鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体胞外段原核表达载体的构建及表达鉴定

目的构建重组原核表达载体以获得鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体（FGFR-1）胞外段活性蛋白，为进一步研制FGFR-1蛋白质肿瘤疫苗打下基础。方法利用RT—PCR技术，从鸡胚肝中扩增出鸡的FGFR-1胞外段基因的cD—NA，用内切酶消化后插入原核表达质粒pQE30中。经过琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定后，体外转化大肠埃希菌，用RT—PCR和免疫印迹方法鉴定是否能够正确表达，同时利用Ni—NTA琼脂柱层析法纯化复性重组蛋白。结果琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定证实PCR扩增的cDNA及构建的重组原核表达质粒pQE30-FGFR-1正确，并在大肠埃希菌中正确表达。经纯化后，进行SDS-PAGE电泳显示得到1条分子量约40ku的蛋白质条带。结论成功构建鸡FGFR-1胞外段原核表达载体并获得重组活性蛋白。     

人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及鉴定

目的构建人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体pEGFP-N1-haFGF。方法 PCR扩增人酸性成纤维细胞生长因子（haFGF）基因,BglⅡ和HindⅢ双酶切后克隆入真核表达载体pEGFP-N1,构建haFGF真核表达载体pEGFP-N1-haFGF,并经限制性酶谱分析和DNA测序对重组表达载体的正确性进行鉴定。结果重组真核基因表达载体pEGFP-N1-haFGF经限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ酶切,DNA电泳显示465 bp的haFGF目的片段和4 700 bp的pEGFP-N1载体片段,重组载体经DNA测序显示所克隆的haFGF基因核苷酸顺序与Genbank中记载的haFGF序列一致。结论本实验成功构建人酸性成纤维细胞生长因子真核表达载体,为进一步研究haFGF的功能奠定基础。     

成纤维细胞生长因子及其受体研究进展

成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor，FGF)是一类通过与细胞膜特异性受体结合发挥作用、调节细胞生长的肽类分子。从70年代中期到目前已进行了大量广泛的研究。现已知FGF家族至少包括23个因子或癌基因的产物，它们在一级的氨基酸序列上有一定的同源性及类似的生物学功能，在细胞生长分化以及肿瘤发生发展等方面发挥重要作用。     

人碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体的构建

目的:构建人碱性成纤维细胞生长因子bFGF基因真核表达载体,探讨bFGF基因转移治疗视网膜病变的方法.方法:将bFGF和GFP基因克隆到真核表达载体pcDNA3中.结果:酶切及琼脂糖电泳分析 pcFG中含有bFGF和GFP基因.结论:成功的构建了含有绿色荧光蛋白的人碱性成纤维细胞生长因子基因的真核表达载体.     

人甲状腺刺激激素受体cDNA的克隆及真核表达载体的构建

目的克隆人甲状腺刺激激素受体(hTSHR)基因cDNA并构建其真核表达载体。方法以人甲状腺组织cDNA为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增hTSHR基因编码区的全部序列,克隆入pGEM-T载体中,经限制性内切酶、DNA序列分析鉴定目的基因后,定向亚克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1中,并进行双酶切鉴定。结果PCR扩增的特异性片段长度为2 337 bp,以此构建的pGEM-T-hTSHR克隆载体,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析证实载体中带有hTSHR基因编码区的目的片段,重组质粒pcDNA3.1-hTSHR经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后显示5 1000 bp和2 300 bp左右的2个条带,DNA序列分析显示与GenBank中的hTSHR基因cDNA序列一致,证明hTSHR基因已成功克隆入真核细胞表达载体pcDNA3.1中。结论成功构建了野生型pcDNA3.1-hTSHR重组真核表达载体。     

人碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及表达

目的: 构建研究人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)真核表达载体,并在体外进行表达和检测.方法: 从骨髓基质干细胞中分离总RNA,进行RT-PCR 获得人bFGF cDNA.测序证实其结果正确后,构建真核表达载体.并经BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定.利用Blast程序,搜索NCBI GenBank中与重组质粒(pVAX1-bFGF)中编码bFGF基因同源的序列.通过脂质体将重组质粒转染入骨髓基质干细胞,使用间接免疫荧光法进行表达产物检测.结果: 经EcoRⅠ/Pst BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切、PCR及测序鉴定证实,人bFGF基因成功地克隆到真核表达载体pVAX1中;pVAX1- bFGF中编码bFGF的序列与GenBank中所报道的bFGF编码序列完全一致;间接免疫荧光结果显示转染重组质粒的细胞表面有绿色荧光.结论: 成功地构建了人bFGF真核表达载体,其可以在体外进行表达.     

成纤维细胞生长因子受体的性质及应用

成纤维细胞生长因子(FGFs)通过与受体(FGFRs)结合启动细胞内信号转导,调节细胞增殖、分化与移行。FGFRs的活化在血管生成、胚胎发育、肿瘤生长以及创伤修复等方面具有重要作用。本文作者从FGFRs结构、结合特异性、突变与疾病关系及小分子FGFs受体激酶抑制剂治疗癌症和心血管疾病的应用方面予以综述。     

碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌中的表达及其意义

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和成纤维细胞生长因子受体-4(fibroblast growth factor receptor-4，FGFR-4)在胃癌组织中的表达及其意义。方法：应用免疫组化方法，检测81例胃癌及其癌旁组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4的表达。结果：11例癌旁正常胃粘膜上皮有1例碱性成纤维细胞生长因子(9．1％)，2例成纤维细胞生长因子受体-4(18．2％)染色阳性；5例癌旁不典型增生中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性各2例(40％)；4例癌旁肠化碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别有2例(50．0％)和1例(25．0％)；81例癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别为72例(88．89％)和74例(91．36％)；癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性率明显高于癌旁肠化及不典型增生(P＜0．01)；胃癌组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4表达的水平与患者肿瘤部位、组织学类型及分化程度无关(P＞0．05)；碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色呈明显相关(P＜0．01)。结论：碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌组织中表达明显增高可能与肿瘤的发生发展有关。     

牛碱性成纤维细胞生长因子cDNA的克隆琢其酵母重组表达质粒的…

根据已有资料设计合成引物，利用ＲＴ－ＰＣＲ方法得到牛ｂＦＧＦ ｃＤＮＡ全序列，经过序列分析后，建立其酵母分泌表达质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／α－ｂｂＦＧＦ。     

牛碱性成纤维细胞生长因子cDNA的克隆及其酵母重组表达质粒的构建

根据已有资料设计并合成引物，利用ＲＴ－ＰＣＲ方法得到牛ｂＦＧＦｃＤＮＡ全序列，经过序列分析后，建立其酵母分泌型表达质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／ａ－ｂｂＦＧＦ。     

人碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达质粒的构建

目的：构建人碱性成纤维细胞生长因子（ｈｂＦＧＦ）基因真核表达质粒,为深入研究ｈｂＦＧＦ在组织修复中的分子调节机制及临床应用提供物质基础。方法：含ｈｂＦＧＦ ｃＤＮＡ的ｐＵＣ１８－ｈｂＦＧＦ质粒于大肠杆菌ＪＭ１０９内扩增;提取及纯化ｐＵＣ１８－ｈｂＦＧＦ质粒;经ＤＮＡ序列分析所含ｈｂＦＧＦ ｃＤＮＡ;限制性酶切ｈｂＦＧＦ ｃＤＮＡ片段,连接酶连接到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－ｎｅｏ内,克隆出真核表达质     

碱性成纤维细胞生长因子真核荧光表达载体的构建

目的：构建可在真核细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的真核表达载体,为进一步开展bFGF基因治疗缺血性脑血管疾病奠定基础。方法：①采用线栓法建立SD大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型,取缺血灶周围脑组织经逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增bFGF基因;②将bFGFDNA克隆到pGEM-TEasy质粒,经菌落PCR和HindⅢ和EcoRI双酶切鉴定;③然后将bFGF DNA亚克隆到pEGFP-N3质粒;通过抗性基因筛选阳性克隆,经菌落PCR、酶切和测序鉴定。结果：菌落PCR、酶切和DNA序列鉴定均证实插入片段与GenBank报道的bFGF基因序列一致。结论：经RT-PCR反应得到了特异的bFGF基因片段并成功构建了bF-GF荧光真核表达载体。     

pSecTag-EGFP真核表达载体的构建及其转染鸡胚胎成纤维细胞的研究

目的 研究pSecTag真核表达载体转染鸡胚胎成纤维细胞的转染效率,选出该质粒转染鸡胚胎成纤维细胞的最佳转染条件,从而为研究目的 基因在鸡胚胎成纤维细胞中成功表达奠定基础.方法 用PCR方法克隆得到EGFP基因,通过酶切、连接、转化的方法构建了pSecTag-EGFP分泌型真核表达载体,设计优化试验,通过脂质体介导的方法转染鸡胚胎成纤维细胞,用Bradflord检测法检测正交优化不同组合细胞培养液中所表达分泌的增强绿色荧光蛋白的相对含量.结果 成功构建psecTag-EGFP分泌型真核表达载体,并选出该质粒转染鸡胚胎成纤维细胞的最佳转染条件,即脂质体加2μl、质粒加1.0μg.结论 脂质体介导的方法能有效转染鸡胚胎成纤维细胞.     

成纤维细胞生长因子受体的结构与功能

目前已发现的成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowth factor,FGF)家族至少有19个成员(FGF1一19),它们在发育、血管生成、创伤愈合中有重要作用。而它们的功能是通过与成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)结合后,经过信号传递系统,激活相应的基因而实现的。本文主要介绍FGFR结构和功能的基础知识与研究近况。     

碱性成纤维细胞生长因子及其受体在胃癌及癌前病变中的表达及其意义

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及成纤维细胞生长因子受体-2(fibroblast growth factor receptor-2,FGFR-2)在胃癌组织中的表达及其意义。方法应用免疫组化SP法检测100例胃癌及癌旁组织,bFGF和FGFR-2的表达及两者之间的关系。结果胃癌中bFGF和FGFR-2表达明显高于癌旁组织及正常组织(P0.01),胃癌组织中bFGF、FGFR-2表达的水平与临床病理分期有关,中晚期胃癌bFGF及FGFR-2阳性率明显高于早期胃癌(P0.05),胃癌组织中bFGF与FGFR-2表达呈正相关,随bFGF表达的增高FGFR-2表达亦增高(P0.05)。结论 bFGF和FGFR-2在胃癌组织中表达明显增高可能与肿瘤的发生发展有关。     

碱性成纤维细胞生长因子促进rhBMP-2诱导成骨的载体

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）在诱导成骨中的适宜载体。方法 ＢＡＬＢ／ｃ小鼠１４０只随机分为４组,每组３５只。设立ｒｈＢＭＰ－２／ｂＦＧＦ／ＰＶＰ为实验组,ｒｈＢＭＰ－２／ｂＦＧＦ,ｒｈＢＭＰ－２／ＰＶＰ和ｒｈＢＭＰ－２３组为对照组,分虽于术后３～２１ｄ共６个时间点取材,进行组织学、Ｘ线分析以及钙含量测定,观察４组诱导成骨情况。结果 ｒｈＢＭＰ－２／ｂＦＧＦ／ＰＶＰ组在诱导间充质细胞     

碱性成纤维细胞生长因子及成纤维细胞生长因子受体在豚鼠前庭中的定位和表达

目的 :观察碱性成纤维细胞生长因子 ( b FGF)及成纤维细胞生长因子受体 ( FGFR)在豚鼠前庭终器的定位和表达。方法 :免疫组织化学。结果 :b FGF位于支持细胞和毛细胞的胞浆及胞核 ,FGFR位于支持细胞表面。b FGF及 FGFR在成年豚鼠表达较弱 ,新生豚鼠及庆大霉素内耳损伤豚鼠表达较强。结论 :提示 b FGF在豚鼠前庭终器发育、结构功能维持及损害后修复中起重要作用     

阿托伐他汀对新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体mRNA的影响

目的 探讨阿托伐他汀对醛固酮诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)mRNA表达的影响.方法 采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取和培养乳鼠心脏成纤维细胞,应用RT-PCR检测心脏成纤维细胞TGF-βRⅠ mRNA的表达.结果 给予醛固酮(10-7mol/L)4 h后,TGF-βRⅠ mRNA表达开始增加,8 h达高峰;提前给予阿托伐他汀(10-6,10-5,10-4mol/L)能剂量依赖性地抑制醛固酮诱导的TGF-βRⅠ mRNA表达,而甲羟戊酸可逆转阿托伐他汀的这种抑制作用.结论 阿托伐他汀可抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-βRⅠ mRNA表达,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关.     

碱性成纤维细胞生长因子及其受体在心肌梗死心脏组织中的分布

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)及其受体(fibroblast growth factor receptor-1,FGFR-1)在正常及心肌梗死后心脏组织中的分布和变化情况,探讨bFGF在心肌梗死中对心脏的保护作用.方法 普通级正常成年西双版纳微型猪11只,实验组(n=6)通过结扎成年微型猪的左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,对照组(n=5)模拟开胸手术过程,但不结扎冠状动脉,4周后取出心脏,采用免疫组化法和图像分析方法检测2组实验动物心脏组织中bFGF 和FGFR-1的水平.结果 ①正常对照组的心房心肌细胞内bFGF和FGFR-1的蛋白表达水平高于心室(P<0.05).②心肌梗死后,实验组左右室心肌组织的bFGF水平明显高于对照组(P<0.05),而以受累左室的增加最为明显.同时,受累左心室中的FGFR-1较对照组也升高(P<0.01),且以梗死边缘区最为显著(P<0.01).③梗死区周围组织中的血管内皮细胞、平滑肌细胞内bFGF和FGFR-1表达较对照组增多(P<0.05).结论 心肌梗死后受累部位心肌bFGF明显增多,同时FGFR-1显著上调,推测bFGF在心肌梗死后的心脏血管新生、侧支循环建立、组织修复、心脏重构及改善心肌梗死预后方面可能起重要作用.     

胃癌组织中碱性成纤维细胞生长因子-2及其受体表达的研究

目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 - 2 (FGF - 2 )及成纤维细胞生长因子受体 - 2 (FGFR - 2 )在胃癌中的表达及其生物学意义。方法 :应用免疫组织化学技术 ,对 79例胃癌及癌旁组织FGF - 2和FGFR - 2表达水平进行分析 ,2 1例胃溃疡病例和 6 1例癌旁组织一起用作对照。结果 :胃癌组织中FGF - 2和FGFR - 2的表达量明显高于癌旁组织和正常组织 (P <0 0 5 ) ,FGF - 2和FGFR - 2的表达量在有淋巴结转移标本中明显高于无淋巴结转移的标本 ,而二者表达量在不同组织学分型和肿瘤病理分级标本中相差不大 (P >0 0 5 )。胃癌组织中FGF - 2和FGFR - 2表达量呈一致性。结论 :胃癌组织中FGF - 2和其受体表达量明显高于非癌组织 ,FGF - 2和FGFR - 2的表达与胃癌的侵袭及转移有关