蛋白酪氨酸磷酸酶基因和磷酸化蛋白激酶B在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的 检测蛋白酪氨酸磷酸酶基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-AKT)在人类中耳胆脂瘤上皮组织中的表达情况及其相关性,探讨他们在中耳胆脂瘤上皮细胞形成机制中的重要作用.方法 应用免疫组织化学SP法检测40例人中耳胆脂瘤组织标本及15例正常皮肤标本中PTEN、P-AKT蛋白的表达.结果 免疫组化显示细胞质PTEN主要在胆脂瘤组织和正常皮肤组织的上皮细胞浆着色,阳性表达率为50.0％,明显低于正常皮肤组的86.6％ (x2=5.075,P＜0.01);P-AKT蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织和正常皮肤组的上皮细胞浆着色,阳性表达率分别为72.5％和26.7％,两者差异具有显著性(x2=7.605,P=0.006,P＜0.01),15例外耳道正常上皮组织中,PTEN与P-AKT蛋白的表达之间呈显著负相关(r=-0.689,P＜0.0001,P＜0.01).结论 PTEN和P-AKT蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织中的异常表达可能与胆脂瘤上皮的高度增殖和抗凋亡状态密切相关.PTEN蛋白表达缺失导致其抑制作用减弱,使P-AKT蛋白表达过度,继而引起胆脂瘤上皮细胞凋亡受抑制.     

P-EGFR、P-ERK和NF-κB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的研究磷酸化表皮生长因子受体(P-EGFR)、磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)和细胞核转录因子κB(NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮组织中的表达情况,探讨EGFR/ERK/NF-κB信号通路在中耳胆脂瘤发病机制中的作用。方法应用免疫组织化学SP法及Western blot(WB)免疫印迹法检测30例中耳胆脂瘤标本及15例正常外耳道皮肤组织中P-EGFR、P-ERK和NF-κB蛋白的表达。结果(1)P-EGFR蛋白阳性表达主要定位于细胞质和(或)细胞膜,在胆脂瘤组的阳性表达率为63%,明显高于正常外耳道皮肤组的20%(P<0.05);P-ERK蛋白阳性表达主要定位于细胞质和(或)细胞核,在胆脂瘤组的阳性表达率为70%,明显高于正常外耳道皮肤组的20%(P<0.05);NF-κB蛋白阳性表达主要定位于细胞核,在胆脂瘤组的阳性表达率为60%,明显高于正常耳道皮肤组的13.3%(P<0.05)。在30例中耳胆脂瘤组织中,P-EGFR、P-ERK和NF-κB两两之间呈正相关关系(P<0.05)。(2)Western blot免疫印迹法检测结果显示:中耳胆脂瘤组中P-EGFR、P-ERK和NF-κB的表达量明显高于正常外耳道皮肤组的表达量。结论 P-EGFR、P-ERK和NF-κB在中耳胆脂瘤上皮中表达增强,EGFR/ERK/NF-κB信号通路可能在中耳胆脂瘤组织的形成和发展过程中起重要作用。     

缺氧诱导因子-1α及诱导型一氧化氮合酶在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的：研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义,探讨其在发病机制中的可能作用。方法：运用免疫组织化学SP法检测21例胆脂瘤标本及11例正常外耳道皮肤标本中HIF-1α、iNOS的表达。结果：在21例中耳胆脂瘤上皮及11例正常外耳道皮肤中,HIF-1α的表达指数分别为52．49±13．80、0．60±0．49,两者比较差异有统计学意义（P〈O．01）;iNOS的表达指数分别为92．05±27．84、1．15±0．84,两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）;HIF-1α与iNOS的表达指数呈正相关（r=0．536,P〈0．05）。结论：HIF-1α及iNOS蛋白在中耳胆脂瘤上皮中存在高度表达;缺氧及其相关因子HIF-1α、iNOS等可能在中耳胆脂瘤的发生、发展过程中起着重要促进作用。     

PTEN、 P-Akt和NF-кB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的 研究10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化Akt (P-Akt)及核转录因子- κB (NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨PI3K (phosphatidylinositol-3-kinase,磷脂酰肌醇-3激酶)- Akt信号通路在中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制中的可能作用.方法 采用免疫组织化学SP法(辣根酶标记链霉卵白素连接法,streptavidin - peroxidase conjugated method)检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中PTEN、P-Akt及NF- kB蛋白的表达.结果 PTEN蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为36.7％,明显低于正常外耳道皮肤组的93.3％ (P＜ 0.01);P-Akt蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞胞质,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为70.0％,明显高于正常外耳道皮肤组的26.7％ (P＜0.01);NF- κB蛋白阳性表达定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为63.3％,明显高于正常外耳道皮肤组的20.0％ (P＜ 0.01).在30例中耳胆脂瘤上皮组织中,PTEN分别与P-Akt、NF-κB蛋白的表达之间呈显著负相关(P＜0.01),而P-Akt和NF- κB蛋白的表达呈显著正相关(P＜0.01).结论 PTEN、P-Akt和NF- κB在中耳胆脂瘤上皮的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用.胆脂瘤上皮中PI3K-Akt信号通路的激活可能参与了胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制.     

核转录因子κ-Bp65在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的检测核转录因子-κBp65（nuclear factor kappa Bp65,NF-κBp65）在中耳胆脂瘤上皮中的表达和活化,探讨其在中耳胆脂瘤发病机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学SP法检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中NF-κBp65蛋白的表达。结果NF-κBp65蛋白阳性表达定位于上皮细胞核。NF-κBp65蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织中阳性表达率为63.3%,明显高于正常外耳道皮肤组的20.0%（P〈0.01）。结论NF-κBp65蛋白在中耳胆脂瘤上皮的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用。胆脂瘤上皮中NF-κBp65的活化可能参与了胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制。     

中耳胆脂瘤组织中的Ras蛋白的表达及病理意义

目的观察Ras蛋白在继发性中耳胆脂瘤组织中的表达活性及其病理意义。方法32例胆脂瘤上皮标本和12例正常面部表皮标本，免疫组织化学法（SP法）分别检NRas蛋白表达水平，并应用HPIAL-2000高分辨图象分析系统进行半定量分析，比较不同组织中的Ras活性表达差异。结果Ras蛋白的免疫阳性染色物呈棕黄色颗粒。在胆脂瘤上皮细胞，阳性反应物位于胞膜者28例（28／32）；同时位于胞膜、胞浆者2例（2／32）；仅存在于胞浆者2例（2／32）。在正常表皮细胞，阳性反应物主要位于胞膜，以基底层细胞着色为主。两组的阳性反应物平均吸光度（A值）分别为0．826和0．438，组间差异具有统计学意义（P〈0．001）。结论继发性中耳胆脂瘤上皮组织中Ras蛋白的表达活性明显升高，提示胆脂瘤上皮具有高度的增殖活性。     

PTEN、P-Akt和NF-κB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的研究10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化Akt(P-Akt)及核转录因子-κB(NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨PI3K(phosphatidylinositol-3-kinase,磷脂酰肌醇-3激酶)-Akt信号通路在中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学SP法(辣根酶标记链霉卵白素连接法,streptavidin-peroxidase conjugated method)检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中PTEN、P-Akt及NF-κB蛋白的表达。结果 PTEN蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为36.7%,明显低于正常外耳道皮肤组的93.3%(P<0.01);P-Akt蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞胞质,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为70.0%,明显高于正常外耳道皮肤组的26.7%(P<0.01);NF-κB蛋白阳性表达定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为63.3%,...     

COX-2和PTEN在中耳胆脂瘤中的表达及相关性研究

目的 检测中耳胆脂瘤中环氧化酶-2(COX-2)和磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN) 的表达,探讨COX-2和PTEN在中耳胆脂瘤发病机制中的作用。方法 收集2018年5月—2019年4月就诊于西南医科大学附属医院手术的中耳胆脂瘤标本35例、中耳肉芽标本20例,随机收集上述患者的外耳道正常皮肤10例作为对照组。应用免疫组化染色、免疫印迹法(Western blot)检测3组标本中COX-2和PTEN的表达,运用Pearson相关性分析检验COX-2和 PTEN在中耳胆脂瘤表达的相关性。 结果 COX-2在中耳胆脂瘤组中的免疫及蛋白表达明显强于中耳肉芽组及对照组,PTEN在中耳胆脂瘤组中的免疫及蛋白表达明显弱于中耳肉芽组及对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05),且中耳胆脂瘤组中COX-2和PTEN的表达呈负相关(P<0.05)。 结论 COX-2表达增加和PTEN表达减少与中耳胆脂瘤的发病密切相关,二者可能通过PI3K/Akt信号通路参与了中耳胆脂瘤的发生发展。     

M CP -1和 FN 在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的探讨单核细胞趋化因子（monocyte chemotactic factor ,MCP -1）和纤维连接蛋白（fibronectin , FN）在继发性中耳胆脂瘤上皮中的表达及其对胆脂瘤上皮侵袭能力的影响。方法应用免疫组织化学MaxVi-sionTM法检测MCP-1和FN在30例中耳胆脂瘤上皮、20例胆脂瘤患者耳后正常皮肤、16例非胆脂瘤患者耳后正常皮肤中的表达,应用计算机图像分析系统对其阳性表达灰度值情况及分析,比较三组之间 MCP -1和 FN表达的差异。结果 MCP-1阳性细胞表达主要分布于胆脂瘤上皮全层,其中棘层呈高表达,MCP-1在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为70％,灰度值为147．2±20．1,强于胆脂瘤患者耳后正常皮肤中的阳性表达（35％,200．8±18．4）和非胆脂瘤患者耳后正常皮肤中的阳性表达（37．5％,193．3±15．5）（ P＜0．05）。FN阳性细胞主要分布于胆脂瘤上皮全层,基底层、棘层和基质呈高表达,FN在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为76．7％,灰度值为139．2±18．5,强于胆脂瘤患者耳后正常皮肤中的阳性表达（30％,195．0±12．9）和非胆脂瘤患者耳后正常皮肤中的阳性表达（31．3％,191．6±13．5）（P＜0．05）。在30例中耳胆脂瘤上皮组织中,MCP-1和FN的灰度值与胆脂瘤的侵袭能力负相关（rmcp-1＝-0．682,rfn ＝-0．531,P＜0．01）,MCP-1和FN蛋白的表达不存在线性相关。结论 MCP-1和FN均在成人中耳胆脂瘤中高表达,且与中耳胆脂瘤的侵袭能力呈负相关。     

CDK4、P16在中耳胆脂瘤中的表达及意义

目的：观察细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P16在中耳胆脂瘤上皮的表达情况,探讨它们在胆脂瘤发病机制中的作用。方法：采用免疫组织化学技术SABC法检测CDK4、P16在中耳胆脂瘤35例、正常外耳道皮肤20例中的表达,并结合胆脂瘤对听小骨骨质破坏程度,采用SPSS11.5软件进行统计学分析。结果：CDK4、P16均表达于胆脂瘤上皮的棘细胞层、颗粒层和角质层,阳性率分别为68.6%、88.6%,高于对照组(前者P=0.011,后者P=0.02)。二者在胆脂瘤上皮的表达有一定的相关性,P＜0.05;与中耳胆脂瘤听小骨骨质破坏程度之间无明显相关性,P＞0.05。结论：CDK4与P16在中耳胆脂瘤发生中是共同而非单独起作用的,从细胞周期的角度可反映胆脂瘤上皮细胞过度增殖的同时也增强负调控因子来抑制增殖,使凋亡同时加快而达到新的平衡。但与骨质破坏程度可能无直接关系。     

角化细胞生长因子及受体在鼓膜穿孔邻近皮肤的研究

目的观察鼓膜穿孔部位邻近皮肤中角化细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）及其受体角化细胞生长因子受体（keratinocyte growth factor receptor,KGFR）的表达情况,分析其在慢性化脓性中耳炎不同转归中的作用。方法应用免疫组化SP染色方法和多媒体图像分析系统,观察20例继发性胆脂瘤型中耳炎鼓膜穿孔部位邻近皮肤、胆脂瘤上皮以及耳道深部正常皮肤的KGF和KGFR表达,并和20例非胆脂瘤型中耳炎鼓膜穿孔部位邻近皮肤作对比。结果胆脂瘤型中耳炎鼓膜穿孔邻近皮肤KGF和KGFR的阳性表达率分别为（33.135±6.364）%和（19.965±10.570）%,介于胆脂瘤上皮与耳道正常皮肤之间,明显高于非胆脂瘤型中耳炎患者相应部位（19.380±2.827）%和（13.145±7.935）%。结论KGF和KGFR在慢性化脓性中耳炎不同部位的表达依次上升,在胆脂瘤型中耳炎鼓膜穿孔邻近皮肤的表达明显高于非胆脂瘤型中耳炎,说明胆脂瘤型中耳炎该处皮肤增生更活跃。     

STAT3蛋白活化与甲状腺乳头状癌上皮间质转化的关系及意义

目的：探讨STAT3、p-STAT3蛋白在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及其与上皮间质转化的关系及意义。方法：采用免疫组织化学方法检测56例PTC组织中STAT3、p-STAT3蛋白及上皮标志物E—cadherin和间质标志物Vimentin蛋白的表达,分析其与PTC临床病理特征间的关系及相互之间的相关性。结果：PTC组织中STAT3、p—STAT3蛋白的阳性表达率为78．6％和83．9％,明显高于癌旁甲状腺组织中的阳性表达率33．3％和20．8％（P〈0．01）。PTC组织中E-cadherin的阳性表达率为37．5％,明显低于癌旁甲状腺组织中的阳性表达率91．7％（P〈0．01）,PTC组织中Vimentin蛋白的阳性表达率为85．7％,明显高于癌旁甲状腺组织中的阳性表达率8．3％（P〈0．01）。STAT3、p-STAT3、E—cadherin、Vimentin蛋白的表达与性别、年龄无明显相关性（P〉0．05）,而均与PTC淋巴结转移、临床分期明显相关（P〈0．05）。STAT3、p-STAT3蛋白的表达和E—cadherin蛋白的表达呈负相关（r=-0．494,r=-0．364,均P〈0．01）,STAT3、p—STAT3蛋白的表达与Vimenin蛋白的表达呈正相关（r=0．533,P=0．000;r=0．377,均P〈0．01）。结论：PTC组织中存在STAT3蛋白活化及EMT,且与PTC淋巴结转移密切相关;STAT3通路激活可能通过介导PTC细胞EMT促进PTC侵袭转移。     

逆向诱导半胱氨酸丰富蛋白和基质金属蛋白酶9蛋白在外耳道鳞状细胞癌中的表达

目的探讨逆向诱导半胱氨酸丰富蛋白（reversioninducingcysteinerichproteinwithkazalmotifs,RECK）基因和基质金属蛋白酶9（matriXmetalIoproteinase．9,MMP9）在34例外耳道鳞状细胞癌（squamouscellcarcinoma,SCC）组织和20例正常外耳道皮肤中的表达情况。方法采用免疫组化SP法和免疫荧光法检测34例外耳道SCC及20例正常外耳道皮肤组织中RECK与MMP9的表达。结果外耳道鳞状细胞癌组织中RECK表达阳性率为44．1％（15／34）,正常外耳道皮肤中阳性表达率为80．O％（16／20）,两组比较差异有统计学意义（X2=7．2492,P〈0．01）;外耳道鳞癌组织中MMP9表达阳性率为67．6％（23／34）,正常外耳道皮肤中阳性表达率为25。0％（5／20）,两组比较差异有统计学意义（X2=11．1137,P〈0．01）。外耳道鳞状细胞癌组织中RECK和MMP9的表达与组织学分级和肿瘤分期密切相关（P〈0．05）,而在不同年龄和性别的患者中其表达无差异（P〉0．05）。鳞状细胞癌组织分化越差,RECK表达越低,而MMP9表达越高。RECK和MMP9的表达呈负相关（r=-0．453,P〈0．05）。结论RECK基因和MMP9蛋白可能参与了外耳道鳞状细胞癌的发生和发展。     

Expression of RANKL and OPG in middle ear cholesteatoma tissue

OBJECTIVES: The objective of this study was to investigate how the expression of the RANK-RANKL-OPG system mediates the formation and differentiation of osteoclasts and causes bone resorption in cholesteatoma. METHODS: An immunohistochemical analysis was carried out in 22 cholesteatoma tissues obtained during middle ear surgery and 15 normal postauricular skin tissues to examine the expression of RANKL and OPG. RESULTS: All 22 cases of cholesteatoma and the 15 cases of normal postauricular skin expressed RANKL and OPG. The count and rate of RANKL-positive cells in cholesteatoma was significantly higher than in normal postauricular skin. The count and rate of OPG-positive cells in normal postauricular skin was significantly higher than in cholesteatoma. The ratio of the positive expression rates of RANKL and OPG in cholesteatoma was statistically higher than in normal postauricular skin. CONCLUSIONS: We provide evidence suggesting that RANKL, which activates osteoclasts, plays a significant role in the mechanism of bone destruction in cholesteatoma, and that the ratio of RANKL to OPG may be a reliable indicator of bone destruction in cholesteatoma.     

凋亡抑制蛋白Survivin及Bcl-2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的研究凋亡抑制蛋白Survivin及Bcl-2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及相互关系,探讨其表达对胆脂瘤增殖能力的影响。方法运用免疫组织化学SP法检测21例胆脂瘤标本及11例外耳道骨部正常皮肤组织中Survivin、Bcl-2的表达。结果Survivin、Bcl-2在胆脂瘤上皮的表达与正常外耳道皮肤上皮比较,不仅范围广,基底上层也有表达,而且表达水平显著增高,两者比较有统计学意义(P<0.01)。胆脂瘤上皮中Survivin表达指数与Bcl-2表达指数呈正相关(r=0.553,P<0.01)。结论凋亡抑制蛋白Survivin,Bcl-2在中耳胆脂瘤的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用,它们可能参与胆脂瘤上皮的凋亡调控过程,因此适当控制Survivin,Bcl-2的表达可能会更有效地控制中耳胆脂瘤的发展。     

小干扰RNA靶向沉默磷酸酶张力蛋白同源物基因在角质细胞中的表达及其对中耳胆脂瘤增殖的影响

目的 应用小干扰RNA(siRNA)沉默第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)在角质形成细胞中的表达来研究PTEN对胆脂瘤增殖能力的影响,及与其相关的细胞外信号调节激酶5(extrace...     

FAK和FGF-2在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的：研究黏着斑激酶（FAK）及成纤维细胞生长因子-2（FGF-2）在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法：应用免疫组织化学法检测鼻咽癌及鼻咽炎组织中FAK及FGF-2蛋白表达情况,并分析其与临床病理参数的关系。结果：在鼻咽癌组织中FAK、FGF-2蛋白阳性表达率与鼻咽炎组织中的表达率比较差异均有统计学意义（均P〈0.05）;FAK、FGF-2蛋白的表达与淋巴结转移有关（分别P〈0.01和P〈0.05）,与其他病理参数无关（P〉0.05）;FAK的表达与FGF-2的表达呈正相关（r=0.350,P〈0.01）。结论：FAK、FGF-2的高表达在鼻咽癌的发生、发展中具有一定的相关性。     

中耳胆脂瘤中核因子-κB的表达与活化

目的研究中耳胆脂瘤中核因子-κB(nuclearfactorkappaB,NF-κB)的表达与活化,深入阐明胆脂瘤的发病机制。方法中耳手术中收集21例中耳胆脂瘤组织及8例正常外耳道皮肤组织,分别采用免疫组化及凝胶电泳迁移阻滞法(electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)检测2种组织NF-κB的蛋白表达分布及DNA结合活性,并进一步以胆脂瘤鳞屑刺激人角质形成细胞系HaCaT,观察细胞NF-κB的活性变化。结果胆脂瘤上皮组织中NF-κB的表达强度显著高于正常表皮组织,其阳性细胞平均积分吸光度分别为0·168±0·051、0·088±0·019(t=4·211,P<0·01),部分胆脂瘤(12/21)上皮细胞出现明显NF-κB的核转位;EMSA结果显示胆脂瘤组电泳带相对密度扫描值平均为(16·5±10·1)%,正常皮肤组则为(1·38±1·24)%,提示胆脂瘤组织中NF-κB的DNA结合活性显著高于正常皮肤组织(t=3·600,P=0·014);在胆脂瘤鳞屑刺激下,HaCaT细胞出现NF-κB的活化,其活性变化与鳞屑组织呈剂量依赖关系。结论NF-κB在胆脂瘤组织中存在异常活化,核因子-κB可能在胆脂瘤的发生和持续发展中起重要作用。