胚胎脊髓细胞悬液在大鼠损伤脊髓中的突触发育过程

目的　观察分析胚胎脊髓细胞悬液在损伤脊髓移植区中的突触发育过程。　方法　对 4 2只 Wistar成年大鼠以改良 Allen法 (10 g× 5 cm)打击脊髓 ,3天后将孕 14天 (E14 ) 5只胚胎脊髓细胞悬液 (FSCS) 2 0 μl植入损伤空腔 ,移植后 2、4、6、8、10和 12周 ,以组织学、免疫组织化学观察移植物成活、分化及其与宿主之间关系。　结果　移植区成神经细胞最先展示了胞质突起 ,随之出现了低电子密度的突触前后膜 ,突触前、后膜电子密度逐渐增高形成良好的致密突起。突触小泡数量和种类逐渐增多 ,突触小泡有圆形清亮小泡、椭圆形小泡、颗粒状小泡和扁平小泡 - f型。突触的连接方式由单个的胞体 -树突突触 ,出现多个的胞体 -树突和树突 -树突突触。同时 ,移植成神经细胞、成少突胶质细胞及成星形细胞的细胞器日渐完善 ,细胞功能活跃。血脑屏障也随之出现。移植区可见神经微丝 (NF)、组织胺 (5 - HT)、降钙素基因相关肽 (CGRP)、胶原纤维酸性蛋白 (GFAP)阳性纤维。　结论　胚胎脊髓细胞悬液在成年大鼠损伤脊髓内可发育为成熟的突触 ,显示了 FSCS与宿主脊髓重建突触方式的信息交换的潜在可行性。     

不同途径移植自体激活雪旺细胞修复大鼠脊髓损伤

目的 通过不同途径移植自体激活雪旺细胞(autologous activated Schwann cells,AASCs),评价各种移植途径在修复脊髓损伤中的作用.方法 结扎Wistar大鼠双侧隐神经,1周后取下结扎处远端神经,在体外分离、培养、传代、纯化和鉴定后获得供实验用AASCs.60只Wistar大鼠制成T_(10)脊髓损伤模型后随机分为三组,1周后将预先用Hoechst33342标记的AASCs移植到三组大鼠体内:Ⅰ组,尾静脉移植;Ⅱ组,鞘内移植(经蛛网膜下腔);Ⅲ组,局部损伤处移植.术后采用BBB评分评价大鼠功能恢复.3个月后行BDA皮质脊髓束顺行示踪标记.标记2周后处死动物,取出损伤处脊髓行快速冰冻切片,行Cy3荧光探针染色、神经丝蛋白200(NF200)和HE染色.结果 AASCs在体外可稳定传4代以上,并表达S-100抗原.从术后第4周开始,BBB评分在各组间差异有统计学意义.至实验结束时,HE染色显示Ⅲ组中损伤空洞明显小于其余两组,NF200免疫组化染色阳性面积占总面积百分比各组间差异有统计学意义.BDA神经示踪显示,Ⅲ组中有较多的再生轴突通过脊髓损伤区,横断面上再生轴突的免疫组化阳性面积各组间差异有统计学意义.结论 局部损伤处移植AASCs可以有效保证移植细胞的数量,AASCs通过分泌多种营养因子和桥接损伤轴突再生的作用促进大鼠脊髓损伤后的功能恢复.     

不同途径移植自体激活雪旺细胞修复大鼠脊髓损伤

Objective To explore the curative effect of autologous activated Schwann cells (AASCs) in rat spinal cord injury (SCI) via different grafting routes. Methods Saphenous nerve of the adult Wistar rat was ligated for one week to activate Schwann cells. And then AASCs were cultured, passaged, purified and identified in vitro. Sixty Wistar rats were all made into SCI model at T10 and then divided into three groups randomly. One week after injury, AASCs were transplanted into the SCI rats via three different routes [group Ⅰ: tail vein; group Ⅱ: intrathecal (subarachnoid route); group Ⅲ: intraspinal cord]. BBB score was carried out to evaluate the functional recovery of the injured rats at weekly interval postinjury. Three months later, corticospinal tract (CST) was labeled by 10% BDA. Two weeks after labeling, the rats were sacrificed and then their injured spinal cord tissues were take out to carry out 10 μm fast frozen section, which was then followed by Cy3 fluorescent probe staining, NF200 and HE staining. Results AASCs passed over 4 stable passages and expressed S-100 antigen in vitro. The difference among groups could be considered sig-nificant in BBB score on the 5th week postinjury. HE staining showed that the injured cavity was evidently smaller in group Ⅲ compared with other two groups. Statistical difference also existed among groups by com-paring the percentage of positive response areas in NF200 staining. 10%BDA stain demonstrated that more regenerated axons passed through the injured cavity in group Ⅲ when compared with other two groups, which was also confirmed by immunohistochemistry stain. Conclusion The amount of grafted AASCs can be guaranteed effectively in injured epicenter via the grafting route of intraspinal cord. AASCs promote the repair after SCI by secreting multiple kinds of neurotrophic factors and bridge injured axons for regrowth.     

自体激活雪旺细胞移植治疗急性脊髓损伤的实验研究

目的 探讨自体激活雪旺细胞（autologous activated Schwann cells,AASCs）移植治疗急性脊髓损伤的疗效.方法 通过结扎单侧隐神经从而激活自体雪旺细胞并进行体外分离、培养及纯化,测定其不同培养时期培养基中神经生长因子、脑源性神经营养因子含量的变化.Wistar大鼠90只,以纽约大学脊髓损伤打击器建立T10急性脊髓损伤模型.随机分为3组,每组30只：单纯DMEM移植对照组、自体未激活雪旺细胞（autologous Schwann cells,ASCs）移植组和AASCs移植组.对各组实验动物脊髓损伤后肢体功能的恢复情况进行行为学评分（BBB评分）、体感诱发电位与运动诱发电位（somatosensory evoked potential and motor evoked potentials,SEP ＆ MEP）、生物素标记的葡聚糖胺示踪皮质脊髓束（corticospinal tract,CST）观察,比较各组差异.结果 BBB评分4周以后组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）,其中细胞移植组明显高于对照组（P＜0.05）;SEP、MEP潜伏期和波幅值8、12周后组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）;CST标记距离损伤中心向头端方向0.6、1.2、1.8、2.4mm和距离损伤中心向尾端方向0.6、1.2、1.8mm组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 AASCs可分泌大量神经营养因子,并能明显促进急性脊髓损伤后的轴突再生和肢体功能恢复.     

人脐血单个核细胞联合雪旺细胞修复脊髓损伤的实验研究

目的 探讨人脐血单个核细胞(haman cord blood mononuclear cells,HCMNCs)与大鼠雪旺细胞(Schwann cells,SCs)联合移植应用于大鼠脊髓损伤的疗效.方法 健康成年8周龄Wistar雌性大鼠40只,体重(200±30)g.利用Impactor Model Ⅱ型打击器制成T10脊髓损伤模型.40只大鼠随机分成4组,每组10只,即DMEM实验对照组、HCMNCs移植组、SCs移植组、HCMNCs+SCs联合移植组.用HE染色、顺行示踪染色及电镜观察脊髓损伤处轴突再生情况,对各组实验动物脊髓损伤后肢体功能的恢复情况进行行为学评分(BBB评分)及脚印分析实验,综合评估脊髓功能恢复程度.结果 HCMNCs+SCs联合移植治疗能够明显促进神经再生,改善功能,减少空洞形成.BBB评分和脚印分析实验显示各组疗效比较,差异有统计学意义.组织学和电镜观察神经轴突再生情况与功能学检查的结果 相吻合.结论 以分泌各种神经营养因子为特点的SCs为平台,联合移植后诱导HCMNCs向神经元及神经胶质细胞分化,可促进脊髓损伤的恢复.     

胚胎脊髓细胞悬液植入急性成年大鼠损伤脊髓

目的：建立胚胎脊髓细胞悬液移植于脊髓损伤模型，以评价其治疗脊髓损伤的可能性。方法：４２只Ｗｉｓｔａｒ大鼠以改良Ａｌｅｎ法（５０ｇｃｍ）打击脊髓，３天后将孕１４天（Ｅ１４）ＦＳＣＳ２０μｌ植入损伤空腔，移植后２、４、６、８、１０、１２周，以光、电镜、免疫组织化学观察移植物存活、分化及其与宿主之间关系。结果：移植细胞逐渐长大。充满不规则空腔，宿主ＮＦ、５－ＨＴ、ＣＧＲＰ纤维分别出现于移植物，ＧＦＡＰ纤维于宿主移植物交界处适量存在。移植成神经细胞、成少突胶质细胞、成星形细胞的细胞器日渐完善，细胞功能活跃。复杂及多样突触与细胞连接，将上述细胞与神经纤维、胶质纤维、毛细血管网在三维空间内连接成一体，并与宿主紧密嵌合。结论：（１）成年大鼠脊髓损伤３天后植入ＦＳＣＳ可以存活。（２）移植物进入宿主后，出现再分布，继而器官样分化。（３）长、短传导束进入移植物，显示了移植物的桥作用。（４）成少突胶质细胞的神经营救作用。（５）移植区内出现多种突触，提示移植物中继作用的可能性。     

氯化锂联合自体激活雪旺细胞治疗脊髓损伤

目的 观察氯化锂联合移植自体激活雪旺细胞(AASCs)在治疗脊髓损伤(SCI)中的作用.方法 Wistar成鼠48只建立T10急性SCI模型.随机均分为4组:AASCs移植组、氯化锂移植组、氯化锂联合AASCs组和DMEM移植组.术后行体感诱发电位(SEP),运动诱发电位(MEP)检查和BBB评分.12周后进行10%BDA神经顺行示踪标记,切片后,行Cy3荧光探针染色、免疫组织化学及苏木素-伊红(HE)染色.结果 术后4周BBB评分各组之间差异开始有统计学意义(F=46.897,P<0.05).实验结束时,SEP、MEP波幅值各组间差异有统计学意义(F-SEP=15.47,P<0.05;F-MEP=8.974,P<0.05);BDA示踪,HE和免疫组织化学染色各组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 氯化锂联合AASCs移植可以显著改善SCI后的功能恢复.     

许旺细胞修复脊髓损伤相关研究

脊髓损伤修复至今仍是医学界难题之一,以许旺细胞(SC)为基础的细胞移植在近年脊髓损伤修复研究方面取得很大进展。SC单独移植对脊髓损伤后运动功能恢复仍然有限,很多研究更多地关注SC与其他种子细胞联合移植,以提高cAMP水平,中和神经抑制性因子等。目前对损伤轴突修复研究主要采用以SC为基础的联合移植方式,但仍有很多问题如SC移植存活率、内源性SC移行等有待进一步研究。     

人脐带间充质干细胞与自体激活雪旺细胞联合移植修复脊髓损伤的实验研究

目的 通过观察人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)和大鼠自体激活雪旺细胞(AASCs)联合移植修复脊髓损伤的疗效,探讨AASCs对hUCMSCs体内存活、分化的影响.方法 分离、培养hUCMSCs和大鼠AASCs.通过IMPACTOR MODEL-Ⅱ型打击仪将80只Wistar成年雌性大鼠均制作成T10损伤模型,随机分为四组(n=20):DMEM移植对照组、hUCMSCs移植组、AASCs移植组、hUCMSCs与AASCs联合移植组.比较符组动物恢复情况,进行行为学评分(BBB评分),NF-200和GFAP染色观察细胞存活、分化情况,生物素葡聚糖胺示踪观察皮质脊髓束再生情况.结果 4周后各组间BBB评分差异有统计学意义(P<0.05),6周后联合移植组明显高于其他三组,差异有统计学意义(P<0.05).免疫组化染色示联合移植组的hUCMSCs存活数量,NF-200、GFAP阳性荧光面积均明显高于hUCMSCs移植组,差异有统计学意义(P<0.05),BDA顺行爪踪可见联合移植组于损伤区染色较多,部分纤维延续至损伤远端.结论 AASCs可支持移植的hUCMSCs在损伤部位存活并向神经方向分化,hUCMSCs与AASCs联合移植较二者单独移植能更有效地促进脊髓损伤后运动功能的恢复和轴突再生.     

成鼠胸髓损伤后延迟植入雪旺细胞与胚胎脊髓细胞混悬液

目的 了解单纯雪旺细胞（ｓｃｈｗａｎｎ．ｃｅｌｌ,ＳＣ）移植或附加胚胎脊髓细胞（ｆｅｔａｌ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｃｅｌｌ,ＦＳＣ）对中枢轴索再生的作用。方法 ＳＣ悬液（ｓｃｈｗａｎｎ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ,ＳＣＳ）单独和与ＦＳＣ悬液（ｆｅｔａｌ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ,ＦＳＣＳ） 联合植入成鼠胸段（Ｔ７）打击伤１周脊脊空腔中,相同量的Ｄｕｌ－ｂｅｃｃｏ     

Effect of fetal spinal cord graft with different methods on axonal pathology after spinal cord contusion

ＡＯｒｔｈｏｐｅｄｉｃＣｅｎｔｅｒｏｆＰＬＡ ,88ｔｈＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉｎａｎＭｉｌｉｔａｒｙＣｏｍｍａｎｄ ,Ｔａｉ ａｎ 2 710 0 0 ,Ｃｈｉｎａ (ＺｈａｎｇＱ)ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｉｅｌｄＳｕｒｇｅｒｙ/ＤａｐｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ,ＴｈｉｒｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ,Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ 40 0 0 42 ,Ｃｈｉｎａ (ＬｉａｏＷＨ ,ＷａｎｇＺＧａｎｄＷｕＹＭ)ｘｏｎａｌｉｎｊｕｒｙａｎｄｌｏｓｓｏｆｗｈｉｔｅｍａｔｔｅｒ (ＷＭ )ａｒｅｔｈｅｍａｊｏｒｃａｕｓ…     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤的治疗一直是医学界的难题。脊髓损伤后神经元轴突再生困难,同时神经胶质瘢痕阻碍再生轴突的通过。嗅鞘细胞是一种特殊的神经胶质细胞,具有中枢神经系统（CNS）星形胶质细胞和外周雪旺氏细胞的特性,许多基础与临床研究发现嗅鞘细胞是神经系统中具有促进神经轴突再生,引导轴突正确生长的独特细胞,取得了一定的成果,为脊髓损伤的修复带来了希望。     

软骨素酶联合雪旺细胞移植促进脊髓损伤修复的研究

目的 观察软骨素酶联合雪旺细胞移植在治疗急性脊髓损伤中的作用.方法 Wistar大鼠80只,制作T10节段急性脊髓损伤模型(致伤力10g×4cm).随机分成4组:对照组、雪旺细胞移植组、硫酸软骨素酶治疗组和联合治疗组.采用脊髓运动功能评分(BBB法,总分21)、神经电生理(SEP&MEP)检查和生物素葡聚糖胺(BDA)神经示踪及标本NF-200免疫组织化学染色等比较各组疗效.结果 4周后BBB评分实验组较对照组明显提高,各组间差异有统计学意义(P<0.05)(12周时4组分别为9.11±1.41、11.22±1.59、11.77±1.76和14.22±1.92).术后4周起,神经电生理检查实验组动物较对照组差异有统计学意义(P<0.05),12周时4组MEP的波幅分别恢复至术前的28.8%、44.9%、49.0%和56.8%.BDA示踪显示联合组较对照组有较多的神经纤维穿过损伤部位.NF-200免疫组织化学染色吸光度(A)比较各组间差异有统计学意义(P<0.05),3个实验组纵切片A值与对照组的比值为1.44、1.55和2.78.结论 联合应用软骨素酶和雪旺细胞移植来治疗脊髓损伤,起到协同作用,效果好于单一方法,能明显促进脊髓损伤后的轴突再生和肢体功能恢复.     

大鼠雪旺细胞对脊髓源性神经干细胞生长及分化的影响

目的 观察雪旺细胞(SCs)在体外对脊髓来源的神经干细胞(NSCs)生长及分化的影响.方法 分别从胎鼠脊髓和出生24 h内的SD大鼠坐骨神经分离培养NSCs及SCs并鉴定.实验分成对照组:NSCs单独培养组;A组:脑源性神经营养因子(黼)与NSCs共培养组;B组:SCs与NSCs共培养组;C组:BDNF+SCs与NSC共培养组.观察NSCs的形态学变化,计数并测量细胞团的数量及直径.利用免疫细胞化学方法检测神经元样细胞的表达并计算其百分率及阳性细胞突起的平均长度.结果 来源于新生大鼠脊髓组织的NSCs能够表达NSCs的标志物神经巢蛋白(Nestin),NSCs可分化为神经元及星形胶质细胞;72 h,A、B、C组细胞团的数量及细胞团的平均直径,均大于对照组(P＜0.05);传代培养3 d、7 d、14 d的NAP-2染色阳性神经元样细胞所占的百分率及阳性细胞突起平均长度均大于对照组(P＜0.05).结论 大鼠SCs在体外能够促进脊髓来源的NSCs生长并诱导其定向分化.     

急性脊髓损伤患者血清蛋白质组学研究

目的观察急性脊髓损伤(SCI)患者和健康人群血清差异表达蛋白,寻找急性SCI相关特异性代谢通路或蛋白标志物。方法 2013年7月—2014年12月,采集9例急性颈部SCI患者(病例组)和9例年龄、性别与病例组相匹配的健康受试者(对照组)的血液样本。记录病例组损伤时间、颈椎日本骨科学会(JOA)评分等基本信息。应用非标记相对定量蛋白质组学技术比较病例组与对照组血清蛋白质谱,采用Spearman相关分析寻找差异表达蛋白与患者年龄、损伤时间以及JOA评分的相关性。应用基因本体论(GO)分析、BiNGO富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果共发现22个差异表达蛋白。与对照组相比,病例组11个蛋白表达上调(包括果糖-二磷酸醛缩酶、碳酸酐酶等),且与损伤时间和颈椎JOA评分呈正相关;11个蛋白表达下调(包括免疫球蛋白等),且与损伤时间和颈椎JOA评分呈负相关。生物信息学分析发现这些差异表达蛋白主要富集在果糖和甘露糖代谢通路、血小板激活代谢通路、黏附连接代谢通路和氮代谢通路。结论急性SCI患者和健康人群血清蛋白质谱存在差异,果糖-二磷酸醛缩酶、碳酸酐酶等有望成为急性SCI潜在的分子标志物。