晚期氧化蛋白产物诱导HaCaT细胞凋亡的实验研究

目的 探讨晚期氧化蛋白产物(AOPPs)对HaCaT细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 人血清白蛋白(HSA)与次氯酸钠溶液反应制成AOPPs.MTT法检测经不同浓度(0、50、100、200、400μg/ml)AOPPs处理24h后HaCaT细胞的活力,以选择AOPPs的工作浓度.根据时间效应或浓度效应对HaCaT细胞进行分组处理,流式细胞技术检测细胞凋亡率,二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting技术检测细胞内NOX4、Bax及Bcl-2蛋白的表达.结果 400μg/ml AOPPs作用后HaCaT细胞活力较其他浓度明显降低(p＜o.05).随AOPPs作用时间的延长和浓度的增加,HaCaT细胞凋亡率明显增加(P＜0.05),细胞内ROS产生增多(P＜0.05),NOX4和Bax蛋白表达量增加(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达量降低(P＜0.05).结论 AOPPs可能通过NADPH氧化酶途径诱导HaCaT细胞凋亡.     

氧化低密度脂蛋白诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的细胞周期分析

目的 :研究氧化低密度脂蛋白 (0x -LDL)引起血管平滑肌细胞 (VSMCs)凋亡的效应及其凋亡细胞周期分析。方法 :采用电镜、流式细胞仪等观察Ox -LDL诱导VSMCs凋亡的细胞形态学改变及细胞周期变化。结果 :VSMCs在Ox -LDL(2 0mg/L)作用下 ,电镜下见凋亡细胞呈现核固缩凋亡小体的形态学特征。流式细胞仪检测发现Ox -LDL(2 0mg/L)引起细胞凋亡指数明显高于N -LDL(10倍 )。细胞增殖周期分析可见 ,Ox -LDL处理VSMCs 2 4h ,随着浓度的增加 ,G1期细胞百分率逐渐下降 ,而G2 /M期细胞百分率逐渐升高 ,提示Ox-LDL能将细胞阻滞在G2 /M期。结论　OX -LDL能诱导VSMCs凋亡 ,VSMCs的凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关。     

氧化苦参碱的制备及抗放实验研究

苦参 (SophoraFlavescens)属豆科植物 ,用根入药 ,性味苦寒 ,有清热、燥湿、杀虫等作用 ,是传统中药。近年来研究显示苦参的生物碱部分有抗癌、抗炎、免疫调节、保肝、抗心律失常、抗病毒、升白及治疗心率不齐等功效。本实验室在苦参水煎剂初筛的基础上 ,分离提取制备得单一成分氧化苦参碱 (SophoridineN oxide ,SNO) ,进行小鼠和大鼠的抗放实验研究。一、材料和方法1 SNO的制备和鉴定 :购自北京中药店的中药苦参 ,粉碎水浸泡后微沸水煎 2h ,水煎液浓缩后经聚苯乙烯磺酸型阳离子交换树脂分离 ,收集 5 %氨水洗脱部分 ,减压浓缩得总生物碱…     

氧化砷诱导胰腺癌细胞凋亡与Fas,Fas—L关系的研究

胰腺恶性肿瘤远较良性肿瘤常见,占消化道肿瘤的８％～１０％,在美国为第２位的胃肠道常见肿瘤〔１〕。国内本病的发病率近年来有升高趋势,据统计上海市市区居民１９７８～１９８２年胰腺癌标准化病死率为５．５／１０〔２〕。胰腺癌出现症状时常已是晚期,大部分患者在确诊时,已有局部浸润或扩散,失去了手术切除的机会。因此,探索化疗对胰腺癌的治疗作用有十分重要的意义。本研究观察了氧化砷（Ａｓ２Ｏ３）在细胞水平对胰腺癌细胞的生长抑制作用,并发现这种抑制作用是通过诱导细胞凋亡来实现的,为胰腺癌化疗药物的选择提供了新的思…     

腹腔穿刺引流对重症急性胰腺炎大鼠胰腺细胞凋亡的影响及机制

目的探讨腹腔穿刺引流(APD)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺细胞凋亡的影响,并探讨其可能的分子机制。方法将成年雄性SD大鼠随机分为假手术(SO)组、SAP组、APD组,每组18只。SAP组、APD组大鼠经胰胆管逆行微量泵入5%牛磺胆酸钠制备SAP模型,APD组进一步由右下腹导入一胃管进行引流。每组设置6、12、24 h时间点,收集腹主动脉血和胰腺组织。酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清淀粉酶、炎性因子及内毒素的变化;HE染色观察胰腺组织损伤情况;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测胰腺组织细胞凋亡情况;Western blotting和免疫组化法检测凋亡相关蛋白及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路蛋白的表达。结果 APD组大鼠胰腺组织坏死、水肿情况明显好于SAP组,病理学评分下降(P<0.05)。APD组大鼠血清淀粉酶、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)1β、IL-6及内毒素水平明显低于SAP组(P<0.05),胰腺细胞凋亡数量明显高于SAP组(P<0.05),胰腺组织凋亡蛋白裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved-...     

海水诱导血管内皮细胞株304细胞凋亡的实验研究

目的探讨海水诱导的细胞死亡特点及其分子机制。方法海水与生理盐水按照不同比例稀释以及处理不同时间条件下,4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色并在荧光显微镜下观察血管内皮细胞株(endothelial cell of vessels,ECV)304细胞形态和生存改变,采用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素和碘化丙啶双染色结合流式细胞术观察ECV304细胞凋亡比例,采用实时定量聚合酶链式反应陈列芯片杂交分析凋亡相关基因表达水平的变化。结果海水刺激早期,ECV304细胞脱水皱缩,随时间延长,细胞凋亡与坏死逐渐增多。荧光显微镜和流式细胞术分析结果显示,海水∶生理盐水=1∶1稀释不仅导致细胞坏死,还能够诱导细胞凋亡,两者比例相当。实时定量聚合酶链反应陈列芯片杂交分析结果显示,有4个凋亡相关基因[半胱天冬酶-6、脂肪酸合成酶配体基因、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)和BCL-2样蛋白1(BCL-2 like 1,BCL-2L1)]RNA水平发生明显改变。结论海水可以诱导细胞凋亡,可能与其诱导的凋亡相关基因表达改变有关。     

VEGFP-CDglyTK系统诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CDglyTK)对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用.方法 用重组腺病毒Ad-VEGFP-CDglyTK体外感染表达VEGF的HepG2细胞,荧光显微镜观察其感染效率,然后给予前药更昔洛韦(GCV)和5-氟胞嘧啶(5-FC),在光镜、透射电镜下观察,用流式细胞术等方法 观察细胞凋亡、细胞周期及细胞内DNA含量的变化.结果 腺病毒对HepG2细胞的感染率随病毒滴度的增高而递增.在感染复数为100时,前药GCV和5-FC在一定范围(GCV 5-FC分别为:1mg/L 20mg/L,10mg/L 40mg/L,100mg/L 60mg/L)内呈剂量依赖性地诱导HepG2细胞凋亡;中浓度下(GCV:10mg/L,5-FC:40mg/L)作用细胞72h,透射电镜下可见HepG2细胞发生典型凋亡改变:空泡形成,染色质浓缩、沿核膜排列,甚至出现核碎裂现象.流式细胞仪测定见用药组出现典型的凋亡峰;随着药物浓度的增加,凋亡细胞所占的比例逐渐增加,实验组凋亡细胞数与对照组比较有显著性差异(P＜0.01);细胞周期分析显示前药能明显抑制HepG2/CD-TK细胞的增殖,主要作用在细胞G2-M期.结论 VEGF启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达VEGF的HepG2细胞,其机制与诱导细胞凋亡有关.     

氧化苦参碱磷脂复合物的理化性质研究

目的 考察氧化苦参碱与其磷脂复合物的理化性质变化.方法 测定和比较氧化苦参碱和其磷脂复合物的X-射线衍射光谱、差示扫描光谱、红外光谱、水中的分散形态、粒度分布及油水分配系数.结果 X-射线衍射分析显示,复合物中氧化苦参碱晶体衍射峰消失;差热扫描显示复合物的相变温度明显降低;红外光谱分析表明氧化苦参碱与磷脂未形成新的化合物或混合物,而是一个磷脂复合物;在水中复合物分散呈胶团状;电镜下可见其外观为球形,粒径比较均匀;与氧化苦参碱相比,复合物在正辛醇中溶解性有明显改善,而在水中溶解度有所降低;在不同pH水-正辛醇系统中,复合物的表观油-水分配系数与氧化苦参碱相比也有较大的差异.结论 理化性质研究表明,氧化苦参碱与磷脂形成了复合物.     

缺血后处理对大鼠移植胰腺细胞凋亡的影响

目的探讨缺血后处理(IPO)对大鼠移植胰腺细胞凋亡的影响及其机制。方法取12只糖尿病SD大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组,n=6)和缺血后处理组(IPO组,n=6),I/R组和IPO组均行胰腺移植。另取12只健康SD大鼠为供体、6只糖尿病SD大鼠为假手术组(对照组);检测各组再灌注前、后血糖;TUNEL法观察移植胰腺组织细胞凋亡情况,W estern B lot检测移植胰腺组织Bax和B cl-2蛋白表达。结果 再灌注后IPO组较I/R组血糖低(P<0.01),移植胰组织中A I值低(P<0.01),IPO组再灌注后移植胰组织Bax蛋白低表达,B cl-2蛋白高表达。结论缺血后处理可以减少移植胰腺缺血再灌注后的细胞凋亡,机制可能与上调B cl-2蛋白和下调Bax蛋白有关。     

X射线诱导细胞凋亡的机制

细胞凋亡是在基因凋控下的细胞主动死亡过程。X射线作为一种电离辐射，其诱导细胞凋亡的机制目前仍未完全明了，可能存在着与P53、Cty-c、AIF、Bcl-2、Caspase酶等物质密切相关的传导系统。随着对此机制认识的不断深入，必能更好地指导临床对肿瘤等疾病的治疗。     

胰腺分裂在慢性胰腺炎病因学中的作用及发病机制

目的探讨胰腺分裂(PD)在慢性胰腺炎病因学中的作用及其发病机制。方法将32只犬随机分为4组(每组8只)。Ⅰ组部分结扎背-腹胰管间的交通支。Ⅱa组切断并结扎交通支。Ⅱb组在背胰管注人小乳头前2mm处将其切断并结扎断端。Ⅲ组假手术对照组,除不结扎交通支外,其余操作同上。于手术前检测各组犬的血清磷脂酶(PLA2)和淀粉酶(Ams)活性及背、腹胰管基础压并在胰泌素激发后15、30、45、60和90分钟各测压一次。于术后180天再行胰胆管测压和造影并观察背、腹胰和十二指肠乳头的病理改变。结果(1)Ⅰ、Ⅱa组和Ⅱb组术后5～80天血清PLA2和Ams活性显著升高。(2)处死时Ⅰ、Ⅱa组腹胰管和Ⅱb组背、腹胰管压力在激发后30～60分钟显著高于注药前(P＜0.01);在60分钟后,前两组压力恢复到术前水平(P＞0.05),而Ⅱb组仍较高(P＜0.05),该组压力在90分钟后恢复正常。(3)光镜Ⅱb组犬背、腹胰小叶间或/和胰管周围显著纤维组织增生,腺细胞结构破坏和炎细胞浸润。Ⅰ和Ⅱa组腹胰见轻度上述改变。(4)电镜Ⅰ、Ⅱa组腹胰和Ⅱb组背、腹胰腺细胞粗内质网脱颗粒、融合和扩张。酶原颗粒减少,线粒体肿张。Ⅰ和Ⅱa组背胰及Ⅲ组背、腹胰未见异常。结论PD是慢性胰腺炎的病因学因素之一,其引发胰腺炎的机制是在胰液分泌的高峰期副乳头功能性梗阻。这一重要发现为PD合并慢性胰腺炎患者的外科治疗(副乳头括约肌切开或成形术)提供了理论依据。     

早期肠内营养对SAP大鼠模型营养学的影响及机制研究

目的探讨早期肠内营养对重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）大鼠模型营养学的影响及机制研究。方法将60只SD大鼠建立SAP模型,随机分为两组,对照组（n=15）,采用肠外营养（PN）治疗;实验组又分为3组（n：15）,采用不同时机启动肠内营养（EN）治疗。比较治疗后肿瘤坏死因子（TNF—α）、血淀粉酶、白细胞介素10（IL-10）等病情指标,以及血清白蛋白（ALB）、转铁蛋白（TRF）、总蛋白（TP）等营养学指标,取肠道标本观察黏膜厚度及绒毛密度情况。结果治疗后实验组TNF-α、血淀粉酶、IL-10水平较对照组有显著性差异（P〈0．05）,ALB、TRF、TP水平较高（P〈0．05）：病理检查显示：实验组肠黏膜厚度和绒毛密度情况均较对照组好。结论早期肠内营养能更好地控制病情,可以改善SAP大鼠模型营养学状况,EN启动越早恢复越快。     

Dynamic contrast-enhanced MRI of the pancreas: initial results in healthy volunteers and patients with chronic pancreatitis

PURPOSE: To characterize pancreatic perfusion in volunteers and patients with chronic pancreatitis (CP) by dynamic contrast-enhanced (DCE) MRI. MATERIALS AND METHODS: Pancreatic enhancement after bolus injection of Gd-DTPA with a three-dimensional ultrafast partial-Fourier radiofrequency (RF) spoiled gradient-echo (GE) acquisition was examined prospectively. An acquisition volume of the pancreatic parenchyma was obtained every 4.2 seconds during a single breath-hold in 31 volunteers and 19 patients with CP. We calculated the wash-in rate and a newly defined parameter, the "time-to-inflow deceleration" (TID). A statistical analysis of the differences between both groups was performed with the use of Student's t-test. RESULTS: Significant differences in the TID and wash-in rate were found for the head and body of the pancreas: the TID was 22.4 sec +/- 4.4 sec and 23.5 sec +/- 6.1 sec in the pancreatic head and body of the healthy volunteers, and 29.8 sec +/- 8.6 sec and 29.4 sec +/- 3.8 sec in patients with CP. The wash-in rate was 96 +/- 37 sec(-1) and 101 +/- 27 sec(-1) in controls, and 62 +/- 17 sec(-1) and 75 +/- 27 sec(-1) in CP. CONCLUSION: CP can be identified by semiquantitative changes on DCE-MRI. Whether DCE-MRI of the pancreas can be used to detect early CP remains to be validated.     

高压氧联合川芎嗪对重症急性胰腺炎模型大鼠的疗效及其作用机制

目的:探究高压氧(HBO)联合川芎嗪对重症急性胰腺炎(SAP)模型大鼠的治疗疗效及其作用机制。方法:75只SPF级健康大鼠造模完成后,按照数字表法随机分成3组:对照组、观察1组和观察2组,每组25只。对照组给予生理盐水腹腔注射,观察1组给予川芎嗪腹腔注射,观察2组在观察1组处理的基础上进行HBO治疗。每组各选取10只大鼠,记录24 h死亡率和平均生存时间;记录各时间点腹水量;采用酶联免疫吸附实验检测各组大鼠各时间点血清中炎性因子以及淀粉酶表达水平,硫代巴比妥酸法测定大鼠各时间点血浆中丙二醛(MDA)的含量。断头法处死大鼠后进行综合胰腺组织病理评分。结果:HBO处理后,观察1组(35.5%)和观察2组(20.0%)模型大鼠死亡率均明显低于对照组(55.0%),平均生存时间高于对照组;且观察2组大鼠死亡率低于观察1组,平均生存时间高于观察1组,差异均有统计学意义( P<0.05或 P<0.01);观察1组和观察2组不同时间腹水量明显少于对照组,观察2组腹水量少于观察1组,差异均有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)。观察1组和观察2组模型大鼠血清淀粉酶IL-6、TNF-α、MDA水平明显低于对照组,IL-10高于对照组;且观察2组淀粉酶IL-6、TNF-α、MDA水平明显低于观察1组,IL-10高于观察组,差异均有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)。观察1组和观察2组不同时间模型大鼠胰腺组织病理评分明显低于对照组,观察2组评分低于观察1组,差异均有统计学意义( P<0.05或 P<0.01)。 结论:HBO联合川芎嗪可通过改善SAP大鼠氧化损伤,调节炎性因子分泌,抑制其病情进展。     

Caspase-1抑制剂对重症急性胰腺炎大鼠肝IL-18表达的影响

目的 观察Caspase-1抑制剂对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝组织及肝内IL-18表达的影响.方法 采用4%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发SAP模型.SD大鼠42只,随机分为3组:对照组(HC组,n=6);SAP造模 生理盐水组(SAP-S组,n=18);SAP造模 Caspase-1抑制剂组(SAP-ICE-Ⅰ组,n=18).SAP-S组于造模后2h腹腔注射生理盐水1ml,12h后重复1次;SAP-ICE-Ⅰ组于造模后2h腹腔注射ICE抑制剂,12h后重复1次.HC组模拟胰胆管穿刺操作,但不注射药物.SAP-S组与SAP-ICE-Ⅰ组于造模后6、12、18h心脏穿刺抽血,测血清淀粉酶(AMY)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,并测定腹水量,留取标本在光镜下观察胰腺及肝组织病理学改变,采用免疫组化方法 检测IL-18在肝脏中的表达和定位,并用Western blotting方法 检测肝内成熟IL-18蛋白的表达.结果 与HC组比较,SAP-S组与SAP-ICE-Ⅰ组血清AMY、ALT、AST水平明显升高,腹水量明显增多(P<0.01);与SAP-S组相比,SAP-ICE-Ⅰ各组血清AMY、血清ALT、AST水平和腹水量有显著下降(P<0.01).光镜下,SAP-S组胰腺和肝组织病理损害程度随时间明显加重,与SAP-S组相比,SAIXlCE-Ⅰ组对应时间点胰腺病变程度有所减轻,而肝组织损伤未见明显变化.免疫组化结果 显示,Kupffer细胞胞质中IL-18的表达在SAP-S组和SAP-ICE-Ⅰ组较HC组明显增多,而SAP-ICE-Ⅰ组较SAP-S组明显减少.Western blotting结果 显示,成熟的IL-18表达在SAP-S组各时间点明显升高,与HC组相比均具有显著性差异(P<0.01),SAP-ICE-Ⅰ组各时间点较SAP-S组显著减少(P<0.01),除6h组外均较HC组无显著差异(P>0.05).结论 Caspase-1抑制剂可以抑制成熟的IL-18蛋白的表达,可以有效改善SAP时受损的肝脏功能.     

胰头切除治疗胰头部慢性胰腺炎不同术式疗效评价

 目的 探讨不同手术方式治疗胰头部慢性炎性反应的疗效。方法 回顾性分析长海医院、武警上海总队医院和上海市第七人民医院从2000-01至2015-01收治的145例胰头部慢性胰腺炎患者的临床资料和随访信息,比较各种手术方式的临床疗效。结果 术前伴有CA199升高、胰头肿块等怀疑恶变的患者多采用胰十二指肠切除术,术前伴有梗阻性黄疸、胰管结石等良性疾病的患者多采用保留十二指肠的胰头次全切除术,Beger术的总并发症率(P=0.040)和胆漏发生率(P=0.035),以及改良Beger术的总并发症率(P=0.035)和胆漏发生率(P=0.043)均高于改良Beger术联合胆肠吻合术式。结论 选择胰头部慢性胰腺炎患者的手术方式时应遵循个体化原则。改良Beger术联合胆肠吻合术式较Beger 术、改良Beger 术式更能减少胆漏的发生。     

Microangiography of the pancreas in experimental hemorrhagic pancreatitis

In experimental hemorrhagic pancreatitis induced with sodium-taurocholate-trypsin, contrast enhancement of the pancreas in computed tomography (CT) has been shown to be decreased in spite of normal pancreatic blood flow. The contrast enhancement in CT depends on blood flow to the organ, capillary permeability and the amount of extracellular fluid in the organ. For further evaluation of the role of microcirculatory changes in our model of hemorrhagic pancreatitis, microangiography was performed in five normal piglets and in ten piglets with acute hemorrhagic pancreatitis. In this experimental model histological studies showed focal necroses, hemorrhages and leucocyte accumulation. In the affected areas microangiography revealed unfilled capillaries and extravasation of contrast medium. Arteries and arterioles were well filled, as in the normal control animals. These severe disturbances in the capillary circulation of the pancreas may explain the decreased contrast enhancement of the pancreas in CT during acute hemorrhagic pancreatitis.     

罗格列酮对重症急性胰腺炎大鼠胰腺氧化应激的影响

 目的 探讨罗格列酮(rosiglitazone,ROSI)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠胰腺组织氧化应激的影响。方法 雄性SPF级SD大鼠60只,按随机数字表法随机分为3组:假手术组(sham operation group,SO组)、SAP组、ROSI组,每组20只。胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠制备SAP模型。ROSI组在造模后5 min经股静脉注射ROSI(6 mg/kg),SO组和SAP组则注射等量生理盐水。术后12 h剖杀大鼠,统计各组大鼠死亡率。检测血清淀粉酶(amylase,AMY);检测胰腺组织一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平;胰腺组织行病理学检查;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清白介素-1β(interleukine-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukine-6,IL-6)水平。免疫印迹法(western blotting)检测胰腺组织诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、内皮细胞型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)蛋白水平。结果 SAP组死亡2只大鼠;SO组和ROSI组无大鼠死亡。SAP组大鼠AMY、IL-1β、IL-6、NO、MDA、胰腺病理评分均较SO组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);ROSI组干预后上述指标较SAP组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。SAP组GSH-Px水平较SO组明显下降,给予ROSI干预后GSH-Px水平有所上升,但仍低于SO组[(49.01±9.42) U/mg vs (59.81±22.43 )U/mg],差异均有统计学意义(P<0.05)。SO组胰腺组织iNOS和eNOS蛋白呈低表达,SAP组iNOS和eNOS蛋白表达水平较SO组明显升高[(1.90±0.16 )vs(0.75±0.09)、(0.37±0.09)vs(0.09±0.01)],差异有统计学意义(P<0.05),ROSI干预后其表达水平均下降[(1.31±0.18)vs(1.90±0.16)、(0.23±0.08)vs(0.37±0.09)],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 罗格列酮对SAP大鼠胰腺损伤具有保护作用,其机制与抑制氧化应激、减少炎性反应因子产生有关。