,平滑肌增生和肥大,肌成纤维细胞增殖及黏液腺,杯状细胞化生及增生,上皮下网状层增厚,微血管生成等。     

支气管哮喘患者气道中白细胞介素-17表达与气道重塑关系的研究

目的初步探讨白细胞介素(IL)-17在支气管哮喘患者气道重塑中的作用。方法选取2007年9月至2008年9月门诊行气管镜检查的非急性发作期支气管哮喘患者40例,按肺功能测定结果分为2组。采用免疫组织化学方法分别检测其支气管肺泡灌洗液中肺泡巨噬细胞及气道上皮细胞的IL-17及转化生长因子(TGF)-β1的表达。采用方差分析和SNK-q检验进行统计学分析。结果支气管肺泡灌洗液肺泡巨噬细胞和气道上皮细胞中IL-17表达试验组分别为(0.361±0.190)和(0.306±0.014),较对照组[分别为(0.206±0.020)和(0.196±0.031)]明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);而TGF-β1表达试验组分别为(0.280±0.018)和(0.274±0.004),较对照组[分别为(0.206±0.006)和(0.193±0.015)]明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 IL-17可能在支气管哮喘气道重塑的发生发展中发挥作用。     

白细胞介素-5和白细胞介素-12在哮喘发病中的作用

目的探讨IL-5、IL-12与哮喘的关系。方法大鼠48只,分为正常对照组和支气管哮喘组（模型组）。大鼠尾静脉取血分离血清,应用ELISA法,测量其血清IL-5、IL-12的水平。结果对照组的IL-5、IL-12的检测结果分别为（15.84±3.65）pg/ml,（79.32±6.48）pg/ml,模型组的分别为（39.15±13.13）pg/ml,（34.24±0.78）pg/ml。结论哮喘患者血清IL-5水平升高,IL-12水平下降。     

阿奇霉素对哮喘模型小鼠气道上皮细胞基质金属蛋白酶-9表达及气道重塑指标的影响研究

目的:观察阿奇霉素对哮喘模型小鼠气道上皮细胞基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达及气道重塑指标的影响,探讨其在哮喘预防中的作用。方法:取小鼠随机分为正常对照组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性对照组(地塞米松,0.18mg·mL-1)和阿奇霉素低、中、高剂量组(0.2、0.4、0.8mg·mL-1),每组10只,除正常对照组外其余各组腹腔注射卵蛋白致敏并雾化卵蛋白激发15d建立哮喘模型,每日雾化前1h腹腔注射相应药物0.5mL,末次激发24h后,观察各组小鼠肺组织病理学变化,检测气道上皮细胞MMP-9表达及气道重塑指标。结果:与正常对照组比较,模型组小鼠气道平滑肌明显增厚,上皮细胞脱落,炎性细胞浸润增多;而阿奇霉素各剂量组和阳性对照组上述病变较模型组均有减轻。与模型组比较,阳性对照组和阿奇霉素各剂量组小鼠MMP-9表达(P<0.05)及气道重塑指标(3种面积(支气管总管壁面积、气道内壁面积、平滑肌面积)与基底膜周径之比)均明显下降(P<0.01),但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论:阿奇霉素可能通过下调MMP-9表达延缓气道重塑的病理变化,从而减慢哮喘气道重塑的进程。     

白细胞介素-1β和黄芪对气道上皮细胞胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的通过检测经白细胞介素-1β(IL-1β)和黄芪共同干预后兔气道上皮细胞胰岛素样生长因子-1(IGF-1)蛋白的表达水平,探讨IL-1β对气道上皮细胞IGF-1表达的影响,以及黄芪在哮喘气道重塑中的防治作用。方法将体外培养的气道上皮细胞随机分为实验组和对照组,实验分3步进行:①实验组用1ng/ml的IL-1β作用于体外培养的兔气道上皮细胞,分别在不同时间点(4、8、16、24、48h)收集培养上清液及贴有细胞的盖玻片;②实验组随机分为IL-1β0.05、0.1、1、10ng/ml组,分别用不同浓度的IL-1β作用于体外培养的兔气道上皮细胞,在16h时收集培养上清液及细胞爬片。以上对照组加入等量培养液;③实验组随机分为黄芪50、200、500mg/ml组,分别用不同浓度的黄芪加入终浓度为10ng/ml的IL-1β干预的气道上皮细胞中,对照组只加入终浓度为10ng/ml的IL-1β,于16h后收集培养上清液及贴有细胞的盖玻片。用免疫细胞化学染色法和双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定IGF-1蛋白的表达。从而分析不同浓度,不同时间IL-1β和不同浓度黄芪对体外培养的气道上皮细胞分泌IGF-1的影响。结果①经IL-1β1ng/ml处理后气道上皮细胞及培养上清液IGF-1的表达水平分别为16h(0.577±0.036,0.141±0.017)、24h(0.537±0.041,0.114±0.032)、48h(0.527±0.067,0.107±0.027)均高于对照组(0.259±0.012,0.054±0.014;0.260±0.012,0.053±0.005;0.267±0.014,0.056±0.009),差异有统计学意义(P值均<0.05),而这三组之间比较差异无统计学意义,加入IL-1β1ng/ml后,气道上皮细胞IGF-1表达增加,至16h达高峰,之后基本呈平台趋势。②IL-1β0.1ng组(0.328±0.012,0.084±0.021)、1ng组(0.471±0.018,0.113±0.019)、10ng组(0.569±0.031,0.145±0.021)气道上皮细胞及培养上清液中IGF-1的表达水平均高于对照组(0.260±0.019,0.051±0.012)及0.05ng组(0.283±0.027,0.053±0.031),差异有统计学意义(P分别<0.05)。IL-1β10ng组气道上皮细胞及培养上清液中IGF-1的表达水平明显高于其它各组(P分别<0.05),而IL-1β0.05ng组与对照组差异无统计学意义。③与对照组(0.56±0.03,0.14±0.16)比较,黄芪50mg组(0.454±0.050,0.104±0.013)、黄芪200mg组(0.391±0.080,0.085±0.014)、黄芪500mg组(0.296±0.074,0.073±0.014)气道上皮细胞及其在培养上清液中的表达水平均降低,差异有统计学意义(P值均<0.05),黄芪500mg组与对照组及黄芪50mg组比较,差异有统计学意义(P均<0.05),而与黄芪200mg组比较差异无统计学意义。结论IL-1β可促进气道上皮细胞IGF-1的蛋白表达,黄芪对上述过程有抑制作用。     

不同途径糖皮质激素对哮喘发作大鼠白细胞介素的影响

<正>支气管哮喘是一种以嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞浸润为特征,同时有多种细胞因子、炎性介质参与的气道变应性炎症。随着细胞生物学与分子生化学的不断进展,许多与气道炎症有关的细胞因子受到重视,特别是TH2分泌     

舒利迭雾化吸入对哮喘小鼠气道炎症及气道重构的影响

目的 研究舒利迭雾化吸入对哮喘小鼠炎症及气道重构的影响.方法 将30只雄性小鼠随机分成卵白蛋自(OVA)致敏致哮喘组(A组)、舒利迭干预组(B组)、正常对照组(C组).用OVA进行致敏和激发,建立哮喘模型.收集小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)行白细胞和嗜酸粒细胞(EOS)计数,采用医学图像分析软件测定支气管各项指标;HE染色观察组织形态学变化.结果 正常对照组、哮喘组、舒利迭干预组的EOS分别是(0.54±0.16)、(6.82±0.5 7)、(3.19±0.66)×10<'5>/m1,A组气道壁炎性细胞计数、气道平滑肌面积、气道内壁面积均明显高于C组,两组比较差异有统计学意义(P<0.01),B组各项指标均明显低于A组,差异有统计学意义(P<0.01),B组与C组比较各项均有升高,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05).结论 舒利迭雾化吸入不仅可明显抑制哮喘小鼠的气道炎症反应,还可明显减轻气道重构的程度.     

川芎嗪对致敏大鼠气道炎症气道重塑的影响和作用机制

目的探讨川芎嗪通过调节GATA-3和白细胞介素(IL)-5,抑制致敏大鼠气道炎症和气道重塑的分子机制。方法32只Wistar大鼠随机分成健康组、哮喘组、川芎嗪组和地塞米松(DXM)组,每组8只。苏木素-伊红(HE)染色行肺组织病理学检查、嗜酸性粒细胞计数及气道平滑肌(ASM)厚度测定;免疫组织化学两步法测定肺组织GATA-3和IL-5的表达;行肺组织GATA-3、IL-5表达与气道炎症反应间的相关性分析。结果川芎嗪和地塞米松可有效减少哮喘肺组织嗜酸性粒细胞数量和减轻平滑肌厚度,与哮喘组比较,差异有统计学意义(P<0.05);两个干预组肺组织中GATA-3和IL-5的表达较哮喘组明显减少,差异有统计学意义(P<0.05);肺组织GATA-3和IL-5表达与肺组织中嗜酸性粒细胞计数及平滑肌厚度呈正相关。结论川芎嗪可降低哮喘大鼠肺组织GATA-3和IL-5的表达,有效抑制哮喘的气道炎症,改善气道壁重塑。     

吸入性糖皮质激素对哮喘气道重塑模型平滑肌的影响

目的探讨吸入性糖皮质激素对哮喘气道重塑模型平滑肌的影响。方法雄性豚鼠108只,随机分为哮喘发作组(A组)、治疗组(B组)和对照组(C组)。每组动物分别予以卵蛋白(OVA)、布地奈德或生理盐水处理,在每个时点末次激发后24 h处死,留取肺组织,测量气道平滑肌的厚度。结果在12周时各组气道平滑肌层厚度,A组(26.56±3.39)μm,B组(18.29±4.11)μm,C组(9.85±3.59)μm,两两比较均有显著性差异(P<0.05)。在首次激发后24 h各组气道平滑肌层厚度分别为(7.66±1.86)μm、(7.81±1.61)μm和(7.79±1.55)μm,两两比较均无显著性差异(P>0.05),直到激发8周后各组平滑肌层厚度才出现显著性差异(P<0.05)。结论吸入性糖皮质激素能抑制气道平滑肌层增厚,但这种作用是不完全的。     

Emodin ameliorates ovalbumin-induced airway remodeling in mice by suppressing airway smooth muscle cells proliferation

Increased number of airway smooth muscle cells (ASMCs) is a characteristic of airway remodeling in asthma. In this study we investigated whether emodin alleviated airway remodeling in a murine asthma model and reduced the proliferation of ASMCs in vitro. We provided in vivo evidence suggesting that intraperitoneal injection of emodin (20 mg/kg) 1 h prior to OVA challenge apparently alleviated the thickness of airway smooth muscle, the mass of alpha-smooth muscle actin (α-SMA), collagen deposition, epithelial damage, goblet cell hyperplasia, airway inflammation and airway hyperresponsiveness (AHR) in lung tissue. Meanwhile, we found that emodin suppressed the activation of the Akt pathway in lung tissue of allergic mouse models. Additionally, we found that emodin inhibited cellular proliferation and Akt activation in a dose-dependent manner in vitro. Furthermore, LY294002, an inhibitor for PI3K, abrogated serum-induced phosphorylation of Akt, and decreased the proliferation of ASMCs. These findings indicated that emodin alleviated ASMCs proliferation by inhibiting PI3K/Akt pathway in vivo and in vitro, which may provide a potential therapeutic option for airway smooth muscle remodeling in asthma.     

分泌型卷曲相关蛋白5、CXC趋化因子受体4、8-异构前列腺素水平与支气管哮喘病儿气道炎症、气道重塑的关系

目的 探究支气管哮喘病儿血清分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)、CXC趋化因子受体4(CXCR4)、8-异构前列腺素(8-iso PG)水平与气道炎症、气道重塑的关系及联合评估病情程度的价值。方法 选取2018年1月至2020年8月攀枝花市中心医院收治的支气管哮喘病儿113例作为研究对象,按照病情程度分为轻度组、中度组、重度组,比较三组一般资料、血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG水平、气道炎症指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性人基质裂解素2(sST2)、白细胞介素-17(IL-17)]、气道重塑指标[痰液转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、骨桥蛋白(OPN)],分析血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG与气道炎症、气道重塑指标及病情程度的关系,评价血清SFRP5、CXCR4、8-iso PG对病情程度的评估价值。结果ACT评分、FEV1占预估值、PEF占预估值、FEV1/FVC：重度组<中度组<轻度组(P<0.05);重度组血清CXCR4、8-iso PG水平分别为(10.69±3.56)μg/L、(37.58±...     

木犀草素对哮喘小鼠气道重塑的影响及机制探讨

目的观察中药木犀草素对哮喘小鼠气道重塑的抑制作用并探讨其可能机制。方法32只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、哮喘组、地塞米松组、木犀草素组,鸡卵蛋白致敏反复雾化吸入共8周,建立哮喘气道重塑模型,并分别使用地塞米松(2mg.kg-1)及木犀草素(1 mg.kg-1)进行干预。观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-5(IL-5)和γ干扰素(IFN-γ)水平的变化。对肺组织切片行苏木精-伊红(HE)染色,借助图像分析软件测量单位气道基底膜周径(Pbm,μm)、平滑肌面积(WAm,μm2)、管壁面积(WAt,μm2),计算出支气管管壁厚度(WAt/Pbm,μm2/μm)和平滑肌厚度(WAm/Pbm,μm2/μm)。结果经过反复抗原激发,哮喘组BALF中IL-5水平(50.7±2.9)μg.L-1明显高于正常对照组(16.1±1.2)μg.L-1、地塞米松组(26.8±1.5)μg.L-1和木犀草素组(25.9±2.6)μg.L-1(P均<0.05),IFN-γ水平(38.1±3.3)μg.L-1明显低于正常对照组(64.2±3.5)μg.L-1、地塞米松组(58.2±4.2)μg.L-1和木犀草素组(54.3±2.4)μg.L-1(P均<0.05),哮喘组支气管管壁厚度(WAt/Pbm)(17.1±1.6)μm2/μm和平滑肌厚度(WAm/Pbm)(6.0±0.5)μm2/μm明显高于正常对照组[(12.7±1.1)μm2/μm,(4.5±0.4)μm2/μm]、地塞米松组[(14.3±1.1)μm2/μm,(5.0±0.5)μm2/μm]和木犀草素组[(14.0±1.2)μm2/μm,(5.2±0.6)μm2/μm](P均<0.05),结果表明:木犀草素有显著的抗气道重塑作用。结论木犀草素可抑制气道壁的增厚和平滑肌增殖,减轻气道重塑,其作用的机制可能是通过减少IL-5的分泌,增加IFN-γ的分泌来实现。     

黄芪多糖对哮喘小鼠气道重构的干预作用

目的：探讨黄芪多糖（astragalus polysaccharide,APS）对哮喘小鼠气道重构的干预作用。方法：60只4～6周龄SPF（Specific PathogenFree）级BALB/c小鼠,随机均分为对照组、哮喘组、APS治疗组和地塞米松（dexamethasone,DXM）阳性对照组;用卵蛋白（ovalbumin,OVA）致敏/激发哮喘;APS治疗组和DXM阳性对照组分别用APS和DXM肌肉注射治疗。采用二步法免疫组化技术对小鼠肺组织α平滑肌肌动蛋白（smooth muscle actin-α,α-SMA）表达进行检测,采用计算机图像分析系统对气道重塑进行分析。结果：与对照组对比,哮喘组小鼠肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fliud,BALF）中白细胞计数显著增加（P〈0.01）,α-SMA强阳性表达,气道壁厚度（d/Pi）、气道壁面积（WA/Pi）、气道平滑肌面积（Wam/Pi）和平滑肌细胞计数（N/Pi）均明显增加（P〈0.05或P〈0.01）;与哮喘组对比,APS治疗组和DXM阳性对照组BALF中细胞计数显著减少（P〈0.001）,α-SMA阳性表达,d/Pi、WA/Pi、Wam/Pi和N/Pi均显著减小（P〈0.05或P〈0.01）。结论：APS可抑制哮喘小鼠的气道重塑,这种抑制作用可能是通过调节α-SMA的表达来实现的。     

抗氧化剂茶多酚对哮喘大鼠气道炎症、气道重塑的干预研究

摘要 目的: 研究茶多酚（TP）对支气管哮喘大鼠早期和晚期气道氧化应激水平及气道炎症、气道重塑的影响。 方法: 以卵蛋白为致敏原,通过反复激发,制备大鼠慢性哮喘模型。将48只大鼠随机分为6组：对照组、哮喘组、早期布地奈德（BUD）组、晚期BUD组、早期TP组、晚期TP组。早BUD组、早TP组在造模前2周药物干预,晚BUD组、晚TP组在造模5周后药物干预。造模12周时观察指标①肺组织病理：测定支气管壁的平滑肌面积、胶原沉积面积,以及肺组织转化生长因子-?1（TGF-?1）的表达。②肺组织TGF-β1含量、丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）活力。 结果: ①早TP组、晚TP组、早BUD组干预后各项气道重塑指标较哮喘组均有改善（P＜0.01或P＜0.05),早TP组改善最明显(P均＜0.01)。晚BUD组较哮喘组无明显改善(P＞0.05)。②哮喘组肺组织中MDA含量明显上升,SOD活性显著下降,与对照组有显著性差异(P＜0.01);各药物干预后SOD活性均上升,MDA含量均下降,以早TP组最明显(P＜0.01)。③相关性分析表明,SOD活性与MDA含量呈负相关,支气管壁的胶原沉积面积与MDA含量呈正相关。 结论: 茶多酚可能通过清除氧自由基,减少气道炎症及氧化应激,从而改善或延缓气道重塑的发生。