重组结核分枝杆菌16000蛋白抗原(rPA16)豚鼠皮肤试验效果的研究

目的 :以豚鼠为动物模型 ,分析重组 16 0 0 0蛋白抗原rPA16能否引起迟发型超敏反应 (DTH)。方法 :连续 3次皮下注射结核分枝杆菌H37Rv热灭活菌体 ,使豚鼠致敏后进行皮肤试验。以生理盐水为阴性对照 ,PPD为阳性对照组 ,重组蛋白则设置 0 .1,0 .2 ,0 .4μg三个剂量 ,分别进行背部皮内注射 ,注射后 2 4～ 72h观察豚鼠注射局部皮肤的皮痘、硬结程度。结果 :0 .1～ 0 .4μg/ 0 .2ml的重组蛋白抗原rPA16在 48～ 72h阳性反应平均直径与PPD相比均无显著差异 (均P >0 .1) ,3种浓度的重组蛋白豚鼠皮肤反应的阳性率之间也无显著差异 (P >0 .1)。 48h为rPA16引起豚鼠皮肤反应的较佳测量时间。结论 :重组结核分枝杆菌 16 0 0 0蛋白抗原与PPD相比 ,所引起的豚鼠皮肤DTH的反应能力基本相似 ,具有皮肤试验的潜在应用价值     

重线结论分枝杆菌16000蛋白抗原（rPA16）豚鼠皮肤试验效果的研究

目的：以豚鼠为动物模型,分析重组１６０００蛋白抗原ｒＰＡ１６能否引起迟发型超敏反应（ＤＴＨ）。方法：连续３次皮下注射结核分枝杆菌Ｈ３７Ｒｖ热灭活菌体,使豚鼠致敏后进行皮肤试验。以生理盐水为阴性对照,ＰＰＤ为阳性对照组,重组蛋白则设置０．１,０．２,０．４μｇ三个剂量,分别进行背部皮内注射,注射后２４～７２ｈ观察豚鼠注射局部皮肤的皮痘、硬结程度。结果：０．１～０．４μｇ／０．２ｍｌ的重组蛋白抗原ｒＰＡ１６在４８～７２ｈ阳性反应平均直径与ＰＰＤ相比均无显著差异（均Ｐ〉０．１）,３种浓度的重组蛋白豚鼠皮肤反应的阳性率之间也无显著性差异（Ｐ〉０．１）。４８ｈ为ｒＰＡ１６引起豚鼠皮肤反应的较佳测量时间。结论：重组结核分枝杆菌１６０００蛋白抗原与ＰＰＤ相比,所引起的豚鼠皮肤ＤＴＨ的反应能力基本相似,具有皮肤试验的潜在应用价     

重组结核分支杆菌16000蛋白抗原(rPA16)的免疫原性研究

目的：研究结核分枝杆菌重组16000蛋白（rPA16)诱发家兔产生抗体的能力并评价其血清学诊断的价值。方法：家兔按注射的抗原及佐剂的不同分组，皮下多点注射分别进行免疫，6次免疫后采血，双向琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验（ELISA）跟踪兔血清抗体效价的时间效应并检测兔血清与所试各类分支杆菌PPD有无交叉反应；同时检测rPA16与各分支杆菌PPD的免疫羊血清的反应，并用rPA16抗原检测人血标本，分析该抗原的临床检测的敏感性和特异性。结果：兔血清抗体效价结果显示：5个月后，加佐剂的抗原组的兔免疫血清仍能检测到抗体，不加佐剂组2个月后血清抗体检测即为阴性，ELISA检测兔免疫血清比双向琼脂扩散方法要更敏感，rPA16抗原加佐剂引起的兔血清抗体滴度最高可达1：6400，不加佐剂组的血清抗体滴度仅为1：400，ELISA法分析抗rPA16的兔血清的特异性表明其特异笥较好，仅与牛、人型结核分支杆菌的PPD呈阳性反应，与其他所试分支杆菌PPD反应均为阴性，同时又分析了rPA16抗原的特异性，与人型PPD相比，该抗原只与所试各类分支杆菌，BCG、牛分支杆菌免疫的血清呈阳性反应，而人型PPD则基本上与结核分支杆菌免疫的血清均呈阳性反应，ELISA检测血清标本结果：肺结核病组中rPA16和PPD检测敏感性分别为64.8%和75.2%；健康组，卡介苗接种阳转健康组，rPA16和PPD检测特异性分别为96.2%,88.5%和94.3%,66.7%。结论：rPA16具有较强的免疫原性和一定的特异性，可能成为结核病血清学诊断试剂之一。     

结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白抗原诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究

目的 :结核分枝杆菌重组Ag85A抗原诱发豚鼠迟发型超敏 (DTH)反应。Ag85A剂量、观察时间对DTH的影响。方法 :常规皮肤实验法 :灭活H37Rv全菌体致敏豚鼠 ,皮肤试验以生理盐水为阴性对照 ,5IUPPD标准品为阳性对照 ,0 .1、0 .2、0 .4、0 .6、0 .8及 1.0 μg重组抗原分别于背部皮内注射 ,注射后 2 4、4 8及 72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。皮肤试验轮圈法 :生理盐水、5IUPPD及 0 .4、0 .6、0 .8、1.0 μgAg85A抗原 ,以轮圈法注射于同一只豚鼠背部一侧 ,每批 6只 ,共 3批。于注射后 2 4、4 8、72h分别测量红肿或硬结反应横、纵直径 (mm) ,取两者的平均值。结果 :常规皮肤试验 0 .1、0 .2 μg重组Ag85A抗原诱发DTH的平均直径与PPD相比有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,而 0 .4、0 .6、0 .8、1.0重组Ag85A抗原诱发豚鼠DTH的平均直径与PPD相比 ,无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,2 4h平均直径显著高于 4 8h平均直径 (P <0 .0 5 ) ,2 4h测量效果较好。轮圈法皮肤试验排除个体差异后结果与常规皮肤试验结果一致。结论 :从我们的实验结果来看重组Ag85A抗原诱发豚鼠DTH反应可以代替PPD     

结核分枝杆菌重组MTB48蛋白抗原血清学诊断价值的研究

目的 研究重组MTB48(recombinant MTB48,rMTB48)蛋白的抗原性,评价其在结核病血清学诊断中的价值,寻找更有效的结核病诊断试剂.方法 应用基因工程技术表达、纯化rMTB48蛋白,通过酶联免疫吸附试验方法检测402例血清中抗结核抗体.结果 rMTB48蛋白在大肠杆菌细胞内以包涵体形式高效表达,表达量占菌体总蛋白的30%左右,分子量约57.6 kD,具有良好的抗原特异性.在210例结核病患者血清中,103例菌阳患者和107例菌阴患者抗MTB48抗体的阳性率分别为41.7%和24.3%,总的灵敏度为32.9%.在192例正常人血清中,95例PPD阴性者和97例PPD阳性者抗MTB48抗体的阳性率分别为0.0%和11.3%,总的特异性为5.7%.结论 rMTB48蛋白可能成为结核病血清学诊断的组合抗原之一.     

结核分枝杆菌特异性抗原重组蛋白研究进展

结核病是一种由结核分枝杆菌(mysobacterium tubercu-losis,MTB)引起的人畜共患慢性传染病.由于耐药株出现、人类免疫缺陷病毒(HIV)合并MTB感染以及大规模高危人群流动,因而造成全球流行,其发病率、病死率呈上升趋势,已形成全球范围的流行.疫情呈三高一低,即患病率高、病死率高、耐药率高、年递降率低.要控制结核病的发生与流行必须加强对结核病的诊断学研究,目前研究快速、准确、敏感、特异以及简便的诊断方法是有效地控制结核病蔓延的关键.     

结核分枝杆菌16KD蛋白的基因克隆及表达与纯化

目的:通过构建结核分枝杆菌(MTB)16KD蛋白的表达载体,在大肠杆菌(E.coli)中表达MTB16KD蛋白,并获得大量纯化的16KD蛋白。方法:采用聚合酶链反应(PCR)从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出16KD蛋白的编码基因,用限制性内切酶消化后插入载体pGEX-4T-2中,测序结果证实后,将重组质粒转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达GST-16融合蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析融合蛋白的相对分子质量及表达形式。Western blot鉴定16KD蛋白活性。经GST亲和层析柱过柱,得到纯化的16KD蛋白。结果:构建了具有正确基因序列的表达载体,在E.coli DH5α中诱导表达的融合蛋白GST-16占菌体总蛋白的42%。Wstern Blot结果证明:融合蛋白GST-16能与抗结核分枝杆菌的抗体发生特异性结合。紫外分光光度仪测量纯化16KD蛋白的浓度为688mg/L。结论:结核分枝杆菌16KD蛋白在E.coli DH5α能高效表达,该蛋白具有特异的免疫学活性。     

重组结核分枝杆菌11 kDa蛋白皮肤试验与结核菌素皮肤试验的比较研究

目的比较重组结核分枝杆菌11 kDa蛋白(重组11 kDa蛋白)皮肤试验与结核菌素皮肤试验(PPD)两种检测方法,探讨更适合结核分枝杆菌潜伏感染者的筛查方法。方法选取2015年9月北京市大兴区某大学新生共461名,进行重组11 kDa蛋白和PPD的同体双臂皮肤试验,分别于不同前臂皮内注射0.1 mL重组11 kDa蛋白(10μg/L)和0.1 mL结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)(50 U/mL),观察注射后72 h后皮肤反应。于皮肤试验前采集461名志愿者的静脉血,进行体外γ干扰素释放试验(T-SPOT.TB)检测,采用T-SPOT.TB试剂盒进行。比较重组11 kDa蛋白皮肤试验、结核菌素PPD皮肤试验的差异性。结果以注射72 h后的硬结反应进行统计,2种检测结果显示男女阳性率比较,差异无统计学意义。重组11 kDa蛋白皮肤试验中阳性反应者为17名,阳性率为3.68%;PPD皮肤试验中强阳性反应者为8名,强阳性率为1.74%。以T-SPOT检测结果为标准,重组11 kDa蛋白皮肤试验灵敏度、特异度、准确度分别为39.53%,100.00%,94.36%;PPD皮肤试验灵敏度、特异度、准确度分别为16.28%,99.76%,91.97%。结论重组11 kDa蛋白皮肤试验灵敏度高,与体外T-SPOT.TB检测结果一致且简便易行,有望成为结核分枝杆菌潜伏感染的新的筛查方法。     

重组结核分枝杆菌38KDa蛋白抗原制备及其血清学诊断价值

目的通过基因工程技术获取纯化的结核分枝杆菌重组38KDa蛋白并评价其血清学诊断价值。方法在大肠杆菌中表达38KDa蛋白，通过亲和层析纯化并复性后用于ELISA检测结核患者血清中特异性抗结核抗体。结果38KDa蛋白表达量占总蛋白的22．80％，以包涵体的形式存在。纯化复性后的蛋白抗原检测54例肺结核患者敏感性为62．96％，其中检测痰涂阳性和痰涂阴性患者的敏感性分别为64.29％和62．50％，二者无显著性差异（X^2=0.02，P〉0．05），检测38KDa抗体特异性为84．38％。另外，通过与结核蛋白芯片检测，结果比较发现研制的重组38KDa蛋白免疫活性与国外进口的蛋白免疫活性相当。结论制备的重组38KDa蛋白抗原具有血清学诊断价值，可用于结核病诊断试剂的开发。     

结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白的血清学诊断

目的 评价结核分枝杆菌重组Ag85A蛋白为抗原进行结核病血清学诊断的价值.方法 以重组Ag85A蛋白为抗原,通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测健康体检者147例和结核患者143例血清中的抗结核抗体;同时以结核杆菌特异性抗体快速检测试剂盒为对照.结果...     

P~(16)蛋白和PCNA在肝细胞性肝癌中的表达及意义

目的 :探讨肝细胞性肝癌 (HCC)中抑癌基因P16 蛋白及增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达、相关性及其与肿瘤临床病理的关系。方法 :采用免疫组化SP法检测 4 5例HCC及癌旁肝组织中P16 蛋白及PCNA。结果 :①P16 蛋白及PCNA在HCC中的阳性表达率分别明显低于、高于癌旁肝组织 (P <0 .0 5)。②高分化、中分化HCC中P16 蛋白的阳性表达率明显高于低分化HCC(P <0 .0 5) ;高分化HCC中PCNA的阳性表达率明显低于中分化及低分化HCC(P <0 .0 5)。③P16 蛋白与PCNA在未转移组HCC中的阳性表达率分别明显高于、低于转移组HCC(P <0 .0 5)。④临床Ⅰ期与Ⅲ期HCC比较 ,P16 蛋白的阳性表达率及PCNA的阳性表达率均有显著性差异 (P <0 .0 1 )。⑤P16 蛋白及PCNA在HCC中的表达与肿瘤直径无关。⑥HCC中P16 蛋白与PCNA的表达间存在明显负相关关系 (r =-0 .57,P <0 .0 5)。结论 :P16 基因及PCNA的表达与HCC的增殖、分化、转移状态及临床分期有关 ,且存在明显负相关关系 ,其表达状况可以作为判断HCC恶性程度及预后的有用指标。     

人微小RNA-16(miR-16)重组腺病毒的制备和鉴定

目的 制备人微小RNA-16(miR-16)重组腺病毒,研究其在人骨髓间充质于细胞(hMSCS)中的表达及对细胞周期素依赖蛋白激酶6(CDK6)表达的影响.方法 从人基因组DNA中扩增miR-16前体的DNA,定向插人腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV.将经Pme I线性化的重组穿梭载体pAdTrack-CMV-m...     

16PF在医护人员招聘中的应用

目的:研究16PF在医护人员招聘中的应用,为选出具备良好心理素质的全方位人才提供依据.方法:采用卡特尔16PF人格量表对377名应聘者进行测试.结果:(1)男性和女性在聪慧性、稳定性、兴奋性、敏感性、怀疑性、自律性6项初级因素方面存在显著性差异,在感情用事与安详机警型以及在新的工作环境中有成长能力的个性因素这2项次级因素中也存在显著性差异.(2)该组被试者与普通应聘者在乐群性、稳定性、兴奋性、有恒性、怀疑性、世故性、独立性、自律性方面以及适应与焦虑性、内向与外向型、心理健康因素、专业而有成就的个性因素、创造能力个性因素等次级因素方面存在显著差异.结论:心理素质测评在人才招聘中的使用,可为单位招聘高素质人才,尤其是心理素质过硬的人才提供一定的依据,但这项工作还需不断完善.     

p^16蛋白和PCNA在子宫内膜癌中的表达

目的：研究ｐ＾１６抑癌基因蛋白和增殖细胞核抗原ＰＣＮＡ与子宫内膜癌的关系。方法：应用免疫组化ＳＰ法对６４例子宫内膜癌、２２例非典型增生内膜、 ３０例正常风膜作ｐ＾１６在内膜癌中检出率为４６．８７％,正常内膜为１００％,Ｐ〈０．０１。ＰＣＮＡ在内膜癌中弱阳性（＋）２３例,强阳性（＋＋）３３例。ｐ＾１６和ＰＣＮＡ两者呈明显负相关。Ｐ〈０．０１。结论：ｐ＾１６和ＰＣＮＡ参与细胞周期调控,与子宫内膜癌的发     

人工合成小分子多肽P16抑制大鼠肾小管上皮细胞纤维化的初步研究

目的 观察人工合成的与结缔组织生长因子(CTGF)同源的16个氨基酸小分子多肽(P16)能否与CTGF竞争性地和CTGF受体相结合,以阻止大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化为肌纤维母细胞,并抑制细胞纤维化的发生.方法 以NRK-52E细胞株为实验对象,用异硫氰酸荧光素标记P16(FITC-P16),激光共聚焦显微镜观察P16和CTGF与细胞竞争性结合能力.用CTGF诱导NRK-52E细胞并加入P16竞争结合,通过细胞免疫荧光和RT-PCR分别在蛋白和基因水平上检测反映NRK-52E细胞向肌纤维母细胞转化的α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth action muscle protein, α-SMA)和反映NRK-52E细胞纤维化的胶原Ⅰ和Ⅳ.结果 CTGF能诱导NRK-52E细胞高表达α-SMA和胶原Ⅰ、Ⅳ.P16可与CTGF竞争性结合细胞表面的整合素аvβ3,并显著抑制CTGF诱导的α-SMA和胶原Ⅰ、Ⅳ高表达.结论 人工合成的小分子多肽P16可通过与CTGF竞争性结合于细胞表面,显著抑制CTGF的促细胞转分化和纤维化作用,可望成为抗纤维化治疗的一种新策略.     

电离辐射对豚鼠组织、器官中SOD、LPO含量的影响

目的　观察电离辐射对豚鼠组织、器官中SOD、LPO含量的影响。方法　豚鼠经60 Coγ射线照射后 ,对脑、心脏、肝脏、脾脏进行预处理 ,采用Misra等肾上腺素自氧法测定SOD活力 ,采用Uchiyama等法测定LPO含量。结果　60 Coγ射线能明显降低豚鼠上述组织、器官中SOD的活力 ,LPO含量显著上升 ;而肝脏中SOD活力明显高于脑、心脏和脾脏。结论　电离辐射能明显降低豚鼠组织、器官中SOD活力、提高LPO含量 ;肝脏中SOD活力明显高于脑、心脏和脾脏     

HPV-16 E4原核表达系统的建立和表达特性研究

目的克隆人乳头瘤病毒-16型(HPV-16) E4 基因( E4 ),构建E4蛋白表达重组工程菌,探索表达条件和鉴定表达产物特性.方法以临床HPV-16阳性宫颈炎患者上皮细胞提取物为模板,PCR扩增 E4 完整基因,并定向克隆到pET32a(+)原核表达质粒中,经双酶切和测序鉴定后转入大肠杆菌BL-21(DE3),获得工程菌(BL-21/E4).经IPTG诱导,表达蛋白用SDS-PAGE和Western blot鉴定.结果克隆到完整 E4 基因为342 bp,与HPV-16东亚型的同源性为99%,与其他HPV16型的同源性高于97%.在28 ℃和37 ℃,0.1 mmol/L的IPTG诱导18 h时,重组蛋白(rE4)表达量分别占菌体总蛋白的12.2%和12.8%;SDS-PAGE和Western blot证明rE4蛋白与表达载体的标签蛋白形成相对分子质量约34×103的可溶性融合蛋白(rE4/His).结论成功构建了表达带标签的融合重组蛋白(rE4/His)的重组大肠杆菌BL-21/E4表达系统,这为高纯度HPV-16 E4蛋白的制备和相关研究奠定了基础.     

卡特尔16种人格因素(中国版)构念效度的验证

目的:验证卡特尔16种人格因素 (16PF) 中国版本的构念效度.方法:对1535名军人和3389名学生16PF样本,计算16个根源特质的题总相关、科龙巴赫系数、Guttman分半系数,以及对次元人格因素的验证性因素分析(CFA)参数.结果:部分特质内部一致性系数较低,各因素的独立性较好,次元人格因素CFA参数达到或接近可接受的标准.结论:建议16PF中国版中的一些题目需要修订.     

p16、Ki-67在胃肠道间质瘤中的表达及意义

目的探讨胃肠道间质瘤p16、Ki-67表达与临床病理的关系。方法制作40例胃肠道间质瘤组织芯片，并进行分组（低度危险组、中度危险组和高度危险组），以40例正常胃肠道肌壁组织为对照，用免疫组化Elivision二步法检测p16、Ki-67在胃肠道间质瘤组及对照组的表达。结果①Ki-67在胃肠间质瘤组中的表达高于在正常对照组中的表达，而p16的表达情况则正好相反，且差异有统计学意义（P〈0．032）；②p16、Ki-67在胃肠道间质瘤各组的表达无显著性差异；低、中度危险组合并后与高度危险组比较时未发现p16的表达差异（P〉0．05），而Ki-67则存在差异（P〈0．05）。结论①p16可能在胃肠道间质瘤的发生、发展中起重要作用；②Ki-67可作为评价肿瘤恶性潜能的一个重要指标；③应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的，具有快速、方便、经济、准确的特点。     

转导白细胞介素2基因的B16细胞对机体免疫反应的影响

应用XM6逆转录病毒载体将人IL-2cDNA转入小鼠B16黑色素瘤细胞。丝裂霉素C处理的转染前后B16细胞作为瘤苗对小鼠进行免疫接种。结果显示，接种B16-IL-2细胞可明显排斥再移植黑色素瘤的生长。对脾淋巴细胞检测的结果表明，MLTR引起的淋巴细胞增殖与特异性CTL杀伤活性，以及NK、LAK活性与诱生的IL-2水平几项指标，B16-IL-2细胞免疫组均明显高于B16免疫组及对照组。提示转基因肿瘤细胞在体内分泌IL-2增强了机体的特异性与非特异性免疫功能。