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相似文献
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1.
目的建立一种灵敏、快速、安全、方便适合口岸现场应用的嗜肺军团菌检测方法。方法分析嗜肺军团菌基因组序列,选择特异性基因片段设计引物,建立环介导等温扩增(loop mediated isothermal amplification,LMAP)方法,并优化反应条件。结果建立的方法特异性好,灵敏度可达103cfu/ml,检测能力与荧光定量PCR法相当。结论应用环介导恒温扩增技术建立的嗜肺军团菌检测方法,灵敏度高,特异性好,适合现场快速检测。  相似文献   

2.
目的建立一种嗜肺军团菌的核酸等温扩增试纸条及pH显色快速检测方法,从而实现对空调冷却水样中嗜肺军团菌的快速现场检测。方法基于嗜肺军团菌特异性mip基因设计引物,建立环介导等温扩增体系,并结合反应产物横向流动试纸条和pH显色检测技术,进而验证方法的灵敏性、特异性,并对浙江省不同地区的中央空调冷却水水样进行检测。结果环介导的等温扩增试纸条及pH显色检测方法灵敏度可高达3 cfu/μl,特异性好,且检测时间仅需40 min左右。检测的灵敏度与荧光定量PCR的方法基本一致,对外环境空调冷却水的检测阳性率与荧光定量也相符。结论建立的嗜肺军团菌试纸条与pH显色快速检测方法,灵敏度高,特异性好,适合现场快速检测。  相似文献   

3.
目的建立一种简便、快速和高灵敏度的嗜肺军团菌的检测方法。方法利用环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,根据嗜肺军团菌mip基因的特征性保守序列,设计LAMP检测引物,建立LAMP检测方法,用常规PCR检测平台和其他21种致病菌评估该方法的特异性、灵敏度、重复性及实用性,同时以荧光法建立反应阈值与模板初始浓度之间的线性标准曲线。结果建立的LAMP方法检出限为1.0×102copies/μl,与其他致病菌无交叉反应,反应阈值与初始模板浓度有良好的线性关系(R2=0.9843),LAMP检测结果与传统分离培养方法具有良好的吻合性。结论环介导等温扩增技术检测嗜肺军团菌简便、快速、敏感度高,具有广阔的应用前景。  相似文献   

4.
目的 建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速检测嗜肺军团菌的方法.方法 应用环介导等温扩增技术(LAMP),针对嗜肺军团菌mip基因设计5条引物(2条内引物、2条外引物及1条环引物),并对LAMP反应条件和反应体系进行优化.为验证该方法的特异性、敏感性,针对种系背景明确的12株嗜肺军团菌实验对照菌株、45株嗜肺军团菌地方分离株、6株非嗜肺军团菌、11株其他细菌以及59份外环境水样本进行检测,并将其结果与传统培养分离方法及定量PCR方法比较.结果 所检测的菌株样本中不同血清型嗜肺军团菌经LAMP检测均呈绿色为阳性,非嗜肺军团菌及其他菌株检测均呈橙色为阴性.实验结果表明,LAMP方法的检出率高于传统培养分离方法及定量PCR.应用该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1.5 h左右,该体系检测灵敏度为5 cfu/ml,而且其检测结果在日(灯)光下通过肉眼即可判断.结论 实验建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测嗜肺军团菌,适合基层检验部门及小型实验室与现场监测等使用.  相似文献   

5.
嗜肺军团菌荧光定量PCR检测方法的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:建立嗜肺军团菌mip基因荧光定量PCR检测方法。方法:利用Primer Express软件设计特异性引物和探针,对质粒标准品、嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他菌株进行检测,验证方法的特异性、敏感性和重复性,最后采集环境样本进行检测。结果:该方法特异性好,嗜肺军团菌呈现阳性结果,而非嗜肺军团菌及其他菌株均为阴性结果。检测灵敏度达293copies/μl;重复性较好,Ct值变异系数较小;检测的12份环境样本中5份阳性。结论:该方法快速且具有较好的特异性、敏感性、重复性,适于外环境嗜肺军团菌污染调查及应急事件的快速检测。  相似文献   

6.
目的建立嗜肺军团菌Lp1型实时荧光定量PCR检测方法,以实现对中央空调冷却水中嗜肺军团菌Lp1型的快速检测。方法基于Lp1型嗜肺军团菌基因组ORF11区域设计特异性的引物和探针,建立体系,验证方法的灵敏度、特异性和重复性,并对模拟的中央空调冷却水水样进行检测。结果该方法的检测灵敏度达3.8×10 cfu/ml,具有良好的特异性,仅嗜肺军团菌Lp1型菌株呈阳性结果,重复检测平均Ct值变异系数。对模拟的水样进行检测,与方法的灵敏度相一致,且具有良好的重复性。结论该方法可实现对嗜肺军团菌Lp1型的快速检测。  相似文献   

7.
嗜肺军团菌荧光定量PCR检测   总被引:6,自引:2,他引:4  
目的 建立特异、快速、敏感的TaqMan探针荧光定量PCR方法,用于检测嗜肺军团菌mip基因。方法 嗜肺军团菌及其他军团菌DNA模板来自中国疾病预防控制中心呼吸道室,嗜肺军团菌地方株及其他对照株由本中心菌种室供给。利用嗜肺军团菌mip基因保守序列设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量PCR反应条件和反应体系进行优化,并对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他细菌进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性等。结果 该方法在检测多株嗜肺军团菌时,均出现阳性信号,而对非嗜肺军团菌和其他细菌则未有阳性扩增结果出现。检测灵敏度达10个拷贝/反应,从菌株核酸的提取至检测完成仅需2 h左右,可减少常规PCR操作的污染机会。结论 TaqMan荧光定量PCR方法可定量检测嗜肺军团菌,具有特异性高、快速、敏感等特点,适于外环境污染源状况的调查及应急事件的快速定量检测。  相似文献   

8.
应用套式聚合酶链反应(nested-PCR)技术,建立了扩增嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强因子(mip)基因序列的方法。对14株标准军团菌和5株标准大肠埃希氏菌等进行检测。结果仅嗜肺军团菌扩增出649bp特异性片段,扩增灵敏度为100CFU/ml。对17份人血标本进行检测,表明军团菌nest-ed-PCR的敏感性明显高于血清学检测和细菌培养  相似文献   

9.
目的建立嗜肺军团菌特异、快速检测方法,探讨南京地区公共场所环境水样嗜肺军团菌污染状况。方法根据嗜肺军团菌的mip基因保守序列设计引物和探针,通过对嗜肺军团菌标准株ATCC33152、嗜肺军团菌南京分离株及大肠埃希菌ATCC25922、鼠伤寒沙门菌ATCC14028、福氏2a志贺菌ATCC12022进行检测,验证该方法的特异性。并应用该法对南京地区某商场、宾馆、办公楼、医院共计13家的中央空调系统的冷却水、淋浴水和景观水共计88份环境水样进行了PCR检测及军团菌的分离培养。结果该法对嗜肺军团菌有特异性扩增曲线,而对其他细菌无阳性扩增曲线。88份水样中荧光定量PCR方法检测出28份阳性,阳性率为31.8%;传统培养方法分离出17株军团菌,分离率为19.3%。结论本文建立的荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性,可用于环境水中军团菌污染状况调查。南京地区中央空调冷却水中检出率最高,存在发生军团菌病的可能,应引起足够重视。  相似文献   

10.
小儿军团菌病的快速检验及临床特征   总被引:1,自引:0,他引:1  
李亚  陈灵  汲小信 《中国妇幼保健》2006,21(24):3455-3457
目的:探索快速准确的诊断军团菌感染的方法,了解儿童军团菌感染的临床特点。方法:根据嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子(m ip)基因建立一种检测嗜肺军团菌(LP)PCR方法,用该方法对65例呼吸系统炎症患儿的痰及咽拭子进行PCR检测,用传统血清学TAT方法检测嗜肺军团菌各型抗体。结果:嗜肺军团菌1~14型均扩增出628 bp的特异性片段,而非嗜肺军团菌LM及肺炎球菌均未见扩增片段;敏感性为2.1 pg/μl的嗜肺军团菌DNA。65例临床标本中6例扩增出628 bp的基因片段,阳性率为9.23%,其中4例应用TAT方法检测Lp抗体也为阳性。此6例患儿临床均为肺炎。结论:①利用嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子(m ip)基因建立的检测嗜肺军团菌PCR方法特异性高,敏感性强,适用标本范围广,在嗜肺军团菌早期诊断中有一定价值。②在儿科呼吸系统感染性疾病中,存在嗜肺军团菌感染,在本资料中,65例呼吸道感染患儿,PCR方法检出6例,嗜肺军团菌感染阳性率为9.23%,而TAT方法检出4例,阳性率为6.15%。说明PCR方法敏感性高于TAT方法。③嗜肺军团菌感染在临床常表现为以重症肺炎、难治性肺炎为主的全身性感染,临床表现不典型,易误诊、漏诊,应引起儿科医师的警惕与重视。  相似文献   

11.
目的 建立检测Mip基因的PCR方法,以检出环境水体中的嗜肺军团菌。 方法 采用Godkey软件设计引物,制备菌种模块,对模拟和环境水样进行处理,然后作PCR扩增及其产物检测。 结果 该方法检测军团菌的灵敏度为5 .8×10 2 cfu/ml,6株标准军团菌均扩增出65 0bp的条带,4株非嗜肺军团菌和4株非军团菌无条带出现;检测71份环境水样,5份阳性,阳性率为7.0 %。 结论 该方法快速、灵敏、特异,为水体中的嗜肺军团菌检测提供了有效方法  相似文献   

12.
军团菌双重PCR检测方法的建立及应用   总被引:4,自引:1,他引:4  
目的建立双重PCR以检出环境水体中的军团菌。方法设计2对引物,分别扩增军团菌的5SrRNA和Mip基因,扩增片段长各为10 4bp和996bp。结果该方法检测军团菌的灵敏度为5 8×102 cfu/ml, 6株标准嗜肺军团菌均扩增出104bp和996bp两条带, 4株非嗜肺军团菌均扩增出104bp条带, 4株非军团菌无条带;检测71份环境水样, 5份出现2条条带, 2份可见104bp条带,阳性率为7 0%。结论该方法快速、灵敏、特异,为水体中的嗜肺军团菌检测提供了有效方法。  相似文献   

13.
目的 建立多重实时荧光PCR检测炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌及嗜肺军团菌的方法.方法设计分别针对炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌、嗜肺军团菌毒力因子基因和特异性结构基因的引物和荧光双标记探针,优化反应体系,建立2套均可同时检测3种细菌的多重实时荧光PCR方法,以及3种分别针对上述单一细菌的二重实时荧光定量PCR方法.结果构建的多重和二重实时荧光PCR方法,检测敏感性分别达到100模板拷贝每反应和20模板拷贝每反应,并且高浓度模板对低浓度模板的扩增检测干扰不明显,对阳性菌株均100%检出,对常见杆菌检测均为阴性.结论多重实时荧光定量PCR具有可以同时筛查、经济、快速、特异性强、灵敏度好等优点,在炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌、嗜肺军团菌的病原体检测方面有较大应用价值.  相似文献   

14.
半套式PCR检测军团菌方法的建立及应用   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的建立检测军团菌的分子生物学方法。方法采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域和嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强子(mip)基因编码区域进行扩增,同时采用半套式PCR对常规PCR的扩增结果进行确证。结果采用常规PCR对军团菌属16SrRNA编码区域进行扩增,5种军团菌(包括3种嗜肺军团菌)扩增产物均可见654bp的特异性扩增带,非军团菌菌株PCR结果为阴性,采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证,扩增产物均可见430bp扩增带;同时采用常规PCR对嗜肺军团菌mip基因编码区域进行扩增,3种嗜肺军团菌扩增产物均可见649bp扩增带,非嗜肺军团菌菌株均为阴性,采用半套式PCR对常规PCR扩增产物进行验证,3种嗜肺军团菌扩增产物均可见399bp扩增带。敏感性为10CFU/ml.并且应用此方法成功检测环境水样中分离的疑似军团菌菌株。结论半套式PCR经济、简便、快速、敏感、特异,为军团菌的早期检测、环境监测、控制暴发流行提供了有效手段。  相似文献   

15.
目的:建立适合口岸出入境大厅及其他公共设施中央空调水的分子生物学检测方法,以实现中央空调水的快速检测,提高检测速度及灵敏度。方法:根据军团菌核酸序列多重比对结果设计并合成实时荧光PCR的引物和探针,分别对军团菌16SrDNA和Mip基因相应片段进行扩增;建立快速、特异的军团菌分子快速检测新方法,并将该方法应用于对口岸中央空调水进行快速检测。结果:本研究以16SrDNA目标序列检测结果判断样本中是否存在军团菌,以Mip目标序列检测样本中是否存在嗜肺军团菌;本研究的方法快速、特异,能在2 h内完成对空调水样的检测。结论:本方法大大提高了军团菌的检测速度,提高了检测灵敏度,非常适合应用于中央空调水的快速检测。  相似文献   

16.
目的 传统的方法分离培养军团菌,时间长,价格贵,培养较困难,本文建立多重PCR方法,快速检测空调冷却塔水中军团菌属和嗜肺军团菌种。方法 利用军团菌属保守基因片段16SrRNA和嗜肺军团型菌巨噬细胞感染增强因子(mip)基因序列的特异性引物,对空调冷却塔水样中分离的疑似军团菌株进行特异性扩增,并且为了增强敏感性,运用递减温度PCR扩增。结果:PCR扩增的阳性结果与生化培养和血清学鉴定为军团菌的菌株结果—致。结论:与传统的分离培养方法相比,多重PCR方法检测军团菌,快速敏感,成本低,具有较好的特异性。  相似文献   

17.
目的 利用光纤倏逝波生物传感器适合现场快速检测的优势,初步建立1型嗜肺军团菌的快速检测平台.方法 优化最佳检测条件,并在此条件下确定检测Lp1的灵敏度和特异性,同时通过检测人工模拟样品确认该方法检测实际样本的灵敏度和特异性.结果 该方法40 min之内自动完成检测.捕获抗体与目标物最佳反应时间、反应体系与检测抗体的最佳反应时间均为10 min,捕获抗体最佳使用浓度是100 μg/ml,检测抗体最佳使用浓度为20μg/ml.在此条件下得到该方法检测Lp1的灵敏度为1.8×103cfu/ml,检测的特异性强.结论 光纤倏逝波生物传感器快速检测方法为大样本量Lp1污染严重水样的现场快速筛查提供一种新途径.  相似文献   

18.
嗜肺军团菌(Legionella pneumophilla,Lp)是军团菌属(Legionella)的代表种。该菌为兼性细胞内致病菌,主要感染肺组织。由于发病症状和体征没有特异性,很难与普通肺炎相鉴别,而难以诊断。分离培养是军团菌检测的金标准,但培养条件苛刻。因此,建立军团菌的快速检测方法具有重要的现实意义。目前,嗜肺军团菌的快速检测主要是基于PCR的方法和血清学方法。PCR方法特异性强,快速,但需要昂贵的仪器(PCR仪),影响在基层的应用普及;血清学方法如ELISA、RIA等多为操作繁琐,费时费力。针对以上不足。本实验室建立一套嗜肺军团菌的滴金免疫测定法(dot immunogold filtration assay,DIGFA)。现报告如下。  相似文献   

19.
空调风管内壁积尘中的嗜肺军团菌巢式PCR检测研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的应用巢式PCR方法检测集中空调风管内壁积尘中嗜肺军团菌的污染情况。方法于2009年8月随机抽取上海市4个城区集中空调冷却水嗜肺军团菌培养法阳性的公共场所,采集集中空调风管内壁积尘。巢式PCR方法扩增嗜肺军团菌种Mip基因,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。结果共采集空调风管内壁积尘40份,嗜肺军团菌阳性样品11份,阳性率为27.5%(11/40)。4个城区风管内壁积尘中嗜肺军团菌阳性率的差异没有统计学意义(χ2=7.446,P=0.064)。当冷却塔与新风口直线距离处于0~4m范围内,风管内壁积尘中嗜肺军团菌的阳性率随距离增加有升高趋势。结论巢式PCR方法检测积尘中嗜肺军团菌特异性较好,集中空调风管内壁积尘中存在嗜肺军团菌污染。  相似文献   

20.
霍乱弧菌环介导等温扩增LAMP技术检测   总被引:5,自引:2,他引:3  
目的 应用环介导等温扩增技术(LAMP)进行霍乱弧菌的快速检测。方法 针对霍乱弧菌的管家基因(mdh)设计4条特异性引物(2条内引物和2条外引物),建立快速检测食品中霍乱弧菌的环介导等温扩增方法;应用该方法对17种细菌共42株菌进行LAMP扩增,并进行确证,全面评估该方法的灵敏度、特异性、准确性等。结果 该方法检测21株霍乱弧菌均得到阳性扩增结果,其余21株非霍乱弧菌均未扩增出条带,扩增反应最佳反应时间为60min,反应温度为65℃。霍乱弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为40 fg和50 cfu/mL。对模拟食品样品进行直接检测,检测限为70 cfu/g。结论 该方法具有特异性强、灵敏度高,操作简便快速、不需要复杂仪器设备,适用于食品的快速检测  相似文献   

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