甘油和聚乙二醇对PCR扩增的影响(摘要)

耐热DNA聚合酶的分离成功及应用,简化了聚合酶链式反应(Polymerasechain reaction,PCR)技术,提高了PCR扩增的特异性,加速了PCR操作自动化过程。国内外已对耐热DNA聚合酶的特性进行了较深入的研究。除耐热DNA聚合酶外,还有许多因素影响PCR扩增效果。我     

DNA聚合酶含量对目的基因扩增的影响

目的:探讨DNA聚合酶在PCR技术检测目的基因时的最佳作用浓度及DNA聚合酶浓度对目的基因片断扩增结果的影响。方法:其他反应条件不变的前提下,分别固定Taq DNA聚合酶含量和Mg2+浓度进行PCR反应,然后通过琼脂糖凝胶电泳检测得出二者最佳作用浓度。结果:在50μl的PCR反应体系中,用0.5μl的Taq DNA聚合酶(5u/μl)和2μl的25mM MgCl2进行PCR反应时,目的基因扩增产物质量相对完好,电泳检测条带清晰规整。结论:DNA聚合酶含量对目的基因片断的扩增结果影响巨大。     

用聚合酶链式反应扩增肾综合征出血热病毒基因组

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)是体外DNA扩增技术,将PCR技术引入HFRSV的研究国内外未见报道。作者目的是把PCR技术与反转录相结合,为HFRS的实验诊断提     

聚合酶链反应及其在乙型肝炎研究中的应用

<正> 聚合酶链反立(Polymerase Chain Reaction,PCR),又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆体系。是在体外摸拟天然DNA复制过程的核酸扩增技术。1985年美国Cetus公司的Mullis等设计并研究成功了PCR。同年Saiki等首次报导应用PCR技术扩增3-球蛋白。现PCR方法已广泛应用于分子生物学研究、遗传性疾病诊断、传染病源检测、法医、考古等方面。并且有     

应用聚合酶链反应检测血清HBVDNA

聚合酶链反应(Polymerase ChainReaction,简称PCR)是一种体外特异性扩增DNA的技术。它能将极微量的DNA样品特异地放大儿十万倍。目前国外已广泛应用PCR技术研究HBV感染。本次试验,我们应用北京医科大学肝病研究所提供的PCR扩增HBV基因试剂盒,对91例HBsAg慢性携带者血清进行PCR检测,探讨HBV感染者的传染性。     

聚合酶链式反应的原理及法医学的应用

聚合酶链式反应(polymerase chain re-action,简称PCR)是近年来分子生物学领域一项革命性技术突破。其内容是进行DNA的体外扩增。利用PCR技术,在数小时内便可把需要检测的某个靶DNA片段扩增上万倍,使对该片段的检测,分离和结构分析等过程大大简化。因此,PCR技术自1985年建立以来,立即引起分子生物学领域的极大兴趣和关注。由于其方法不断完善和改进,短短几年时间,就已广泛应用于基础和应用研究等领域。应用PCR进行的基因扩增与应用研究,已成为九十年代生     

聚合酶链反应及其在病毒性肝炎中的应用

聚合酶链反应(polymerase Chain Rea-ction,PCR),又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆体系.它是一种在体外模拟天然DNA复制过程的核酸扩增技术.1985年美国Cetus公司的Mullis等设计并研究成功了PCR,同年Saiki等首次报道应用PCR方法结合液相杂交技术快速诊断遗传病.经过这短短的五年,PCR得到了不断的改进和发     

短片段一步法RT-PCR方法的建立

0　引言　传统 RT- PCR方法需要用反转录酶将 RNA先反转录成 c DNA,然后用 Taq酶对 c DNA进行 PCR扩增 ,而且往往需要巢式 PCR扩增才能提高结果的特异性和灵敏度 ,操作比较麻烦 .有人发现 Taq DNA聚合酶有一定的反转录活性 [1 ] ,可以实现只用 Taq DNA聚合酶进行反转录的单反应管一步法 RT- PCR扩增 .但是我们在实验过程中发现 ,利用Taq DNA聚合酶进行一步法 RT- PCR反应成功率往往不高 ,这可能是因为 Taq DNA聚合酶的反转录活性不高的原因造成的 .为此 ,我们重新设计了实验方法 ,以提高用 Taq DNA聚合酶进行 RT- PC…     

聚合酶链式反应

<正> 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reac-tion,PCR),即 DNA 体外扩增技术,是1985年由美国 Mullis 首创的一种生物高技术。随着耐高温的 Taq 酶的出现,扩增自动化     

PCR中耐热DNA聚合酶催化DNA合成错误

PCR(Polymerase Chain Reaction)是近年来发展起来的用于体外扩增特定DNA片段的方法,PCR早期使用的DNA聚合酶为大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的大片段(Klenow片段),随后采用耐热DNA聚合酶(Taq DNA polymerase),不仅使PCR操作过程大为简化,而且其催化DNA合成片段的长度、忠实性都有较大改进.但仍有极低的错误率发生.错误率发生的高低与PCR扩增条件有关.我们应用PCR技术从Ⅱ型糖尿病人(非胰岛素依赖型糖尿病)基因组DNA中扩增出胰岛素基因片段(大小为1128bp),并将PCR产物直接克隆到M_(13)载体中(M_(13)mp18/M_(13)mp19 RFDNA),再用双脱氧链终止法作DNA序列分析     

PCR技术在DNA片段扩增的应用与意义

1985年,Mullis等人发明了PCR技术,短短十余年间,这一技术得到迅速发展和应用,由扩增已知基因发展到扩增未知基因。本文旨在介绍利用PCR技术扩增未知序列DNA片段的最新进展及这些技术在基因克隆研究中的应用。1985年,美国PE2cetus公司人类遗传研究室的Mullis等人发明了体外无限扩增核酸片段的聚合酶链式反应,即PCR技术。目前,PCR技术已在众多的研究领域得到广泛应用,如在基因克隆、基因定点突变、c DNA文库构建、基因测序、载体构建以及人类基因组计划等方面发挥着重要作用。在今天的"基因大战"中,新基因的发现与克隆已成为研究的热点。而扩增未知序列的PCR技术格外引人注目,许多新方法应运而生,本文旨在介绍这方面的研究进展。     

PCR技术及其在乙型肝炎诊治中的应用

聚合酶链反应（PCR）又称体外酶促基因扩增，是一种在体外模拟自然DMA复制过程的核酸扩增技术。它先将待扩增的DNA双螺旋结构通过热变性（95～97℃）解链成单链，然后以此作为模板，在一对人工合成的寡核苷酸引物的介导下，通过耐高温DNA聚合酶的酶促作用，快速、特异性地扩增出特定的DNA片段，并很容易使微微克（pg）水平的起始物达到微克（μg）水平的量，因此，作为一种基因诊断技术，它有极高的灵敏度和特异性，而且，随着耐热DNA聚合酶的克隆生产和自动化基因扩增仪的应用，PCR检测技术越来越多的被临床应用。PCR用于诊断乙…     

2种制备Taq DNA聚合酶方法的比较

目的比较2种制备纯化Taq DNA聚合酶的方法,为PCR提供实验用酶。方法Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,IPTG诱导12 h后收集菌体,分别用硫酸铵沉淀法和冻融法进行纯化,SDS-PAGE电泳和PCR扩增分析比较其纯度和活性。结果硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶活性能可有效扩增DNA片段;冻融法制备的Taq DNA聚合酶活性较低。结论硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶优于冻融法,能够达到分子生物学实验中基因扩增的要求。     

基因诊断正常宫颈乙肝病毒的应用体会

自1964年澳大利亚学者Blumberg研究发现乙型肝炎病毒（HaplitisBVirus，HBV）以来．由于分子生物学的进展．尤其是病毒分子生物学的进展，促使其基因诊断技术逐渐成熟，1988年起，DNA体外扩增技术，又称聚合酶链式反应（PCR）技术开始用于HBV－DNA的检测，使HBV的检测灵敏度较传统的血清学方法大为提高，而目前流行的“套叠式”PCR的扩增效力和检测敏感性更高。为了探讨正常子宜颈分泌物中HBV一DNA的分布情况，对于HBV的预防具有重要价值，有关这一研究迄今尚未见报道。我们应用Net－PCR技术对子宫颈分泌物进行了HBV－DNA…     

PCR技术在传染病病原诊断中的应用

PCR系PolymeraseChainReaction的缩写,中文译名为聚合酶链反应,最初由Mullis等于1985年首先建立[1],是一种在体外模拟自然DNA复制过程,用聚合酶催化物扩增核酸分子的新技术,以其快速、简便、敏感度高、特异性强等优点,而广泛应用于分子生物学、医学、农业和法医等领域。在传染病研究中,首先被用于病毒性感染的诊断,特别是对于难以培养的病原体,PCR成为其检测的重要手段。本文拟对PCR技术在传染病病原诊断中的应用作一介绍。1　PCR技术的基本原理[1～4]PCR是由引物介导将特异性DNA序列在酶促作用下进行扩增的方法。整个反应过程包…     

低模板量DNA的分型方法及其相关问题

随着法医DNA分析技术的发展,越来越多低模板量DNA的生物检材被提取,并要求进行STR分型。在此对快速发展的各种低模板量DNA STR分型方法如增加聚合酶链反应(PCR)循环数、纯化PCR扩增产物、激光捕获显微切割和PCR扩增前的全基因组扩增等予以介绍,并就LT-DNA法庭科学应用中存在的相关问题予以论述。     

石蜡组织DNA提取方法的比较

目的 :选择一种高效、简便、稳定的从蜡块中提取基因组DNA进行聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。　方法 :分别采用四种不同的方法从石蜡组织中提取DNA ,比较所提取的DNA质量 ,PCR扩增cyclinD1基因的效率。对其中的一种方法进行了改良。　结果 :四种方法提取的DNA质量都能达到相关分子生物学实验的要求 ,但在操作程序、扩增效率等方面存在差异。　结论 :微波脱蜡法操作简单、快速、扩增成功率高 ,适合于应用PCR技术对病理标本进行相关研究。     

PCR-SSP法进行HLA分型的影响因素分析

日曲：探讨DNA模板质量、DNA聚合酶(Taq)用量对人类白细胞抗原(HLA)分型结果的影响，从而确定PCR一序列特异性引物(PCR-SSP)技术的更加优化的扩增体系。方法：采用PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法，对山西地区14400名骨髓供的血样进行了人类白细胞抗原(HLA)基因分型，回顾性分析DNA模板的纯度、DNA用量、DNA聚合酶(Taq)酶用量对HLA分型结果的影响。结果：每个PCR反应的DNA模板量在30ng～50ng之间时PCR扩增效果最优；每个PCR反应所用Taq酶为0．23U时PCR扩增效果最优。结论：DNA模板量和Taq酶用量是使用PCR-SSP技术进行HLA分型的主要影响因素；模板DNA的纯度对实验结果影响不大。     

PCR技术在法医物证发展中的作用

DNA检验技术已经在许多研究和应用领域发挥重要的作用,尤其在法医学领域具有重要意义,聚合酶链反应（PCR）扩增技术的发展,也加速了该领域的快速发展,本文就PCR主要技术及其在法医领域中的应用进展作一综述。     

PCR技术反应体系镁离子浓度的优化

成功的体外DNA扩增,镁离子浓度的优化是十分重要的。镁离子浓度可以影响到Taq DNA聚合酶的活性、精度及产物的特异性,还可影响模板与PCR产物的解链温度,引物二聚体的形成等,镁离子在PCR技术反应体系中的优化最终要求模板DNA、引物和dNTP能够满足Taq DNA聚合酶结合的镁离子。