EGCG对鼻咽癌细胞增殖抑制和凋亡诱导时NF-κB和caspase-3的表达变化

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）作用于鼻咽癌CNE-2细胞后,对转录因子NF-κB和凋亡效应酶caspase-3表达的影响,以及这两个基因的表达与鼻咽癌细胞凋亡和增殖的关联性。方法体外培养鼻咽癌细胞CNE-2,MTT法检测细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期的改变。RT-PCR检测NF-κB和caspase-3的表达。结果EGCG能明显的抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导其凋亡,并表现为浓度依赖性：流式分析显示,EGCG干预鼻咽癌细胞CNE-2在48小时后,细胞被阻滞于G1期。80mg/L EGCG处理鼻咽癌细胞24小时和48小时后,均能下调NF-κB表达,上调caspase-3表达。结论EGCG可能通过抑制NF-κB和诱导caspase-3的表达来发挥其抗鼻咽癌细胞的生物学作用。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨虎杖苷诱导鼻咽癌细胞凋亡的初步研究

目的　基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨虎杖苷（polydatin, PYD）诱导鼻咽癌细胞凋亡的机制。方法 用不同梯度浓度的PYD处理CNE-1细胞后,采用CCK-8法检测虎杖苷对CNE-1细胞增殖的抑制作用,吖啶橙/溴化乙锭（acridine orange/ethidium bromide,AO/EB）双荧光染色法显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪分细胞周期分布;qRT-PCR和Wester n blot法检测细胞中PI3K、AKT、mTOR、p70S6K的mRNA和蛋白表达。结果 CNE-1细胞经不同PYD（40、80、160 μg/ml）干预48小时 后,CNE-1细胞增殖抑制率,凋亡率呈浓度依赖性增加;G0/G1、S期细胞的百分比呈浓度依赖性降低,而G2/M期细胞的百分比呈浓度依赖性增加;CNE-1细胞中PI3K、AKT、mTOR、p70S6K的mRNA和蛋白表达明显下调,均呈浓度依赖性。结论　PYD具有抑制鼻咽癌CNE-1细胞增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能是PI3K/AKT/mTOR信号通路受到PYD抑制,致使其下游基因蛋白表达下降。     

microRNA抑制鼻咽癌hTERT基因表达的实验研究

目的观察microRNA对鼻咽癌CNE-2细胞hTERT基因表达的调控效应，探讨microRNA在鼻咽癌基因治疗的应用前景。方法构建靶向hTERT基因的microRNA表达质粒，脂质体法转染鼻咽癌CNE-2细胞，RT-PCR检测转染细胞中hTERT基因的mRNA水平，Western Blotting观察microRNA对hTERT蛋白表达水平的调控效应，CCK-8比色法检测microRNA对细胞生长的抑制作用，流式细胞学检测miRNA诱导细胞凋亡的作用。结果在mcroiRNA表达质粒转染CNE-2细胞后，hTERT的mRNA表达水平下调，蛋白表达水平降低，细胞周期在G0～G1期受阻，并诱导细胞凋亡。结论microRNA可在鼻咽癌中有效下调hTERT基因的表达水平，抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡，为鼻咽癌基因治疗研究奠定了一定的基础。     

EGCG对鼻咽癌细胞株CNE-2及相关基因表达的影响

目的:研究EGCG对鼻咽癌细胞系CNE-2的增殖与凋亡作用,探讨其对细胞增殖与凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法:应用MTT实验、流式细胞仪检测细胞的增殖与周期;Hoechst33258荧光染色法检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Caspase-3表达。结果:EGCG明显抑制CNE-2细胞的增殖,诱导其凋亡,该作用具有剂量-效应关系。EGCG抑制CNE-2细胞Bcl-2表达,诱导CNE-2细胞Bax、Caspase-3表达。结论:EGCG在体外具有抗鼻咽癌细胞的作用,此作用可能是通过调节细胞增殖与凋亡基因的表达实现的。     

普鲁卡因对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的影响

目的:探讨普鲁卡因(procaine)对人鼻咽癌(NPC)细胞CNE-2Z的影响。方法:体外培养的NPC细胞CNE-2Z分别加入不同浓度的普鲁卡因,并作用不同的时间。应用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5-Dimethyl-thiaoly)-2,5-diphenyl-2H tetrazolium bromide,MTT]法和流式细胞仪检测观察普鲁卡因对NPC细胞CNE-2Z的影响,同时用RT-PCR分析p16和RASSF1A mRNA的表达情况。结果:普鲁卡因能显著抑制CNE-2Z细胞增殖,该作用呈剂量-效应和时间依赖关系。普鲁卡因使细胞周期阻滞于G1期,并能上调CNE-2Z细胞RASSF1A mRNA的表达,但对p16 mRNA表达无明显影响。结论:普鲁卡因对CNE-2Z细胞有增殖抑制作用,它能上调CNE-2Z细胞RASSF1A mRNA的表达,推测这可能是普鲁卡因抑制CNE-2Z细胞增殖的重要分子机制之一。     

靶向联合阻断表皮生长因子受体和环氧化酶-2信号通路影响鼻咽癌细胞生长的研究

目的：观察联合阻断表皮生长因子受体（EGFR）和环氧化酶-2（COX-2）介导的信号通路,对鼻咽癌细胞株CNE-2的影响。方法：用EGFR-酪氨酸激酶拮抗剂和COX-2抑制剂单独和联合处理鼻咽癌细胞株CNE-2,采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,流式细胞术进行细胞周期、凋亡率的分析,Western blot检测相关蛋白表达。结果：①联合用药组CNE-2细胞生长抑制率显著大于两者单独处理组生长抑制率之和（P〈0．05）;②联合处理组细胞G1期比例大于单独处理组（P〈0．05）。联合处理组细胞凋亡率与单独处理组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;③与单独处理组相比,联合处理组出现明显的p—EGFR,COX-2表达下调。结论：联合阻断EGFR和COX-2信号通路对抑制鼻咽癌细胞株CNE-2生长,增加G1期阻滞及抑制EGFR的磷酸化和COX-2的表达方面具有协同作用。     

塞来昔布对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的：体外观察塞来昔布对人鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法观察其对鼻咽癌细胞生长的影响;透射电子显微镜检测细胞凋亡,应用流式细胞术观察DNA的含量和凋亡的变化情况,TUNEL染色法计数细胞凋亡指数。结果：体外塞来昔布抑制CNE-2细胞生长,呈浓度和时间依赖性。透射电镜观察到细胞皱缩、胞质丢失、核质浓缩以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变。流式细胞术显示细胞凋亡率显著增高,在80、100gmol／L浓度下细胞凋亡率分别为（10．47±0．18）％和（20．17±0．55）％,与对照组（1．57±0．27）％比较差异均有统计学意义;塞来昔布使G0／G1期细胞比例升高,S和G2／M期比例下降,呈一定剂量效应关系。TUNEL染色法显示药物组凋亡率明显高于对照组（P〈0．01）。结论：塞来昔布能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞增殖,并诱导其凋亡;其机制可能与诱导凋亡和阻止细胞周期进展有关。     

Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制Bcl-2基因对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用

目的观察Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（B-cell lymphoma gene 2,Bcl-2gene）表达对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）CNE-2细胞的生长抑制作用。方法将构建成功的重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-15a/16-1经Lipofectamine 2000转染CNE-2细胞,RT-qPCR检测miR-15a/16-1、Bcl-2 mRNA表达水平,流式细胞术和WesternBlot检测Bcl-2、caspase-3蛋白表达水平,CCK-8法分析细胞生长抑制情况,4,6-二脒基-2-苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）染色观察细胞凋亡状况。结果转染后miR-15a表达增高（F=547.525,P均〈0.001）;miR-16-1表达增高（F=99.979,P均〈0.001）;Bcl-2 mRNA表达无明显差别（F=0.220,P〉0.05）;Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达增高;细胞在体外凋亡明显;细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效关系。结论 Hsa-miR-15a/16-1对Bcl-2基因的靶向抑制,可体外对CNE-2细胞产生增殖抑制和促进凋亡作用。     

蛇床子素对人鼻咽癌细胞CNE2细胞增殖和凋亡的影响

目的　探讨蛇床子素对人鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响，寻找鼻咽癌综合治疗的新思路。方法  以蛇床子素不同梯度浓度处理CNE2细胞，采用MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡，RT-PCR和Western blot分别测定Bax、Bcl-2mRNA和蛋白的表达水平。结果　蛇床子素处理CNE2细胞24、48、72 h对细胞增殖均有不同程度抑制作用，且呈时间、剂量依赖性（P <0.05）。蛇床子素干预CNE2细胞48 h后，流式细胞术结果表明细胞凋亡率显著升高（P <0.01），RT-PCR与Western blot检测提示Bax mRNA、蛋白表达显著增加，而Bcl-2 mRNA及蛋白明显下调（P <0.01），均呈浓度依赖性。结论　蛇床子素对CNE2细胞具有抑制增殖和促进凋亡的生物学效应。     

17-AAG联合EGCG对人鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究

目的　研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）单药或联合使用对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法　MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果　①17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关（P＜0.01）;两者联合抑制作用显著增 加,且表现出时间、剂量依赖性（P＜0.01）。②RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论　17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。     

脑源性神经营养因子促进鼻咽癌细胞CNE-2迁移的分子机制

目的 检测脑源性神经营养因子BDNF对鼻咽癌细胞CNE-2迁移过程的影响,以探讨BDNF对无TrkB表达的鼻咽癌细胞促进迁移的作用及其机制.方法 应用免疫印迹方法检测CNE-2细胞BDNF和TrkB蛋白的表达,采用细胞划痕实验检测BDNF对CNE-2细胞迁移能力的影响.结果 CNE-2细胞中高表达BDNF但不表达TrkB.BDNF依然能够促进CNE-2细胞迁移而且具有剂量依赖性,其中25 ng/mL BDNF促细胞迁移的作用具有明显的统计学差异(P＜0.01).K252a抑制Trk激酶活性不影响BDNF促细胞迁移作用(P＜0.01).结论 BDNF在不表达其高亲和力受体TrkB的鼻咽癌细胞中依然能够发挥促细胞迁移的作用,而且这一作用的机制很可能是通过其他受体及通路进行介导的.     

新福菌素对人鼻咽癌细胞株CNE-2凋亡杀伤作用的研究

目的探讨新福菌素对人鼻咽癌细胞株CNE-2的体外杀伤效应及作用机制。方法体外培养CNE-2细胞,应用MTT比色法观察新福菌素对CNE-2细胞增殖的抑制作用。倒置显微镜下观察实验组细胞的生长及结构变化,同时采用逆转录．聚合酶链反应技术（RT—PCR）检测BaxmRNA基因的表达。结果新福菌素在体外对CNE-2细胞有较强的增殖抑制作用,能诱导CNE-2细胞凋亡;同时进行BaxmRNA基因表达检测发现对照组CNE-2细胞BaxmRNA表达呈弱阳性;实验组CNE．2细胞BaxmRNA表达均呈阳性,且随着新福菌素浓度的增加而逐渐增强。结论新福菌素对CNE-2细胞有明显的杀伤效应,杀伤机制可能是诱导鼻咽癌细胞凋亡,并与凋亡相关基因BaxmRNA表达上调有关。     

建立稳定表达融合自杀基因CD／UPRT．UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株

目的：建立稳定表达融合自杀基因CD／UPRT．UL49的CNE-2鼻咽癌细胞株。方法：构建表达载体pcDNA3．1（一）E6．BARFlP．cD／UPRT．UL49,经脂质体法转染CNE-2细胞,G418和前体药物5-氟胞嘧啶筛选出阳性克隆细胞并扩大培养。抽提阳性克隆细胞总蛋白质,Western-blotting检测目的基因表达。结果：融合自杀基因CD／UPRT．UL49在CNE2转染细胞内稳定表达。结论：本组通过脂质体转染技术,成功地建立了稳定表达融合CD／UPRT．UL49基因的CNE-2细胞株。     

高压氧对鼻咽癌CNE-2细胞株放射敏感性的体外研究

摘要：目的体外观察高压氧对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响。方法将鼻咽癌CNE-2细胞随机分为A、B、C、D四组。A组：细胞用0．22MPa高压氧处理60min后立即进行2Gy放疗;B组：细胞只应用0．22MPa高压氧处理60min;C组：细胞只进行2Gy放疗处理;D组：细胞不作任何处理。应用MTT法检测各组细胞生长抑制率,PI染色检测各组细胞死亡率,流式细胞计数各组细胞凋亡率。结果A、B、C3组细胞生长抑制率分别为（18．67±4．54）％,（7．47±4．88）％,（14．06±9．39）％,A组与B组和C组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;A、B、C、D4组死亡率分别为（11．70±1．45）％,（4．00±0．56）％,（8．43±0．83）％,（1．43±0．51）％。A与B、C、D组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;A、B、C、D4组凋亡率分别为4．37±1．12、2．19±0．35、2．70±0．38、1．65±0．20,A与B、C、D组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论高压氧对鼻咽癌CNE-2细胞有较强的放射增敏作用。     

E6．BARFlpN控自杀基因CD／UPRT．UL49的表达对鼻咽癌细胞的体外杀伤效应

目的体外实验观察及检测E6．BARFlP．CD,UPRT．UL49,5-Fc系统对鼻咽癌上皮细胞系2（nasopharyngealcarcinomaepithelial-2,CNE-2）的杀伤效应。方法用高效液相色谱法测定Y射线干预对前体药物5．氟胞嘧啶（5．fluorocytosine,5．Fc）转换效率的影响：用相对存活率表示γ射线联合前体药物5．Fc对转染自杀基因E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49的CNE-2细胞和野生型CNE-2细胞的杀伤作用;流式细胞仪检测1,射线联合前体药物5-Fc对转染自杀基因E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49的CNE-2细胞的杀伤作用及旁杀效应。统计分析采用SPSSl0．0软件进行f检验及方差分析,P〈0．05表示有统计学意义。结果转染自杀基因E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49的CNE．2细胞在接受放射治疗联合前体药物5．Fc的作用后,其生长受到不同程度的抑制。即使仅有10％的CNE一2细胞成功转染了自杀基因E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49,亦可因旁杀效应而杀死37．46％的肿瘤细胞。结论E6．BARFlP．CD／UPRT．UL49／5．Fc自杀基因,前体药物系统对鼻咽癌CNE-2细胞具有直接杀伤和旁杀效应。     

POT1蛋白在人鼻咽癌细胞系及鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的探讨端粒保护蛋白1(protection of telomeres 1,POT1)在人鼻咽癌细胞系及鼻咽癌组织中的表达、细胞定位及临床意义。方法应用Western blot法检测POT1蛋白在人鼻咽癌系、人鼻咽上皮细胞系、鼻咽癌组织、癌旁组织中的表达;应用细胞免疫荧光检测POT1蛋白在鼻咽癌细胞中的定位。结果 POT1蛋白在人鼻咽癌细胞系CNE-1、5-8 F、CNE-2、6-10 B中的表达强度高于在人鼻咽上皮细胞系NP69中的表达强度,分别为2.8、2.3、1.9、1.5倍;POT1蛋白主要定位于细胞质;鼻咽癌组织中POT1蛋白表达量(0.6414±0.0979)明显高于癌旁组织中的表达量(0.4386±0.0912),两组比较有统计学意义(P<0.05);鼻咽癌组织中POT1蛋白表达强度与鼻咽癌的临床分期、T分期有关(P<0.05),但与患者年龄、性别、颈部淋巴结转移无关(P>0.05)。结论 POT1蛋白表达可能与鼻咽癌的发生与发展有关。