尾加压素Ⅱ--促细胞增殖的活性肽

尾加压素Ⅱ(urotensin Ⅱ，U Ⅱ)是迄今所知的体内最强的缩血管肽，它除了具有收缩／舒张血管、心肌变力等生物学效应外，对血管平滑肌细胞、心成纤维细胞、肿瘤细胞等多种细胞具有明显的促细胞增殖效应，该作用主要通过Ca^2 及Ca^2 依赖的CaN通路、PKC通路、MAPK通路。U Ⅱ还能通过PKC-Src酪氨酸激酶-MAPK途径与中度氧化LDL、5-羟色胺、溶血卵磷脂等物质发挥协同促细胞增殖作用。U Ⅱ的单独和协同促增殖作用很可能对阐明细胞增殖机制有重要补充，尤其是，U Ⅱ及其受体在心血管含量丰富，高血压、动脉粥样硬化、心衰等心血管疾病患者血浆U Ⅱ含量升高，U Ⅱ很可能是这些疾病促心血管细胞增殖的重要因子。     

尾加压素Ⅱ诱导人脐血管平滑肌细胞肥大及其机制探讨

用植块法培养人脐动脉血管平滑肌细胞,并加入尾加压素Ⅱ（UⅡ）进行培养;细胞图像分析系统测量细胞体积．考马斯亮蓝法测定细胞蛋白含量,[^3H]-Leuclne摄入法测定蛋白合成速率．免疫沉淀法并ERKt／2试剂盒测ERK1／2活性,Western—Blot测ERK蛋白（p—ERK）1／2表达。与对照组相比,加入UⅡ培养的平滑肌细胞体积、蛋白含量、蛋白合成速率明显提高,p-ERK活性和表达增强;ERK1／2阻断剂U0126可减弱UⅡ的上述作用。表明UⅡ可以诱导人脐动脉血管平滑肌细胞肥大,其机制与激活ERK1／2通路有关。     

尾加压素Ⅱ生物学作用的研究进展

尾加压素Ⅱ (urotensinⅡ ,U Ⅱ )是发现于硬骨鱼尾部下垂体的活性肽。目前 ,从人体中已克隆出U Ⅱ ,并发现其受体GPR14分布于人体的多个部位 ,U Ⅱ与GPR14结合后 ,参与许多生物学效应 ,如舒缩血管、收缩气道及促细胞增殖等     

尾加压素II——促细胞增殖的活性肽

尾加压素II（urotensinII,UII）是迄今所知的体内最强的缩血管肽 ,它除了具有收缩 /舒张血管、心肌变力等生物学效应外 ,对血管平滑肌细胞、心成纤维细胞、肿瘤细胞等多种细胞具有明显的促细胞增殖效应 ,该作用主要通过Ca2 + 及Ca2 + 依赖的CaN通路、PKC通路、MAPK通路。UII还能通过PKC Src酪氨酸激酶 MAPK途径与中度氧化LDL、5 羟色胺、溶血卵磷脂等物质发挥协同促细胞增殖作用。UII的单独和协同促增殖作用很可能对阐明细胞增殖机制有重要补充 ,尤其是 ,UII及其受体在心血管含量丰富 ,高血压、动脉粥样硬化、心衰等心血管疾病患者血浆UII含量升高 ,UII很可能是这些疾病促心血管细胞增殖的重要因子。     

尾加压素Ⅱ与心血管疾病

尾加压素Ⅱ (urotensinⅡ ,UⅡ )是人体内最强的缩血管物质 ,近年已从人体中克隆出来 ,体内一种孤立的G 蛋白耦联受体 (GPR1 4)是其特异性受体 ,主要分布于心血管和神经系统。UⅡ与GPR1 4结合后 ,引起细胞内Ca2 浓度增加 ,参与多种生物学效应。本文就近年来UⅡ与心血管疾病的研究进展作一综述。     

尾加压素Ⅱ促血管内皮细胞分泌肾上腺髓质素的作用

目的研究人尾加压素（human urotensinⅡ,HUⅡ）对人血管内皮细胞（human vascular endothelial cells,HVEC）分泌肾上腺髓质素（adrenomedullin,ADM）的影响及可能机制。方法不同浓度的HUⅡ（10^-10～10^-7mol／L）刺激培养的HVEC,用放射免疫法测定其分泌ADM的量,并加入不同细胞信号转导分子阻滞剂以测定其对分泌的影响。结果HUⅡ呈时间和浓度依赖性的增加HVEC分泌ADM。细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059及钙调素依赖性蛋白激酶抑制剂W7、P38蛋白激酶抑制剂SB202190及钙通道阻滞剂nicardipine均能抑制HUⅡ刺激的HVEC对ADM的分泌,其抑制率分别为68％（P〈0．01）、78％（P〈0．01）及24％（P〈0．05）、25％（P〈0．05）;蛋白激酶C抑制剂H7、钙调神经磷酸酶抑制剂环孢霉素（CsA）对HUⅡ刺激HVEC分泌ADM无明显影响。结论HUⅡ能刺激HVEC分泌ADM,其作用可能与Ca^2＋、ERKs、CaM PK及P38介导的信号转导通路有关。     

人尾加压素Ⅱ的心血管效应及其应用

人尾加压素Ⅱ是生长素样环状结构11肽，1998年首次在人体中克隆出来。人心肌细胞、冠状动脉粥样硬化斑块及脂质沉积的平滑肌和巨噬细胞中含有丰富的尾加压素Ⅱ，其受体GPR14主要分布在脊髓、丘脑、黑质及心肌、血管平滑肌、动脉的内皮细胞及部分静脉的内皮细胞。人尾加压素Ⅱ可促进血管平滑肌细胞及心肌成纤维细胞分裂、增殖，导致心肌肥大。人尾加压素Ⅱ不但能致血管强烈收缩及痉挛，而且可引起一些小动脉内皮依赖性扩张。小剂量人尾加压素Ⅱ可降低外周阻力，增加心输出量，升高冠状动脉灌注压；大剂量则增加外周阻力，降低心输出量，抑制心肌收缩，增高血压，降低冠状动脉灌注压，产生心肌缺血。急性心肌梗死、稳定型心绞痛、原发性高血压、糖尿病及小儿先天性心脏病患者血浆尾加压素Ⅱ含量明显降低。因此，尾加压素Ⅱ及其受体作为治疗靶点可能用于一些心血管疾病的防治。     

尾加压素Ⅱ及其在肺部疾病中的作用

尾加压素Ⅱ(UⅡ)是新近发现的环状肽类血管活性物质,广泛分布于人体器官组织,已有研究证实它具强大的缩血管作用,并有促进平滑肌增殖等功能。本文就尾加压素Ⅱ的结构、生物学特性和其受体、受体拮抗剂方面的研究作一简述,并对UⅡ在肺部有关疾病中的作用、研究前景作一较全面的综述。     

尾加压素Ⅱ在心力衰竭发病中的作用

尾加压素Ⅱ是一种血管活性肽,随着近几年研究的深入,有关尾加压素Ⅱ与心力衰竭的研究不断增多,人们逐渐对尾加压素Ⅱ在心力衰竭中的作用有所认识和了解,但尾加压素Ⅱ作用比较复杂,目前对其作用机制仍不很清楚.本文对尾加压素Ⅱ在心力衰竭方面的作用做一,探讨其病理生理机制和临床意义.     

尾加压素Ⅱ对体外培养大鼠肾成纤维细胞的促增殖作用

目的 观察尾加压素Ⅱ(UrotensinⅡ,UⅡ)对大鼠肾间质成纤维细胞(RFB)的促增殖作用,探讨UⅡ在肾纤维化发生发展中的作用.方法 体外培养大鼠肾成纤维细胞并鉴定,采用MTT法、流式细胞仪(FCM)法分别观察不同浓度UⅡ作用下,大鼠肾成纤维细胞数、细胞周期的变化.结果 UⅡ可以促进RFB的增殖活性,随着UⅡ作用浓度的增加,MTT吸光度值呈先升高后降低的趋势,其中1×10-9和1×10-8mol/L UⅡ组作用显著(P＜0.05);在1×10-10,1×10-9,1×10-8,1×10-7mol/L UⅡ作用下,RFB S 期细胞百分率均较对照组明显增加,而G0-G1期细胞百分率均较对照组明显降低(P＜0.01);在1×10-7mol/L UⅡ作用下,上述各参数与对照组比较无统计学意义(P＞0.05).结论 UⅡ能促进大鼠肾成纤维细胞增殖,影响细胞周期,这可能提示UⅡ在肾纤维化发生和发展过程中发挥着重要作用.     

紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌细胞增殖影响的时间效应关系

目的　观察紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌细胞增殖影响的时间效应关系 ,探讨药物洗脱支架植入后 ,损伤血管修复过程中延迟再狭窄发生的部分细胞学机制。方法　将兔平滑肌接种于上室、内皮细胞接种于下室建立细胞共培养体系 ,根据下室中内皮细胞生长状态随机分为融合内皮组、对数内皮组、平滑肌对照组和内皮对照组 ,于融合内皮组和对数内皮组下室加入 10nmol/L紫杉醇干预 2 0min ,分别于干预前、干预后第 1天、第 3天、第7天和第 10天检测平滑肌细胞和内皮细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率 ,并作细胞计数。结果　紫杉醇干预后第1天和第 3天 ,对数内皮组和融合内皮组平滑肌细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率和细胞计数均明显低于平滑肌对照组 (对数内皮组和融合内皮组平滑肌细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率分别为第 1天 5 4 %± 4 %和 5 6 %±5 % ,第 3天 6 5 %± 3%和 6 3%± 3% ;细胞计数分别为第 1天 6 4 %± 6 %和 6 2 %± 4 % ;第 3天 6 8%± 5 %和 6 6 %±5 % ,P <0 .0 5 )。对数内皮组内皮细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入率和细胞计数明显低于内皮对照组 (对数内皮组内皮细胞氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入为第 1天 75 %± 9% ,第 3天 81%± 6 % ;细胞计数为第 1天 72 %± 7% ,第 3天 80 %± 7% ;P <0 .0 5 ) ;     

普罗布考抑制大鼠血管平滑肌细胞周期素D1蛋白表达和G1→S转换

目的研究普罗布考是否通过阻滞细胞周期抑制平滑肌细胞增殖。方法首先用普罗布考和氧化型低密度脂蛋白与平滑肌细胞共同孵育。然后用MTT法和细胞计教法测定细胞增殖，用流式细胞术观察细胞周期，最后用蛋白印迹测蛋白表达。结果MTT法和细胞计数法显示25～100mg／L氧化型低密度脂蛋白都能刺激平滑肌细胞增殖，效应呈浓度依赖性，普罗布考能显著抑制氧化型低密度脂蛋白所诱导的细胞增殖，效应呈浓度和时间依赖性。流式细胞术分析表明普罗布考增加了G0/G1细胞比例达28.6％（P〈0．01，n=3），减少S期细胞比例达83．5％（P〈0.01，n=3）。蛋白印迹结果显示氧化型低密度脂蛋白诱导细胞周期素D1蛋白表达，高峰在6～12h，普罗布考显著减少周期素D1蛋白表达，在6h和12h分别减少达26％和23％（P均〈0.01，n=3）。结论普罗布考显著抑制氧化型低密度脂蛋白所诱导的细胞增殖，其抗增殖活性与普罗布考下调周期素D1蛋白表达，从而阻滞细胞由C0/G1期向S期转换有关。     

线粒体融合素2基因突变体对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究大鼠线粒体融合素2基因的蛋白激酶A磷酸化位点两种突变体对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其相关的信号通路.方法 利用两种携带蛋白激酶A磷酸化位点突变的线粒体融合素2基因重组腺病毒(Adv-Mfn2-alaPKA和Adv-Mfn2-asnPKA)和携带线粒体融合素2基因的重组腺病毒(Adv-Mfn2),感染培养的大鼠血管平滑肌细胞.水溶性四甲基偶氮唑盐法比较各组细胞增殖的变化;流式细胞术比较各组细胞周期的变化;免疫印迹法比较各组线粒体融合素2基因和磷酸化细胞外调节激酶1/2蛋白表达变化.结果 感染重组腺病毒的三组细胞线粒体融合素2基因表达差异无显著性.与对照组相比,Adv-Mfn2-alaPKA和Adv-Mfn2组显著抑制细胞增殖(P<0.01),停滞于G_0/G_1期细胞比例显著增加(P<0.01),磷酸化细胞外调节激酶1/2蛋白表达水平显著降低(P<0.01),且Adv-Mfn2-slaPKA作用更明显(P<0.01),而Adv-Mfn2-asnPKA组较对照组差异无显著性.结论 Mfn2-alaPKA通过细胞外调节激酶1/2信号通路抑制大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用较线粒体融合素2基因更明显;而Mfn2-asnPKA对血管平滑肌细胞无抑制增殖的作用,对细胞外调节激酶1/2信号通路也无作用.蛋白激酶A磷酸化位点是调控线粒体融合素2基因抗血管平滑肌细胞增殖的重要功能位点.     

纤维蛋白原诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖及趋化

目的观察不同浓度纤维蛋白原对体外培养的血管平滑肌细胞增殖、趋化和随机迁移的影响,探讨其致动脉粥样硬化的可能作用及其机制。方法采用胶原酶消化法培养大鼠主动脉平滑肌细胞,用BrdU掺入法和细胞计数法观察其增殖能力,刮伤实验及慢速显微摄像技术检测其随机迁移能力,微孔滤膜法观察其趋化性,Western印迹法检测其明胶酶A的表达,明胶酶谱分析其分泌的明胶酶活性。结果细胞计数(r=0.860,P<0.05)和BrdU掺入实验(r=0.880,P<0.05)发现0.2gL～3.2gL纤维蛋白原呈剂量依赖性地促进血管平滑肌细胞增殖,其中0.4、0.8、1.6和3.2gL纤维蛋白原作用48h,细胞计数依次为(6.32±0.39)×107L、(10.63±0.25)×107L、(12.31±0.44)×107L和(13.59±0.43)×107L,BrdU掺入率依次为5.2%±2.2%、17.5%±2.0%、21.5%±2.3%和25.5%±2.5%,与对照组[分别为(5.63±0.34)×107L和2.0%±0.8%]比较差异均有显著性(P<0.01)。微孔滤膜法趋化实验发现0.2gL～3.2gL纤维蛋白原呈剂量依赖性地促进血管平滑肌细胞趋化(r=0.957,P<0.01)。刮伤实验中细胞迁移速度及慢速显微摄像单细胞随机迁移速度在纤维蛋白原组及对照组细胞均无明显差别(P>0.05)。Western印迹及明胶酶谱发现纤维蛋白原促使血管平滑肌细胞明胶酶A的表达及活性上调。结论纤维蛋白原可能通过促进血管平滑肌细胞增殖和趋化在动脉粥样硬化发生过程中起重要作用。     

泽泻汤对氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察泽泻汤对血管平滑肌细胞(VSMC)周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E、增殖细胞核抗原(PCNA)和p27表达的影响,探讨泽泻汤在氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的VSMC增殖中的作用和机制。方法通过体外50 mg/L ox-LDL诱导VSMC,建立VSMC增殖的动脉粥样硬化细胞模型;应用空白血清及20%泽泻汤含药血清干预。MTS法检测泽泻汤含药血清对VSMC增殖的影响;Western blot检测增殖相关蛋白Cyclin D1、Cyclin E、PCNA和p27表达水平。结果 50 mg/L ox-LDL可明显诱导VSMC增殖。与ox-LDL组比较,泽泻汤含药血清可显著抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖,下调细胞Cyclin D1、Cyclin E和PCNA的表达,同时促进p27蛋白表达。结论泽泻汤具有抗VSMC增殖的作用,机制可能与上调p27蛋白和抑制Cyclin D1、Cyclin E、PCNA表达有关。     

中链甘油三酯对血管平滑肌细胞增殖的双向作用

目的研究中链甘油三酯(MCT)对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(RASMC)增殖的影响。方法采用体外细胞培养、油红O染色观察细胞形态的变化;MTT法、流式细胞术检测MCT对RASMC增殖的影响。结果油红O染色结果显示,脂质浸润始于125 mg/dL,随着MCT浓度的增高,浸润的细胞数量有所增加;高浓度情况下(2000mg/dL),细胞形态变化较明显,胞体变大变圆,细胞突起增多,呈不规则形。MCT对RASMC增殖的影响具有时间和浓度依赖性。在24~48 h,62.5~250 mg/dL,表现为促增殖作用,其中24 h,62.5 mg/dL时增殖率最大约为132.9%,与对照组相比差异有统计学意义(t=-4.5529,P=0.0005);24~48 h,≥250 mg/dL及24~144 h,≥500mg/dL,表现为抑制增殖作用,其中120 h,1000 mg/dL增殖率最低约为1.0%,与对照组相比差异有统计学意义(t=68.8652,P0.0001)。流式周期结果表明,与对照组比较,MCT组出现G0/G1期百分比降低(F=5.56,P=0.0039)和S期百分比增高(F=7.28,P=0.0011)。流式凋亡结果显示,除了24 h外,各时间点的凋亡百分比均比对照组低,其中48~144 h的凋亡率分别为2.6%(F=1.86,P=0.1591)、0.9%(F=6.43,P=0.002)、0.9%(F=3.41,P=0.0274)、1.0%(F=5.76,P=0.0033)和2.1%(F=5.18,P=0.0054)。结论 MCT对RASMC增殖的影响具有双向性,即在低浓度短时间促进增殖作用,在中、高浓度抑制增殖作用。     

生物机械力诱导蛋白激酶CβⅡ活化促进血管平滑肌细胞增殖

目的 高血压引起的血管重塑与生物机械力的异常增加有关。为了探讨细胞外生物机械力是如何被细胞感受并被转导为细胞内的生物化学信号、最终导致细胞的病理生理反应。方法 被分离的大鼠主动脉血管平滑肌细胞种植在底部为橡胶薄膜的细胞培养板上进行体外培养，细胞达80％融合后给予生物机械力刺激不同时间（60／min，15％伸张度）。受刺激后的细胞被收集后通过蛋白印迹（Western blot）方法进行蛋白激酶CβⅡ在细胞内转膜和蛋白激酶CβⅡ蛋白磷酸化分析。此外，受刺激后的细胞用氚标胸腺嘧啶核苷酸标记6h并进行同住素计数。结果 平滑肌细胞在静息状态下蛋白激酶CβⅡ在胞浆和胞膜的分布各占50％，受机械力刺激后蛋白激酶CβⅡ在胞浆和胞膜的分布为20％和80％，呈现出了机械力诱导的蛋白激酶CβⅡ明显地由胞浆向胞膜转位。蛋白激酶CβⅡ磷酸化分析显示：平滑肌细胞受机械力刺激后蛋白激酶CβⅡ能快速磷酸化，并呈现明显的时间依赖性。蛋白激酶CβⅡ磷酸化在受机械力刺激后2min时达峰值，随后逐渐减弱，而未受机械力刺激的细胞则没有蛋白激酶CβⅡ磷酸化发生。氚标胸腺嘧啶核苷酸掺入实验结果发现，机械力刺激可明显促进细胞DNA合成增加。结论 生物机械力可快速激活细胞蛋白激酶CβⅡ，导致蛋白激酶CβⅡ在细胞内转住和磷酸化，最终引起血管平滑肌细胞增殖。该研究对于理解高血压及其相关的心脑血管疾病发生的分子机制和提供对该疾病的防治方法将是非常有用的。     

激肽释放酶-激肽系统在血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用

血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖和迁移在动脉粥样硬化以及血管内支架成形术后再狭窄的发生和发展中起着重要作用.近年来的研究显示,激肽释放酶-激肽系统(kallikrein-kinin system,KKS)在细胞因子和转导通路方面与VSMC增殖和迁移密切相关.因此,探讨KKS在VSMC增殖和迁移过程中的作用,对于临床防治动脉粥样硬化、血管内支架成形术后再狭窄具有十分重要的意义.     

Notch信号通路介导血小板源生长因子AA诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探讨Notch信号通路在血小板源生长因子AA(PDGF-AA)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移中的作用及机制。方法脱臼处死1~2月龄雄性SD大鼠,无菌取腹主动脉,剥弃外膜及去除内皮后,贴块法培养VSMC,α-SM-actin染色鉴定。实验分为四组:对照组、γ-secretase抑制剂组(DAPT组)、PDGF-AA组和PDGFAA+γ-secretase抑制剂组(PDGF-AA+DAPT组)。实时荧光定量PCR(Real-time q PCR)检测Notch信号分子mRNA表达;Cell Titer96 Aqueous One Solution试剂盒检测细胞增殖活性;采用细胞划痕实验检测VSMC的迁移能力。结果腹主动脉VSMC表达Notch信号通路Jagged1、Jagged2、Notch1~3等几种主要的配体及受体;PDGF-AA刺激24h和48 h后分别导致Jagged2和Jagged1 mRNA表达显著增强(P0.01,n=4);与0 h相比,PDGF-AA刺激72 h后,Notch1、Notch3 mRNA表达显著增高(P0.01,n=4),而刺激24 h后Notch2 mRNA表达显著降低。PDGF-AA显著促进HES1(P0.05,n=4)、HEY2(P0.05,n=4)和转录因子Rbp-jКmRNA(P0.05,n=4)表达,DAPT抑制PDGF-AA介导的HES1、HEY2 mRNA表达增强(P0.01,n=4),但是进一步促进PDGF-AA诱导的Rbp-jКmRNA表达(P0.05,n=4);PDGF-AA刺激促进VSMC增殖(P0.01,n=5)和减少划痕余留面积(P0.01,n=4),两种效应均可被DAPT显著阻抑(P0.01,n=4)。结论 PDGF-AA调节了VSMC Notch信号分子表达,PDGF-AA部分通过激活Notch信号通路调节VSMC的增殖和迁移。     

黑木耳多糖对动脉粥样硬化形成中平滑肌细胞增殖的影响

目的通过平滑肌细胞的致动脉粥样硬化形成作用,探讨黑木耳多糖对平滑肌细胞增殖的影响,以减少动脉粥样硬化的形成。方法将30只新西兰白兔随机分为正常对照组、模型组和实验组3组,分别给予普通饲料(正常组)、高胆固醇饲料(模型组)以及高胆固醇加黑木耳多糖饲料(实验组)喂养。实验前及第12周时检测空腹12~14h后血脂及血清中超氧化物歧化酶和丙二醛含量。喂养至第12周末处死动物,取主动脉行组织形态学观察及用免疫组织化学方法分析α平滑肌肌动蛋白的表达,HPIAS-1000高清晰度彩色医学图文分析系统进行图像分析。结果与模型组比,实验组动物血脂水平显著降低(模型组和实验组总胆固醇分别为18.76±2.32和11.68±1.63;甘油三酯分别为1.52±0.15和1.19±0.12;低密度脂蛋白胆固醇分别为17.62±2.27和9.64±1.56;高密度脂蛋白胆固醇分别为0.65±0.09和0.73±0.76;P<0.01),血清中超氧化物歧化酶活力增高(模型组和实验组分别为182.3±10.9和216.0±7.4,P<0.05)而丙二醛含量显著降低(模型组和实验组分别为4.53±0.21和4.14±0.14,P<0.05);实验组主动脉斑块面积明显小于模型组(模型组和实验组分别为0.44±0.10和0.30±0.83,P<0.01),斑块内平滑肌细胞也少(模型组和实验组分别为14%±1%和12%±1%,P<0.05)。结论黑木耳多糖可减少平滑细胞的增殖,从而减轻动脉粥样硬化形成。