基因工程FR-008/杀念菌素脱羧衍生物发酵过程优化

以组合生物合成技术得到的基因工程FR-008／杀念菌素脱羧衍生物CS103为研究对象，在摇瓶水平进行培养条件的初步优化。确定了接种量、接种时间、发酵过程pH、装液量等初步条件。对3.7L发酵罐水平的培养条件进行优化，确定了最适搅拌转速和通气量，并初步建立了补料分批发酵工艺。结果表明，接种时间30h、接种量为10％、控制pH6.5-7.0、搅拌转速450r／min、通气量200L／h，发酵过程维持发酵液残余葡萄糖浓度5g／L左右，在3.7L发酵罐基因工程FR-008／杀念菌素脱羧衍生物CS103产量达到99.87μg／ml。本研究为基因工程FR-008／杀念菌素工业化生产工艺提供了依据。     

基于响应面法对红色诺卡氏菌发酵条件的优化及其发酵动力学研究

采用响应面法(RSM)对抗肿瘤药物注射用红色诺卡氏菌细胞壁骨架生产菌——红色诺卡氏菌在5 L发酵罐中的发酵条件(搅拌转速、通气量、接种量)进行优化。当搅拌转速、通气量、接种量分别为307 r/min,3.1 L/min,9.2%时,预测的菌体最大生物量为79.91 g,实际生物量为80.22 g。结果表明,在红色诺卡氏菌5 L罐发酵条件优化方面,响应面法是可行的。在此基础上,对红色诺卡氏菌分批发酵的动力学进行了研究,用Logistic和Boltamann函数建立了红色诺卡氏菌发酵过程中菌体生长、底物消耗随时间变化的数学模型,并用Origin 8.0软件对实验值和模型拟合值进行比较,两者能较好的吻合。说明所建动力学模型能较好反映红色诺卡氏菌的分批发酵过程,这为工业补料-分批发酵及其放大提供了理论依据。     

细胞稀释工艺转化甾体11β-羟基的研究

以相等溶氧速率系数KLa为基础将甾体11β－羟基细胞稀释转化工艺由250ml摇瓶放大到2L、10L发酵罐。通过对通风量、接种量、种龄等发酵参数的研究，确定了细胞稀释转化工艺条件。在10L发酵罐上，转化工艺为二级工艺，发酵温度为28℃，二级种子接种量15％，缺压0．04－0．05MPa，搅拌转速180－200r/min，通风量7L/min，稀释比1：1，转化周期24h，氢化可的松转化率74％－77％。测定了转化过程中底物和主产物β体的含量变化。     

响应面法优化链霉菌HY6-S36产星孢菌素的发酵条件

摘要：目的 优化链霉菌HY6-S36产星孢菌素的发酵条件,以提高星孢菌素的产量。方法 在单因素试验的基础上通过 Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验、Box-benhnken(BB)响应面法优化发酵条件。结果 优化后,最佳培养条件为麦芽糊精 69.8g/L,豆粉49.6g/L,烟酸0.5g/L,碳酸钙4.0g/L,转速200r/min,pH7.2,装液量30mL/250mL,接种量5%,温度28℃,发酵 时间7d,摇瓶产量为996mg/L。经50L发酵罐放大培养,发酵效价达1063mg/L。结论 在此优化条件下,星孢菌素的摇瓶产量 提高了177%。     

裂殖壶菌可溶性蛋白的提取及双向电泳方法的建立

裂殖壶菌Schizochytrium是目前用于商业化生产DHA的高产菌株之一。研究比对了多种裂殖壶菌可溶性蛋白的提取方法及纯化方式,并对IPG胶条的pH范围、胶条长度等双向电泳条件进行了优化。结果表明,裂殖壶菌可溶性蛋白的制备采用玻璃珠破碎结合TCA/丙酮沉淀的方法,并采用长度为24 cm,pH 3～10的IPG胶条进行等电聚焦效果最佳。并利用此电泳体系初步分析了37℃高温培养对裂殖壶菌可溶性蛋白表达的影响。     

重组胰岛素样生长因子-Ⅰ基因T程菌的发酵研究

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因工程菌的摇瓶及发酵罐培养的一些发酵参数、诱导阶段的补料基质及诱导剂浓度对IGF-Ⅰ表达的影响.方法通过摇瓶培养和分批及补料分批发酵培养进行研究.结果在摇床转速为150、200、250 r/min条件下测得以葡萄糖为基准的Y△x/△ s分别为0.203、0.27、0.33干细胞产量分别为0.54、0.765、1.0g/L.平均生长速率分别为0.034、0.048、0.066 g/(L.h).细胞对数生长期分别为6、7 5、10h发酵罐上生物量由分批发酵的18(A600nm)提高到补料分批发酵的35(A600nm),表达量占细胞可溶性总蛋白质的10%.结论后期供纯氧与补料能延长对数生长期,提高乳糖浓度和诱导前用甘油作碳源有利于IGF-Ⅰ表达     

重组胰岛素样生长因子—I基因工程菌的发酵研究

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因工程菌的摇瓶及发酵罐培养的一些发酵参数、诱导阶段的补料基质及诱导剂浓度对IGF-Ⅰ表达的影响.方法通过摇瓶培养和分批及补料分批发酵培养进行研究.结果在摇床转速为150、200、250 r/min条件下测得以葡萄糖为基准的Y△x/△ s分别为0.203、0.27、0.33干细胞产量分别为0.54、0.765、1.0g/L.平均生长速率分别为0.034、0.048、0.066 g/(L.h).细胞对数生长期分别为6、7 5、10h发酵罐上生物量由分批发酵的18(A600nm)提高到补料分批发酵的35(A600nm),表达量占细胞可溶性总蛋白质的10%.结论后期供纯氧与补料能延长对数生长期,提高乳糖浓度和诱导前用甘油作碳源有利于IGF-Ⅰ表达     

克拉维酸发酵工艺的优化研究

以棒状链霉菌 CA- 0 3- F2 为出发菌 ,进行克拉维酸发酵工艺的优化研究 ,结果表明在控制培养温度 2 8℃ ,搅拌转速 4 0 0 r/ min,罐压 0 .0 5 Mpa,空气流量 0 .5 vvm,保证溶氧浓度 4 0 %以上以及适当控制培养基中各成分含量的情况下 ,发酵效价可从 2 14 0 μg/ ml提高到 3132 μg/ ml     

搅拌式生物反应器悬浮培养水母雪莲细胞的研究(摘要)

应用 2L通气搅拌式生物反应器一步批式培养水母雪莲细胞。实验采用大直径 4片倾斜式搅拌浆和低搅拌速率70rpm及 0 4～ 0 6vvm的通气量 ,培养结束细胞干重达 1 3 8gDW/L ,黄酮产量 4 1 6mg/L ,黄酮含量占细胞干重的 2 9%。水母雪莲细胞生长及黄酮合成的进程表明 ,黄酮积累与细胞生长是正相关 ,结果还表明反应器内的接种量在 4 0～5 0DW/L之间可以达到较高的产量。对细胞聚集体随时间分布的研究发现 ,反应结束后 0 5～ 1mm的聚集体含量显著增加。流变压力使细胞聚集体分裂 ,在一定程度上使反应器中细胞生长受到影响 ,黄酮产量较摇瓶中降低。     

人凝血因子Ⅷ生产冷沉淀制备工艺的优化

目的：通过优化冷沉淀制备过程中的工艺条件,获得最佳的人凝血因子Ⅷ生产用冷沉淀的制备工艺。方法主要对溶解过程中的夹层循环水温度、搅拌转速和离心过程中的离心机转速、出液温度和进液速度等影响因素进行考察,以人凝血因子Ⅷ效价为衡量指标进行研究。结果通过该试验研究,获得的最佳制备工艺为：循环水温度大于25～30℃,搅拌转速100 r/min,离心机转速14000 r/min,出液温度0～2℃,每台进液速度为3 kg/min。结论通过该试验研究,获得了最佳的人凝血因子Ⅷ生产用冷沉淀的制备工艺,为提高人凝血因子Ⅷ的质量和产量奠定了基础。