低氧环境对人上皮性卵巢癌细胞株上皮间质转化及侵袭能力的影响及机制探讨

目的:探讨低氧环境对人卵巢癌细胞上皮间质转化(EMT)和侵袭能力的影响及可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞株SKOV-3、3AO,将每株细胞分为对照组、Co Cl2(模拟低氧环境)组、VPL(钙离子拮抗剂)组和VPL+Co Cl2组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测Co Cl2对SKOV-3、3AO细胞生长情况的影响;倒置相差显微镜下观察低氧后细胞形态的改变;采用Western blot法检测SKOV-3、3AO细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转录因子Twist、上皮型钙黏蛋白(E-cad)及神经型钙黏蛋白(N-cad)表达的变化;体外侵袭实验穿膜小室(Transwell小室)检测细胞的侵袭能力。结果:Co Cl2作用后,两种细胞的存活率均较对照组明显降低(P0.05)。低氧环境下,部分细胞伸出伪足,呈多角形,细胞排列松散、紊乱。Co Cl2能体外模拟细胞低氧环境,诱导HIF-1α蛋白高表达。SKOV-3、3AO细胞中,Co C12组中HIF-1α、Twist、N-cad蛋白表达明显高于对照组、Co C12+VPL组(P0.01,P0.05);E-cad蛋白表达明显低于对照组、Co C12+VPL组(P0.01,P0.05);VPL组与对照组相比,各蛋白表达的变化无明显差异(P0.05)。Co C12组两种细胞的穿膜数均显著多于对照组、Co C12+VPL组(P0.01,P0.05)。结论:钙信号途径参与了低氧环境下HIF-1α调节卵巢癌SKOV-3、3AO细胞中Twist的表达,从而诱导这两种细胞EMT的发生并增强其侵袭能力。     

靶向阻断CXCR4对卵巢上皮性癌上皮间质转化影响的研究

目的:探讨靶向阻断趋化因子受体4(CXCR4)对卵巢上皮性癌上皮间质转化(EMT)形成及肿瘤侵袭转移的影响。方法:CXCR4拮抗剂AMD3100作用后,采用MTT法、细胞克隆形成能力实验及Transwell侵袭实验分别检测卵巢癌细胞的增殖能力、细胞克隆形成能力及侵袭能力;采用Western blot法检测卵巢癌OVCAR3细胞中CXCR4以及EMT相关蛋白的表达。结果:AMD3100作用后,卵巢癌细胞OVCAR3的增殖能力、细胞克隆形成能力及侵袭能力明显受到抑制,且卵巢癌细胞中随着CXCR4表达的下降,EMT相关蛋白E-cadherin表达升高,而Vimentin、Snail表达则明显下降,且呈浓度依赖性,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论:CXCR4可能调节EMT相关蛋白的表达,从而抑制卵巢癌的增殖、侵袭及转移能力。CXCR4有望成为治疗卵巢上皮性癌的新靶点。     

ZEB家族在上皮性卵巢癌上皮-间质转化中的作用

上皮性卵巢癌是威胁女性生命最严重的恶性肿瘤之一,极易发生侵袭转移。上皮-间质转化是卵巢癌细胞侵袭、转移过程中的重要现象,涉及多个信号通路和复杂的分子机制,其中E盒结合锌指蛋白（ZEB）家族是诱导上皮-间质转化过程的重要转录因子。ZEB家族能在转录水平直接或间接地抑制上皮性-钙黏蛋白等黏附蛋白和一系列极性蛋白的表达,促进上皮细胞向间质细胞的转化。研究ZEB家族在上皮性卵巢癌上皮-间质转化（EMT）过程中的作用将为阻断上皮性卵巢癌侵袭转移提供新的治疗靶点。     

卵巢癌细胞放疗抗性与上皮–间质转化的关系

目的 探究卵巢癌细胞放疗抗性与上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的关系。方法 构建A2780卵巢癌细胞放疗抵抗模型A2780R。采用平板克隆形成实验、CCK8实验检测细胞的放疗抵抗性,采用流式细胞术检测细胞凋亡,采用细胞划痕和Transwell侵袭迁移实验检测细胞迁移侵袭能力,采用Western blot和q RT-PCR实验检测细胞EMT相关蛋白和m RNA的表达。结果 与A2780细胞比,A2780R细胞的克隆体积大、数量多,细胞伸出伪足,与EMT的典型细胞形态类似。与A2780细胞比,A2780R细胞2 Gy细胞存活分数（survival fraction, SF2）、平均致死剂（mean lethal dose, D0）、准阈量（quasithreshold dose, Dq）、N增加（P <0.05）,D0放射增敏比（sensitization enhancement ratio of D0, SERD0）、准阈量放射增敏比（sensitization enhancement ratio of Dq, SERD...     

卵泡刺激素对上皮性卵巢癌细胞株的增殖及E-钙粘素表达的影响

目的 :研究在上皮性卵巢癌细胞株中卵泡刺激素 (FSH)受体的不同表达并通过不同浓度的FSH作用 ,观察FSH刺激后各卵巢癌细胞株的增殖与上皮钙粘素 (E -cadherin)在各细胞株中的表达情况。方法 :应用逆转录聚合酶链反应(RT -PCR)及免疫细胞化学方法研究体外培养上皮性卵巢癌细胞株HO - 8910、HO - 8910PM及SKOV3中FSH受体表达 ,免疫组化半定量研究各细胞株中E -cadherin表达及其在FSH作用后的表达情况 ,噻唑蓝染色法了解FSH作用后各细胞株的细胞增殖程度。结果 :在卵巢癌细胞株HO - 8910及HO - 8910PM中存在着FSH受体 ,SKOV3细胞株中的FSH受体表达阴性。用不同浓度FSH培养 4 8小时后 ,HO - 8910及HO - 8910PM的细胞增殖指数高于SKOV3。当FSH浓度为 4 0U/L时细胞增殖指数最高 (P <0 .0 5 )。E -cadherin在 3株细胞中的表达随试验中细胞株转移程度的不同而具有差异 ,FSH培养后 ,FSH受体阳性细胞株HO - 8910及HO - 8910PM的E -cadherin表达均减弱。结论 :FSH是FSH受体阳性卵巢癌细胞增长的促进因素并可引起受体阳性肿瘤细胞E -cadherin表达的下调 ,从而增强卵巢癌细胞的转移能力。     

微小RNA-7调控EGFR抑制上皮性卵巢癌细胞上皮间质转化的研究

目的:探讨微小RNA-7(miR-7)调控人上皮性卵巢癌(EOC)细胞上皮间质转化,抑制肿瘤侵袭转移的作用及机制。方法:选取EOC细胞株HO-8910pm、ES-2,用li-pofectmin 2000体外瞬时转染miR-7质粒,分别通过实时PCR和Western blot检测转染前后细胞株miR-7及EGFR蛋白表达情况;Western blot法检测转染前后细胞株上皮标记β-catenin、间质标记Vimentin及EGFR下游信号通路AKT、ERK蛋白磷酸化水平;实时PCR检测转染前后EMT相关转录因子Snail、Slug、ZEB1、ZEB2的表达。Transwell肿瘤细胞侵袭实验检测转染前后细胞体外侵袭能力。结果:转染miR-7质粒后,HO-8910pm细胞miR-7的表达水平提高了(8.015±0.181)倍,ES-2细胞miR-7表达提高了(28.03±1.253)倍;EGFR蛋白表达均显著下降;转染后细胞的侵袭能力显著下降,HO-8910pm与ES-2的侵袭抑制率分别为62.33%、71.32%;转染后两种细胞的β-catenin蛋白表达均升高,而Vimentin蛋白表达降低;转录因子Snail、Slug的表达较未转染前显著降低(P<0.05),转染前后ZEB1、ZEB2无显著差异;转染后细胞p-AKT,p-ERK1/2表达均下降。结论:miR-7可通过调控EGFR的表达抑制其下游AKT和ERK1/2信号通路的活化以及逆转EMT,从而抑制EOC细胞的侵袭转移能力。     

上皮间质转化在卵巢癌中的研究进展

上皮间质转化(EMT)与卵巢癌的侵袭、转移等行为密切相关,阻断EMT的发生发展对卵巢癌侵袭转移前的早期诊断、早期治疗有着非常重要的意义。因此,深入研究EMT的机制有助于我们更深刻的认识卵巢癌的侵袭和转移,寻找卵巢癌治疗的新途径及新靶向。     

卵泡刺激素介导卵巢上皮性癌细胞增殖的初步研究

目的 探讨卵泡刺激素(FSH)促进卵巢上皮性癌细胞增殖的作用途径,从分子水平上了解卵巢癌的发病机理。方法 卵巢上皮癌细胞系OVCAR3转染FSH受体表达质粒,获得FSH刺激敏感的细胞系OVCAR3-FSHR。以FSH刺激细胞,或与蛋白激酶c(PKC)的激活剂十四烷酰佛波醇乙酯(TPA)和抑制剂他莫西芬(TAM)共同刺激细胞,以四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖情况,逆转录-聚合酶链反应技术检测细胞PKC各亚型的mRNA表达;以蛋白印迹法观察PKCα及磷酸化PKCα的表达水平。结果 FSH可刺激OVCAR3-FSHR细胞增殖1．9倍。FSH刺激后,PKCα的表达水平和活性分别增高1．5倍和1．9倍。TPA、TAM均能抑制FSH刺激OVCAR3-FSHR细胞增殖的60％及47％,TPA或TAM与FSH共同刺激PKCα表达较FSH单纯刺激者明显降低。结论 FSH通过PKC的途径,可刺激卵巢上皮癌细胞增殖,在卵巢上皮癌的发展中起一定的作用。     

CUL4A促进人卵巢癌细胞侵袭转移及其机制探讨

目的:检测Cullin 4A(CUL4A)表达对卵巢癌细胞迁移及侵袭能力的影响,并初步探讨其相关分子机制。方法:Western blot法检测人卵巢癌细胞株中CUL4A表达,设计合成靶向CUL4A的特异性shRNA,构建稳定低表达CUL4A的卵巢癌细胞株。Western blot和荧光定量PCR验证干扰效率;划痕实验及Transwell法检测下调CUL4A后细胞的迁移及侵袭能力;Western blot和荧光定量PCR检测上皮间质转化(EMT)相关指标及上游信号分子Snail、ZEB1变化。结果:SKOV-3、OV2008、ES-2、OVCAR-3卵巢癌细胞中CUL4A表达均高于正常卵巢上皮细胞HOSE,且以SKOV-3表达水平最高。shRNA转染SKOV-3细胞后,CUL4A的mRNA及蛋白水平显著下降,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制;E-cadherin表达增加,N-cadherin、Vimentin、Snail和ZEB1表达均显著降低。结论:CUL4A可促进卵巢癌细胞的迁移和侵袭,其分子机制可能与调节EMT的上游信号分子Snail及ZEB1有关,提示CUL4A在卵巢癌的发生发展中起着重要的作用。     

醋酸甲羟孕酮通过诱导上皮-间质转化促进卵巢癌细胞转移机制研究

目的 探讨醋酸甲羟孕酮（MPA）对人卵巢上皮性癌（EOC）细胞转移能力的影响及其作用机制。方法 2011年8月至2012年6月在河北医科大学病理学实验室进行实验。培养EOC细胞SKOV3,取对数生长期细胞用于实验,分别设立对照组和MPA组（10-5mol/L MPA作用于SKOV3细胞48 h或72 h）。采用划痕实验观察细胞迁移能力,倒置显微镜观察细胞形态,实时荧光定量PCR(Real Time-PCR)检测Snail、Slug mRNA表达水平,蛋白印迹法(Western blot)检测E-cadherin、N-cadherin和vimentin蛋白表达水平。 结果 划痕24h、48h时,MPA组剩余划痕面积为［（0.34 ±0.06）%、（0.14±0.02）%］均显著小于对照组［（0.51±0.05）%、（0.46±0.06）%］,差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,10-5mol/L MPA作用于SKOV3细胞72h后,细胞由上皮形态转变为间质形态,即细胞由立方形或椭圆形转变为纺锤形或多角形,且细胞间连接松散。10-5mol/L MPA作用于SKOV3细胞48h,可显著上调 Snail、Slug mRNA表达水平,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;10-5mol/L MPA作用于SKOV3细胞72 h,E-cadherin蛋白表达水平较对照组明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。而N-cadherin和vimentin蛋白表达水平较对照组明显增加,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 MPA可通过诱导EOC细胞发生上皮-间质转化,进而增强EOC细胞的转移能力。     

Prognostic significance of human epididymis protein 4 in epithelial ovarian cancer

Objective

The purpose of this study was to evaluate the prognostic significance of serum human epididymis protein 4 (HE4) level in patients with epithelial ovarian cancer.

Study design

A total of 78 women diagnosed with a pelvic mass and operated on in our institute comprised our cohort. Forty-five of these were diagnosed with epithelial ovarian cancer and treated with debulking surgery, followed by taxane and platinum-based chemotherapy as clinically indicated. Preoperatively obtained serum samples were analyzed for levels of HE4 and CA125.

Results

The elevated serum HE4 level was related to advanced stage and serous type of cancer. The median duration of the follow-up was 35.1 months. In advanced stage, the median progression-free survival (PFS) of patients with elevated serum HE4 levels was 20.1 months (95% CI, 15.7–24.6 months), whereas that of patients with normal serum HE4 level was 24.2 months (95% CI, 13.9–34.6 months) (p = 0.029). Independent predictors for PFS in patients with advanced stage EOC included serum HE4 level (hazard ratio 2.24; 95% CI, 1.14 to 6.84; p = 0.048).

Conclusions

Our results demonstrated that an elevated serum HE4 level was related to the advanced stage of epithelial ovarian cancer. An elevated serum level of HE4 is a poor prognostic factor for PFS in patients with epithelial ovarian cancer who were treated with debulking surgery and adjuvant taxane and platinum-based chemotherapy. The serum HE4 level is a promising indicator for the progression of cancer as well as a biomarker for the detection of epithelial ovarian cancer.     

宫颈癌细胞分泌外泌体介导上皮-间质转化提高癌前细胞侵袭能力的体外研究

目的:研究宫颈癌细胞Siha分泌的外泌体(Exosomes)能否介导上皮-间质转化(EMT),从而改变癌前细胞Ect1的体外侵袭能力。方法:差速超速离心法分离SihaExo,透射电镜观察形态,Western blot检测标志蛋白表达,共聚焦显微镜观察PKH67染色外泌体的生物学活性。Siha-Exo和PBS分别与Ect1共培养48h后Western blot检测上皮和间质转化标志蛋白的表达,Transwell侵袭实验检测共培养后Ect1体外侵袭能力。结果:Siha-Exo为直径30~100nm的盘状囊泡,特异性表达标志性蛋白CD63和CD81,能够被受体细胞Ect1内吞,具备生物学活性。Western blot结果显示,与PBS组相比,Siha-Exo组下调Ect1细胞中上皮标志蛋白E-Cadherin和β-Catenin的表达,上调间质标志蛋白NCadherin和Vimentin的表达。Transwell侵袭实验显示,与PBS组相比,Siha-Exo组穿透聚碳酯膜的Ect1细胞数明显增多(P=0.01)。结论:Siha-Exo能够介导Ect1发生EMT变化,提高其体外侵袭能力。     

miR-101对上皮性卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用研究

目的:探讨miRNA-101(miR-101)对上皮性卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用,以及在失巢凋亡过程中可能的作用机制。方法:构建失巢凋亡模型模拟卵巢癌细胞转移的生长状态;用脂质体Lipofectamine 2000将miR-101 mimics及miR-NC转染SKOV3细胞,随机分为阴性对照组、miR-空白质粒组(miR-NC组)和miR-101质粒组。RTPCR法检测细胞内miR-101 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell侵袭实验及划痕实验检测细胞的侵袭及迁移能力;RT-PCR及Western blot法检测c-fos基因mRNA和蛋白表达水平。结果:失巢凋亡模型构建成功,模型中SKOV3细胞呈悬浮、团簇状生长;将miR-101 mimics转染SKOV3细胞后,SKOV3细胞中miR-101表达水平增加,同时癌细胞失巢凋亡增加;透膜细胞数量及细胞迁移距离减少;c-fos mRNA和蛋白表达水平均降低。结论:miR-101过表达可增加SKOV3细胞失巢凋亡,降低细胞侵袭及迁移能力,下调c-fos基因表达可能是其作用分子机制。     

sTWEAK在上皮性卵巢癌患者血清中的表达及其意义

目的:检测卵巢上皮性癌(EOC)患者外周血可溶性肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(sTWEAK)的表达水平,并分析其临床意义。方法:选取2010年1月至2014年2月在上海交通大学附属仁济医院住院行手术的上皮性卵巢癌(EOC)患者和良性上皮性卵巢肿瘤患者共43例,采用ELISA法检测外周血血清中sTWEAK的表达水平。结果:(1)与良性上皮性卵巢肿瘤组相比,EOC组的sTWEAK的表达水平明显升高(P0.05)。两组患者中sTWEAK的表达与CA125呈正相关(r=0.42,P0.05),其中CA125500U/ml者的sTWEAK表达水平明显低于CA125500U/ml者(P0.05)。(2)EOC患者血清中,sTWEAK的表达水平与其临床分期、病理分级、组织类型以及腹水有无肿瘤细胞均无相关性(P0.05)。(3)EOC组中,CA125500U/ml者行满意肿瘤细胞减灭术的比例显著高于CA125500U/ml者(P0.05)。结论:sTWEAK虽不能反映EOC患者的肿瘤进展,但其与EOC的发生密切相关,sTWEAK可能成为判断卵巢肿瘤良恶性的新型血清学标记,在EOC诊断及预后预测中具有一定的应用前景。     

八聚体结合转录因子4与蛋白激酶B1基因在卵巢浆液性肿瘤组织表达及耐药相关性研究

目的 研究八聚体结合转录因子4（OCT4）和蛋白激酶B1（AKT1）基因在卵巢浆液性肿瘤组织中的表达,探讨两者之间相关性及在化疗耐药中发挥的作用。 方法 全部病例来自中国医科大学附属盛京医院2004年1月至2010年10月。采用免疫组织化学SP法对67例卵巢浆液性腺癌（化疗耐药30例,化疗敏感37例）、10例卵巢交界性浆液性囊腺瘤、10例卵巢良性浆液性囊腺瘤和10例正常卵巢组织中OCT4和AKT1的表达情况进行检测。 结果 OCT4的阳性表达率在卵巢浆液性腺癌、卵巢交界性浆液性囊腺瘤、卵巢良性浆液性囊腺瘤和正常卵巢组织中依次降低,差异具有统计学意义（P=0.002）;在耐药组和敏感组的阳性表达率分别为83.33%和45.95%,差异有统计学意义（P=0.002）。AKT1蛋白在正常组、良性组、交界性组和恶性组的阳性表达率分别为0、40.00%、70.00%、62.69%,差异具有统计学意义（P=0.001）;在耐药组和敏感组的阳性表达率分别为76.67%和51.35%, 两组比较,差异有统计学意义（P=0.033）。OCT4蛋白与卵巢浆液性癌临床病理因素无关,AKT1蛋白与卵巢浆液性癌的临床分期呈正相关（P<0.05）。OCT4与AKT1蛋白在耐药组中呈正相关（r=0.388,P=0.034）;在敏感组无明显相关性（r=0.246,P=0.142）。     

The non-canonical Wnt ligand,Wnt5a,is upregulated and associated with epithelial to mesenchymal transition in epithelial ovarian cancer

Objective

Aberrant Wnt signalling has previously been associated with gynaecological cancers, and the aim of this study was to investigate the expression of Wnt5a in epithelial ovarian cancer, and clarify its role in activating or inhibiting β-catenin dependent and independent Wnt signalling pathways.

Method

Wnt5a expression was investigated in a large cohort of epithelial ovarian cancer patient samples using immunohistochemistry and correlated with clinicopathological variables. Wnt5a function was investigated in vitro in ovarian cell lines.

Results

Wnt5a expression was found to be upregulated in all major subtypes (serous, endometrioid, clear cell and mucinous) of epithelial ovarian cancer compared to borderline tumours and benign controls. Treatment of ovarian surface epithelial cells with recombinant Wnt5a decreased cell adhesion and was associated with increased epithelial to mesenchymal transition (EMT). In addition, downstream targets of β-catenin dependent Wnt signalling were inhibited, and β-catenin independent targets increased following Wnt5a upregulation. Knockdown of Wnt5a in ovarian cancer cells was associated with a mesenchymal to epithelial transition (MET), but had no significant effect on cell migration or proliferation.

Conclusion

This study adds to the increasing evidence that Wnt signalling may play an important role in ovarian cancer development. Utilising an unparalleled large cohort of 623 patients, Wnt5a protein expression was shown to be significantly higher in ovarian cancer patients when compared to benign and borderline ovarian tumours and healthy control patients. In addition, we have utilised in vitro models to show for the first time in ovarian cancer that Wnt5a driven non-canonical pathways can alter epithelial to mesenchymal transition (EMT).     

Intake of selective beta blockers has no impact on survival in patients with epithelial ovarian cancer

Background and objective

Some authors have claimed a significant impact of β-blocking agents on outcome in epithelial ovarian cancer (EOC). This study investigated the impact of concurrent medication with selective beta blockers (SBB) in patients undergoing primary treatment for EOC.

血清miR-222、HE4及CA125水平联合ROMA指数对上皮性卵巢癌的诊断价值

目的:探讨血清miR-222、血清人附睾蛋白4(HE4)及糖类抗原125(CA125)水平联合ROMA指数对上皮性卵巢癌(EOC)的诊断价值.方法:选取2016年1月至2019年12月海南西部中心医院收治的120例EOC患者、100例上皮性卵巢良性肿瘤患者和50例正常健康女性作为研究对象.实时定量PCR法检测miR-2...