乙醇对胎鼠脑新皮质神经干细胞凋亡的影响

目的探讨乙醇对胎鼠神经干细胞凋亡的影响。方法将妊娠14 d胎鼠脑新皮质来源的神经干细胞暴露于终浓度分别为0(对照)、25、50、100 mmol/L的乙醇培养基溶液3 d。采用Annexin V/PI法检测细胞早期和晚期凋亡情况,采用JC-1探针法检测线粒体膜电位的改变,并检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞的早期凋亡细胞率明显升高,差异有统计学意义(P0.05);而各浓度乙醇染毒组神经干细胞的晚期凋亡率无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,神经干细胞的早期凋亡细胞率呈上升趋势。仅100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bax mRNA的表达水平均上升,差异有统计学意义(P0.05);而Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达水平均无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,Bax mRNA表达量呈上升趋势。与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞Bax蛋白的表达水平均升高,而Bcl-2/Bax蛋白的比值均降低,差异有统计学意义(P0.05);各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达水平均无明显改变。结论乙醇可引起神经干细胞早期凋亡,其机制可能与线粒体损伤和Bax表达上调有关。     

亚砷酸钠对人正常肝细胞凋亡及Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人正常肝(L-02)细胞凋亡及Bax、Bcl-2 m RNA和蛋白表达的影响。方法将L-02肝细胞分别暴露于含0(对照)、50、100、150μmol/L亚砷酸钠的培养基中暴露24 h。采用MTT法检测L-02肝细胞的存活率,采用流式细胞术检测L-02肝细胞凋亡率,采用RT-PCR的方法检测Bax、Bcl-2 m RNA相对表达情况,采用Westernblotting方法检测L-02肝细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率均较低,凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率上升趋势。与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞中Bcl-2、Bax m RNA和蛋白的表达水平均较高,100μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值也较高,而150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值及50、150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2蛋白/Bax蛋白值均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可抑制L-02肝细胞的生长,诱导细胞凋亡的发生;其机制可能与Bcl-2家族的激活有关。     

铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨铀矿尘对人正常支气管上皮细胞株HBE细胞凋亡相关蛋白表达的影响及凋亡的可能机制。方法体外培养HBE细胞,分为对照组、铀矿尘组(12.5、25、50、100、200μg/ml)。细胞染毒12 h后,用MTT法检测HBE细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及细胞色素C(CytC)、半胱天冬酶-3(caspase-3)和半胱天冬酶-9(caspase-9)的蛋白表达。结果当铀矿尘浓度为25~200μg/ml时,HBE细胞存活率均低于对照组,细胞凋亡率和坏死率均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.01)。随着铀矿尘浓度的升高,HBE细胞Bax、Bcl-2、CytC、caspase-3、caspase-9蛋白表达量逐渐增加,均高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论铀矿尘对HBE细胞的凋亡作用可能是通过线粒体途径实现的。     

镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响

目的研究氯化镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响。方法原代培养的小鼠大脑皮质星形胶质细胞分别于终浓度为0(对照)、0.25、0.5、1.0 mmol/L氯化镧无血清培养基处理24 h后,采用RT-PCR法检测星形胶质细胞B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤2相关X基因(Bcl-2-associated Xgene,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-8和caspase-9 mRNA的表达水平。结果与对照组比较,0.25、0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均显著升高,0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bcl-2 mRNA的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氯化镧染毒剂量的升高,小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均呈上升趋势,Bcl-2 mRNA的表达水平呈下降趋势。而各组小鼠星形胶质细胞caspase-8 mRNA的表达水平间比较,差异无统计学意义。结论氯化镧对星形胶质细胞产生毒作用的机制可能与氯化镧致促凋亡基因Bax和caspase-3、caspase-9表达升高以及抑凋亡基因Bcl-2表达下降有关。     

微囊藻毒素-LR对中国仓鼠卵巢细胞凋亡的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)致中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的凋亡作用。方法调整CHO细胞密度约为1×105/ml,分别用终浓度为0(对照)、1、5、10、15μg/ml的MC-LR染毒24 h后,采用噻唑兰(MTT),法测细胞活性,计算半致死效应浓度(EC50)。分别用终浓度为0(对照)、2.5μg/m(l1/4 EC50)、5μg/m(l 1/2 EC50)、10μg/m(lEC50)的MC-LR染毒24 h后,测定活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的活力和细胞凋亡率。结果与对照组相比,各浓度MC-LR染毒组CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均较高,线粒体膜电位降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着MC-LR染毒浓度的升高,CHO细胞内ROS含量、caspase-3活力和细胞凋亡率均呈上升趋势,线粒体膜电位呈下降趋势。结论 MC-LR暴露可诱导体外培养的CHO细胞发生凋亡。     

c-jun末端激酶在亚砷酸钠致人胚胎肝细胞损伤中的表达

目的探讨亚砷酸钠染毒对人胚胎肝(L-02)细胞中c-jun末端激酶(JNK)的变化。方法将处于对数生长期的L-02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、50、100、150μmol/L的亚砷酸钠溶液中培养24 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,采用流式细胞术检测染毒24 h时的细胞周期及细胞凋亡率;采用蛋白杂交(Western-blot)法检测JNK及p-JNK的蛋白表达水平。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率及G0-G1期构成比均较低,JNK、p-JNK的蛋白表达水平和S期构成比及凋亡率均较高;而G2-M期构成比在50μmol/L亚砷酸钠染毒组较低,在100、150μmol/L亚砷酸钠染毒组均较高,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞凋亡率及JNK和p-JNK蛋白的表达水平均呈上升趋势,细胞存活率呈下降趋势。结论亚砷酸钠诱导L-02细胞凋亡可能与JNK及p-JNK表达的增加有关。     

高碘对大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨不同浓度碘对体外培养大鼠胸主动脉平滑肌(A7r5)细胞的凋亡及凋亡相关蛋白硫氧还原蛋白1(TRX-1)和凋亡信号调节激酶1(ASK-1)表达的影响。方法将处于对数生长期的细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、750、1 500、3 750、6 000、7 500 mg/L的含碘化钾培养液中培养24 h。采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,采用蛋白杂交(Western-blot)法检测A7r5细胞内TRX-1和ASK-1蛋白的表达水平。结果与对照组相比,碘化钾暴露浓度为6 000~7 500 mg/L时,A7r5细胞的存活率均降低,差异均有统计学意义(P0.01);且A7r5细胞的存活率随着碘化钾暴露浓度的升高而下降。与对照组相比,不同浓度碘化钾暴露A7r5细胞内的TRX-1蛋白表达水平较低,ASK-1蛋白表达水平较高,差异均有统计学意义(P0.01);且随着碘化钾暴露浓度的升高,A7r5细胞内的TRX-1蛋白表达水平呈下降趋势,ASK-1蛋白的表达水平呈上升趋势。结论高浓度碘暴露可引起大鼠胸主动脉平滑肌细胞活性的下降,减弱抑凋亡蛋白TRX-1的表达,增强促凋亡蛋白ASK-1的表达,从而诱导大鼠胸主动脉平滑肌的凋亡。     

二甲基甲酰胺致心肌细胞凋亡线粒体通路的体外实验研究

目的 探讨二甲基甲酰胺（dimethylformamide,DMF）致H9c2心肌细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的影响。方法 采用蛋白免疫印迹法（western blot,WB）检测不同剂量DMF（0 mM、50 mM、100 mM、200 mM）染毒24 h后胞浆内活化的Caspase-3（cleaved caspase-3）、Bax、Bcl-2以及细胞色素C（Cyt-c）水平的改变。结果 不同剂量DMF（0 mM,50 mM,100 mM,200 mM）染毒24 h后胞浆Cleaved caspase-3、Bax和Cyt-c水平升高,Bcl-2水平降低,组间差异均有统计学意义（Cleaved caspase-3:F=23.33,P<0.001;Bax:F=60.31,P<0.001;Bcl-2:F=577.8,P<0.001;Cyt-c:F=104.0,P<0.001）。Cleaved caspase-3和Cyt-c水平在100 mM、200 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax在50 mM、100 mM染毒组较对照组升高,差异均有统计学意义（均有P<0.05）,200 mM染毒组与对照组相比差异无统计学意义（P=1.000）。Bcl-2水平在50 mM、100 mM、200 mM染毒组较对照组均降低,差异均有统计学意义（均有P<0.05）。Bax/Bcl-2比值增加,100 mM,200 mM组较对照组差异均有统计学意义（均有P<0.05）。结论 DMF染毒后可上调H9c2心肌细胞Cleaved caspase-3、Cyt-c以及Bax/Bcl-2水平,下调Bcl-2水平。线粒体通路参与了DMF诱导的H9c2心肌细胞凋亡的过程。     

微囊藻毒素-LR急性呼吸道暴露对小鼠生殖细胞凋亡的影响及其作用机制

目的探讨微囊藻毒素(MC-LR)急性呼吸道暴露对小鼠生殖细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将30只健康8周龄SPF级ICR雄性小鼠按体重随机分为3组,分别为对照组和10、25μg/kg MC-LR组,每组10只。采取暴露式气管滴注法进行急性暴露36 h。检测小鼠睾丸组织凋亡情况以及睾丸组织内质网应激相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结果与对照组相比,各剂量MC-LR组小鼠睾丸组织阳性小管发生率和每管凋亡细胞数均较高,差异有统计学意义(P0.01);且随着MC-LR浓度的升高,阳性小管发生率和每管凋亡细胞数均呈上升趋势(P0.01)。与对照组相比,各剂量MC-LR组小鼠睾丸组织中caspase-3、caspase-12、CHOP蛋白及25μg/kg MC-LR组小鼠睾丸组织中GRP78蛋白的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05);而各剂量MC-LR组小鼠睾丸组织中caspase-9、IER1、PERK蛋白的表达水平均无明显改变。随着MC-LR染毒剂量的升高,小鼠睾丸组织中caspase-3、caspase-12、CHOP蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论呼吸道急性暴露MC-LR可能通过内质网应激途径诱导小鼠睾丸生殖细胞凋亡,从而介导小鼠睾丸损伤。     

氧化应激在全氟辛烷磺酰基化合物诱导人胚胎肝细胞凋亡中的作用

目的探讨全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)致人胚胎肝(L-02)细胞凋亡的作用及其机制。方法将处于对数生长期的L-02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、50、100、150、200μmol/L的PFOS溶液培养24 h。采用MTT法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,并测定细胞线粒体内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平及线粒体膜电位,采用q RT-PCR法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、bax、bcl-2 m RNA的表达水平。结果与对照组比较,150、200μmol/L PFOS染毒L-02细胞的存活率均降低,而100、150、200μmol/L PFOS染毒组L-02细胞的凋亡率均增加,差异均有统计学意义(P0.05);且随着PFOS染毒浓度的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率呈上升趋势。与对照组比较,各浓度PFOS染毒组L-02细胞内ROS和MDA水平均增加,而各浓度PFOS染毒组L-02细胞内SOD水平和100、150、200μmol/L PFOS染毒组L-02细胞内GSH水平和线粒体膜电位均较低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着PFOS染毒浓度的升高,L-02细胞内ROS和MDA水平均呈上升趋势,而SOD、GSH水平和线粒体膜电位均呈下降趋势。与对照组比较,各浓度PFOS染毒组L-02细胞中caspase-3、caspase-9、Bax m RNA的表达水平均较高,而bcl-2、bcl-2/bax值均较低,除50μmol/L PFOS染毒组caspase-9外,差异均有统计学意义(P0.05﹚。结论在本实验剂量下,PFOS暴露可引起L-02细胞凋亡,其机制与PFOS诱导的氧化损伤和线粒体凋亡途径有关。     

PM_(2.5)对支气管上皮细胞凋亡基因表达水平的影响

目的探讨PM_(2.5)对支气管上皮(HBE)细胞凋亡基因表达的影响。方法用PM_(2.5)低剂量10μg/m L和高剂量50μg/mL对HBE细胞染毒,用未染毒的细胞作为对照组,10μg/mL的Cr~(6+)为阳性对照组,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRTPCR)检测凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2的mRNA表达水平变化情况,Western blot检测凋亡基因的蛋白质表达变化情况。结果 qRT-PCR结果显示,与对照组比较,PM_(2.5)10μg/mL和50μg/mL染毒以及阳性对照组染毒后,Caspase-3基因表达量分别升高193.0%、340.0%、214.0%,Caspase-8基因表达分别升高50.0%、84.0%、71.0%,Caspase-9基因表达分别升高94.0%、177.0%、117.0%,Bax基因表达分别升高8.0%、38.0%、57.0%,Bcl-2基因表达水平分别下降26.0%、46.0%、57.0%。Western blot结果显示,与对照组比较,Caspase-3蛋白在PM_(2.5)10μg/mL和50μg/mL染毒和Cr6+染毒后表达水平分别升高22.4%、48.6%、21.8%,Caspase-8蛋白表达水平分别升高54.7%、77.8%、64.3%,Caspase-9蛋白表达水平分别升高16.1%、82.7%、25.1%,Bax蛋白表达水平分别升高54.7%、90.4%、42.8%,Bcl-2蛋白表达量分别下降20.5%、41.8%、27.6%。结论 PM_(2.5)染毒引起HBE细胞中凋亡基因表达升高,抑凋亡基因表达下降,提示雾霾对凋亡基因表达水平具有明显影响。     

慢性砷染毒对大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响

目的探讨慢性砷染毒对大鼠附睾上皮细胞凋亡的影响。方法将40只健康清洁雄性SD大鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和2.4、12.0、60.0 mg/L亚砷酸钠染毒组,每组10只。采用自由饮用方式进行连续染毒6个月。采用TUNEL细胞凋亡染色法测定大鼠附睾上皮凋亡细胞的凋亡情况,采用Western blot法测定附睾组织内caspase-3、caspase-9蛋白的表达水平,并测定精子顶体完整率和精子畸形率。结果与对照组比较,各浓度砷染毒组大鼠附睾管的细胞凋亡率较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着砷染毒浓度的升高,大鼠附睾管的细胞凋亡程度加重。与对照组比较,各浓度砷染毒组大鼠附睾内caspase-3、caspase-9蛋白表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着砷染毒浓度的升高,大鼠附睾内caspase-3、caspase-9蛋白的表达水平呈上升趋势。与对照组比较,12.0、60.0 mg/L砷染毒组大鼠精子顶体完整率均较低,而精子畸形率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着砷染毒浓度的升高,大鼠精子顶体完整率呈下降趋势,而精子畸形率呈上升趋势。结论慢性砷染毒通过激活caspase-3或caspase-9等途径实现大鼠附睾组织的损伤及凋亡。     

双酚A对雌性小鼠血清性激素及卵巢氧化损伤的影响

目的探讨双酚A(bisphenol A,BPA)对雌性小鼠血清性激素水平影响及卵巢氧化损伤作用。方法将30只1周龄健康SPF级昆明雌性小鼠按体重随机分为对照(玉米油)组和100、200 mg/kg BPA染毒组,每组10只。采用灌胃方式进行染毒,染毒容量为0.01 ml/g,每天1次,每周连续染毒5 d,共染毒12周。测定小鼠血清中雌二醇(E_2)、孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH)及卵巢细胞活性氧(ROS)的水平;通过免疫组化SP法检测卵巢Bcl-2及Bax蛋白的表达,并计算Bcl-2/Bax值。结果与对照组相比,各剂量BPA染毒组小鼠血清中E_2、P的水平均降低,而FSH的水平均升高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着BPA染毒剂量的升高,小鼠血清中E_2、P的水平均呈下降趋势,而FSH的水平呈上升趋势。与对照组相比,各剂量BPA染毒组小鼠卵巢细胞ROS的水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着BPA染毒剂量的升高,小鼠卵巢细胞ROS的水平呈上升趋势。与对照组相比,各剂量BPA染毒组小鼠卵巢细胞BAX蛋白的表达水平均较高,而Bcl-2蛋白的表达水平及Bcl-2/BAX值均降低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着BPA染毒剂量的升高,小鼠卵巢细胞BAX蛋白的表达水平呈上升趋势,而Bcl-2蛋白的表达水平及Bcl-2/BAX值均呈下降趋势。BPA染毒组卵巢颗粒细胞和卵泡的形态结构病理学变化明显。结论 BPA可致小鼠卵巢组织发生明显的氧化损伤。     

氯化消毒饮用水有机提取物对L-02肝细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响

目的探讨氯化消毒饮用水水样中有机提取物染毒对人肝细胞株(L-02)细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响。方法于2012年7—9月(丰水期)采集贵阳市某地水厂的管网末梢水水样并制备有机提取物。将L-02细胞分别于含0(对照)、0.312 5、0.625、1.25、2.5、5 L/ml氯化消毒饮用水有机提取物的培养基中暴露48 h。测定细胞中半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)与B细胞淋巴瘤2相关x基因(Bax)m RNA及蛋白的表达水平。结果与对照组比较,2.5、5 L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中caspase-3、Bax的m RNA及蛋白表达水平均较高,而0.625、1.25、2.5、5 L/ml饮用水有机提取物染毒组L-02细胞中Bcl-2、PARP-1的m RNA及蛋白表达水平均较低(除0.625 L/ml组PARP-1蛋白外),差异均有统计学意义(P0.05)。结论在本实验条件下,较高剂量的氯化消毒饮用水有机提取物暴露可上调L-02肝细胞中caspase-3与Bax基因,下调Bcl-2及PARP-1基因,促进细胞凋亡的发生。     

全氟辛烷磺酸盐通过线粒体途径诱导N9细胞凋亡

目的 以小胶质细胞株(N9)作为靶细胞,观察全氟辛烷磺酸盐(PFOS)通过线粒体途径诱发N9细胞凋亡效应.方法 设定5、10、50、100、200 μmol/L PFOS染毒组及对照组.PFOS染毒24h后流式细胞术分析凋亡细胞率,罗丹明123检测线粒体膜电位,荧光定量PCR检测染毒24h后凋亡相关基因p53、Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达.结果 与对照组(2.24％)比较,50、100、200 μmol/L PFOS组细胞凋亡率(分别为20.81％、33.26％、48.72％)均增加(P＜0.05);PFOS染毒降低了线粒体膜电位,200 μmol/L组细胞出现明显核周小斑点状荧光;此外,随剂量增加,PFOS染毒组p53、Bax、caspase-3和caspase-9基因表达水平呈上升趋势,Bcl-2表达水平呈下降趋势,但未见浓度依赖性.结论 PFOS暴露可破坏神经小胶质细胞自稳态,破坏线粒体,影响凋亡相关基因表达,诱导神经细胞凋亡.     

砷对原代培养海马神经元凋亡及突触素和生长相关蛋白GAP-43表达的影响

目的观察砷对原代培养海马神经元的细胞活性、凋亡及突触素(SYN)和生长相关蛋白GAP-43表达的影响。方法将原代培养的新生SD大鼠海马神经元分别暴露于含0.00、0.05、0.10、0.20、0.40μg/ml亚砷酸钠的培养基中培养24 h。检测神经元形态变化、细胞凋亡及SYN和GAP-43蛋白的表达水平。结果与对照组比较,0.10、0.20、0.40μg/ml亚砷酸钠染毒组大鼠海马神经元中神经网络丰富型神经元的构成比降低,海马神经元的凋亡率较高,SYN蛋白表达水平降低,各浓度亚砷酸钠染毒组大鼠海马神经元中GAP-43蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,大鼠海马神经元的凋亡率呈上升趋势,SYN和GAP-43蛋白表达水平呈下降趋势。结论砷可诱导原代培养海马神经元凋亡,通过降低SYN和GAP-43蛋白表达而损伤其突触可塑性。     

氢醌对人白血病细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响

目的 研究氢醌对白血病细胞株U937细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响。方法 用不同浓度的氢醌处理U937细胞24 h、48 h后,采用MTT法来检测细胞增殖抑制率;经瑞-吉染色后,观察细胞形态变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达。结果 (1)U937细胞的增殖抑制率随氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(2)氢醌作用后,部分细胞体积增大,胞浆中有空泡,胞核发生畸形;(3)流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P<0.05);(4)免疫印迹结果显示,与空白组相比较,染毒48h时,细胞Bax蛋白的表达量增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达量减少(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05),染毒24 h时,细胞Caspase-3蛋白的表达量增加(P<0.05);与染毒24 h各组相比较,染毒48 h时细胞Caspase-3蛋白的表达量随时间延长呈增加趋势(P<0.05)。结论 氢醌可以诱导U937细胞凋亡,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达有关。     

有机碘和无机碘对人甲状腺细胞凋亡的影响

目的 研究有机碘和无机碘对体外培养的人甲状腺细胞形态和凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法 取正常人甲状腺细胞进行培养,分别设对照(培养液)组和KI组(碘浓度分别为10-7、10-5、10-3 mol/L)及3,5-二碘酪氨酸(DIT)组(碘浓度分别为10-7、10-5、10-3 mol/L),分别加入相应浓度用培养液稀释的DIT和KI溶液,继续培养48 h.采用免疫组织化学技术测定细胞凋亡相关蛋白表达的情况.结果 与对照组相比,10-5、10-3 mol/L KI组和10-3 mol/L DIT组甲状腺细胞Bcl-2表达量较低,10-5、10-3 mol/L KI及DIT暴露甲状腺细胞Bax表达量较高,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);且随着KI或DIT暴露浓度的升高,甲状腺细胞Bcl-2表达量呈下降趋势,Bax表达量呈上升趋势.与相同剂量KI组相比,10-5、10-3 mol/L DIT组甲状腺细胞Bcl-2表达量较高,Bax表达量较低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 高碘可引起甲状腺细胞形态的改变并增强其细胞凋亡的发生,且DIT对甲状腺细胞的影响弱于KI.     

纳米银在HepG2和L02细胞中的生物分布及凋亡作用研究

目的探讨纳米银在人肝癌(Hep G2)细胞株及人正常肝(L02)细胞株内的生物分布及引起凋亡作用差异的可能机制。方法将HepG2细胞、L02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、20、40、80、160μg/ml含纳米银的细胞培养液中24、48 h。采用透射电镜(TEM)观察细胞超微结构及颗粒分布;采用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位下降细胞比例和活性氧(ROS)水平的变化。结果染毒24 h时,HepG2和L02细胞的细胞膜受损,在膜周围可见黑色颗粒;染毒48 h时,在HepG2细胞的线粒体及L02细胞的溶酶体和内吞小泡中发现黑色颗粒。与对照组相比,20~160μg/ml纳米银暴露Hep G2细胞24、48 h以及40、80、160μg/ml纳米银暴露L02细胞24 h及80、160μg/ml纳米银暴露L02细胞48 h时的线粒体膜电位下降细胞比例均较高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着纳米银暴露浓度的升高暴露时间的延长,HepG2细胞和L02细胞的线粒体膜电位下降细胞比例均呈上升趋势。与对照组相比,20~160μg/ml纳米银暴露HepG2细胞24、48 h的ROS水平上升明显,差异有统计学意义(P0.01);且随着纳米银暴露浓度的升高暴露时间的延长,HepG2细胞ROS水平呈上升趋势;各剂量纳米银暴露L02细胞中ROS水平无明显变化。结论纳米银在HepG2和L02细胞中的生物分布不同对这两种细胞的凋亡造成了不同的影响。     

PBDE-47对人神经母细胞瘤细胞凋亡和线粒体膜电位及细胞色素C蛋白表达的影响

目的探讨PBDE-47对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞线粒体膜电位和细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响及其与细胞凋亡的关系。方法将处于对数生长期的SH-SY5Y细胞分别加入终浓度为0(溶剂对照组)、1、5、10μmol/L的PBDE-47暴露24 h。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位变化,采用Western blot技术检测胞浆与线粒体细胞色素C蛋白表达的水平。结果与溶剂对照组相比,10μmol/L PBDE-47染毒组SH-SY5Y细胞凋亡率和5、10μmol/L PBDE-47染毒组胞浆内细胞色素C蛋白表达水平均明显升高,10μmol/L PBDE-47染毒组线粒体膜电位和各浓度PBDE-47染毒组线粒体内细胞色素C蛋白表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。且随着PBDE-47染毒浓度的升高,SH-SY5Y细胞凋亡率和胞浆内细胞色素C蛋白表达水平呈升高趋势,线粒体内细胞色素C蛋白表达水平呈下降趋势。结论 PBDE-47可通过引起线粒体膜通透性转运孔开放和细胞色素C的释放介导SH-SY5Y细胞凋亡,从而对SH-SY5Y细胞产生损伤。