Mda-7/IL-24和C-myb在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的：研究弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中Mda-7/IL-24和C-myb的表达水平及其临床意义。方法：收集72例DLBCL患者的瘤组织及36例正常淋巴结组织;通过半定量逆转录PCR及免疫组化技术分别从mRNA及蛋白水平检测各组织中Mda-7/IL-24与C-myb的表达水平,并对Mda-7/IL-24与C-myb进行相关性分析;收集患者临床资料,分析瘤组织Mda-7/IL-24与C-myb蛋白表达水平与患者年龄、性别、临床分期、是否骨髓浸润、Ecog评分及国际预后指数（IPI）之间的关系;分析瘤组织Mda-7/IL-24与C-myb蛋白表达水平与患者无进展生存期之间的关系。结果：与正常淋巴结组织相比,DLBCL组织中Mda-7/IL-24 mRNA的表达水平明显降低,而C-myb mRNA的表达水平则明显增高（P < 0.01）;72例DLBCL患者瘤组织中Mda-7/IL-24与C-myb mRNA表达水平呈明显负相关（r=-0.43,P < 0.01）;瘤组织低表达Mda-7/IL-24、高表达C-myb的患者其临床分期晚、易骨髓转移、瘤细胞增殖活性强、IPI积分较高,同时患者无进展生存期较短（P均 < 0.05）。结论：DLBCL组织中Mda-7/IL-24与C-myb的表达呈明显负相关,Mda-7/IL-24低表达或C-myb高表达是DLBCL患者临床预后较差的指标。     

BRD7基因转染对鼻咽癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨鼻咽癌负相关基因BRD7对鼻咽癌细胞系HNE1生长的影响。方法：构建BRD7基因真核表达载体pcDNA3.1( )/BRD7重组体,采用脂质体介导转染技术,将BRD7真核表达重组粒和空载体质粒分别导入鼻咽癌细胞系HNE1,Southern杂交和RT－PCR分别检测外源性DNA的整合和BRD7基因的表达,并借助细胞生长曲线、软琼脂集落形成试验、流式细胞计数和裸鼠接种方法对转染细胞的生物学行为进行了检测。结果：转染BRD7基因的HNE1生长倍增时间为53h,较HNE1（23．9h)和空载体转染HNE1（24．1h）明显延长,流式细胞仪表明,BRD7表达升高延缓细胞由G0－G1期进入S期,BRD7转染HNE1在软琼脂中集落形成率较对照组显著下降（P＜0．01）,裸鼠接种试验显示BRD7基因转染细胞HNE1生长速度受到抑制。结论：BRD7基因重表达有助于HNE1的恶性表型的逆转;BRD7是一个鼻咽癌相关的抑瘤基因良好的候选者。     

HLCDG1基因转染对肺癌细胞生长的影响

背景与目的:HLCDGI基因是我们实验室最近克隆的新基因,它位于5q33,介于D5S436～D5S470之间,在肺癌组织中明显表达下调或缺失。本研究旨在观察HLCDGI基因是否具有抑制肺癌细胞生长的能力。方法:构建HLCDGI基因的重组质粒pcDNA3.1(+)/HLCDGI,通过脂质体转染,将HLCDGI基因cDNA导入肺癌细胞系A549中,经G418筛选,获得稳定表达的细胞克隆。RT-PCR检测HLCDGI基因表达,并采用细胞生长抑制实验、软琼脂集落形成实验及裸鼠致瘤性实验,分析HLCDGI基因转染细胞恶性表型。结果:RT-PCR结果表明转染HLCDGI 基因的细胞HLCDGI mRNA明显表达。转染HLCDGI基因组、转染空载体组和未转染组,3组细胞生长倍增时间分别为70.0 h、43.3 h和39.5 h,转染HLCDGI基因组与两对照组之间的差异有显著性(P<0.05)。计算软琼脂中细胞克隆形成率,结果分别为8.5％、29.0％和35.0％,转染HLCDGI基因的细胞克隆形成率明显降低。将转染HLCDGI基因的细胞、转染空载体的细胞和未转染的细胞分别注射入无胸腺的裸鼠体内,43天后处死动物,剥离出肿瘤组织并称重,各组瘤块平均重量分别为0.120g、0.612g和0.924g,转染HLCDGI基因的细胞成瘤能力与两对照组细胞比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:HLCDGI在肺癌A549细胞中表达,具有抑制细胞增殖和抑制裸鼠移植瘤形     

抑瘤基因mda-7/IL-24 研究进展

 黑色素瘤分化相关基因-7(Melanoma differentiation-associated gene-7,mda-7)是一种肿瘤抑制基因,其定位于染色体的1q32位点,位于一群分泌IL-10,IL-19和IL-20细胞因子的基因群中,基于氨基酸的同源性预测蛋白质的结构、染色体的定位以及细胞因子样特性,mda-7被命名为IL-24 [ 1 ].mda-7 cDNA 编码一个206个氨基酸的蛋白质,分子质量约为23.8 kDa.通过Prosite 数据库分析发现mda-7/IL-24在第85,99和126位点存在N-糖基化,6个磷酸化位点(即位于101, 111和161位点的酪蛋白激酶Ⅱ; 88, 133 和 161位点的蛋白激酶C) 以及开始于101 位点的IL-10信号图形,     

MDA 7/IL-24抗肿瘤作用研究进展MDA 7/IL-24抗肿瘤作用研究进展

黑色素瘤分化相关基因(melonoma differentiation associated gene 7,MDA 7)是通过消减杂交法从人黑色素瘤细胞中分离出来的,因其分子生物学特性与IL-10相似,故将其归入IL-10家族,并命名为IL-24。MDA 7/IL-24具有广泛的抗肿瘤生物学作用,它能够通过多种途径对肿瘤细胞产生生长抑制作用,其作用机理与凋亡诱导、细胞自噬、抑制肿瘤新生血管形成和侵袭转移、免疫调节作用等有关。作为一种具有多种途径抗肿瘤作用的细胞因子,MDA 7/IL-24在临床Ⅰ期试验中已显示出良好的治疗效果,被誉为治疗癌症的“魔法子弹”。本文就MDA 7/IL-24在肿瘤治疗中的作用及其机制研究作一综述,以期为MDA 7/IL-24在肿瘤基因治疗中研究提供参考和借鉴。     

ICE基因转染联合化疗药物杀伤肝癌细胞的研究

目的：研究人ICE基因转染联合化疗药物诱导体外杀伤肝癌细胞的作用。方法：应用电穿孔法将构建成功含有目的基因的逆转录病毒载体pLXSN-hICE导入包装细胞系PA317，筛选G418抗性克隆，并将其病毒上清转入肝癌细胞株HepG2，DNA提取、电泳观察；采用^3H-TDR掺入法观察、分析化疗药物卡铂对肝癌细胞株SMMC7721及转入相应目的基因后的SMMC7721-ICE，SMMC7721-反义hICE，SMMC7721-neo细胞株体外增殖的影响。结果：ICE基因转染可诱导HepG2形成具有凋亡特征的梯状DNA；在卡铂低浓度诱导下，与对照细胞相比SMMC7721-hICE细胞株体外增殖明显受抑。结论：人ICE基因转染可直接诱导肝癌细胞株HepG2凋亡，明显提高肝癌细胞SMMC7721对化疗药物卡铂杀伤的敏感性，ICE基因转染联合化疗药物诱导极大增强了对肝癌细胞的杀伤作用，可能是治疗肝癌一个有前途的方案。     

MDA-7/IL-24基因与化疗药物联合应用对食管癌细胞产生协同抑制作用

探讨人黑素瘤分化相关基因7（melanoma differentiation-associated gene-7,MDA-7）/白介素-24(IL-24)基因对食管癌细胞的抑制作用及其与化疗药物的协同抗瘤作用。方法：RT-PCR法检测人食管癌细胞株TE-11和YES-5中MDA-7/IL-24受体IL-20R1、IL-20R2和IL-22R1的表达水平。用携带MDA-7/IL-24基因的重组人复制缺陷腺病毒Ad-MDA-7感染TE-11和YES-5细胞, Ad-LacZ为对照腺病毒,人成纤维细胞株OUMS-24为对照细胞。MTT法检测感染细胞抑制率,Western blotting法检测感染前后细胞中的MDA-7水平。化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）、顺铂（CDDP）、丝裂霉素（MMC）和足叶乙甙（VP-16）分别与Ad-MDA-7联合作用于食管癌细胞株,MTT法检测单独或联合应用对食管癌细胞的抑制作用,流式细胞术检测Ad-MDA-7与化疗药单独或联合应用后食管癌细胞周期的变化,Western blotting检测Ad-MDA-7与化疗药联合作用后细胞凋亡和增殖的相关分子的变化。结果：TE-11和YES-5细胞均表达3种IL-24受体。Ad-MDA-7感染后,两种食管癌细胞中均有MDA-7蛋白表达,同时细胞均被剂量依赖性地抑制生长,Ad-MDA-7达3×104VP/细胞时TE-11细胞抑制率超过80%、YES-5细胞超过50%;同剂量Ad-LacZ对细胞无抑制作用,成纤维细胞OUMS-24被Ad-MDA-7感染后没有发生明显细胞抑制。Ad-MDA-7分别与5-FU、CDDP、MMC和VP-16联合应用后,与单独应用相比产生了更强的抗肿瘤协同效应。Ad-MDA-7与5-FU联合应用诱导细胞更多停滞在S和G2/M期,subG1期细胞比例明显增加。与单用5-FU相比,联合应用时Ad-MDA-7诱导了更多的细胞凋亡相关蛋白cleaved caspase-8、 -9、 -3的表达,增加了Akt的磷酸化,但降低了IκB-α的表达水平。结论：MDA-7/IL-24与化疗药联合应用于食管癌细胞,产生了更强的抗肿瘤协同效应,为临床化疗和基因治疗的联合应用提供新选择。     

IL-24基因对大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响

目的　探讨IL 2 4基因对C6大鼠胶质瘤细胞生长状况的影响。方法　应用逆转录病毒载体 ,将IL 2 4基因导入C6细胞 ,经G4 18筛选后获得表达IL 2 4分子的阳性细胞克隆C6 /IL 2 4 ;用RT PCR方法检测目的基因表达 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测细胞体外增殖状况 ,流式细胞技术检测细胞的增殖活性 ,并制作荷瘤动物模型 ,观察C6 /IL 2 4和C6细胞的体内致瘤性。结果　RT PCR检测表明 ,外源IL 2 4基因于mRNA水平在C6 /IL 2 4细胞已获得稳定表达。C6 /IL 2 4细胞系的体外增殖性较亲代C6细胞明显下降 ,流式细胞术检测其细胞增殖指数 (PI)为 (2 9.71± 0 .89) %。 9只接种C6 /IL 2 4细胞的实验组大鼠中 ,6只颅内成瘤 ,肿瘤体积为 (14 .0 8± 9.81)mm3 ,明显小于接种C6细胞大鼠的肿瘤体积 (P <0 .0 5 )。结论　外源性IL 2 4基因可部分抑制胶质瘤细胞异常增殖的肿瘤特性。     

MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的制备及其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用

目的：构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒,制备MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白,研究该融合蛋白在肿瘤细胞内的定位及其对肿瘤细胞致凋亡作用。方法：PCR扩增MDA-7/IL-24基因,插入含有HaloTag (HT7)标签的载体中,构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒;MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白经IPTG诱导表达后纯化。利用带有荧光标记的HT7配基观察MDA-7/IL-24-HT7在肿瘤细胞内的定位。MTT法及AnnexinV-PI染色法检测MDA-7/IL-24-HT7对肿瘤细胞生长和凋亡的影响。结果：成功构建了表达MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的原核及真核表达质粒,MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白主要存在于E.coli BL21的包涵体内。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白定位于肿瘤细胞的内质网上。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞的生长,1 mg/ml MDA-7/IL-24-HT7 融合蛋白作用大肠癌HCT116细胞、肝癌SMMC7721细胞96 h后,细胞凋亡率分别为（34.7±1.3）% 和（22.1±0.9）%,显著高于未处理的肿瘤细胞（P<0.01）。结论：带有HaloTag标签的MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。     

IL-18基因转染人膀胱癌T-24细胞及其表达的研究

目的 :建立表达IL-18基因的人膀胱癌细胞系IL-18/T-24,探讨外源性IL-18基因对T-24细胞生长及其生物学性状的影响。 方法 :将插入IL-18基因的质粒,应用逆转录病毒载体LXSN感染ψ2(ecotropic)和PA317(amphotropic)两种包装细胞,通过药物G418筛选获得表达IL-18蛋白的PA317阳性细胞克隆,用IL-18/PA317培养上清转染T-24细胞,获得表达IL-18的IL-18/T-24细胞。分别用RT-PCR、ELISA和免疫组化染色分析IL-18/T-24细胞表达IL-18的mRNA和蛋白的水平,筛选出高表达IL-18的IL-18/T-24细胞克隆用于下层研究中;用流式细胞仪检测转染前后细胞的周期变化及细胞凋亡情况;用ELISA法检测IL-18/T-24细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN-γ的能力;采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色法,测定转染前后细胞增殖及黏附能力的变化。 结果 :外源性IL-18基因转染的人膀胱癌细胞系IL-18/T-24,在mRNA水平和蛋白水平均可获得稳定表达;并且,IL-18/T-24细胞的培养上清可明显促进小鼠脾细胞分泌IFN-γ(P<0.01)。IL-18/T-24细胞与LXSN/T-24和T-24比较,细胞周期及细胞凋亡率无显著性差异(P>0.05),IL-18/T-24细胞的增殖率与LXSN/T-24和T-24细胞相比虽有所降低,但无显著性差异(P>0.05)。 结论 :建立的稳定表达IL-18的IL-18/T-24细胞,既保持了肿瘤细胞原有的免疫原性,又具有分泌IL-18的功能,引起较强的免疫应答反应。IL-18/T-24细胞与LXSN/T-24和T-24细胞相比较,其生物学性状无明显差异,可进一步用于肿瘤相关免疫基因治疗的研究。     

白细胞介素-24抑制K562细胞生长的机制

 目的　探讨白细胞介素-24（又称黑色素瘤分化相关基因-7,IL-24／mda-7）对白血病细胞系K562的周期阻滞作用机制。方法　利用基因芯片技术初步分析转染IL-24／mda-7与转染空载体的K562细胞之间基因表达差异,并以实时定量PCR验证;以Western blotting方法检测pRb的磷酸化水平。结果　转染IL-24／mda-7可使K562细胞的细胞周期相关基因p21WAF-1、BCCIP上调,cdk6、Smurf2下调,定量PCR证实了上述表达变化;IL-24／mda-7转染还可明显降低K562细胞pRb磷酸化水平。结论　IL-24／mda-7 可能通过调节细胞周期相关蛋白,即上调p21WAF-1、BCCIP,下调cdk6、Smurf2,使K562阻滞于G0／G1期,从而抑制细胞生长。     

mda-7/IL-24对裸鼠肝癌移植瘤的生长抑制和促凋亡作用

目的: 探讨mda-7/IL-24对裸鼠肝癌细胞移植瘤的生长抑制和促凋亡作用及其相关机制.方法:构建携带mda-7基因的重组腺病毒载体Ad.mda-7.以HepG2细胞皮下接种建立裸鼠肝癌移植瘤模型,采用瘤内单点注射的方法分别给予Ad.GFP、Ad.mda-7和ALLN(毒胡萝卜素,N-Ac-L-L-norleucinal)+Ad.mda-7,观察瘤质量和瘤体积的变化,通过免疫组化和TUNEL法检测肿瘤组织内凋亡相关蛋白caspase-3活化、细胞增殖相关抗原ki-67和微血管密度、细胞凋亡率,并通过Western blotting检测caspase-12、caspase-3和Bax的表达.结果:Ad.mda-7治疗组和Ad.GFP对照组肿瘤体积分别为(312.6±30.2)mm3和(520.6±30.0)mm3(P<0.01),两组的肿瘤质量分别为(0.321±0.031)g和(0.534±0.030)g(P<0.01);Ad.mda-7治疗后瘤细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.01);Ad.mda-7可抑制肝癌组织ki-67表达、微血管密度和促进caspase-3的表达. 经 ALLN 处理的裸鼠,明显抑制Ad.mda-7对肝癌细胞的致凋亡作用(P<0.05),并且下调Ad.mda-7诱导的caspase-12、caspase-3和Bax的表达.结论:Ad.mda-7可显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长和新生血管的形成,并通过内质网应激通路显著诱导肿瘤细胞的凋亡.     

mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化

目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U9...     

携带mda-7基因的复制缺陷型腺病毒通过促进线粒体释放促凋亡蛋白杀伤肝癌细胞

目的 探讨黑色素瘤分化相关基因7/白介素24(mda-7/IL-24)基因选择性杀伤肝癌细胞的机制.方法 应用携带mda-7基因的复制缺陷型腺病毒Ad.mda-7感染正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2.通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附实验(ELISA)及Western blot方法,观察mda-7/IL-24基因的表达;应用Hoeehst染色和流式细胞仪观察mda-7/IL-24对肝癌细胞的杀伤作用;采用RT-PCR和Western blot方法,观察Bcl-2家族和caspase-9基因表达的变化,分离不同感染时点细胞内线粒体和胞浆蛋白,并检测线粒体释放促凋亡蛋白细胞色素C(Cyt-C)和Smac/DIABLO的变化过程.结果 Ad.mda-7能介导mda-7/IL-24在两种细胞株中的高效表达.能选择性杀伤肝癌细胞,感染24 h后,HepG2细胞凋亡率为24.0%±4.6%,而对正常的肝细胞没有影响.RT-PCR和亚细胞蛋白的分析结果显示,胞浆内Bel-2和Bcl-xL的表达在HepG2细胞中明显下降,而在L02细胞中的表达无变化,Bax在肝癌细胞中的表达明显增强,Bak的表达无变化;Ad.mda-7能促进细胞线粒体释放cyt-C和Smac/DIABLO蛋白,并促进caspase-9的表达.结论 Ad.mda-7能选择性杀伤肝癌细胞HepG2,通过促进线粒体促凋亡蛋白的释放而诱导肝癌细胞凋亡.     

Suppression of Her2/Neu mammary tumor development in mda-7/IL-24 transgenic mice

Melanoma differentiation associated gene-7/interleukin-24 (mda-7/IL-24) encodes a tumor suppressor gene implicated in the growth of various tumor types including breast cancer. We previously demonstrated that recombinant adenovirus-mediated mda-7/IL-24 expression in the mammary glands of carcinogen-treated (methylnitrosourea, MNU) rats suppressed mammary tumor development. Since most MNU-induced tumors in rats contain activating mutations in Ha-ras, which arenot frequently detected in humans, we presently examined the effect of MDA-7/IL-24 on Her2/Neu-induced mammary tumors, in which the RAS pathway is induced. We generated tet-inducible MDA-7/IL-24 transgenic mice and crossed them with Her2/Neu transgenic mice. Triple compound transgenic mice treated with doxycycline exhibited a strong inhibition of tumor development, demonstrating tumor suppressor activity by MDA-7/IL-24 in immune-competent mice. MDA-7/IL-24 induction also inhibited growth of tumors generated following injection of Her2/Neu tumor cells isolated from triple compound transgenic mice that had not been treated with doxycycline, into the mammary fat pads of isogenic FVB mice. Despite initial growth suppression, tumors in triple compound transgenic mice lost mda-7/IL-24 expression and grew, albeit after longer latency, indicating that continuous presence of this cytokine within tumor microenvironment is crucial to sustain tumor inhibitory activity. Mechanistically, MDA-7/IL-24 exerted its tumor suppression effect on HER2⁺ breast cancer cells, at least in part, through PERP, a member of PMP-22 family with growth arrest and apoptosis-inducing capacity. Overall, our results establish mda-7/IL-24 as a suppressor of mammary tumor development and provide a rationale for using this cytokine in the prevention/treatment of human breast cancer.     

过表达MDA-7/IL-24蛋白的亚细胞定位

目的了解标签蛋白GFP的位置对过表达的MDA-7/IL-24融合蛋白亚细胞定位的影响。方法分别构建在MDA-7/IL-24 cDNA的5'端和3'端带有GFP-tag的重组表达质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24,瞬时转染猴胚肾Cos7细胞,48h后用Hoechst 33258染核,在荧光显微镜下观察GFP-MDA-7/IL-24融合蛋白在Cos7细胞的亚细胞分布。结果测序表明重组质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24构建正确;分别转染Cos7细胞后,在氨基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光均匀分布于胞浆和胞核,但在羧基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光则分布于核膜外侧和胞浆。结论GFP-tag位置的不同对过表达融合蛋白MDA-7/IL-24的亚细胞定位有显著的影响。     

Impact of RGD Peptide Tethering to IL24/mda-7 (Melanoma Differentiation Associated Gene-7) on Apoptosis Induction in Hepatocellular Carcinoma Cells

Background: Melanoma differentiation-associated gene-7 (MDA-7)/interleukin-24 (IL-24), a unique tumorsuppressor gene, has killing activity in a broad spectrum of cancer cells. Herein, plasmids producing mda-7proteins fused to different RGD peptides (full RGD4C and shortened RGD, tRGD) were evaluated for apoptosisinduction with a hepatocellular carcinoma cell line, Hep-G2. The study aim was to improve the apoptosis potencyof mda-7 by tethering to RGD peptides. Materials and Methods: Three plasmids including mda-7, mda-7-RGDand mda-7-tRGD genes beside a control vector were transfected into Hep-G2 cells. After 72 hours incubation,cell viability was evaluated by MTT assay. In addition, the rate of apoptosis was analyzed by flow cytometryusing PI/annexin staining. To detect early events in apoptosis, 18 hours after transfection, expression of theBAX gene was quantified by real time PCR. Modeling of proteins was also performed to extrapolate possibleconsequences of RGD modification on their structures and subsequent attachment to receptors. Results andConclusions: In MTT assays, while all mda-7 forms showed measurable inhibition of proliferation, unmodifiedmda-7 protein exhibited most significant effect compared to control plasmid (P<0.001). Again, flow cytometryanalysis showed a significant apoptosis induction by simple mda-7 gene but not for those RGD-fused mda-7proteins. These findings were also supported by expression analysis of BAX gene (P<0.001). Protein modellinganalysis revealed that tethering RGD at the end of IL-24/Mda7 disrupt attachment to cognate receptor, IL-20R1/IL-20R2. In conclusion, fusion of RGD4C and shortened RGD peptides to carboxyl terminal of mda7, not only     

BI-69A11 enhances susceptibility of colon cancer cells to mda-7/IL-24-induced growth inhibition by targeting Akt

Background:

Akt and its downstream signalling pathways contribute to the aetiology and progression of colorectal carcinoma (CRC). Targeting the Akt pathway is an attractive strategy but few chemotherapeutic drugs have been used to treat CRC with only limited success. BI-69A11, a small molecule inhibitor of Akt, efficiently inhibits growth in melanoma cells. Melanoma differentiation associated gene-7 (mda-7)/interleukin-24 promotes cancer-selective apoptosis when delivered by a tropism-modified replication incompetent adenovirus (Ad.5/3-mda-7). However, Ad.5/3-mda-7 displays diminished antitumour efficacy in several CRC cell lines, which correlates with the expression of K-RAS.

Methods:

The individual and combinatorial effect of BI-69A11 and Ad.5/3-mda-7 in vitro was studied by cell viability, cell cycle, apoptosis and invasion assays in HT29 and HCT116 cells containing wild type or mutant K-ras, respectively. In vivo HT29 tumour xenografts were used to test the efficacy of the combination treatment.

Results:

BI-69A11 inhibited growth and induced apoptosis in CRC. However, combinatorial treatment was more effective compared with single treatment. This combination showed profound antitumour and anti angiogenic effects in vitro and in vivo by downregulating Akt activity.

Conclusions:

BI-69A11 enhances the antitumour efficacy of Ad.5/3-mda-7 on CRC overexpressing K-RAS by inducing apoptosis and regulating Akt activity thereby warranting further evaluation in treating CRC.     

人mda-7/IL-24对淋巴瘤细胞Namalwa的抑制作用

目的:研究黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7,又称IL-24)对淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的抑制作用。方法:用半定量RT-PCR方法检测10个造血系统恶性肿瘤细胞系(Namalwa、Raji、K562、NB4、U937、Ramous、CEM、KG1a、HL60、J6-1)中mda-7/IL-24的表达情况。用RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆mda-7/IL-24编码区,构建真核表达载体pTarget-IL-24。经测序鉴定后,用脂质体法转染Namalwa细胞,筛选稳定表达细胞株。转染细胞经RT-PCR和Western blotting证实mda-7/IL-24的表达。通过MTF法、集落形成试验、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验来评价mda-7/IL-24对肿瘤细胞增殖、生长特性、集落形成、凋亡情况、体内致瘤能力的作用。结果:10个造血系统恶性肿瘤细胞系中未检测到mda-7/IL-24的表达;转染重组质粒pTarget-IL-24的Namalwa细胞在mRNA与蛋白水平都有mda-7/IL-24的表达;稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞增殖活力以及集落形成能力与转染空载体的对照组相比明显下降(P<0.05);但是两者的凋亡率比较无统计学意义。裸鼠体内移植瘤实验结果显示稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞株的致瘤性明显低于转染空载体的对照组(P<0.05)。结论:mda-7/IL-24对来源于Burkitt淋巴瘤的Namalwa细胞系具有明显的增殖抑制作用,为Burkitt淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。