microRNA let-7与肿瘤

微小RNA(miRNA)是一类长18～25个核苷酸的非编码小分子RNA,能与靶mRNA的3′UTR碱基配对,通过抑制mRNA的翻译或直接使mRNA降解,在转录后水平使基因沉默。miRNA调节的基因调控机制与肿瘤的发生、发展密切相关。Let-7是目前研究最为广泛的miRNA之一。在多种肿瘤中,let-7表达下调,提示let-7必然与肿瘤存在一些重要的联系。本文就对let-7的生物学特性、作用机制与肿瘤的关系及其在肿瘤治疗方面的潜在作用进行综述。     

MicroRNA-137抑制胰腺癌细胞侵袭和迁移能力

目的:探讨microRNA-137(miR-137)对胰腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:构建miR-137慢病毒表达载体(LV-miR-137)及空载体,将细胞分为3组:LV-miR-137感染组(实验组)、空载体组(阴性对照组)及空白组;LV-miR-137感染胰腺癌PANC-1和MIAPaCa2细胞后72h,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测感染效率,Transwell小室侵袭实验及细胞划痕实验检测miR-137对PANC-1和MIAPaCa2细胞株侵袭和迁移能力的影响。结果:LV-miR-137感染胰腺癌细胞株PANC-1和MIAPaCa2后miR-137表达水平量明显升高,Transwell小室细胞侵袭实验发现:实验组PANC-1和MIAPaCa2细胞迁移能力明显受到抑制,细胞迁移数目(58.2±1.1,37.5±1.8)较空白对照组(141.7±7.9,74.2±2.4)和阴性对照组(151.7±5.8,72.2±2.9)明显减少,P<0.05,差异有统计学意义;PANC-1细胞的侵袭能力也明显受到抑制,细胞侵袭数目(44.0±1.5)较空白对照组(110.9±6.4)和阴性对照组(117.2±1.9)明显减少,P<0.05,差异有统计学意义;细胞划痕实验检测发现,24h后实验组胰腺癌MIAPaCa-2、PANC-1细胞的迁移距离明显比阴性对照组及空白组短,P<0.05,差异有统计学意义。结论:MiR-137能抑制胰腺癌细胞的侵袭和迁移能力,有望成为胰腺癌基因治疗的新靶点。     

MicroRNA-137在胰腺癌中的表达及临床意义

目的:检测MicroRNA-137(miR-137)在胰腺癌中的表达并探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-137在17例临床胰腺癌组织及相配对的癌旁组织中的表达,同时,检测8株不同胰腺癌细胞系和2株正常胰腺上皮细胞中miR-137的表达,并分析miR-137的表达水平与胰腺癌临床病理参数之间的关系。结果:miR-137在胰腺癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05);miR-137在胰腺癌细胞系中的表达水平明显低于正常胰腺上皮细胞(P<0.05);miR-137表达水平在临床Ⅰ~Ⅱ期胰腺癌组织明显高于Ⅲ~Ⅳ期胰腺癌组织(P<0.05),在无淋巴转移的胰腺癌组织明显高于有淋巴转移的胰腺癌组织(P<0.05)。结论:miR-137低表达与胰腺癌的发生发展相关,可能成为胰腺癌基因诊断和治疗的新靶点。     

胰腺癌肿瘤标志物的研究新进展

胰腺癌起病隐匿,发展迅速,且早期诊断十分困难,预后较差。近年来肿瘤标志物(TM)在胰腺癌诊断、判断预后以及指导治疗等方面的研究不断有新的突破。本文就最近发现和检测到的TM在胰腺癌中的差异表达及其在胰腺癌诊疗中的研究和应用等多方面加以阐述,希望能对胰腺癌的临床早期诊断和治疗有所帮助,以降低患者病死率。     

microRNA研究领域中的是与非

分子生物学家对微小RNA(microRNA)的认识进一步丰富了现有分子生物学理论体系。而microRNA分子自身表达调控、加工成熟和生物学功能发挥等诸多研究领域的成果也为人类深刻理解microRNA这样一类非编码小分子核酸的重要生物学意义提供了契机。然而,即便是在microRNA研究领域成果卓然的今天,科学家们依然对该领域诸多未解之谜和不同认识纷争不已。本文结合我们自己的研究工作,就近年来microRNA研究领域的若干争议性问题提出自己的看法和讨论,期望通过与同行学者的信息交流进一步提高自身的研究水平。     

microRNA-100对人胰腺癌细胞增殖及皮下成瘤能力的影响

目的：研究microRNA-100（ miR-100）对人胰腺癌细胞MIA PaCa-2和CFPAC-1增殖及皮下成瘤能力的影响。方法：用miR-100慢病毒过表达载体感染MIA PaCa-2和CFPAC-1细胞,构建高表达miR-100细胞株;用平板克隆、CCK-8方法检测miR-100对人胰腺癌细胞体外增殖能力,裸鼠皮下成瘤实验检测miR-100对人胰腺癌细胞成瘤能力。结果：慢病毒感染后,miR-100表达在MIA PaCa-2细胞中提高（941±171）倍,在CFPAC-1细胞中提高（154±23）倍,差异有统计学意义（ P﹤0.05）;平板克隆形成实验提示MIA PaCa-2和CFPAC-1细胞实验组平板克隆数少于对照组病毒,差异有统计学意义（ P﹤0.05）;CCK-8细胞增殖实验提示MIA PaCa-2和CFPAC-1细胞实验组增殖能力弱于对照组,差异有统计学意义（ P﹤0.05）;裸鼠皮下成瘤实验显示,miR-100抑制了肿瘤裸鼠皮下成瘤。结论：miR-100能从体内外抑制人胰腺癌细胞增殖及皮下成瘤能力。     

胰腺癌的非手术治疗新进展

胰腺癌是一种常见的消化系统恶性肿瘤,其发病隐匿、恶性程度高,进展迅速、病死率高。由于受胰腺解剖学和生物学特征等因素的影响,胰腺癌早期容易侵犯周围组织器官和远处转移,加上早期无明显的特异性症状和体征以及缺乏简单、可靠的早期诊断方法,确诊时多属晚期,已无手术机会,且预后极差。在我国胰腺癌近20年来发病率增长约6倍,死亡率位居恶性肿瘤第5位。目前,胰腺癌已成为国内外医学界面临的一个重大诊断和治疗难题。现就胰腺癌的非手术治疗新进展作如下综述。     

胰腺癌治疗方案的实施与胰腺癌分期的关系

目前胰腺癌(TNM)分期依据国际抗癌协会联盟(UICC)标准(1997)分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。胰腺癌目前5年生存率仍低于5％，如何提高患者生存率一直是努力的方向。关注胰腺癌的分期与实施序贯性治疗方案的关系则有助于使胰腺癌治疗科学规范。     

乳腺癌患者血浆中相关microRNA的表达及其临床意义

目的:探讨乳腺癌患者血浆微RNA(microRNA,miRNA)的表达及其临床意义。方法:采用深度测序的方法,筛选8对乳腺浸润性导管癌及癌旁正常乳腺组织中差异表达的miRNA,选出在乳腺癌中高表达的miRNA;用实时荧光逆转录多聚酶链反应(realtime RT-PCR)方法对55例乳腺浸润性导管癌患者及30例作为对照的正常健康体检女性血浆中相应miRNA的表达水平进行检测。结果:深度测序发现miR-7、miR-21、miR-155、miR-182、miR-184、miR-196a在乳腺癌组织中表达上调;在乳腺癌患者及健康对照者血浆中用realtime RT-PCR方法进行检测发现其中miR-21、miR-155、miR-184、miR-196a在乳腺癌患者血浆中升高(P<0.001,P<0.001,P=0.002及P=0.028);其ROC曲线下面积及95%可信区间(95%CI)分别为:0.823(95%CI:0.730～0.916),0.780(95%CI:0.681～0.879),0.708(95%CI:0.591～0.826)和0.645(95%CI:0.527～0.763);miR-21和miR-155与乳腺癌淋巴结转移相关(P=0.001及P=0.024)。结论:miRNA在乳腺癌患者血浆中差异表达,与乳腺癌临床病理特征有关,有望成为乳腺癌新的血液肿瘤标志物。     

胰腺癌石蜡包埋组织中微RNA原位杂交检测技术的优化

目的 对采用原位杂交检测10%中性甲醛溶液固定的石蜡包埋（FFPE）胰腺癌组织切片中微RNA（miR）的方法进行技术优化,以提高miR的阳性检出率。方法 将20例胰腺癌组织标本构建成组织芯片,使用锁核酸（LNA）标记的探针和显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达。杂交温度分别设为48℃、53℃、56℃,杂交后采用3种不同的洗涤条件（温度、时间和3种不同洗涤缓冲液）进行杂交条件优化。将126例胰腺癌组织标本制成组织芯片,采用优化的显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达。结果 miR-21探针最佳杂交条件为杂交温度53℃下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ在65℃下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min;miR-34a探针最佳杂交条件为杂交温度53℃下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ分别在4℃和65℃下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min。在126例胰腺癌组织中,84例（66.7%）miR-21表达阳性,77例（61.1%）miR-34a表达阳性。结论 在FFPE胰腺癌组织切片中,miR-21和miR-34a的最佳杂交温度均为53℃,选择合适的杂交后洗涤温度和洗涤缓冲液有利于提高miR的阳性检出率。     

小干扰RNA沉默MAT1基因治疗胰腺癌的实验研究

目的了解体外转录法合成的小干扰RNA（siRNA）沉默MAT1基因对胰腺癌的体内体外抗癌效应。方法用siPORT-脂质体（1ipid）中性阳离子脂质体转染由体外转录法合成、Cy3荧光标记的双链siRNA人胰腺癌BxPC3细胞,观察对胰腺癌细胞生长和细胞周期曲线的影响,检测MAT1基因被siRNA沉默后mRNA和蛋白质的表达水平。在裸鼠胰腺癌皮下移植瘤瘤体内直接注射siRNA观察抑瘤效应。结果合成的4条MAT1-siRNA序列中有一半可显著抑制BxPC3细胞的生长。体外转染MAT1-siRNA72h后,BxPC3细胞生长抑制率达34．9％（P〈0．01）;83．9％的BxPC3细胞滞留于G。／G,期,而空白对照组仅59．86％（P〈0．01）。体外转染MAT1-siRNA48h后MAT1-mRNA水平下调了80．12％,72h后MAT1蛋白质水平下调了50．12％,与各对照组相比差异均有统计学意义（均P〈0．01）。MAT1-siRNA注射组裸鼠移植瘤重量和体积均明显低于对照组（均P〈0．05）,抑瘤率达42．53％。结论siRNA介导的MAT1基因沉默在体外实验中显著抑制了胰腺癌细胞的生长,在体内实验中对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤产生明显的抑瘤效应。     

心律失常相关microRNA的研究进展

心脏性猝死是目前威胁人类的主要疾病之一,其病因很多,主要由恶性心律失常引起。由于不能确切认识心律失常的发生机制,目前尚无有效方法预防和治疗心脏性猝死。近年来,发现microRNA(miRNA)在心脏生理病理过程中发挥重要的调控作用,尤其与心律失常的发生、发展密切相关。该文就miRNA在心律失常发生、发展中的作用予以综述。     

胰腺癌49例临床分析

近年来国内外胰腺癌的发病率有所增加,过去的30年美国增加3倍,日本高达4倍。根据上海1963年统计占11.6/10万人,居全身肿瘤的20位;1977年3.80/10万,居第12位;1982年6.92/10万,居第8位,为此引起人们对胰腺癌的关注。我院自1973年12月～1992年12月确诊49例胰腺癌进行临床分析:     

靶向封闭CapG基因对胰腺癌细胞运动侵袭能力的影响

目的观察靶向封闭CapG基因对胰腺癌细胞株BxPC3运动侵袭能力的影响。方法设计并体外合成靶向CapG的小干扰RNA,将其转染到BxPC3细胞中,蛋白质印迹法检测转染前后细胞中CapG蛋白的表达,采用Transwell小室检测转染前后细胞运动侵袭能力的改变。结果CapGsiRNA能有效降低BxPC3细胞中CapG的表达,CapG在蛋白质水平的表达抑制率达80％左右。抑制BxPC3细胞中CapG的表达后,BxPC3细胞的运动侵袭能力明显下降,穿过人工基底膜的细胞数显著低于阴性对照组和空白对照组（P〈0．05）。结论封闭CapG表达能明显抑制胰腺癌细胞BxPC3在体外的运动侵袭能力。