新疆维吾尔族非综合征性遗传性聋GJB2基因突变的研究

目的:研究新疆维吾尔族非综合征性遗传性聋患者GJB2基因突变的情况.方法:采用直接测序法对新疆维吾尔族非综合征性遗传性聋患者43例和健康对照46例进行GJB2基因突变的检测.结果:在编码区耳聋组共发现6种碱基改变:380G>A、109G>A、235 delC、233delC、71G>A及35 delG,其中235 delC杂合突变1例,233 delC纯合突变2例,35 delG杂合突变2例;对照组发现6种碱基改变,其中5种为已明确的常见多态性改变.结论:新疆维吾尔族非综合征性遗传性聋患者GJB2基因突变检出率较低,具有种族和地域性特点.     

辽宁地区非综合征型耳聋患者常见耳聋基因突变分析

目的：分析辽宁地区重度和极重度非综合征型耳聋患者常见耳聋基因热点突变的特点及规律。方法：收集中国医科大学附属第一医院就诊的非综合征型耳聋患者128例,采集外周血并从中提取DNA,应用耳聋基因芯片检测中国人群中常见的4个基因GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体12SrRNA的热点突变位点,同时结合耳聋问卷调查、听力学检测及颞骨CT检查。结果：128例患者中52例（40．6％）存在不同的被检测基因位点突变：①22例存在GJB2基因突变,其中c．235delC位点纯合突变10例,单杂合突变5例c.176_191 del 16位点单杂合突变1例;c.35 del G位点单杂合突变1例;c．235 del C／c．299_300 del AT复合杂合突变1例,C．235delC／c．176_--191del16复合杂合突变1例,035delG／c.176_191 del 16复合杂合突变1例;c.299_300 del AT纯合／c．919-2A〉G杂合1例儿235 del C纯合／c．919-2 A〉G杂合1例。②30例存在SLC26A4基因突变,其中c．919-2 A〉G位点纯合突变6例、单杂合突变17例,c．2168 A〉G位点纯合突变1例、单杂合突变2例,c．2168 A〉C／c．919-2 A〉G复合杂合突变2例,c．919-2 A〉G／GJ B2 c．235 del C复合突变2例。③无GJB3和线粒体12S rRNA基因突变,考虑与样本量少有关。在基因水平,明确诊断遗传性聋者24例（18．8％）,遗传性耳聋基因突变携带者28例（21．9％）。结论：辽宁地区耳聋患者存在较高的遗传性耳聋发生率,耳聋基因芯片诊断技术可应用于临床中进行快速筛查、诊断并指导聋儿康复。     

非综合征型聋患者常见耳聋基因突变分析

目的分析重度和极重度非综合征型聋患者常见耳聋基因突变情况,从分子水平了解该人群聋病的遗传病因和特点,为临床防聋治聋提供策略、依据。方法应用遗传性耳聋基因芯片对179例非综合征型聋患者GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体12SrRNA基因中9个热点突变进行检测,同时结合耳聋病因问卷调查、纯音听阈测试、听性脑干反应测试、声导抗、颞骨CT检查。结果 179例患者中,79例存在不同程度的被检测基因位点突变,其中3例同时携带二个基因突变:①42例存在GJB2基因突变,其中:176del16位点纯合突变1例、单杂合突变2例;235delC位点纯合突变17例、单杂合突变9例;299delAT位点纯合突变0例、单杂合突变2例;235delC/299delAT复合杂合突变7例,235delC/176del16复合杂合突变4例。②37例存在SLC26A4基因突变,其中:2168A>G位点单杂合突变4例;IVS7-2A>G位点纯合突变13例,单杂合突变17例;2168A>G/IVS7-2A>G复合杂合突变3例。③3例存在线粒体12SrRNA基因突变,其中2例1555A>G位点均质突变,1例1494C>T位点均质突变;④无GJB3基因突变。在基因水平,明确诊断遗传性聋者48例,占26.80%,遗传性耳聋基因突变携带者31例,占17.32%。结论 GJB2、SLC26A4突变是安徽地区重度和极重度非综合征型聋患者主要突变形式、其次是线粒体12SrRNA基因突变,通过筛查可以明确部分非综合征型聋的病因,可以为患者及其家族成员提供准确的遗传咨询和指导,为再次生育家庭提供产前诊断,从而为防聋治聋提供帮助。     

贵州省356例非综合征型聋患者常见致聋基因突变分析

目的：分析贵州省356例非综合征型聋患者常见耳聋基因突变特点,初步了解其耳聋基因热点突变谱系及频率。方法采集贵州省356例平均年龄为11．90±12．23岁的非综合征型感音神经性聋患者的外周血,提取基因组DNA,应用遗传性耳聋基因芯片检测试剂盒对GJB2、SLC26A4、GJB3及线粒体DNA12SrRNA基因的9个突变热点（GJB2基因35delG、176del16、235delC、299delAT 突变,SLC26A4基因 IVS7－2A＞G、2168A＞G 突变,GJB3基因538C＞T突变,12SrRNA基因1555A＞G和1494C＞T 突变）进行检测。结果356例非综合征型聋患者中,88例（24．72％）携带不同基因突变;1例携带 GJB2、SLC26A4双基因突变;GJB2基因突变40例（11．24％）（含前述1例双基因突变者）,其中纯合突变19例（5．34％）,复合杂合突变5例（1．40％）,单杂合突变15例（4．21％）;SLC26A4基因突变29例（8．15％）（含前述1例双基因突变者）,其中纯合突变9例（2．53％）,单杂合突变19例（5．34％）;线粒体DNA12SrRNA 基因突变19例（5．34％）,其中1555A＞G 均质突变10例（2．81％）,1555A＞G异质突变7例（1．97％）,1494C＞T 均质突变2例（0．56％）;1例患者携带GJB3基因538C＞T 杂合突变。结论贵州省NSHL患者以GJB2基因和SLC26A4基因为最主要的致病基因,其中235delC突变为最常见突变位点,其次为IVS7－2 A＞G突变。     

新疆维吾尔族和汉族非综合征型遗传性聋患者线粒体DNA 12S rRNA A1555G、GJB2及GJB3基因突变研究

目的 分析新疆地区维吾尔族和汉族非综合征型遗传性聋患者线粒体DNA、GJB2、GJB3 基因突变情况,探讨新疆地区维吾尔族非综合征型遗传性聋人群中上述基因突变位点及突变频率与汉族耳聋人群的差异.方法 对93名新疆地区非综合征型遗传性聋患者进行耳聋病因问卷调查和纯音听阈测试,另选取110名听力正常人作为对照组.耳聋组中维吾尔族43例,汉族50例;对照组中维吾尔族56例,汉族54例.收集血样,提取DNA后经聚合酶链反应(PCR)扩增.GJB3基因PCR产物直接测序;针对线粒体DNA 12S rRNA A1555G点突变进行限制性内切酶分析,挑选阳性者进一步测序.对83例非综合征型遗传性聋患者和98例正常人行GJB2基因测序,其中耳聋组维吾尔族43例,汉族40例,对照组维吾尔族46例,汉族52例.结果 93名患者中检测到GJB3基因33C-T2例、766G-A 2例、357C-T 7例以及798C-T4例.8例患者存在线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变,其中维吾尔族2例,汉族6例.在耳聋患者中,发现9种GJB2碱基改变:109G-A、233-235delC、79G-A、196G-A、341A-G、564G-A、380G-A、71G-A及35delG.对照组检测到GJB3基因357C-T 4例、798C-T 5例及93C-T 2例.对照组发现9种GJB2基因碱基改变:341A-G、380G-A、457G-A、79-G-A、109G-A、281A-G、21G-T、171G-T及368C-A.线粒体DNA A1555G突变频率在汉族耳聋组与对照组之间差异具有统计学意义(P＜0.05).GJB2基因79G-A突变在两个民族耳聋组和对照组的分布差异均具有统计学意义(P值均＜0.05);而341A-G突变在耳聋组两个民族之间的分布差异具有统计学意义(P＜0.05).GJB3基因798C-T的突变频率无论在耳聋组还是对照组,维吾尔族和汉族之间的差异均具有统计学意义(P值均＜0.05).结论 新疆地区线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变检出率较高.GJB3 基因突变并非新疆地区非综合征型遗传性聋患者的主要致病原因.该地区GJB2和GJB3突变具有种族和地域性特点.     

基因芯片技术在非综合征性耳聋快速基因诊断中的应用研究

目的应用耳聋基因芯片对非综合征性感音神经性耳聋患者进行分子病因学研究,评估其在快速耳聋基因诊断中的可行性。方法采集158名来自北京第三聋哑学校的非综合征性耳聋学生的外周血,提取基因组DNA,用耳聋基因芯片检测四个国人中常见的耳聋相关基因中的9个热点突变,包括GJB2（35delG,176del16bp,235delC及299_300delAT）,GJB3（538C〉T及547G〉A）,SLC26A4（IVS7-2A〉G、2168A〉G）和线粒体DNA 12S rRNA（A1555G）。同时,应用酶切法或直接测序法分别对线粒体12SrRNA A1555G突变,以及GJB2、SLC26A4基因编码区序列进行检测,以验证基因芯片结果的准确性。结果在158名耳聋患者中,基因芯片方法共检出67例携带致聋突变（42.41%）。其中,线粒体DNA 12S rRNA A1555G突变5例（3.16%）;GJB2基因突变39例（24.68%）,包括235delC纯合突变24例,235delC和299_300delAT复合杂合突变7例,235delC单杂合突变5例,299_300delAT单杂合突变2例,35delG单杂合突变1例;SLC26A4基因突变22例（13.92%）,包括IVS7-2A〉G纯合突变5例,IVS7-2A〉G和2168A〉G复合杂合突变5例,IVS7-2A〉G单杂合突变11例,2168A〉G单杂合1例;另外还有1例患者检出299_300delAT和IVS7-2A〉G双杂合突变。未检出GJB3基因突变。除两例纯合235delC被判读为杂合外,基因芯片的结果同酶切及测序方法结果一致,后者的阳性患者检出率为70例（44.3%）,与芯片检测结果相比无统计学差异（P=0.250）。经探针优化后,上述两例误判的235delC样品的芯片检测结果均与测序方法一致,同时经测序证实的其他22例235delC纯合突变样品验证,基因芯片的结果均与测序结果一致。结论针对国人常见耳聋相关基因热点突变设计的耳聋基因芯片对非综合征性重度和极重度耳聋患者的突变检出率高（42.41%）。与传统方法相比,它具有快速、高通量、高准确性、低成本等特点,能够满足临床耳聋基因检测的要求;且其操作简单,易于标准化,适于推广,显示出广阔的临床应用前景。     

扬州市特教学校耳聋学生常见耳聋突变基因调查报告

目的:调查扬州地区非综合征性聋患儿常见耳聋突变基因的发病情况。方法:选择扬州市特教学校90例中、重度非综合征性聋学生为研究对象。在苏北人民医院医学检测中心利用耳聋基因芯片诊断试剂盒筛查常见的耳聋相关基因的9个热点突变,包括GJB2(35delG、176del16、235delC及299delAT),GJB3(538C>T),SLC26A4(IVS7-2A>G、2168A>G)和mtDNA 12SrRNA(A>G、1494C>T)。结果:在90例耳聋患者中,基因芯片方法共检出携带致聋基因突变64例(71.1%)。其中,GJB2基因突变40例(44.4%),包括235delC纯合突变20例(22.2%),235delC单杂合突变4例(4.4%),235delC和299delAT复合杂合突变2例(2.2%);299de-lAT单杂合突变2例(2.2%),299delAT纯合突变2例(2.2%);176del16单杂合突变2例(2.2%),176del16纯合突变2例(2.2%),176del16和235delC复合杂合突变6例(6.7%)。SLC26A4基因突变22例(24.4%),包括IVS7-2A>G纯合突变2例,IVS7-2A>G和2168A>G复合杂合突变2例(2.2%),IVS7-2A>G单杂合突变18例(20.0%);mtDNA 12SrRNA A>G纯合突变2例(2.2%);未检出GJB3基因突变。结论:应用基因诊断技术可以在耳聋患者病因调查中进行快速筛查诊断,值得推广应用。     

GJB2基因在遗传性聋中的检测

目的对遗传性聋家系进行GJB2基因突变检测,为该病的基因诊断提供依据。方法采用PCR直接测序法对20个非综合征型遗传性聋家系的先证者(均为耳聋患者)进行GJB2基因的突变检测。结果发现了三种碱基改变:109G>A、79G>A和341G>A。109G>A是已报道的具有争议的致病突变,本实验在两个隐性遗传性聋家系的先证者中检测到109G>A纯合突变,且与耳聋共分离。79G>A和341G>A是已报道的多态。结论本研究发现了具有争议的致病突变109G>A的纯合突变,极可能导致隐性遗传性聋。     

广州市188例聋校学生耳聋相关基因筛查结果分析

目的探讨基因芯片及酶切法在非综合征性耳聋患者检测中的意义,初步了解广州地区耳聋患者的相关基因突变。方法选取广州市聋校学生188人作为研究对象,采用遗传性耳聋基因芯片进行4个常见基因（GJB2、GJB3、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA）9个致聋突变位点的检测,并用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（polymerasechainreaction-restrictionfragmentlengthpolymorphism,PCR-RFLP）对线粒体DNAA1555G突变、GJB2基因的235delC突变：〉DSLC26A4基因的IVS7-2A〉G突变位点进行检测。结果188例耳聋患者中检出42人携带耳聋相关基因突变,检出阳性率为22．34％,其中GJB2的235delc纯合突变12例,杂合突变3例,299—300delAT杂合突变l例,总检出率为8．51％;SLC26A4基因的IVS7-2A〉G纯合突变7例,IVS7-2A〉G、2168A〉G复合杂合突变1例,IVS7-2A〉G杂合突变17例,2168A〉G杂合突变2例,总检出率为13．83％。基因芯片的检测结果均与酶切法检测结果一致。结论基因芯片与传统的酶切法相比具有操作简单快速、高通量、高准确性、低成本等特点,易于对人群进行大规模且快速准确的筛查。     

29个近亲结婚致聋核心家系GJB2、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA基因分析

目的分析GJB2、SLC26A4和线粒体DNA12SrRNA三种常见耳聋致病基因在近亲婚配家系先证者中的突变特点。方法对29个近亲结婚致聋核心家系的后代进行全面的体格检查，采取静脉血10ml，提取DNA，针对特定基因，进行聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）并测序。结果GJB2基因检测结果：299-300delAT纯合突变1人，79G〉A突变21人，341A〉G突变15人，109G〉A杂合突变3人，558G〉A突变1人，5人未检测到突变。SLC26A4基因H723R杂合突变1人；线粒体DNA 12srRNA A1555G纯合突变1人，并伴有GJB2基因79G〉A和341A〉G多态表现。结论近亲结婚家系遗传性聋的发生率较高。     

52例听力损失儿童及其父母耳聋基因芯片筛查结果分析

目的：对非综合征性先天性重度及以上感音神经性听力损失儿童及其父母进行耳聋相关基因检测,探讨耳聋基因芯片筛查在临床中应用的有效性和可行性。方法选择来自医院听力检测中心的47个听障儿童家庭,包括52例非综合征性先天性感音神经性听力损失患儿及其父母,应用遗传学耳聋基因芯片对47个家庭进行GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体12S rRNA4个常见耳聋基因9个检测位点的基因检测。结果146例受检者中,17个家庭的43例筛查结果阳性,其中16例听力损失患儿筛查阳性,筛查阳性率为30.8%。GJB2基因235delC位点纯合突变8例,GJB2基因235delC位点杂合突变20例,GJB2基因235delC位点和SLC26A4基因IVS7-2A〉G位点杂合突变1例,SLC26A4基因IVS7-2A〉G位点纯合突变2例,SLC26A4基因IVS7-2A〉G位点杂合突变10例,SLC26A4基因2168A〉G位点杂合突变2例。结论应用耳聋基因芯片检测技术能快速、高效地检测非综合征性耳聋患者的遗传性致病基因,适用于大规模群体耳聋基因的筛查,有助于临床医生从病因学角度辅助耳聋诊断,引入正确的康复干预措施,并为具有聋病易感基因的听力损失儿童家庭提供针对性的遗传咨询指导。     

Cx26 gene mutations in idiopathic progressive hearing loss

OBJECTIVE: The present study evaluated the frequency and type of mutations throughout the entire GJB2 region in a population of 39 patients affected with sporadic progressive "idiopathic" hearing loss. MATERIAL: A large series of patients suffering from progressive hearing loss underwent a systematic screening program to identify the etiology of the hearing loss. Of these patients, 39 presented with sporadic idiopathic progressive hearing loss and were included in this study. METHOD: We performed molecular analysis of GJB2 in each patient sequencing the genomic deoxyribonucleic acid (DNA) in both directions for detection of GJB2 mutations. Furthermore, in all patients bearing a Cx26 mutation, a search was also conducted for mutations or deletions of GJB6 (Cx30 gene) and for the A1555G mutation of the mitochondrial DNA. A control group was also considered to evaluate the frequency of Cx26 mutations in the normal population. RESULTS: A Cx26 gene mutation was detected in nine cases. One subject was found to bear a homozygous genotype for the 35delG mutation, another subject was compound heterozygous for 35delG and E47X, and the remaining patients showed heterozygous genotypes (35delG, L90P, R127H, M34T, V153I, V37I). No mutation or delection of the Cx30 gene was observed in these nine patients, and none of them presented with the A1555G mutation in the mitochondrial DNA. In the control group (40 individuals), a Cx26 mutation was detected in two cases (5%). CONCLUSIONS: About 23% of our patients (nine subjects) presented with mutations in GJB2, and 18% (seven subjects) were heterozygous. However, most of the described mutations are recessive, so a monogenic model of inheritance cannot explain the deafness phenotype. On the basis of these findings, we can speculate that the heterozygote Cx26 genotype could be a cause of progressive hearing loss, probably in association with mutations in other alleles. Thus, we recommend carefully following all hearing-impaired subjects with GJB2 mutations, even if they present with only mild hearing loss, because the hearing deficit could worsen. Furthermore, molecular analysis of the Cx26 gene should also be performed in adult patients affected with idiopathic progressive hearing loss.     

15343例新生儿耳聋基因普遍筛查结果分析

目的：探讨新生儿耳聋基因普遍筛查的意义,对携带耳聋基因儿童的家长提出预警并指导其进行听力学随诊和生活防护。方法用9项遗传性耳聋基因检测试剂盒（微阵列芯片法）对15343例新生儿进行4个常见耳聋相关基因9个突变位点的检测,包括GJB2（35delG、176del16、235delC、299_300delAT）、SLC26A4（IVS7-2A＞G、2168A＞G）、线粒体DNA 12S rRNA（1555A＞G、1494C＞T）、GJB3（538C＞T）,对阳性结果的家长进行电话或门诊咨询,给予相关指导。结果15343例新生儿检测出单基因单杂合突变545例,分别为GJB2基因杂合突变277例,携带率为1.8%;SLC26A4基因杂合突变188例,携带率为1.2%;线粒体12S rRNA基因均质或异质突变46例,携带率为0.3%;GJB3基因杂合突变34例,携带率为0.2%;9个热点突变单杂合突变阳性率为3.6%。另有单基因复合杂合突变2例和双杂合突变6例。结论新生儿耳聋基因普遍筛查对听障患儿的早期发现、早期诊断和早期干预具有重要意义。     

南通地区遗传性耳聋资源收集及病因学分析

目的 调查江苏南通地区遗传性耳聋病因流行病学情况。方法 调查南通各市县五个聋哑学校202名学生，利用聚合酶链反应一限制性片断长度多态性（PCR—RFLP）方法和Prev—DAF药物性耳聋基因诊断试剂盒筛查患者GJB2 235delC突变和线粒体DNA 12SrRNA A1555G突变。结果 195例非综合征耳聋患儿中31例（15．9％）为GJB2 235delC纯合突变，21例（10.8％）为GJB2 235delC杂合突变，5例（2．6％）存在线粒体DNA 12SrRNA A1555G点突变，在分子水平能够明确诊断者占2913％。结论 南通地区遗传性耳聋发病率较高，尤其是GJB2 235delC突变，突变率（26％）明显高于全国平均水平（18％）。此结果突出了本地区耳聋基因诊断的重要作用，利用耳聋基因检测技术，在人群中（包括重点人群和普通人群）进行生育前耳聋基因筛查，是达到减少聋儿出生的重要途径。     

GJB2 mutations in the Swiss hearing impaired

OBJECTIVE: Mutations in the GJB2 gene encoding connexin 26 (Cx26) protein are a major cause for nonsyndromic autosomal recessive and sporadic deafness. However, its contribution to hearing impairment in Switzerland remains undefined. To determine the frequency and type of GJB2 mutations in the Swiss hearing-impaired population diagnosed under the age of 2 yr and at 2 yr and older and to assess the effectiveness of denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC) in screening for mutation in GJB2. METHODS: Thirty-four patients with hearing impairment underwent mutation screening of the single coding exon of GJB2 with DHPLC followed by bidirectional sequencing to identify sequence alterations. RESULTS: GJB2 mutations were more common in children diagnosed with hearing impairment under the age of 2 yr compared to the group 2 yr and older. In patients under age 2 yr, 9 of 20 (45%) harbored 13 GJB2 mutations including a common 313del14nt mutation; four of these patients were homozygous or compound heterozygous for GJB2 mutations. In contrast, 2 of 14 patients in the 2 yr and older group (14%) had a single mutation in GJB2. The 35delG mutation was exclusively found in 5 patients under the age of 2 yr. DHPLC for mutation screening was 100% sensitive and 83% specific for detecting sequence alterations in GJB2. CONCLUSIONS: In Switzerland, GJB2 mutations are a major cause of nonsyndromic hearing impairment in children under the age of 2. Similar to other populations, GJB2 mutations are uncommon in the affected Swiss patients identified after 2 yr. Although 35delG mutation is common in the hearing-impaired children under the age of 2, it was absent in patients diagnosed with hearing impairment after the age of 2. DHPLC is a highly sensitive tool for detection of GJB2 mutations.     

GJB2 (connexin 26) gene mutations in Moroccan patients with autosomal recessive non-syndromic hearing loss and carrier frequency of the common GJB2-35delG mutation

OBJECTIVE: Mutations in the connexin 26 gene (GJB2), which encodes a gap-junction protein expressed in the inner ear, have been shown to be responsible for a major part of autosomal recessive non-syndromic hearing loss in Caucasians. The aim of our study was to determine the prevalence and spectrum of GJB2 mutations, including the (GJB6-D13S1830) deletion, in Moroccan patients and estimate the carrier frequency of the 35delG mutation in the general population. METHODS: Genomic DNA was isolated from 81 unrelated Moroccan familial cases with moderate to profound autosomal recessive non-syndromic hearing loss and 113 Moroccan control individuals. Molecular studies were performed using PCR-Mediated Site Directed Mutagenesis assay, PCR and direct sequencing to screen for GJB2, 35delG and del(GJB6-D13S1830) mutations. RESULTS: GJB2 mutations were found in 43.20% of the deaf patients. Among these patients 35.80% were 35delG/35delG homozygous, 2.47% were 35delG/wt heterozygous, 3.70% were V37I/wt heterozygous, and 1 patient was E47X/35delG compound heterozygous. None of the patients with one or no GJB2 mutation displayed the common (GJB6-D13S1830) deletion. We found also that the carrier frequency of GJB2-35delG in the normal Moroccan population is 2.65%. CONCLUSIONS: These findings indicate that the GJB2-35delG mutation is the major cause of autosomal recessive non-syndromic hearing loss in Moroccan population. Two other mutations were also detected (V37I and E47X), in agreement with similar studies in other populations showing heterogeneity in the frequencies and types of mutation in connexin 26 gene.