烯醇化酶抑制剂对大鼠脊髓损伤后自噬及运动功能的影响

目的探讨烯醇化酶(Enolase)抑制剂(ENOblock)对大鼠脊髓损伤后调控自噬相关蛋白表达及促进运动功能的影响。方法选取160只雌性SD大鼠, 按照随机数字表法分为假手术组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)自噬抑制剂处理组(3-MA组)、脊髓损伤组及ENOblock处理组(ENOblock组), 每组40只。假手术组行背部椎板切除, 但不损伤脊髓。3-MA组、脊髓损伤组和ENOblock组采用改良Allen法打击装置损伤T8脊髓, 建立脊髓损伤模型。3-MA组和ENOblock组分别在伤后立即向鼠尾静脉推注3-MA(2.5 mg/kg)和ENOblock(100 μg/kg)。假手术组和脊髓损伤组向鼠尾静脉推注等剂量的等渗氯化钠溶液。伤后1, 3, 7, 14, 21 d采用BBB评分评估各组双下肢运动功能。伤后3 d采用免疫印迹法检测各组微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ和LC3-Ⅰ比值、自噬效应蛋白(Beclin-1)和多泛素结合蛋白(p62)的表达量。伤后7 d采用免疫荧光法检测各组脊髓组织损伤区域LC3-Ⅱ和Beclin-1的阳性细胞。伤后3 d 采用RT-PCR检测各组脊髓组...     

电离辐射诱导乳腺癌细胞自噬相关基因DRAM表达的研究

目的 研究电离辐射对乳腺癌细胞株MCF-7自噬相关基因DRAM表达变化的影响.方法 采用GFP-LC3转染法检测自噬泡,实时荧光定量PCR方法检测DRAM基因表达,Western blot方法检测LC3和DRAM蛋白的表达,采用磷酸钙共转染法构建DRAM沉默细胞模型.结果 与假照组相比,8 GyX射线照射后细胞中GFP-LC3表达升高;时间-效应关系表明,在8 Gy照射后,自噬溶酶体蛋白LC3表达在2、4、8、16、24和32 h上升变化显著,各组均高于假照组(F=5.38、8.72、10.63、15.23、20.78和55.23,P＜0.05);DRAM蛋白表达在8 Gy照射后以时间依赖性增加,从2h开始上升,32 h达至最高值(F=116.34,P＜0.05).DRAM沉默细胞模型组中LC3和DRAM蛋白的表达明显低于假照组(F=20.36和40.35,P＜0.05);对DRAM沉默细胞模型组进行8 Gy照射后,DRAM蛋白表达与假照组相比虽有所增加,但仍低于8 Gy照射组;DRAM沉默细胞模型组LC3蛋白的表达也低于照射组,沉默前后差异均有统计学意义(F=50.34,P＜0.05).结论 X射线可能通过激活DRAM基因来促进乳腺癌细胞株MCF-7发生自噬.     

自噬对持续性正加速度暴露大鼠Beclin-1、LC3-Ⅱ表达水平及学习记忆、行为能力影响研究

目的探讨自噬对持续性正加速度(+Gz)暴露大鼠Beclin-1、LC3-Ⅱ表达水平及学习记忆、行为能力的影响。方法选取30只体质量180～200 g的雄性SD大鼠,按体质量配对原则将大鼠随机分为对照组(CON组)、+10 Gz/3 min暴露后即刻组(+10 Gz/3 min组)、+10 Gz/3 min暴露后1 d组(+10 Gz/3 min 1 d组)、+10 Gz/3 min+3-MA组、+10 Gz/3 min 1 d+3-MA组,每组各6只。采用免疫蛋白印迹和逆转录-聚合酶链反应法检测脑组织自噬相关基因Beclin-1、LC3-Ⅱ的蛋白表达水平和mRNA相对表达量,通过行为学实验观察大鼠学习记忆能力和行为能力的变化,同时观察自噬抑制剂3-MA的干预作用。结果 +10 Gz/3 min组、+10 Gz/3 min 1 d组Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达水平、mRNA相对表达量均高于CON组、+10 Gz/3 min+3-MA组、+10 Gz/3 min 1 d+3-MA组,差异有统计学意义(P<0.05);+10 Gz/3 min 1 d组LC3-Ⅱ蛋白表达水平低于+10 Gz/3 min组,+10 Gz/3 min 1 d组Beclin-1、LC3-ⅡmRNA相对表达量低于+10 Gz/3 min组,差异有统计学意义(P<0.05)。+10 Gz/3 min组、+10 Gz/3 min 1 d组正确反应次数、总得分少于CON组、+10 Gz/3 min+3-MA组、+10 Gz/3 min 1 d+3-MA组,且+10 Gz/3 min组少于+10 Gz/3 min 1 d组,差异有统计学意义(P<0.05);+10 Gz/3 min组、+10 Gz/3 min 1 d组总反应时间、中央格停留时间长于CON组、+10 Gz/3 min+3-MA组、+10 Gz/3 min 1 d+3-MA组,且+10 Gz/3 min组长于+10 Gz/3 min 1 d组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑自噬活动增强会对+Gz暴露大鼠学习记忆及行为能力造成损伤,而抑制自噬可显著改善病情。     

不同负荷运动训练对慢性心力衰竭大鼠心功能及自噬相关蛋白表达的影响

目的:研究不同负荷运动对慢性心力衰竭大鼠心功能及心肌细胞自噬相关蛋白表达的影响,探讨运动训练对心力衰竭后心肌的保护机制。方法:采用健康SD大鼠40只,左冠状动脉前降支(LAD)结扎法制作心肌梗死后心力衰竭模型。术后4周,12导联心电图检测有6～8个Q波、且超声心动检查左心室射血分数(EF)30%～50%的模型大鼠入选后续实验。共有32只大鼠入选,随机分为模型对照组(C+LAD组)、模型低强度运动训练组(LE+LAD组)、模型中等强度运动训练组(ME+LAD组)、模型高强度运动训练组(HE+LAD组),每组8只,分别进行不同强度运动训练。训练8周后,应用超声心动和Western-blot法分别检测模型各组大鼠的心功能和心肌细胞自噬相关蛋白雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、自噬相关蛋白LC3B的表达情况。结果:与C+LAD组比较,不同强度运动训练组大鼠左心室射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)值均有不同程度升高,以ME+LAD组升高程度最为显著(P<0.01)。与LE+LAD组相比,ME+LAD组和HE+LAD组大鼠心肌组织p-mTOR表达降低、LC3...     

相同剂量分割照射与单次照射对小鼠放射性心脏损伤的影响

目的 探索相同剂量分割照射与单次照射对小鼠放射性心脏损伤的影响。方法 野生型C57BL/6J小鼠21只,随机分为正常对照组、分割照射组和单次照射组。采用18 Gy X射线,对小鼠心脏分别进行分割(3 Gy/次,6次)和单次照射,建立放射性心脏损伤模型。照射后7和28 d通过全自动生化分析仪检测小鼠心肌酶损伤标志物肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶MB(CK?MB)、乳酸脱氢酶(LDH)和LDH1,以及外周血清离子(K⁺、Ca²⁺、Fe²⁺和Cl^-)的浓度;照射后28 d检测小鼠心脏功能,记录并分析左心室射血分数(EF)、左心室短轴缩短率(FS)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室质量(LV mass)和左心室收缩末期容积(LVESV)的变化;激光共聚焦显微镜观察心肌细胞线粒体膜通道孔(mPTP)开放和线粒体膜电位的改变;透射电镜观察心肌超微结构;Masson染色观察心肌纤维化;油红染色观察主动脉粥样硬化;实时定量PCR(RT?qPCR)和Western印迹检测凋亡相关基因与蛋白B细胞淋巴瘤?2相...     

左旋肉碱对顺铂损伤大鼠肾超微结构的影响

目的：观察左旋肉碱（LC）对顺铂损伤大鼠肾病理和超微结构的影响。方法：将36只成年雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组（Control组）,化疗模型组（DDP组）,干预组（LC＋DDP组）。Control组和DDP组给予常规饲料,LC＋DDP组给予常规饲料＋1％LC。喂饲7d后,DDP组和Lc＋DDP组腹腔注射顺铂（5mg／kg）,Control组腹腔注射生理盐水。注射4d后,取标本,光镜和透射电镜下观察大鼠肾脏形态结构改变。结果：病理切片显示,DDP组肾小球结构尚完整,近曲小管上皮细胞有变性、坏死,肾小管出现蛋白管型;而LC＋DDP组肾脏病理结构明显改善。超微结构观察,DDP组近曲小管上皮细胞线粒体高度肿胀,嵴断裂缺失,部分呈空泡变性,部分崩解;而Lc＋DDP组这些损害轻微。结论：预防性喂饲LC能对顺铂损伤大鼠肾病理和超微结构产生一定的保护作用。     

60Coγ射线心脏局部照射对大鼠离体心脏功能的影响

目的 研究γ射线心脏局部照射对大鼠心脏血流灌注及功能的影响,为放射性心脏损伤的防治提供实验依据.方法 12只Wistar雌性大鼠随机分为未照射组、照射组,每组6只,照射组行60Co γ射线20Gy单剂量照射,每日观察大鼠饮食、行为活动等变化,定期记录大鼠体重变化.照射后120天用超声心肌造影检测大鼠心肌血流灌注变化.照射后180天分离大鼠心脏,采用Langendorff离体心脏灌流法测定左室收缩压(LVSP)和左室内压力变化速率(dp/dtmax、dp/dtmin),并取大鼠心脏进行病理检查,用HE染色观察心肌组织病理变化.结果 照射后180天大鼠的饮食、行为、精神状态无可评价的异常变化,组间动物体重增加无明显差异.照射组大鼠心肌微循环灌注较未照射组明显减低.大鼠离体心脏功能检测示照射组大鼠LVSP、dp/dtmax、dp/dtmin均较未照射组明显减低.心肌组织HE染色显示照射组心肌细胞变性坏死、心肌纤维化.结论 γ射线心脏局部照射可致心肌血流灌注降低,导致心脏功能下降.     

还原型辅酶Ⅰ(NADH)拮抗阿霉素心肌线粒体毒性的机制

为探讨还原型辅酶Ⅰ（NADH）对阿霉素（Dox）心肌线粒体毒性的拮抗作用及其机制，建立原代培养的乳鼠心肌细胞和SD大鼠心肌受阿霉损伤的模型，采用MTT比色法、激光共聚焦显微镜、透射电镜和生物氧耗电极检测器检测线粒体形态和功能改变。结果显示，Dox组心肌细胞杀伤率增高，而NADH／Dox组心肌细胞杀伤作用明显下降，Dox诱发的心肌细胞线粒体结构损害表现为肿胀、裂解、嵴断裂直至溶解，加入NADH后线粒体结构明显得到保护，Dox组和NADH／Dox组MMP和ROS荧光强度有显著性差异,Dox可明显损害线粒体氧化磷酸化功能，Dox组与NADH／Dox组S3值、RCI值和ADP／O值比较，两者差异有显著性意义。提示NADH能够明显拮抗Dox所致的心肌线粒体毒性损伤作用，对线粒体结构和功能起保护作用。     

低氧耐力运动对营养性肥胖大鼠骨骼肌自噬蛋白表达的影响

目的:通过对高脂膳食诱导的营养性肥胖大鼠模型进行低氧耐力训练,探讨不同低氧浓度的耐力运动对营养性肥胖大鼠骨骼肌自噬相关蛋白LC3、Beclin1、AMPKα2、Sestrin2表达的影响。方法:80只建模成功的营养性肥胖大鼠随机分为8组(常氧安静组、常氧运动组、11.3%组、13.3%组分别在11.3%、13.3%、16.3%静组不进行任何干预,运动组按照20 m/min、40 min/d、5次/周的安排训练8周,末次训练24 h后处死大鼠取腓肠肌,采用Western Blot方法测定腓肠肌自噬相关蛋白LC3(微管相关蛋白1轻链3)、Beclin1(酵母ATG6同源物)、AMPKα2、Sestrin2的表达水平。结果:(1)实施低氧暴露干预后,11.3%低氧组、13.3%低氧组大鼠腓肠肌自噬相关蛋白Beclin1、AMPKα2、Sestrin2表达及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著高于常氧组(P<0.05)。(2)实施耐力运动干预后,与对应安静组相比,运动组Beclin1、AMPKα2表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著性升高(P<0.05);常氧运动组、16.3%低氧运动组、11.3%表达水平显著性升高(P<0.05)。(3)低氧结合耐力运动干预后,与常氧安静组相比,常氧运动组、16.3%低低氧运动组Sestrin2、Beclin1、AMPKα2蛋白表达显著性升高(P<0.低氧运动组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著性升高(P<0.05),低氧运动组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著性升高(P<0.05);且随氧浓度降低,Beclin1、AMPKα2、Sestrin2表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值呈现上升趋势。结论:运动和低氧都能显著激活骨骼肌细胞自噬,上调骨骼肌自噬相关蛋白的表达水平;与单纯运动和单纯低氧相比,低氧耐力训练对自噬的调控作用更加明显。     

不同水平急性+Gz暴露对大鼠心肌超微结构的影响

目的 研究不同水平急性 Gz暴露对大鼠心肌超微结构的影响,为进一步完善高性能战斗机飞行员抗荷措施提供实验依据。方法 20只雄性Wistar大鼠随机分为4组(n=5)：正常对照组、 20Gz组、 10Gz组和 5Gz组。采用梯形加速度曲线, 20Gz暴露30S, 10Gz暴露1.5min, 5Gz暴露1．5min并间隔30min重复3次。暴露后5h取左心室心肌组织常规透射电镜观察。结果 20Gz和 10Gz暴露均可造成明显的心肌细胞和血管内皮细胞水肿,肌原纤维排列疏松,线粒体和细胞核损伤。 20Gz暴露还可造成部分心肌纤维断裂、收缩带形成和线粒体膜破裂。 5Gz重复暴露也造成心肌细胞和血管内皮细胞轻度水肿,但未见心肌超微结构器质性损伤。结论 高 Gz暴露可造成大鼠心肌超微结构损伤,中等强度 Gz反复暴露心肌细胞也可出现轻度可逆性损伤反应,提示应重视高 Gz暴露对飞行员心脏影响的研究和防护。     

直线加速器小剂量X线照射对BALB/c小鼠T细胞亚群影响的动态观察研究

目的：观察小剂量X线照射对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。方法：小鼠按实验分组经直线加速器2和3 Gy X线照射,流式细胞仪动态测定T细胞亚群变化。结果：照射后,小鼠外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋细胞呈进行性降低,至第3、4周出现逐渐恢复迹象,4、5周后恢复正常。在同一时间,3 Gy较2 Gy照射所导致的细胞亚群降低的程度更为明显（P〈0.05）。结论：BALB/c小鼠经照射后T细胞亚群下降明显,4~5周后恢复正常。     

电离辐射联合自噬和凋亡抑制剂或诱导剂对MCF7细胞的影响

目的 探讨电离辐射联合自噬抑制剂、诱导剂和凋亡抑制剂对MCF7细胞自噬和凋亡的影响。方法 MCF7细胞经0 Gy、4 Gy、4 Gy+rapamycin、4 Gy+3-MA、4 Gy+z-VAD-fmk不同方法处理后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞的生长倍增时间;采用Western blot检测MCF7细胞经不同方法处理后自噬特异蛋白LC3和beclin1的表达,并比较蛋白表达量的差异;流式细胞仪(FCM)检测不同处理方法MCF7细胞凋亡百分率。结果 经4 Gy照射后,MCF7细胞生长倍增时间明显长于未经照射的细胞生长倍增时间(t= 4.41,P<0.05);而4 Gy+rapamycin处理后,明显长于单纯4 Gy照射组(t= 4.35, P<0.05);经4 Gy + 3-MA和4 Gy+z-VAD-fmk处理后,均明显短于4 Gy+rapamycin组 (t= 4.32, P<0.05)。Western blot检测结果表明,Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达4 Gy+rapamycin组为最高,4 Gy+3-MA组为最低,除4 Gy+3-MA组与4 Gy+z-VAD-fmk组比较差异无统计学意义外,其余各处理组间比较差异有统计学意义(t= 3.91~4.78, P<0.05)。结论 电离辐射联合自噬诱导剂可促进MCF7细胞凋亡;联合自噬抑制剂抑制自噬发生,进而延缓肿瘤细胞凋亡。     

别嘌呤醇对缺血再灌注心肌MMP-1的变化的影响

目的：研究缺血再灌注时的心肌MMP-1的表达变化及别嘌呤醇对其影响。方法：应用中国大白兔建立MI/R模型。设立：MI/R组、别嘌呤醇组、假手术组。用免疫组化法检测心肌中MMP-1的表达。用Maclab生理记录仪记录心功能变化。TBA法检测血液及心肌中MDA水平变化。结果：Sham组心肌MMP-1的表达极少。在缺血再灌注心肌中有MMP-1的表达,别嘌呤醇组较MI/R组明显减弱。心功能结果示再灌注4 h后MI/R组及别嘌呤醇组LVDP及±LVdp/dtmax均较SHAM组明显降低。但别嘌呤醇组LVDP及±dp/dtmax水平较I/R组高（P〈0.05）。MI/R组血液及心肌MDA水平高于别嘌呤醇组（P〈0.05）。结论：I/R后心肌中MMP-1的表达可能参与了再灌注损伤的过程。别嘌呤醇能抑制I/R时心肌MMP-1的表达并对心肌I/R损伤有保护作用。     

PI3K-Akt信号通路及β2-AR蛋白在外源性硫化氢后处理减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨外源性硫化氢后处理是否激活β2-AR受体减轻大鼠离体心肌缺血再灌注损伤。方法 70只雄性Sprague Dawley（SD）大鼠随机分为5组（n=14）：缺血/再灌注组（I/R）、硫化氢后处理组（N）、溶媒组（D）、LY294002组（L）、硫化氢后处理＋LY294002组（N＋L）。采用离体心脏Langendorff灌注模型,各组平衡灌注20min后,停灌40min,复灌60min。记录平衡末及灌注结束时的心率（HR）、左室内压上升最大速率（＋dp/dtmax）、左室内压下降最大速率（-dp/dtmax）、左室发展压（LVDP）、左室舒张末期压（LVEDP）、冠脉流量（CF）;灌注结束时,心肌HE染色观察心肌组织形态;Western blot测定β2-AR、Caspase-3、p-Akt和p-ERK的表达水平。结果 平衡末各组间心功能指标（基础值）差异无统计学意义（P〉0.05）。复灌60min时,与I/R组相比,N组能明显改善心功能各项指标（P〈0.05）,使心肌组织形态有改善,β2-AR、p-Akt和p-ERK表达水平升高,而活化的Caspase-3表达水平降低（P〈0.05）。LY294002逆转了硫化氢后处理改善心功能指标及升高p-Akt、pERK、β2-AR和降低Caspase-3表达水平的作用。结论 外源性硫化氢后处理通过激活PI3K-Akt信号通路和调节β2-AR受体蛋白的表达,参与离体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。     

早期运动训练对帕金森小鼠中脑和纹状体的影响:自噬与线粒体动力学关系的研究

目的:研究早期中等强度有氧运动训练对帕金森(PD)小鼠[注射MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶)]脑和纹状体自噬水平的影响,探讨其与线粒体呼吸功能和线粒体动力学改变之间的相互关系,进一步阐明运动训练对中脑和纹状体的神经保护作用机制。方法:雄性C57BL/6小鼠(6～8周龄),随机分为安静+生理盐水组(N)、运动+生理盐水组(NE)、安静+MPTP组(M)、早期运动训练+MPTP组(ME)4组,每组15只。。运动组进行连续6周、每周6天、每天20分钟、12米/分(75%VO2max)的跑台训练。训练结束后第1天,M组和ME组注射中等剂量MPTP(30 mg/kg×2次,ip,间隔16小时),N组和NE组在相同时间、以相同方式注射同等剂量的生理盐水。造模后第7天检测中脑和纹状体线粒体功能(态3呼吸、态4呼吸、RCR),ATP酶合成活力,脑自噬相关蛋白(Beclin1、LC3)和线粒体分裂相关蛋白(Fis1、Drp1)mRNA,以及Beclin 1、LC3-II、Fis1和Drp1蛋白表达等指标。结果:(1)与N组比较,M组小鼠中脑和纹状体线粒体态3呼吸、RCR和ATP酶合成活力显著下降(P<0.01);与M组相比,ME组小鼠线粒态3呼吸、RCR和ATP酶合成活力显著升高(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。(2)与N组相比,NE组Beclin 1、LC3基因表达显著增多(P<0.01),Beclin1蛋白含量显著增多(P<0.01),LC3-II蛋白变化无显著性差异;与M组相比,ME组Beclin 1、LC3基因表达显著增多(P<0.01),蛋白表达显著增多(P<0.05)。(3)与N组比较,NE组Fis1基因和蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01),Drp1基因和蛋白变化无统计学意义(P>0.05);与M组相比,ME组Fis1基因和蛋白表达显著增加(P<0.01,P<0.05),Drp1基因和蛋白变化无统计学意义(P>0.05)。结论:(1)中等剂量MPTP可损害中脑和纹状体线粒体功能,使自噬水平代偿性增高。(2)早期运动训练可初步启动中脑和纹状体自噬;而当MPTP损害发生时,这一过程可及时调控线粒体分裂,促进自噬水平上调,进而改善中脑和纹状体线粒体功能,在运动防治帕金森病中发挥神经保护作用。     

G-CSF联合SB203580对4Gy照射小鼠免疫系统的作用

目的 研究G-CSF联合p38抑制剂SB203580 （SB）对免疫细胞辐射损伤的作用.方法 C57BL/6雄性小鼠按体质量随机分为对照组、照射组和给药组.照射组和给药组给予4 Gy全身照射.给药组小鼠给予腹腔注射G-CSF和SB,G-CSF于4Gy照射后2h和6h给药（1μg/只）,每天2次,连续给药5d,SB于照射后24h给药（15 mg/kg）,隔日给药,共给药5次.照射后10d测外周血计数,进行白细胞CD4、CD8、B220检测、胸腺细胞CD4、CD8检测和骨髓细胞活性氧检测.结果 照射组外周血计数和CD8、B220比例下降,而胸腺细胞中CD4＋CD8＋细胞比例及骨髓细胞活性氧水平显著增加.与照射组相比,联合给药组外周血红细胞数、血小板、CD4、CD8细胞比例升高,胸腺细胞中CD4＋CD8＋细胞比例下降.结论 G-CSF联合SB对4 Gy照射引起的免疫细胞损伤存在保护作用.     

^18F-FLT评价食管癌照射后早期生物学响应的实验研究

目的探讨^18F—FLT在评价食管癌细胞及其动物模型经X线照射后早期生物学响应中的应用价值。方法在体外以5、10和15Gyx线分别照射人食管癌细胞Eca-109,照射前及照射后2、4和8h检测细胞对^18F—FLT摄取率的变化、细胞相对存活率和ATP的表达情况。将24只荷食管癌裸鼠按随机数字表法分成4组：对照（未照射）组;10Gy照射后1、7及15d各1组,分别行^18F—FLT PET显像并测量肿瘤对^18F—FLT的摄取值（T／NT）的变化。显像后处死各组荷瘤裸鼠,取肿瘤组织,用免疫组织化学检测照射前、后瘤组织内细胞增殖核抗原（PCNA）及Ki67抗原的表达。组间差异比较用单因素方差分析及两独立样本t检验,数据间相关性分析用Pearson直线相关分析。结果照射前细胞对^18F-FLT摄取率为（4．00±0．42）％;经5、10、15Gy照射后2h分别下降至（3．65±0．41）％、（3．17±0．45）％和（2．53±0．28）％;照射后4h分别下降至（2．84±0．35）％、（2．58±0．39）％和（1．80±0．22）％;照射后8h分别下降至（2．71±0．23）％、（1．89±0．31）％和（1．44±0．20）％。与对照组比较,5、10、15q照射后2、4、8h,细胞相对存活率差异无统计学意义（F=4．02,P〉0．05）;ATP浓度下降明显,呈剂量依赖性。细胞受照后的^18F—FLT摄取率与ATP浓度呈正相关（r=0．89,P〈0．01）。^18F—FLTPET显像示裸鼠肿瘤呈高摄取,照射前T／NT为2．24±0．06,照射后1、7和15d分别下降至1．99±0．09、1．85±0．04和1．15±0．10。瘤组织对^18F-FLT的摄取值与PCNA、Ki67表达均呈正相关（r=0．83和0．88,均P〈0．01）。结论^18F—FLT在食管癌细胞及肿瘤内摄取的变化能较好地评价其照射后早期生物学响应,^18F—FLTPET有望用于监测食管癌照射后早期疗效。     

预缺氧对PC12细胞缺氧后细胞内游离Ca^2＋的影响

目的：建立PC12细胞预缺氧模型；观察预缺氧对PC12缺氧后细胞内游离Ca^2＋的影响。方法：PC12细胞分为对照组、缺氧组、预缺氧组。检测缺氧及预缺氧对PC12细胞LDH释放率的影响；采用荧光分光光度法，检测PC12细胞内游离Ca^2＋浓度和PC12细胞线粒体膜电位的变化。结果：①缺氧组LDH释放率和细胞内游离Ca^2＋浓度比对照组显著升高（P〈0．01），而线粒体膜电位显著低于对照组；②预缺氧组LDH释放率和细胞内游离Ca^2＋浓度显著低于缺氧组（P〈0．01），线粒体膜电位显著高于缺氧组。结论：预缺氧对PC12细胞的缺氧损伤具有保护作用，其机制可能与减轻缺氧时细胞内的游离Ca^2＋浓度与稳定线粒体膜电位有关。     

缺氧肠上皮细胞自噬的变化及意义

目的：研究缺氧条件下肠上皮细胞自噬的变化。方法将培养的人肠上皮细胞株Caco-2分为常氧处理组（正常对照组）及缺氧组,缺氧组细胞分别缺氧培养0.5、1、2、6、12及24h。采用蛋白质免疫印迹法检测自噬相关（Beclin1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）及P62蛋白表达,透射电子显微镜镜观察细胞自噬溶酶体变化,绿色荧光蛋白（GFP）-LC3B融合蛋白示踪肠上皮细胞自噬体形成的变化。结果与正常对照相比较,肠上皮细胞Beclin1和LC3的蛋白表达水平在缺氧0.5h即开始逐渐增加,12h达高峰,24h仍显著高于正常; P62蛋白表达则逐渐降低,24h降至最低;透射电镜下观察到缺氧后肠上皮细胞自噬溶酶体显著增多; GFP-LC3B融合蛋白示踪也显示缺氧后肠上皮细胞自噬体形成非常明显。结论缺氧后肠上皮细胞自噬作用显著增强,可能参与缺氧引起肠上皮细胞损害的调控。     

RNA干扰沉默p16基因对小鼠胚胎成纤维细胞衰老的影响

目的：探讨RNA干扰沉默小鼠p16基因表达对137Csγ射线诱导的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）衰老的影响。方法构建p16 RNA干扰载体,采用实时荧光定量PCR、Western blot和衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察RNA干扰前后辐射诱导衰老的MEF细胞mRNA水平、蛋白水平和衰老细胞百分率等的变化。结果辐射诱导衰老的MEF细胞RNA干扰后24 h,照射＋p16 siRNA-1和照射＋p16 siRNA-2组p16 mRNA 相对表达水平较照射组显著降低（t=16.52、16.13,P均〈0.05）,蛋白水平较照射组显著降低;干扰后5 d,照射＋p16 siRNA-1和照射＋p16 siRNA-2组SA-β-Gal染色阳性细胞百分比[（34.17±2.08）%和（33.83±1.75）%]明显低于照射组[（68.83±1.26）%]（t=37.72、38.09,P均〈0.01）。结论 RNA干扰沉默小鼠p16基因表达能够抑制MEF细胞的衰老,为其在细胞衰老相关研究中的应用奠定了基础。