脊髓损伤与bcl-2基因

脊髓损伤的预后很大程度上取决于原发性损伤后引起的一系列细胞和分子的继发性改变。继发神经功能损失与远侧未受损的广泛的神经元和神经胶质细胞的凋亡有关。凋亡是细胞的程序性死亡,亦可见于外伤情况下。目前认为,神经元的凋亡在引起最终损伤的继发的损伤中起重要作用,并可能通过bcl-2等抗凋亡因子调节神经元的存活。bcl-2家族的部分成员通过促进或抑制细胞的死亡来调节神经元的存活。bcl-2基因在脊髓的继发损伤中具有重要作用,对脊髓损伤的治疗具有重要意义。     

嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的：了解嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响，探讨嗅鞘细胞治疗脊髓损伤的机制。方法：成年动物脊髓半切损伤模型，进行嗅鞘细胞和培养液移植，在伤后1～14d，应用苏木精一伊红和TUNEL法观测神经细胞存活和细胞凋亡变化。结果：脊髓半切后，神经元数目随时间下降。伤侧和对侧分别在伤后1d和2d，出现以神经元为主的凋亡高峰。7d出现以胶质细胞为主的凋亡高峰，14d凋亡下降。嗅鞘细胞移植可明显降低脊髓损伤后神经细胞凋亡，促进神经细胞存活。     

嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的:了解嗅鞘细胞移植对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响,探讨嗅鞘细胞治疗脊髓损伤的机制。方法:成年动物脊髓半切损伤模型,进行嗅鞘细胞和培养液移植,在伤后1～14d,应用苏木精-伊红和TUNEL法观测神经细胞存活和细胞凋亡变化。结果:脊髓半切后,神经元数目随时间下降。伤侧和对侧分别在伤后1d和2d,出现以神经元为主的凋亡高峰。7d出现以胶质细胞为主的凋亡高峰,14d凋亡下降。嗅鞘细胞移植可明显降低脊髓损伤后神经细胞凋亡,促进神经细胞存活。结论:脊髓损伤后嗅鞘细胞移植有对抗神经细胞凋亡作用。     

细胞共培养体系在观察骨髓间充质干细胞对损伤脊髓神经元生长存活影响中的应用

目的:建立细胞共培养体系,观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对正常及损伤的脊髓神经元的影响。方法:选取新生7d的大鼠,无菌条件下分离骨髓间充质干细胞。选取新生24h的大鼠,无菌条件下分离脊髓背根神经节神经元,并制备机械损伤的模型细胞。用Transwell可渗透培养皿构建共培养体系,通过细胞形态学,免疫细胞化学方法进行细胞纯度鉴定,观察不同条件作用下神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞的存活。结果:共培养组神经元细胞NSE阳性率较相应对照组高。在BMSCs与神经元共培养到第6天,计数神经元的存活率,单纯神经元细胞培养组仅有40%的神经元存活,而共培养组神经元的存活率达到65%。单纯损伤神经元细胞培养组仅有26%的神经元存活,共培养组神经元的存活达到51%,细胞凋亡的数量较对照组明显低。结论:BMSCs可促进正常的脊髓神经元存活,对损伤的脊髓神经元有保护作用,并能诱导神经前体细胞分化为脊髓神经元。     

缺血预处理对大鼠皮质神经元缺血耐受性和Bcl-2表达的影响

目的：观察缺血预处理对大鼠原代培养神经元缺血耐受性的影响，并探讨缺血预处理对bcl-2表达的影响。方法：体外培养的原代神经元分为对照组和预处理组，对照组给予类缺血30min复氧复糖培养24h；预处理组经类缺血10min预处理后复氧复糖培养24h后，再给予致死性的类缺血30min复氧复糖培养24h，两组细胞均用TUNEL法检测神经元凋亡，并计算存活和凋亡神经元所占百分率。同时用免疫组化法观察两组细胞bcl-2的表达。结果：对照组神经元的凋亡率明显高于预处理组，对照组bcl-2的表达明显低于预处理组，差异有统计学意义。结论：缺血预处理能够诱导神经元的缺血耐受性，预处理可能通过激活bcl-2增加其表达发挥神经保护作用。     

细胞凋亡在脊髓损伤中作用的实验研究

目的 探讨细胞凋亡在脊髓损伤发病机理中的作用。方法 采用原位末端标记法,对大鼠脊髓损伤不同时间脊髓组织中凋亡细胞的数目和部位进行观察和分析,并作正常对照。结果 损伤后灰质和白质均检测到凋亡细胞,神经元凋亡少见,胶质细胞凋亡多见。细胞凋亡发生在损伤后 12 h～ 4周,以 4d时达到高峰,至 4周时渐趋于正常。结论 大鼠脊髓损伤后神经元和胶质细胞均发生细胞凋亡,而以胶质细胞凋亡常见。     

细胞凋亡在举髓损伤中作用的实验研究

目的 探讨细胞凋亡在举髓损伤发病机理中的作用。方法 采用原位末端标记法不同对大鼠脊髓损伤不同时间脊髓组织中凋亡细胞的数目和部位进行观察和分析,结果 损伤后灰质和白质均检测到凋亡细胞,神经元凋亡少见,胶质细胞凋亡多见。细胞凋亡发生在损伤后１２ｈ￣４周,以４ｄ时达到高峰,到４周时渐趋于正常。结论 大鼠脊髓损伤后神经元和胶质细胞均发生细胞凋亡,而以胶质细胞凋亡常见。     

慢性压迫损伤对大鼠脊髓神经营养因子及其受体表达的影响

目的：观察脊髓慢性受压后神经营养因子及其受体的变化情况。方法：采用大鼠后路渐进性脊髓压迫动物模型，用免疫组化的方法观察脑源性 神经营养因子（BDNF）及其受体TrkB表达的变化。结果：正常大鼠脊髓组织中，BDNF和TrkB反应物质几乎存在于所有的脊髓神经元，灰白质中胶质细胞染色明显；脊髓受到压迫后，压迫节段脊髓组织的神经元和胶质细胞表达BDNF和TrkB增强。结论：在慢性压迫性脊髓损伤的过程中，脑源性神经营养因子及其受体表达增多，这可能对损伤脊髓神经元 的存活和保留具有重要作用。     

Bcl-2，p53与卵巢肿瘤

Bcl-2和p53基因是调控细胞凋亡的主要原因之一。bcl-2主要表现为抑制细胞凋亡，p53主要诱导凋亡。p53及bcl-2可能参与共同通路调节细胞生长和死亡，且在卵巢癌中均呈高表达，它们可能与卵巢癌的发生发展，治疗及预后密切相关。     

兔慢性颈脊髓压迫减压术后凋亡基因bcf-2和bax的表达

目的：通过观察兔慢性颈脊髓压迫症动物模型脊髓减压术后bcl-2和bax的表达，以期了解脊髓减压术治疗慢性颈脊髓压迫症的作用机制。方法：21只患有慢性颈脊髓压迫症的中国大白兔，改良Tarlov运动功能评分均为3分，随机分为两组：①减压组15只：退出螺钉进行减压。其中1只兔发生急性脊髓损伤，改良Tarlov运动功能评分降至1分，排除实验。②压迫组6只：不施行减压术。另取6只无神经功能障碍的健康大白兔作为正常对照组。分别在减压后第1，7，15，30，60天，观察减压术后脊髓的细胞凋亡和凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果：脊髓减压术后凋亡细胞逐渐减少。脊髓减压术后第1天,bcl-2和bax阳性细胞均较减压前增多。减压后第7天，bcl-2阳性细胞明显增多，bax阳性细胞减少。减压后第15，30天和第60天，bcl-2和bax阳性细胞均逐渐减少。至减压后第60天，bcl-2和bax阳性细胞表达与正常对照组相似。结论：脊髓减压术能有效抑制神经细胞凋亡。     

脑挫裂伤后细胞凋亡及其相关基因的研究

目的 探讨脑挫裂伤患者的细胞凋亡及其相关基因的表达。方法 31例脑挫裂伤患者因颅内占位效应而行开颅减压术，术中切除部分脑组织，其中10例脑挫裂伤周围非坏死组织检测到细胞凋亡。TUNEL法检测细胞凋亡，免疫组化法检测细胞凋亡相关基因p53、bcl-2与bax的表达。结果 全部患者均表达bax，6例表达bcl-2，8例患者检测到TUNEL阳性细胞，1例p53阳性，bcl-2表达阳性患者预后好于bcl-2阴性患者。结论 脑挫裂伤患者主要的病理改变为坏死，然而细胞凋亡可以造成继发的脑损害。bcl-2表达阳性的患者预后更佳。促进bcl-2表达或抑制bax表达来预防细胞凋亡具有重要的临床意义。     

Bcl-2/Bax与脊髓损伤

细胞凋亡在脊髓继发性损伤过程中起着关键性作用。Bcl-2是一个多基因家族,成员有15种之多,其中Bcl-2、Bcl-xL抑制细胞凋亡,而Bax、Bad、Bak、Bcl-xS促进其凋亡,Bcl-2和Bax是Bcl-2基因家族中最具代表性的基因,其比率决定细胞是否凋亡。近年来国内外通过调节Bcl-2/Bax的比例促进脊髓损伤修复的最新研究进展作一综述。     

应用β-七叶皂甙钠治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:观察应用β-七叶皂甙钠治疗大鼠脊髓损伤后功能恢复、损伤段神经细胞凋亡表达情况。方法:将22只SD大鼠根据损伤及治疗情况分为3组:空白组、损伤组、治疗组,观察药物治疗前后大鼠的神经功能行为的变化。损伤后12天处死动物,损伤段脊髓标本做组织学切片,HE染色;做免疫组化检测凋亡因子(包括bcl-2,bax,fas);TUNEL标记凋亡细胞。结果:治疗组在用药后,神经功能有所提高,且与损伤组比较,效果显著(P<0.05)。凋亡指标检测:fas、bax、TUNEL显示,损伤组的凋亡阳性细胞明显多于治疗组;bcl-2显示,治疗组的阳性表达明显多于损伤组(P<0.05)。结论:β-七叶皂甙钠能抑制脊髓神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能具有保护作用。     

许旺细胞源神经营养因子对脊神经根性撕脱所致神经元死亡的干预

背景：许旺细胞源神经营养因子是从许旺细胞胞浆中分离纯化出的一种相对分子质量为58000的神经营养物质，具有明显的神经营养活性，能对抗一氧化氮神经毒性物质。 目的：建立根性撕脱伤动物模型，观察许旺细胞源神经营养因子对脊神经根性撕脱所致脊髓前角运动神经元死亡的保护作用。 设计：重复观察测量。 单位：深圳市第二人民医院骨三科，中山大学附属第一医院显微外科。 材料：实验于2003—03／05在中山大学医学院实验动物中心完成。选用清洁级3-4月龄SD大鼠20只，随机分为许旺细胞源神经营养因子组、生理盐水对照组，各10只。两组动物均以左侧为正常侧，右侧为损伤侧。 方法：①两组大鼠均建立颈6、7神经根性撕脱伤动物模型。②许旺细胞源神经营养因子组将一小块预浸有质量浓度为1g/L的许旺细胞源神经营养因子40μL的明胶海绵覆盖于损伤侧硬膜囊表面，生理盐水对照组将一小块预浸有等量生理盐水的明胶海绵覆盖于损伤侧硬膜囊表面。③明胶海绵表面置硅胶管，硅胶管一端与明胶海绵缝扎，另一端用凡士林封闭固定于皮下，关闭切口后伤口局部肌肉注射青霉素预防感染。术后两组动物分别通过硅胶管定期注射许旺细胞源神经营养因子或生理盐水20μL，1次／周，3周后取材。 ④切取颈6.7脊髓节段，观察损伤侧脊髓前角运动神经元的存活率和形态学变化以及一氧化氮合酶的表达。 主要观察指标：①脊髓运动神经元存活情况和形态学变化。②脊髓运动神经元一氧化氮合酶表达的变化。 结果：实验选用20只大鼠，全部进入结果分析。①脊髓运动神经元存活情况和形态学变化：颈6.7神经根性撕脱术后3周，生理盐水对照组损伤侧68.6％的运动神经元死亡，存活率31．4％，明显低于正常侧（P〈0．01），且存活的神经元胞体严重萎缩；许旺细胞源神经营养因子组损伤侧脊髓运动神经元的死亡率较生理盐水对照组减少35％（P〈0．01），存活率为66．4％，且存活的神经元胞体代偿性增大，基本与正常侧相似（P〉0．05）。②脊髓运动神经元一氧化氮合酶表达的变化：正常情况下，脊髓中的一氧化氮合酶阳性神经元主要见于后角浅层，中央导水管周围、中间外侧柱和脊髓背根神经节中的内脏传入神经元，前角运动神经元不表达一氧化氮合酶。颈。神经根性撕脱术后3周，生理盐水对照组损伤侧脊髓运动神经元一氧化氮合酶表达明显增多，而其正常侧和许旺细胞源神经营养因子组损伤侧脊髓运动神经元均未见一氧化氮合酶表达增加。 结论：脊神经根性撕脱可引起脊髓前角运动神经元的死亡和一氧化氮合酶表达，许旺细胞源神经营养因子则对受损的神经元有明显的保护作用和抑制一氧化氮合酶表达。提示许旺细胞源神经营养因子的神经元保护作用可能是通过改变神经元的一些细胞分子例如一氧化氮合酶而实现的。     

脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的实验研究

目的：研究细胞凋亡在脊髓缺血再灌注损伤中的作用。方法：建立兔脊髓缺血再灌注损伤模型，再灌注后24h和48h取脊髓标本，应用HE染色、透射电镜、TUNEL和免疫组化染色方法观察脊髓标本中运动神经元的细胞凋亡情况。结果：兔脊髓缺血再灌注后，HE染色可见运动神经元呈凋亡形态改变，TUNEL染色阳性，免疫组化染色示Bax蛋白表达明显升高，Bcl-2蛋白表达轻度升高，Bax／Bcl-2比值升高，电镜观察可见典型凋亡小体出现。再灌注24h时凋亡细胞较48h时为多。结论：细胞凋亡是兔脊髓缺血再灌注损伤后运动神经元的主要死亡方式。     

慢性压迫损伤对大鼠脊髓神经营养因子及其受体表达的影响

目的观察脊髓慢性受压后神经营养因子及其受体的变化情况。方法采用大鼠后路渐进性脊髓压迫动物模型,用免疫组化的方法观察脑源性神经营养因子(BDNF)及其受体TrkB表达的变化。结果正常大鼠脊髓组织中,BDNF和TrkB反应物质几乎存在于所有的脊髓神经元,灰白质中胶质细胞染色明显;脊髓受到压迫后,压迫节段脊髓组织的神经元和胶质细胞表达BDNF和TrkB增强。结论在慢性压迫性脊髓损伤的过程中,脑源性神经营养因子及其受体表达增多,这可能对损伤脊髓神经元的存活和保留具有重要作用。     

细胞凋亡与糖尿病

细胞凋亡是受基因调控的细胞主动死亡过程。糖尿病(DM)的发生与胰岛β细胞过度凋亡和 T、B 淋巴细胞的凋亡受阻有密切关系。T、B 淋巴细胞 CD5表达缺陷、bcl-2降调节以及 IL-1β、TNF-α、IFN-γ等细胞因子通过 NO 或非 NO 途径,氧化损伤所诱导的细胞凋亡,参与了 DM 的发生、发展。细胞凋亡的调节可从基因水平探讨 DM 的防治。     

糖尿病并发症与细胞凋亡及相关基因的关系

细胞凋亡在糖尿病及其并发症的发生方面起着重要的作用。研究发现bax和bcl-2可能参与肾脏细胞凋亡的调控。国外相关研究证实视网膜毛细血管周细胞丧失的性质为细胞凋亡，发现bax和bcl-2基因在早期糖尿病大鼠视网膜的表达发生显变化。近期研究发现，糖尿病神经病变患血中包含Fas调节的凋亡的激活因子，可能参与糖尿病神经病变的发病机制。研究发现细胞凋亡是造成了糖尿病模型的创伤愈合障碍的重要因素之一，细胞凋亡在细胞浸润和肉芽组织形成受阻过程中密切地参与了炎症的调节，最终在创伤愈合的炎症阶段发挥作用。尚有研究发现糖尿病时的勃起功能障碍可能与细胞凋亡有关。     

钙在神经损伤中的作用机制

钙离子不仅调节生命活动而且与神经细胞的死亡过程有着密切关系,在脑和脊髓损伤,尤其在脑和脊髓继发性损伤中起着重要的作用。一定程度上Ca~(2+)的变化是神经元死亡的最后“共同的通路”,是神经元继发性损伤的主要原因之一。 1 损伤神经元的细胞内钙的变化 正常细胞内钙离子的浓度比细胞外低几个数量级。在人体细胞,细胞总钙浓度因细胞种类的不同而有很大的差异,细胞外液的钙约50％～60％是结合钙,细胞内则99.9％为结合钙,其中,正常神经组织静息状态时胞浆钙约为10μmol/L,其中约0.1μmol/L的钙是游离钙([Ca~(2+)]i),其余以与蛋白质、有机配体结合形式存在。     

高压氧前处理脊髓损伤大鼠前角运动神经元的凋亡

背景：脊髓损伤后难以修复,损伤后保护残存的神经元是促进神经再生的关键。目的：验证高压氧预处理可以通过抑制早期的细胞凋亡来保护脊髓前角运动神经元。方法：随机将26只雄性Wistar大鼠等分成模型组和实验组。实验组在给予高压氧5d后与模型组同时制作脊髓T9~10全横断模型。结果与结论：尼氏染色显示脊髓T9~T10全横断后8h及1d,脊髓前角的浓染的细胞多见,与模型组相比,实验组脊髓前角浓染的细胞较少。TUNEL染色也显示脊髓T9~T10全横断后脊髓损伤后8h~1d,2组大鼠脊髓前角内均可见大量的凋亡神经元,3d时凋亡神经元数量减少。相比于模型组,高压氧预处理8h,1d后大鼠脊髓前角凋亡神经元较少（P〈0.05,P〈0.01）。说明高压氧预处理能对脊髓损伤后前角运动神经元起保护作用。