抗CD_4单克隆抗体在肾移植患者中的使用

在啮齿类动物中使用抗CD_4单抗表明可以防止和逆转自发和实验诱导的自身免疫病、延迟器官和皮肤移植的排斥反应。本文作者没有进行抗CD_4单抗免疫抑制作用的专门实验室研究,主要评估了抗CD_4单抗的生物学效应及临床副作用。作者在肾移植患者中选择了12名自愿实验者(男9名,女3名)。实验前都曾用硫唑嘌呤和强的松龙抑制免疫功能。实验方法是术后24小时静脉输入BL_4,持续1小时以上,5名患者的使用剂量是10mg/天,另7名是15mg/天,疗程3～14天(平均5天)。结果:3例进行了2周治疗,无排斥     

抗CD_3单克隆抗体激活的杀伤细胞抗瘤活性研究

为了研制高效低毒抗瘤效应细胞,采用抗人CD_3单抗刺激人外周血单个核细胞(PBMc),观察其增殖、扩增及抗瘤活性,现报道如下:     

抗人CTLA-4单克隆抗体的制备及其生物学活性研究

以我室用基因工程表达的人CTLA 4蛋白[1,2 ] 作为免疫原 ,采用细胞融合、ELISA法和免疫印迹等方法制备并筛选到鼠抗人CTLA 4的单克隆抗体 ,并以单向混合淋巴细胞刺激反应 (MLR )测定了抗人CTLA 4抗体对淋巴细胞增殖的影响。结果表明我们得到了 4株单克隆抗体 (1H7、 2G2、 2F11、 3A7) ,它们均可与近似天然构象的人CTLA 4Ig融合蛋白结合 ,又可与大肠杆菌表达出的经复性后的人CTLA 4蛋白结合 ,并且可分别识别人CTLA 4Ig融合蛋白不同抗原决定簇。其中一株(3A7)既和近似天然构象的蛋白结合又可与变性的蛋白结合 ,并具有显著阻断CTLA 4的抑制性免疫信号传递 ,促进同种异体混合淋巴细胞增殖的功能     

抗CP4-EPSPS单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定

目的制备可用于胶体金快速检测试条的抗CP4-EPSPS(5-enolpyruvlshimimate-3-phosphate synthase)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以重组蛋白CP4-EPSPS免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗CP4-EPSPS的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类,检测mAb的效价及相对亲和力,并进行mAb结合表位分析。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(Ⅲ5A3,Ⅲ13A2)。其抗体亚类均为IgG1;腹水效价分别为1∶106和1∶108;相对亲和力Ⅲ5A3在105以上,Ⅲ13A2在106以上。ELISA相加实验结果显示2株mAb识别相同或相近的抗原表位。结论成功地制备出抗CP4-EPSPS的2株mAb,为建立快速特异检测转基因植物(GMO)的实验方法提供了有力的工具。     

CD_9类单克隆抗体的研制

本研究用血小板为免疫原免疫BALB/c小鼠,并按常规细胞融合方法进行细胞融合。在筛选时,用血小板幼稚B细胞(Nalm-6)及EB病毒转化人B淋巴母细胞系Raji细胞同时检测杂交细胞上清,选仅与血小板及Nalm-6细胞反应,不与Raji细胞反应的抗体分泌杂交细胞,建立了B_(9-1),B_(9-2),B_(9-3) 杂交瘤株,通过B_9系列抗体与各种血液、造血细胞的反应特点,与肾小球血管内皮及远端曲管上皮反应性及对其相应抗原分子量测定表明,B_9系列抗体为     

鼠抗人B7-H4单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

研制鼠抗人B7-H4单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步研究。采用稳定高表达B7-H4分子的基因转染细胞株293T/B7-H4为免疫原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术融合、流式细胞术筛选和克隆化培养后,最终获得一株鼠抗人B7-H4单克隆抗体(mAb),建立了稳定的杂交瘤细胞株;采用快速试纸条定性法鉴定其抗体亚型,通过western blot和细胞免疫组化鉴定其识别特异性,并与商品化抗人B7-H4抗体(美国BioLegend.克隆号MIH43)进行位点竞争;T细胞体外增殖抑制实验初步鉴定其生物学特性。成功获得的杂交瘤细胞株命名为287;快速试纸条鉴定其Ig亚型为IgG1,K链;western blot和细胞免疫组化结果显示,2B7能特异性识别B7-H4分子;位点竞争实验表明,287与商品化抗体MIH43识别不同的抗原表位。生物学功能实验结果显示,287能阻断B7-H4对T细胞体外增殖的抑制效应。单克隆抗体2B7的成功研制,为深入研究B7-H4的生物学功能和临床应用提供了有价值的工具。     

鼠抗人B7-H4单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定

目的:研制鼠抗人B7-H4分子的单克隆抗体(mAb)并鉴定其生物学特性。方法:以高表达人B7-H4分子的转基因细胞L929/B7-H4为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴瘤杂交技术,经免疫荧光标记和流式细胞术分析、反复筛选、多次克隆化培养,获得两株可特异分泌鼠抗人B7-H4分子mAb的杂交瘤细胞株。采用快速定性试纸分析法鉴定mAb所属的Ig亚类。用Dot-blot、Western blot鉴定mAb的特异性,竞争结合抑制实验鉴定mAb所识别的抗原结合位点,T细胞增殖抑制阻断实验对mAb的生物学功能进行初步的鉴定。结果:获得两株持续、稳定地分泌抗B7-H4 mAb的杂交瘤细胞,分别命名为1F10和2B2。Dot-blot的结果显示,两株mAb均能特异性识别B7-H4分子。Westernblot检测显示,mAb 2B2可以特异性识别B7-H4分子,而mAb 1F10则不能识别。位点竞争实验表明,两株mAb之间,mAb 1F10与商品化的mAb H74之间识别位点不同,mAb 2B2与商品化mAb识别位点相近。T细胞增殖抑制阻断试验显示,这两株mAb均能一定程度地阻断B7-H4对T细胞的抑制作用。结论:成功地获得两株抗人B7-H4分子的mAb,为进一步研究B7-H4分子的生物学功能提供了有效的工具。     

白细胞介素4促进胚胎期CD_4~- CD_8~-早期胸腺细胞增殖的有效作用

应用无支持细胞的单个T细胞培养技术,分析小鼠CD_4~-CD_8~-胸细胞进行增殖的生长因子需求。在所分析的基因重组因子IL 2、IL 4、IL 5、IL 6及天然混合因子CAS中,经PMA Ionomycin活化的胚胎CD_4~-CD_8~-胸腺细胞只对IL-4有增殖应答,其克隆效应为38.6±14.8%,倍增时间为19.2小时,但IL 4不足以支持多数克隆中子代细胞的连续扩增。活化的成鼠CD_4~-CD_8~-胸腺细胞,可对IL 2、IL—4及IL—5有微弱的增殖应答,其克隆效应分别为9.0±6.8%,16.1±3.3%及9.2±1.5%,但这些因子均不能支持其克隆的有效扩增。在因子的联合应用中,IL-2 IL 4对胚胎CD_4~-CD_8~-胸腺细胞的增殖有协同作用,使克隆效应达55.8±5.0%。IL 2 CAS对成鼠CD_1~-CD_8~-胸腺细胞的增殖有显著的协同作用,使其克隆效应达58.7±5.0%。IL 2 IL 5及IL-2 IL 6亦有协同促进成鼠CD_4~-CD_8~-胸腺细胞克隆扩增作用。故胚胎及成鼠CD_4~-CD_8~-胸腺细胞进行增殖的因子需求不同,后者的因子需求更接近于成熟T细胞特点。     

抗HPT单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定

目的：制备抗潮霉素B磷酸转移酶(HPT)的单克隆抗体(McAb)，建立一种快速检测转基因作物中该选择标记基因HPT编码蛋白的方法。方法：用基因重组潮霉素B磷酸转移酶(HPT)抗原免疫BALB/C小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb。选择不同的抗原决定簇与兔抗HPT多抗配对，建立双抗夹心ELISA检测HPT抗原。结果：筛选出四株稳定分泌抗HPT单抗的杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定均为IgG1，ELISA检测证实单抗可特异性识别细胞培养上清、重组子菌体裂解产物中及纯化出的HPT蛋白。结合位点测定实验表明4株单抗是针对不同的抗原决定簇，与多克隆抗体组成双抗夹心ELISA法，均可较好地检测到HPT抗原。检测的灵敏度为30ng／ml，且与别的无关抗原无交叉反应性。结论：4株杂交瘤细胞株特异性好，亲和力强，组成双抗夹心ELISA法可用于快速、灵敏检测HPT抗原。     

鼠抗人4-1BB单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

目的:鼠抗人4-1 BB分子功能性单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定.方法:以高表达人4-1 BB分子的转基因细胞293T/4-1 BB为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,并以293T/4-1BB为阳性抗体筛选细胞,293T/mock为阴性抗体筛选细胞,经免疫荧光标记和流式细胞术(FCM)分析、反复筛选和多次克隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人4-1BB分子mAb的杂交瘤细胞株;采用Western blot、间接免疫荧光法、竞争结合抑制试验、3H掺入和细胞凋亡分析等方法对mAb进行生物学特性的鉴定.结果:成功获得3株持续、稳定分泌鼠抗人4-1BB mAb的杂交瘤细胞株,命名为1G5、4B11和9F11.对mAb的生物学功能的研究结果表明,3株mAb均能识别活化T细胞和单核细胞来源的树突状细胞(Mo-DC)表达的4-1BB分子.mAb 4B11能有效地激发T细胞体外增殖、抑制其凋亡,并能促进Mo-DC体外扩增,上调CD80、CD83、CD86和CD1α的表达.结论:获得的3株分泌鼠抗人4-1BB mAb的杂交瘤,所分泌的抗体具有特异性地识别人4-1BB分子;其中4B1 1 mAb具有激发T细胞增殖及促进Mo-DC体外扩增与成熟的作用,为激发型4-1BB mAb.     

两株鼠抗人VSIG4单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究

目的:制备鼠抗人vSIG4分子单克隆抗体(mAb)及对其生物学特性进行鉴定.方法:以高表达膜型VSIG4分子的基因转染细胞L929/VSIC4L为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,经流式细胞术检测和多次;隆化培养,筛选出特异分泌鼠抗人VSIG4分子的杂交瘤细胞株;采用间接免疫荧光法、western blot、竞争抑制试验及MTT增殖试验等单对抗的生物学特征进行鉴定.结果:获得2株持续、稳定分泌鼠抗人VSIG4 mAb的杂交瘤细胞株,分别命名为9A7和9D5.对mAb生物学特性的研究结果表明,2株mAb均能识别巨噬细胞以及jurkat、THP-1、H446等肿瘤细胞株表面的VSIG4分子.对T细胞增殖抑制的阻断实验显示,这2株抗体对VSIG4分子抑制T细胞增殖均有阻断作用.结论:成功地获得了2株鼠抗人VSIG4功能性mAb,为进一步研究VSIG4及其未知受体的生物学功能奠定了基础.     

抗人4-1BB功能性单克隆抗体的研制及生物学特性研究

研制鼠抗人4-1BB功能性单克隆抗体及其在T细胞活化、增殖及信号转导中的作用。以小鼠肾肿瘤细胞转染人4- 1BB基因的细胞株4-1BB/293T为免疫原.采用B淋巴细胞杂交瘤技术,获取分泌特异性4-1BB单抗的杂交瘤细胞株。以体内诱生法产生腹水,Protein G亲和层析法进行纯化,快速定性试纸法鉴定单抗的亚类,MTT法检测单抗对T细胞的刺激作用,流式法检测单抗对T细胞凋亡的影响。结果显示:成功获得1株持续分泌特异性抗人4-1BB单抗的细胞株(命名为5D5).属于IgG2b。该单抗能特异识别人4-1BB分子,介导有效的共刺激信号,体外促进T细胞的增殖,抑制活化诱导的T细胞凋亡。总之,成功获得1株功能性4-1BB单抗,具有重要的研究和潜在应用价值。     

某些人的抗HIVgp120抗体与抗CD_4抗体的反应

许多研究已证实,HIV引起人类感染是由于HIV的包膜糖蛋白(gp120)与T_H细胞上的受体(CD_4抗原分子)具有高度亲和性。作者制备了抗CD_4的单克隆抗体(T_(4.2)),它可以封闭gp120与CD_4的结     

抗人CD38分子单克隆抗体生物学功能研究

目的 研究抗人CD38单克隆抗体(1C6)的生物学功能.观察1C6对多种肿瘤细胞系生长增殖的影响,利用不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应,观察抗人CD38单克隆抗体(1C6)在人外周血淋巴细胞增殖反应中的作用.方法 以MTT法检测单克隆抗体抑制细胞增殖以及介导补体杀伤靶细胞的功能.利用抗人CD3单克隆抗体刺激人外周血淋巴细胞增殖、同种异型抗原诱导混合淋巴细胞反应,在加入或未加入抗人CD38单克隆抗体(1C6)的情况下,观察细胞形态并检测3H-TdR掺入量.结果 加入不同浓度的1C6的实验组与对照组相比,多种细胞系的生长受到不同程度的抑制.不同刺激原诱导的淋巴细胞增殖反应中,加入1C6的实验组细胞克隆明显减少,3H-TdR掺入量明显下降,细胞增殖受抑.结论 1C6可抑制多种肿瘤细胞的生长,可介导补体杀伤多种靶细胞.1C6对抗CD3刺激的外周血淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养均具有明显的抑制效应.     

鼠抗人FL单克隆抗体的研制及其生物学特性

目的：研制鼠抗人FL单克隆抗体（mAb）以及对其生物学特性的研究。方法：以人FL基因转染细胞株L929-FL为免疫原，采用B细胞杂交瘤技术，获取分泌抗人FLmAb的杂交瘤细胞株。快速定性试纸法鉴定mAb亚类，体内诱生腹水法制备mAb，免疫亲和层析法纯化mAb，MTT法检测mAb对白血病细胞株U937和HL-60生长的影响，Annexin V／PI染色流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。结果：建立了3株稳定分泌抗人FLmAb的杂交瘤，命名为3C2、3C6和8D10。快速定性试纸法鉴定3株mAb均属小鼠lgG2a亚类。3株mAb分别识别白血病细胞U937和HL-60上表达的FL分子。将3株mAb分别加入共表达FL／Flt3的U937和HL-60细胞的培养体系中，MTT法检测显示，3C2、3C6和8D10对白血病细胞的生长均具有抑制作用（P〈0．05）。Annexin V／PI染色FCM检测细胞凋亡，3C2和8D10均能增加白血病细胞凋亡的作用。结论：3C2、3C6和8D10是3株功能性抗FLmAb，对于研究FL／Flt3在白血病发生、发展中的作用具有潜在的应用价值。     

抗VEGF单克隆抗体生物学活性分析方法的建立及其应用

目的建立抗VEGF单克隆抗体生物学活性分析方法,并对实验条件进行优化及方法学验证。方法从新生儿脐带分离获取人脐静脉内皮细胞(HUVEC),使用第4~6代细胞进行活性检测。HUVEC接种96孔板于CO_2培养箱培养4 h后加入不同浓度的抗VEGF单克隆抗体——VEGF165混合物孵育48 h,加入CCK8显色4 h,酶标仪读取各孔OD450吸光值,采用四参数拟合绘制标准曲线,计算参比品和样品的IC50值,获取样品的相对活性。结果该方法专属性强,仅在抗VEGF单克隆抗体上呈现相应的剂量关系曲线,标准曲线拟合度r~20.99,精密度样品相对活性RSD20%,方法在50%~200%活性范围内具有良好的准确性。用该方法对两个候选药分别进行6次重复性检测,候选药相对活性值分别为(95.80±3.29)%,(101.10±3.81)%。结论本研究建立的HUVEC增殖抑制法特异性高、重复性好,并具有良好的准确性及精密度,可用于抗VEGF单克隆抗体生物学活性的评估。     

抗卵黄囊单克隆抗体的体内定位和生物学效应

<正> 孕鼠或肿瘤生成鼠静注直接抗卵黄囊抗原1(mab6D1)和抗卵黄囊抗原2(mab3C_3)两种孕克隆抗体。由交尾后2,24或48小时杀死动物取不同器官作免疫荧光测检发现在孕鼠内胚层内脏细胞和卵黄囊癌的内脏细胞的游离面与mab6D)的特殊结合。mab3C3只有卵黄囊壁的和肿瘤的特殊的壁模式的内胚层起反应。反应在注射后2,24小时较强,48小时后大大减弱。3C3 mab具胚胎毒性效应,而     

EGFR单克隆抗体抗结肠癌作用的实验研究

目的:观察表皮生长因子受体单克隆抗体(EGFRMcAb)对结肠癌的作用。方法:用不同剂量的EGFRMcAb处理LST174结肠癌细胞系, 采用细胞计数、生长曲线测定及MTT法测定体外培养细胞的生长和增殖抑制率。结果:可见一定程度的增殖抑制并呈剂量依赖性。抗-EGFR抗体组细胞数明显低于对照组(P<0.01).不同浓度之间比较:当EGFRMcAb为0.625mL/L时细胞计数相对高, 是对照组的61.3%;当EGFRMcAb为2.5mL/L时细胞计数最低, 是对照组的33.8%.EGFRMcAb组细胞生长受到抑制, 细胞生长曲线较对照组速度减慢。MTT值显示实验组细胞增殖能力低于对照组, 抑制率为42.3%(P<0.01).结论:EGFRMcAb可抑制人结肠癌LST174细胞生长, 具有一定的抗结肠癌作用。