视网膜抗原中MHC Ⅰ类分子H-2b限制性表位的鉴定

目的　利用合成的肽片段鉴定视网膜抗原中的ＭＨＣⅠ类分子Ｈ 2 ｂ 限制性表位。方法　首先利用计算机技术预测感光器间类视网膜结合蛋白 (Ｉｎ ｔｅｒｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒｒｅｔｉｎｏｉｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ,ＩＲＢＰ)、Ｓ 抗原 (Ｓｏｌｕｂｌｅｒｅｔｉｎａｌａｎｔｉｇｅｎ ,Ｓ Ａｇ) ,恢复蛋白 ,Ｐｈｏｓ ｄｕｃｉｎ和色素上皮细胞衍生因子 (Ｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ-ｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ,ＰＥＤＦ)中的ＭＨＣⅠ类分子Ｈ 2 ｂ限制性肽片段 ,随后用肽结合试验联合流式细胞仪分析选择的肽片段与Ｍ…     

大鼠MHC—Ⅰ类基因cDNA的克隆与鉴定

采用逆转录聚合酶链反应技术自ＳＤ大鼠肝细胞中克隆出全长１１２５个ｂＰ的编码主要组织相容性抗原Ⅰ类复合体分子ｃＤＮＡ。经限制性内酶图谱分析证实后,定向插入表达载体ｐＢＶ２２０,并筛选出带有插入片断的阳性克隆。为研究在原核或真核表达系统的表达,及其在抗原识别,免疫应答中的应用奠定了基础。     

苯肾上腺素对大鼠成骨细胞放射损伤的保护作用

目的:探讨苯肾上腺素对放射损伤大鼠成骨细胞的细胞形态以及烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)mRNA表达水平的影响,阐明苯肾上腺素对其可能的保护作用机制。方法:组织块法培养大鼠颅骨成骨细胞,随机分为空白对照组、苯肾上腺素组、单纯照射组和苯肾上腺素+照射组。苯肾上腺素组在照射前0.5 h以100 mmol·L^-1苯肾上腺素孵育成骨细胞,照射组给予成骨细胞8 Gy X射线照射。照射后8、16、32和64 h在倒置显微镜下观察并分别收集细胞,提取细胞总RNA,应用RT-PCR法检测成骨细胞Nampt mRNA表达水平。结果:倒置显微镜下,与空白对照组比较,苯肾上腺素组成骨细胞形态、数量未见明显改变;单纯照射组细胞形态发生明显皱缩,尤以8 h明显,细胞数量在8、16、32和64 h时分别是对照组的0.82、0.37、0.24和0.21倍;苯肾上腺素+照射组在照射8和16 h后细胞皱缩,32 h后其形态恢复,在8、16、32和64 h后其数量分别为空白对照组的0.91、0.83、0.72和0.75倍,是单纯照射组的1.09、2.24、3.00和3.60倍。RT-PCR法检测,在照射8、16、32和64 h后,单纯照射组、苯肾上腺素+照射组Nampt mRNA表达水平较空白组明显减少(P<0.01),苯肾上腺素+照射组较单纯照射组明显增加(P<0.01)。结论:苯肾上腺素可减轻电离辐射导致的大鼠成骨细胞萎缩,并上调Nampt mRNA表达水平,其对成骨细胞放射损伤的保护作用可能与上调Nampt mRNA表达水平有关。     

MHC Ⅰ类基因逆转录病毒表达载体的构建及其在造血细胞中的表达

目的构建BALB/c小鼠MHC Ⅰ类基因的逆转录病毒表达载体并探讨该基因在C57BL/6小鼠造血细胞中的表达.方法由逆转录病毒载体pMSCV介导,将BALB/c小鼠的H-2Dd基因导人C57BL/6小鼠的造血细胞中,并用逆转录聚合酶链反应和流式细胞仪检测转染后基因的表达.结果用EcoRⅠ和Xho Ⅰ双酶切鉴定证实,H2Dd基因正确插入载体pMSCV.重组逆转录病毒感染的C57BL/6小鼠造血细胞整合了BALB/c小鼠的H2Dd基因,且能转录为mRNA,在其细胞膜上有H2Dd分子的表达.结论成功构建小鼠H-2Dd编码基因的逆转录病毒载体,该基因已稳定地整合进C57BL/6小鼠造血细胞的基因组内,且在细胞中得到表达.     

卵巢癌细胞MHC—I类抗原表达与肿瘤微环境免疫 …

目的 探讨卵巢癌细胞ＭＨＣ－Ⅰ类分子表达与肿瘤微环境免疫活性细胞分布的关系,了解机体肿瘤微环境免疫功能状态。方法 用流式 细胞仪检测卵巢癌细胞ＭＨＣ－Ⅰ类分子表达,同时用免疫组化方法检测肿瘤微环境中ＬＣＡ＾＋、ＣＤ３＾＋细胞分布情况。结果卵巢癌细胞ＭＨＣ－Ⅰ类分了表达存在不同程度的下降或缺如,且与肿瘤微环境中ＬＣＡ＾＋、ＣＤ３＾＋细胞分布呈正相关,前者ｒ＝０．８４６,Ｐ＝０．０００１,后者ｒ＝０     

大鼠心脏放射损伤对内皮素-1和心肌肌钙蛋白Ⅰ表达水平的影响

目的观察SD大鼠心脏放射损伤时血清内皮素1（ET-1）和心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTn-Ⅰ）表达水平的变化,以及将ET-1和cTnⅠ作为放射性心肌损伤诊断指标的可行性。方法采用随机数字表法,将健康雌性SD大鼠30只分为对照组和照射组。照射组大鼠采用直线加速器心前区照射,单次剂量25 Gy。照射后第5、15、30、60天经下腔静脉取血5 ml,离心后取血清,采用ELISA试剂盒,分别测定血清ET-1和cTnⅠ含量。结果照射组大鼠血清ET-1含量均高于对照组,但只有在照射第5天和第15天时与对照组的差异有统计学意义（分别P〈0.01和0.05）。cTnⅠ的含量在照射后30 d内均高于对照组,而后下降,但只有照射后第15天（P〈0.05）和第30天（P〈0.01）时与对照组间的差异有统计学意义。结论大鼠心脏放射损伤的早期血清ET-1和cTnⅠ含量即明显升高,可将血清ET-1和cTnⅠ作为诊断早期放射性心肌损伤的敏感性与特异性指标。     

颌下腺摘除对大鼠急性实验性胃粘膜损伤的影响

用高浓度酸酒精在大鼠颌下腺摘除术后第１、２和３周灌胃，所引起的急性胃粘膜损伤较假手术对照组有加重趋势，但无统计学差异；而低浓度酸酒精灌胃在摘除组引起的胃粘膜损伤比假手术组明显加重。颌下腺摘除大鼠经口补充外源性表皮生长因子（ＥＧＦ）后，酸酒精引起的胃粘膜损伤比单纯摘除组及摘除后补充生理盐水对照组均明显减轻，而和假手术组相当。提示颌下腺对维持大鼠胃粘膜的抗损伤能力具有重要意义，而发挥这一作用的因素可能     

沙眼衣原体感染对Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达的影响

目的 探讨沙眼衣原体(Ct)感染对上皮细胞系Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达的影响。方法 用直接免疫荧光和流式细胞仪分析等方法,对感染Ct的Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达水平进行检测。结果 Ct感染的Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达水平随感染剂量增加和感染时间延长而下降,并且IL-10抗体能部分抑制这种下降。结论 Ct感染可下调Hela细胞HLA-Ⅰ类分子表达,下调与感染过程中分泌的IL-10有关,这可能是衣原体持续感染的一种重要原因。     

苯肾上腺素对离体大鼠肺泡液体清除率的影响

目的 探讨α-肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素对离体大鼠肺泡液体清除率的影响及其影响的机制。方法应用5％等渗白蛋白溶液和不同的药物灌注到离体的大鼠的肺泡腔内，根据灌注前及其孵育1h后白蛋白浓度的变化来计算肺泡液体清除率。结果苯肾上腺素可以显著地提高离体大鼠的肺泡液体清除率，并且呈现剂量依赖性。α1-及其β1-,β2-肾上腺素能受体抑制剂可以显著地抑制苯肾上腺素引起的肺泡液体清除率的提高，但α2-肾上腺素能受体激动剂对苯肾上腺素提高肺泡液体清除率的作用没有影响。结论α-肾上腺素能受体激动剂苯肾上腺素可以显著提高离体大鼠的肺泡液体清除率，呈现剂量依赖性。并且可能是通过作用于α1-和β-肾上腺素能受体的结果。     

MHCⅡ类反式激活因子在上调HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用

目的探讨主要组织相容性复合物(major histocom patibility complex,MHC)Ⅱ类反式激活因子(classⅡtrans-activator,CⅡTA)在调控HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用。方法将含CⅡTAcDNA的真核表达载体EBS-NPL-CⅡTA和不含CⅡTAcDNA的空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞。用RT-PCR技术检测未经转染的HepG2细胞、转染EBS-NPL-CⅡTA及空载体EBS-NPL的HepG2细胞CⅡTA mRNA的表达,并用间接细胞免疫荧光技术及流式细胞技术检测其3种HLAⅡ类分子(HLA-DR、DP、DQ)的表达。结果未经转染的HepG2细胞和转染空载体EBS-NPL的HepG2细胞均无CⅡTA mRNA和HLAⅡ类分子的表达。转染EBS-NPL-CⅡTA后的HepG2细胞出现CⅡTA mRNA表达,并表达3种HLAⅡ类分子。结论CⅡTA是调控HepG2细胞是否表达HLAⅡ类分子的关键因子,HepG2细胞不表达HLA-Ⅱ类分子与其缺乏CⅡTA表达有关,为进一步研究CⅡTA在肝癌治疗中的作用奠定基础。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对小鼠创伤后MHCⅡ类分子表达的改善作用

目的：探讨粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对创伤小鼠巨噬细胞抗原提呈功能的影响。方法：以双股骨骨折致伤小鼠，伤后连续５天注射ＧＭ－ＣＳＦ，观察巨噬细胞Ｉａ抗原的表达。结果：创伤后小鼠巨噬细胞Ｉａ表达明显降低，ＧＭ－ＣＳＦ治疗组Ｉａ表达恢复早而快，伤后第３天开始显著高于对照组。结论：ＧＭ－ＣＳＦ能够促进创伤后巨噬细胞抗原提呈功能的恢复。     

海带多糖对放疗后颌下腺细胞凋亡的影响

目的 探讨海带多糖(LJP)对放疗后颌下腺细胞凋亡的影响.方法 将Wistar大鼠随机分为4组:正常对照组、放疗对照组,放疗LJP A组(LJP 30 mg/kg)及放疗LJP B组(LJP 300 mg/kg).放疗对照组、放疗LJP A组及放疗LJP B组的大鼠颌下腺给予一次性γ射线照射,每只总剂量15 Gy.采用免疫组化法及原位切口末端标记(TUNEL)法分别检测大鼠颌下腺细胞的Bcl-2,Bax表达及凋亡情况.结果 与放疗对照组比较,放疗LJP A组及放疗LJP B组大鼠颌下腺细胞的Bcl-2表达水平明显增强(P＜0.05),Bax水平无明显改变(P＞0.05);与正常对照组比较,放疗对照组的凋亡细胞明显增加(P＜0.05),而与放疗对照组比较,放疗LJP A组及放疗LJP B组的凋亡细胞明显减少(P＜0.05).结论 LJP可调节细胞Bcl-2及Bax的表达水平,抑制细胞凋亡,从而保护颌下腺免受放疗损伤.     

TNF,IFN,MHCⅠ类分子基因“正反馈”式放大表达的重组腺病？…

目的 为使外源性ＴＮＦ,ＩＦＮ基因和内源性主要组织相容性复合物Ⅰ类ＭＨＣⅠ）分子基因表达呈现“正反馈”式放大效应,构建在ＨＬＡ－Ｂ７启动子调控、ＩＲＥＳ连接下协同表达ＴＮＦα和ＩＦＮβ基因的重组腺病毒载体。方法和结果 从ｐＧＬ３Ｂ７ＴＮＦ及ｐＩＲＩＦ中切下Ｂ７ｐｒｏ－ＴＮＦ和ＩＲＥＳ－ＩＦＮβ基因片段,先后插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｓｋ（＋）,构建成ｐＢＬＢ７ＴＮＩＲＩＦ。回收ＴＮＦα－ＩＲＥＳ     

胃癌细胞系MKN中HLA-Ⅰ类分子表达降低的机制研究

目的：探讨胃癌细胞系MKN中HLA—Ⅰ类抗原表达水平异常的分子机制。方法：以胃癌细胞系BGC823、MGC803和SGC7901为对照，利用流式细胞仪检测细胞表面HLA—Ⅰ类复合物的表达情况，Western blot检测HLA—Ⅰ类分子重链及轻链表达情况，半定量RT—PCR检测HLA—Ⅰ类分子重链、轻链和抗原加工分子mRNA水平的表达情况，并利用HLA基因区域的微卫星序列检测MKN细胞HLA基因在DNA水平的完整性。结果：胃癌细胞系MKN表面HLA—Ⅰ类复合物表达降低，重链A及B／C位点蛋白无表达而轻链表达无异常。在mRNA水平，胃癌细胞系MKN存在重链A、B、C各位点和抗原加工分子TAP1、LMP2、Tapasin、PA28β的表达缺失。微卫星DNA扩增结果初步显示，MKN细胞无HLA基因区域DNA的大片段丢失。结论：胃癌细胞系MKN HLA—Ⅰ类分子复合物表达降低可能是由HLA-Ⅰ类分子重链及其加工分子在转录水平改变而引起的。     

颌下腺摘除对大鼠急性实验性胃粘膜损伤的影响

用高浓度酸酒精在大鼠颌下腺摘除术后第１、２和３周灌胃，所引起的急性胃粘膜损伤较假手术对照组有加重趋势，但无统计学差异；而低浓度酸酒精灌胃在摘除组引起的胃粘膜损伤比假手术组明显加重。颌下腺摘除大鼠经口补充外源性表皮生长因子（ＥＧＦ）后，酸酒精引起的胃粘膜损伤比单纯摘除组及摘除后补充生理盐水对照组均明显减轻，而和假手术组相当。提示颌下腺对维持大鼠胃粘膜的抗损伤能力具有重要意义，而发挥这一作用的因素可能是颌下腺所分泌的ＥＧＦ．     

HLA-Ⅰ类分子与肿瘤逃逸

在肿瘤免疫应答过程中 ,MHC Ⅰ类分子限制的CD+8细胞毒性T淋巴细胞 (CTLs)在阻止肿瘤的发生、发展过程中起关键作用 ,肿瘤免疫应答刺激信号的产生主要涉及到MHC 抗原肽 TCR三原体结构的生成。其中 ,MHC Ⅰ类分子、LMP、TAP等抗原加工提呈相关分子的改变对肿瘤免疫应答第一信号的产生有直接影响。这些分子的减少或丢失可能反映了肿瘤细胞在MHC Ⅰ类分子向T细胞递呈免疫源性多肽这一作用而选择的一种逃避机制。因此 ,检测HLA、TAP等抗原在肿瘤细胞上的表达成为一个新指标 ,有助于制定肿瘤生物治疗策略。1　MHC Ⅰ类抗原的递呈…     

去颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5表达的影响

目的：观察切除颌下腺对大鼠睾丸膜联蛋白5（annexin 5）表达的影响.方法：切除大鼠颌下腺,分别于术后14、28和42d处死大鼠,Western blotting和免疫组织化学分析大鼠睾丸annexin 5表达及分布的改变.结果：Western blotting结果显示,与对照组相比,切除颌下腺14d和28d后,实验组大鼠睾丸annexin 5的表达分别升高了27.5%和35.2%,具有显著性差异（P＜0.05,P＜0.01）;切除颌下腺42d后,实验组大鼠睾丸annexin 5又恢复到与对照组几乎相同的水平.免疫组织化学显示,annexin 5在大鼠睾丸中的分布未见明显改变,但实验组annexin 5免疫组化显色较深,说明annexin 5的表达升高,这与Western blotting的结果基本一致.结论：颌下腺切除影响大鼠睾丸annexin 5的表达,颌下腺切除早期（14、28 d）颌下腺分泌的某些生物活性物质缺乏,而造成睾丸内annexin 5表达的升高.颌下腺切除后期（42 d）,机体内因颌下腺切除而缺乏的某些物质在体内又重新得到了补偿,对睾丸annexin 5的影响消除,睾丸annexin 5的表达也恢复到正常水平.其内在具体机制尚待进一步阐明.     

葡萄糖酸镁灌胃对大鼠异丙肾上腺素心肌损伤的影响

用大鼠异丙肾上腺素心肌损伤模型,研究了葡萄糖酸镁胃内给药的心肌保护作用。结果表明,葡萄糖酸镁胃内给药能减少异丙肾上腺素所致的心肌细胞Mg~(2+)丢失和Ca~(2+)聚积,减轻心肌组织脂质过氧化损害,抑制细胞内乳酸脱氢酶的释放,并能显著地减轻异丙肾上腺素引起的心肌肥大或/和水肿等病理损伤。证实了葡萄糖酸镁胃肠道给药具有一定的心肌保护作用,为其临床应用提供了实验依据。