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耐热DNA聚合酶的分离成功及应用,简化了聚合酶链式反应(Polymerasechain reaction,PCR)技术,提高了PCR扩增的特异性,加速了PCR操作自动化过程。国内外已对耐热DNA聚合酶的特性进行了较深入的研究。除耐热DNA聚合酶外,还有许多因素影响PCR扩增效果。我 相似文献
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<正> 聚合酶链反立(Polymerase Chain Reaction,PCR),又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆体系。是在体外摸拟天然DNA复制过程的核酸扩增技术。1985年美国Cetus公司的Mullis等设计并研究成功了PCR。同年Saiki等首次报导应用PCR技术扩增3-球蛋白。现PCR方法已广泛应用于分子生物学研究、遗传性疾病诊断、传染病源检测、法医、考古等方面。并且有 相似文献
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聚合酶链式反应(polymerase chain re-action,简称PCR)是近年来分子生物学领域一项革命性技术突破。其内容是进行DNA的体外扩增。利用PCR技术,在数小时内便可把需要检测的某个靶DNA片段扩增上万倍,使对该片段的检测,分离和结构分析等过程大大简化。因此,PCR技术自1985年建立以来,立即引起分子生物学领域的极大兴趣和关注。由于其方法不断完善和改进,短短几年时间,就已广泛应用于基础和应用研究等领域。应用PCR进行的基因扩增与应用研究,已成为九十年代生 相似文献
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聚合酶链反应(polymerase Chain Rea-ction,PCR),又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆体系.它是一种在体外模拟天然DNA复制过程的核酸扩增技术.1985年美国Cetus公司的Mullis等设计并研究成功了PCR,同年Saiki等首次报道应用PCR方法结合液相杂交技术快速诊断遗传病.经过这短短的五年,PCR得到了不断的改进和发 相似文献
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短片段一步法RT-PCR方法的建立 总被引:1,自引:1,他引:0
0 引言 传统 RT- PCR方法需要用反转录酶将 RNA先反转录成 c DNA,然后用 Taq酶对 c DNA进行 PCR扩增 ,而且往往需要巢式 PCR扩增才能提高结果的特异性和灵敏度 ,操作比较麻烦 .有人发现 Taq DNA聚合酶有一定的反转录活性 [1 ] ,可以实现只用 Taq DNA聚合酶进行反转录的单反应管一步法 RT- PCR扩增 .但是我们在实验过程中发现 ,利用Taq DNA聚合酶进行一步法 RT- PCR反应成功率往往不高 ,这可能是因为 Taq DNA聚合酶的反转录活性不高的原因造成的 .为此 ,我们重新设计了实验方法 ,以提高用 Taq DNA聚合酶进行 RT- PC… 相似文献
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梁朝 《南昌大学学报(医学版)》1992,34(1):1
<正> 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reac-tion,PCR),即 DNA 体外扩增技术,是1985年由美国 Mullis 首创的一种生物高技术。随着耐高温的 Taq 酶的出现,扩增自动化 相似文献
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PCR(Polymerase Chain Reaction)是近年来发展起来的用于体外扩增特定DNA片段的方法,PCR早期使用的DNA聚合酶为大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的大片段(Klenow片段),随后采用耐热DNA聚合酶(Taq DNA polymerase),不仅使PCR操作过程大为简化,而且其催化DNA合成片段的长度、忠实性都有较大改进.但仍有极低的错误率发生.错误率发生的高低与PCR扩增条件有关.我们应用PCR技术从Ⅱ型糖尿病人(非胰岛素依赖型糖尿病)基因组DNA中扩增出胰岛素基因片段(大小为1128bp),并将PCR产物直接克隆到M_(13)载体中(M_(13)mp18/M_(13)mp19 RFDNA),再用双脱氧链终止法作DNA序列分析 相似文献
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《世界核心医学期刊文摘》2016,(88)
1985年,Mullis等人发明了PCR技术,短短十余年间,这一技术得到迅速发展和应用,由扩增已知基因发展到扩增未知基因。本文旨在介绍利用PCR技术扩增未知序列DNA片段的最新进展及这些技术在基因克隆研究中的应用。1985年,美国PE2cetus公司人类遗传研究室的Mullis等人发明了体外无限扩增核酸片段的聚合酶链式反应,即PCR技术。目前,PCR技术已在众多的研究领域得到广泛应用,如在基因克隆、基因定点突变、c DNA文库构建、基因测序、载体构建以及人类基因组计划等方面发挥着重要作用。在今天的"基因大战"中,新基因的发现与克隆已成为研究的热点。而扩增未知序列的PCR技术格外引人注目,许多新方法应运而生,本文旨在介绍这方面的研究进展。 相似文献
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聚合酶链反应(PCR)又称体外酶促基因扩增,是一种在体外模拟自然DMA复制过程的核酸扩增技术。它先将待扩增的DNA双螺旋结构通过热变性(95~97℃)解链成单链,然后以此作为模板,在一对人工合成的寡核苷酸引物的介导下,通过耐高温DNA聚合酶的酶促作用,快速、特异性地扩增出特定的DNA片段,并很容易使微微克(pg)水平的起始物达到微克(μg)水平的量,因此,作为一种基因诊断技术,它有极高的灵敏度和特异性,而且,随着耐热DNA聚合酶的克隆生产和自动化基因扩增仪的应用,PCR检测技术越来越多的被临床应用。PCR用于诊断乙… 相似文献
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2种制备Taq DNA聚合酶方法的比较 总被引:2,自引:1,他引:1
目的比较2种制备纯化Taq DNA聚合酶的方法,为PCR提供实验用酶。方法Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,IPTG诱导12 h后收集菌体,分别用硫酸铵沉淀法和冻融法进行纯化,SDS-PAGE电泳和PCR扩增分析比较其纯度和活性。结果硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶活性能可有效扩增DNA片段;冻融法制备的Taq DNA聚合酶活性较低。结论硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶优于冻融法,能够达到分子生物学实验中基因扩增的要求。 相似文献
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自1964年澳大利亚学者Blumberg研究发现乙型肝炎病毒(HaplitisBVirus,HBV)以来.由于分子生物学的进展.尤其是病毒分子生物学的进展,促使其基因诊断技术逐渐成熟,1988年起,DNA体外扩增技术,又称聚合酶链式反应(PCR)技术开始用于HBV-DNA的检测,使HBV的检测灵敏度较传统的血清学方法大为提高,而目前流行的“套叠式”PCR的扩增效力和检测敏感性更高。为了探讨正常子宜颈分泌物中HBV一DNA的分布情况,对于HBV的预防具有重要价值,有关这一研究迄今尚未见报道。我们应用Net-PCR技术对子宫颈分泌物进行了HBV-DNA… 相似文献
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PCR系PolymeraseChainReaction的缩写,中文译名为聚合酶链反应,最初由Mullis等于1985年首先建立[1],是一种在体外模拟自然DNA复制过程,用聚合酶催化物扩增核酸分子的新技术,以其快速、简便、敏感度高、特异性强等优点,而广泛应用于分子生物学、医学、农业和法医等领域。在传染病研究中,首先被用于病毒性感染的诊断,特别是对于难以培养的病原体,PCR成为其检测的重要手段。本文拟对PCR技术在传染病病原诊断中的应用作一介绍。1 PCR技术的基本原理[1~4]PCR是由引物介导将特异性DNA序列在酶促作用下进行扩增的方法。整个反应过程包… 相似文献
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随着法医DNA分析技术的发展,越来越多低模板量DNA的生物检材被提取,并要求进行STR分型。在此对快速发展的各种低模板量DNA STR分型方法如增加聚合酶链反应(PCR)循环数、纯化PCR扩增产物、激光捕获显微切割和PCR扩增前的全基因组扩增等予以介绍,并就LT-DNA法庭科学应用中存在的相关问题予以论述。 相似文献
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石蜡组织DNA提取方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :选择一种高效、简便、稳定的从蜡块中提取基因组DNA进行聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。 方法 :分别采用四种不同的方法从石蜡组织中提取DNA ,比较所提取的DNA质量 ,PCR扩增cyclinD1基因的效率。对其中的一种方法进行了改良。 结果 :四种方法提取的DNA质量都能达到相关分子生物学实验的要求 ,但在操作程序、扩增效率等方面存在差异。 结论 :微波脱蜡法操作简单、快速、扩增成功率高 ,适合于应用PCR技术对病理标本进行相关研究。 相似文献
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张德梅 《山西职工医学院学报》2005,15(1):6-7
日曲:探讨DNA模板质量、DNA聚合酶(Taq)用量对人类白细胞抗原(HLA)分型结果的影响,从而确定PCR一序列特异性引物(PCR-SSP)技术的更加优化的扩增体系。方法:采用PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)的方法,对山西地区14400名骨髓供的血样进行了人类白细胞抗原(HLA)基因分型,回顾性分析DNA模板的纯度、DNA用量、DNA聚合酶(Taq)酶用量对HLA分型结果的影响。结果:每个PCR反应的DNA模板量在30ng~50ng之间时PCR扩增效果最优;每个PCR反应所用Taq酶为0.23U时PCR扩增效果最优。结论:DNA模板量和Taq酶用量是使用PCR-SSP技术进行HLA分型的主要影响因素;模板DNA的纯度对实验结果影响不大。 相似文献
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成功的体外DNA扩增,镁离子浓度的优化是十分重要的。镁离子浓度可以影响到Taq DNA聚合酶的活性、精度及产物的特异性,还可影响模板与PCR产物的解链温度,引物二聚体的形成等,镁离子在PCR技术反应体系中的优化最终要求模板DNA、引物和dNTP能够满足Taq DNA聚合酶结合的镁离子。 相似文献