实验性重症肌无力小鼠模型的研究

目的:采用纯化乙酰胆碱受体(acetylcholine receptors, AChR)免疫小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力(experimental autoimmune myasthenia gravis, EAMG)动物模型.方法:以亲和层析法从电鳐电器官提取和纯化AChR,并用其免疫接种BALB/C和C57BL/6小鼠,观察接种动物的临床症状、电生理变化以及血清AChR抗体水平的情况.结果:与对照小鼠相比,发病小鼠出现临床肌无力症状,重复神经电刺激(repetitive nerve stimulation, RNS)显示动作电位波幅衰减,血清AChR抗体水平升高.结论:用电鳐电器官提纯TAChR作为免疫原,成功诱导产生EAMG小鼠模型,C57BL/6小鼠较BALB/C小鼠易感.     

重肌灵片对EAMG大鼠体内NO和NOS的影响

目的探讨重肌灵片对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)体内一氧化氮(NO)和一氧化氮合成酶(NOS)的影响.方法用从电鳐电器官提取的含N2-AchR粗提液加完全弗氏佐剂免疫Lewis大鼠制成EAMG,ELISA法检测大鼠免疫后第7周血清及细胞培养上清中IFN-γ含量.采用比色法检测血清、淋巴细胞培养液和肌肉组织中的NO和NOS.结果模型组与完全弗氏佐剂(CFA)组比较干扰素-γ(IFN-γ)、NO和NOS水平升高(P＜0.01),重肌灵组与模型组比较IFN-γ、NO和NOS含量下降(P＜0.01).结论重肌灵下调EAMG体内IFN-γ和AChRab含量导致NO和NOS合成减少,从而降低由NO引起的肌肉神经组织损伤.     

转染TGF-β1基因的树突状细胞对重症肌无力大鼠T细胞IFN-γ和NO分泌的调节

目的：探讨TGF—β1基因转染的树突状细胞（TGF—β1-DC）对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠T细胞IFN-γ和NO分泌的调节作用．方法：近交系、8～10wk龄、雌性Lewis大鼠25只,随机分为5组：正常组、EAMG组、DC对照组、TGF—β1-DC治疗组、生理盐水治疗对照组．除正常组外,其余各组均采用丁氏双鳍电鳐的电器官乙酰胆碱受体蛋白二次免疫的方法复制EAMG大鼠模型．初次免疫后第5日分别皮下注射2×10^6的DC,TGF—β1-DC及等体积的生理盐水,EAMG组不接受任何治疗．初次免疫后7wk,分离脾脏T细胞体外培养48h后分别应用ELISA和化学方法检测T细胞IFN-γ和NO的分泌水平．结果：正常大鼠T细胞体外培养48h后,其上清液中IFN-γ的含量很少,而EAMG组大鼠T细胞培养上清液中IFN-γ的含量显著增加（P〈0．01）．TGF—β1-DC治疗组、DC对照组、生理盐水对照组IFN-γ的含量与EAMG组比较均无统计学差异;正常大鼠T细胞体外培养的上清液中NO的含量很少,EAMG组大鼠T细胞培养上清液中NO的含量明显增加（P〈0．01）．TGF—β1-DC治疗组NO的含量较EAMG组明显增加（P〈0．05）,DC对照组、生理盐水对照组与EAMG组比较无统计学差异．结论：调节EAMG大鼠体内IFN-γ和NO的分泌可能是TGF—β1-DC的治疗机制之一．     

兔重症肌无力模型的建立

目的:探讨兔重症肌无力模型(MG)的建立方法。方法:采用亲和柱层析法从电鳐电器官中提取乙酰胆碱受体(AChR),给16只日本大耳白兔分两次注射200μg AChR与等量的弗氏完全佐剂混合液,两次注射相隔3周,采用自行设计的评分标准评定其症状的严重性。结果:12只日本大耳白兔出现重症肌无力表现,积分12.83±6.19分。结论:从电鳐电器官中提取AChR,并主动免疫日本大耳白兔能够复制出重症肌无力模型。     

TGF—β上调在Wistar大鼠抑制EAMG发生中起重要作用

用AChR加CFA免疫大鼠后,Lewis大鼠出现典型的临床肌无力,而Wister,Furth(W.F)大鼠不出现任何症状。为阐明W。F大鼠对AChR耐受的机制,本文检测了表达IFN—γ,IL—4和TGF—β mRNA的MNC和肌肉AChR。结果表明,W。F大鼠免疫后第5.7周PILN中AChR诱导的IFN—γ mRNA表达细胞数比Lewis大鼠低,TGF—β mRNA表达细胞数比Lewis大鼠高,肌肉AChR含量比Lewis大鼠高。提示IFN—γ和TGF—β与EAMG的发生有关,TGF—β上调可抑制IFN—γmRNA表达,减少肌肉AChR丢失,进而预防和抑制EAMG发生。     

Lewis和Wistar Furth大鼠T细胞对AChR的免疫应答不同

为探讨T细胞对乙酰胆碱受体(AChR)免疫应签在实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)发病中的作用,本文用酶联免疫斑点技术(ELISPOTS)和[3H]TdR掺入法检测Lewis大鼠和Wistar Furth(Wistar)大鼠AChR加完全弗氏佐剂(CFA)免疫后不同时间点 窝和腹股沟淋巴结(PILN)、脾脏及胸腺中AChR反应性r干扰素分泌细胞和淋巴细胞增生反应。结果表明:免疫后第5周PILN中AChR反应性r干扰素分泌细胞Lewis大鼠为8.9±1.5,Wistar大鼠为4.3±0.9;第7周Lewis大鼠为7.8±1.2,Wistar大鼠为4.2±1.6,差异均有显著性(P<0.05);免疫后第7周PTLN中淋巴细胞增生反应(SI)Lewis大鼠为6.83±2.14,Wistar大鼠为2.62±1.07,差异具有显著性(P<0.05)。与此相一致,lewis大鼠免疫后出现典型的EAMG,而wistar大鼠不出现EAMG。结果提示,T细胞对AChR的应答在EAMG的发病过程中起重要作用。PILN中T细胞对AChR免疫应答的抑制,可阻止EAMG的发生。     

双类似物鼻黏膜耐受对EAMG临床发病的抑制作用

目的　采用双类似物 (Lys2 6 2 Ala2 0 7)通过不同时间点对实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)模型进行鼻黏膜耐受预防性给药 ,观察临床发病变化 ,并评价疗效 ,探讨其控制EAMG临床发病作用机制。方法　应用AChR加CFA致敏Lewis大鼠建立EAMG模型 ,并在致敏前 10天 (A组 )及致敏当日 (B组 )鼻腔给药。观察给药后A、B组及相应对照组大鼠体重、临床症状及肌电图变化。结果　①急性期和慢性期A、B组体重明显超过、而病情明显轻于相应对照组 ,慢性期A组体重明显超过、病情明显轻于B组 ,P均 <0 .0 5 ;②A、B组低频重复电刺激出现衰减反应D5阳性率明显低于相应对照组 ,P均 <0 .0 5。结论　Lys2 6 2 Ala2 0 7鼻黏膜预防耐受可有效地抑制临床发病 ,为采用双类似物鼻黏膜耐受防治人类重症肌无力提供了依据。     

福定碱治疗实验性自身免疫重症肌无力

近年来重症肌无力(MG)的研究取得很大进展,但有些问题如血中抗胆碱受体(NAChR)抗体浓度与症状严重度间的关系仍有争议,应用MG模型评价药物的疗效报告极少。本文以简便可靠的方法从我国丁氏双鳍电鳐电器官中分离纯化受体膜微囊,成批免疫家兔,造成MG模型,研究病理变化,并报告我国首次从石杉科植物提取的新类型胆碱酯酶抑制剂福定碱的疗效。     

抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7诱导实验性重症肌无力

目的:探讨抗乙酰胆碱受体单克隆抗体A7(Anti-AChR mAbA7)对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的作用.方法:Lewis大鼠腹腔注射5ml 20倍浓缩的含Anti-AChR mAbA7培养上清液,建立EAMG被动转移模型.对照组腹腔注射同体积的PBS.每8 h监测体重和临床症状评分.48h后处死实验动物.用放射免疫法检测AChR,并计算出AChR的损失率.结果:Anti-AChR mAbA7诱导的EAMG模型AChR损失率高,为24.3%～45.2%.而且AChR损失率与临床症状评分相关(r=0.74,P＜0.01).Anti-AChR mAbA7攻击的位点在终板的AChR上.结论:Anti-AChR mAb A7可用作诱导EAMG模型而应用于重症肌无力的研究.     

鼻腔AChR耐受低调EAMG大鼠特异性T淋巴细胞反应

用乙酰胆碱受体(AChR)加完全弗氏佐剂(CFA)免疫前,鼻腔给予大鼠AChR可有效地预防实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)。本文结果表明,与非耐受对照组相比,鼻腔AChR耐受组免疫后,腘窝、腹股沟淋巴结(PILN)的单个核细胞(MNC)AChR特异的淋巴细胞增生反应受到明显抑制,鼻腔耐受组PILN中AChR特异的CD4~+/CD8~-克隆增生亦明显受抑制,差异均有显著性。此外,鼻腔耐受组AChR特异性皮肤迟发型过敏反应(DTH)也显著降低。提示鼻腔AChR耐受后引起的特异性T淋巴细胞反应的低调可能是临床肌无力抑制的基础。     

Investigation on the Mechanism of Exacerbation of Myasthenia Gravis by Aminoglycoside Antibiotics in Mouse Model

Myasthenia gravis ( MG) is an autoi mmuneneuromuscular disease caused by the autoi mmuneresponse of lymphocytes tothe acetylcholine recep-tor (AChR)[1]. Autoantibodies against AChR playan i mportant role in the pathogenesis of the dis-ease . The therapy of MG patients with antibioticsis needed because it is very easy for these patientsto suffer the infections , especially respiratory in-fections[2]. However ,some kinds of antibiotics canaggravate the obstruction of neuromuscular junc-tion …     

重症肌无力中枢损害脾脏改变及细胞凋亡相关蛋白表达

目的 :探讨在重症肌无力 (MG)中枢损害模型中脾脏变化和细胞凋亡相关蛋白改变及其意义 .方法 :分别将自MG患者血中提取的IgG和健康人血中提取的IgG注入大鼠脑室系统 ,建立大鼠MG模型和健康对照组模型 ,一组大鼠不予任何处理作为空白对照组 .脾常规HE染色 ,并用免疫细胞化学方法观察FasL和Bag 1在脾脏中的表达 .结果 :模型大鼠表现出类似实验性自身免疫性重症肌无力 (EAMG)动物模型样症状 .在MG组脾脏淋巴细胞增生明显 ,淋巴小结及生发中心数目增多 ,Bag 1抗原阳性细胞弥漫分布于白、红髓区 ,FasL仅偶见或无 .在健康对照组脾脏中可散见Bag 1和FasL表达 (P <0 .0 5 ) ,两种对照模型镜下改变相似 .结论 :脑室注射抗神经肌接头 (NMJ)处的AchRab能够同中枢神经系统的AchR结合 ,引起外周免疫的变化 ,脾淋巴细胞增生 ,Bag 1表达增加 ,Fas/FasL表达受抑制 .这些可能导致EAMG脾脏中激活免疫细胞的正常凋亡过程抑制 ,并参与MG病变进展     

实验性重症肌无力动物模型的建立

从牛骨骼肌中提取乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲ），经用１２５Ｉ标记α银环蛇神经毒素（α Ｂｇｔ）鉴定受体活性良好。用ＡｃｈＲ免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠建立实验性自身免疫性重症肌无力（ＥＡＭＧ）模型。与对照组比较，小鼠在临床表现、肌电图衰减效应、血清中抗ＡｃｈＲ抗体和脾细胞对ＡｃｈＲ增殖反应检测中，均出现明显的阳性标志。ＥＡＭＧ动物模型的建立为进一步探索重症肌无力（ＭＧ）免疫发病机制和药物防治研究奠定基础     

Suppression of experimental autoimmune myasthenia gravis by nasal administration of acetylcholine receptor

Experimental autoimmune myasthenia gravis (EAMG) is a well established animal model, which can be induced in various animal species and strains with acetylcholine receptor (AChR) and represents an experimental counterpart of human myasthenia gravis (MG). Current im-munotherapies to both EAMG and MG are non specific and limited by their toxicity. Recently, toler-ance to EAMG has been achieved by oral administration of milligram quantities of Torpedo AChR. In the present report we demonstrate that nasal administration of microgram doses of Torpedo AChR to female Lewis rats prior to immunization with Torpedo AChR and complete Freund's adjuvant resulted in the prevention of subsequently induced EAMG, the suppression of serum anti - AChR antibody levels, the decrease of delayed -type hyersensitjvity responses to AChR, as well as the suppression of AChR -specific IgG secreting cells, AChR -reactive IFN -r secreting cells and T cell proliferation in peripheral lymphoid organs, particularly in popliteal and ing     

受体相关蛋白对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠乙酰胆碱受体的作用

目的：探讨受体相关蛋白(Bapesyn)对实验性自身免度性重症肌无力(EAMG)动物终板乙酰胆碱受体的作用。方法：用基因工程的方法制备提取pcDNA-Rapsyn，并将其注入动物肌肉左大腿外侧，右大腿相应部位注射相同剂量的空白质粒(Vector)以方波刺激使其进入细胞膜内，2w后用单克隆抗体35（mAb35)诱导出EAMG模型并进行症状评估,mAb3S诱导48h后取双大腿外侧肌，用放射免疫法检测AChR，并计算出AChR的损失率。结果：在EAMG模型中，被pcDNA-Rapsyn预处理的肌肉从AChR损失率明显低于未经处理的肌肉。结论：Bapsyn蛋白对EAMG模型的AChR有保护作用。     

诱导EAMG耐受性机制初探

目的：探讨鼻腔耐受和Ｗｉａｔａｒ大鼠对ＥＡＭＧ耐受的机理。方法：「＾３Ｈ」ＴｄＲ掺入和酶联免疫斑点法。结果：免疫后第３、５、７周ＥＡＭＧ大鼠Ｇｕｏ窝和腹股沟淋巴结（ＰＩＬＮ）中ＡＣｈＲ特异的淋巴细包增生反应（ＬＰＲ）刺激指数比鼻腔耐受大鼠高,第７周比Ｗｉｓｔａｒ大鼠高（Ｐ〈０．０５）。免疫后第５、７周ＥＡＭＧ大鼠ＰＩＬＮ中ＡＣｈＲ反应性γ干扰素分泌细胞数比鼻腔耐受大鼠和Ｗｉｓｔａｒ大鼠高（Ｐ〈０．     

“温阳补气”针法对EAMG大鼠神经肌肉接头处AchR蛋白表达的影响

目的: 探讨"温阳补气"针法对实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠腓肠肌神经肌肉接头(NMJ)处乙酰胆碱受体(AchR)蛋白表达水平的影响,阐明针灸治疗重症肌无力(MG)的作用机制。方法: 采用AchR α1129-145多肽片段免疫接种Lewis雌性大鼠,建立EAMG大鼠模型。在建模成功的EAMG大鼠中随机选取30只,分为模型对照组10只、药物对照组10只和针刺治疗组10只,并将同期购进的未建模的10只大鼠设为空白对照组。药物对照组大鼠予以18.5 mg·kg^-1·d^-1溴吡斯的明灌胃治疗;针刺治疗组大鼠予以"温阳补气"针法治疗;其余2组不予任何处置作为对照。记录治疗前后各组大鼠Lennon症状评分。治疗结束后,取4组大鼠腓肠肌NMJ处组织,采用Western blotting法检测各组大鼠NMJ处AchR蛋白表达水平。结果: 与空白对照组比较,建模成功后治疗前模型对照组、药物对照组和针刺治疗组大鼠Lennon症状评分明显升高(P<0.01);与模型对照组比较,经过2个疗程治疗后药物对照组和针刺治疗组大鼠Lennon症状评分均明显降低(P<0.01);与空白对照组比较,模型对照组大鼠腓肠肌NMJ处AchR蛋白表达水平明显降低(P<0.01);与模型对照组比较,治疗后针刺治疗组和药物对照组EAMG大鼠腓肠肌NMJ处AchR蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论: "温阳补气"针法可以提高EAMG大鼠NMJ处AchR蛋白表达水平,发挥治疗EAMG的作用。     

重症肌无力重复神经电刺激检测的比较研究

目的比较肘肌、三角肌、小指展肌重复神经电刺激（RNS）对重症肌无力（MG）的诊断价值。方法应用低频RNS技术对18例MG患者的肘肌、三角肌、小指展肌进行疲劳前后的检测,用DANTECounterpoint肌电图仪记录。结果对照组肘肌、三角肌、小指展肌疲劳前RNS电压分别降低了1．54％±1．32％、1．64％±1．43％、0．62％±0．38％;疲劳后RNS电压分别降低了2．01％±1．75％、2．05％±1．98％、1．02％±0．75％。MG组肘肌、三角肌、小指展肌疲劳前测试阳性分别为9／18（50％）、10／18（55．6％）、3／18（16．7％）（P均＜0．05）;疲劳后RNS测试阳性分别为15／18（83．3％）、14／18（77．8％）、6／18（33．3％）（P均＜0．05）。经卡方检验,肘肌疲劳前后RNS测试阳性率有显著性差异（P＜0．05）。小指展肌、三角肌疲劳前后RNS测试阳性率对比无显著性差异。结论MG患者肘肌疲劳后RNS阳性率较疲劳前明显增高,而三角肌、小指展肌疲劳前后RNS阳性率无显著性差异;肘肌、三角肌RNS测试较小指展肌更敏感,但肘肌RNS方法简便,病人不适程度轻,有较大的临床实用价值。