失血性休克对肠上皮细胞线粒体编码的细胞色素氧化酶mRNA表达变化的研究

目的　观察大鼠失血性休克后肠上皮细胞线粒体编码基因细胞色素氧化酶亚基 (COXⅠ、COXⅡ、COXⅢ )mRNA的表达变化。方法　采用失血性休克模型 ,分离肠上皮细胞后进行RNA的提取 ,应用RT PCR检测COXⅠ、COXⅡ、COXⅢmRNA的表达变化。结果　大鼠失血性休克 1h ,COXⅠ、COXⅡ基因表达开始增强 ,2h表达最强 ,以后随着休克时间延长 ,表达又逐渐减弱 ,失血性休克晚期 5h表达显著低于正常对照组 (P <0 .0 1)。结论　失血性休克可引起大鼠肠上皮细胞线粒体编码基因COXⅠ、COXⅡmRNA的明显改变。     

失血性休克大鼠心肌和肠上皮细胞ND1、ND2、mtTFA基因表达的变化

目的探讨失血性休克后线粒体呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2及其调控因子-mtTFA在大鼠心肌和肠上皮细胞内基因转录物水平改变规律.方法通过采用大鼠失血性休克模型,提取心肌和肠上皮细胞总RNA,行RT-PCR扩增呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2基因及mtTFA基因并对其基因转录物水平进行了检测.结果大鼠失血性休克后1～2 h,心肌细胞ND1基因的转录水平与正常对照组比较均显著升高;而肠上皮细胞ND1基因的转录水平较正常对照组显著下降,但两种细胞ND2基因的转录水平在失血性休克后的变化趋势基本一致.两种细胞mtTFA基因的转录水平在失血性休克1～2 h后的转录水平则较正常对照组显著下降.结论在缺血缺氧性损害中,心肌和肠上皮细胞内线粒体ND1亚单位基因转录物水平的改变可能具有组织差异性.     

Rg_1对失血性休克大鼠肠上皮细胞PGC-1基因表达的影响

目的探讨Rg1对失血性休克大鼠肠上皮细胞PGC-1基因表达的影响,以从基因调控水平探讨Rg1对失血性休克时肠上皮细胞线粒体缺血缺氧性损伤的保护作用。方法用RT-PCR方法观察失血性休克大鼠肠上皮细胞PGC-1基因mRNA量的改变,用Western-blot法检测肠上皮细胞PGC-1蛋白的表达变化。结果失血性休克5 hPGC-1 mRNA表达明显降低（P〈0.05）,复苏后3 h组其表达量仍低于休克前水平,但较失血性休克组表达有所增强。复苏加Rg1治疗3 h后PGC-1 mRNA明显呈较高水平表达。复苏加SB202190及复苏加茴香霉素对PGC-1mRNA几乎无调节作用;Rg1在SB202190存在时,仍微弱上调PGC-1 mRNA表达,Rg1能增强茴香霉素上调PGC-1mRNA的作用。失血性休克5 h大鼠肠上皮细胞PGC-1蛋白表达量明显降低,复苏加Rg1能上调PGC-1蛋白表达,复苏加SB202190或茴香霉素对PGC-1蛋白表达调节作用较弱。Rg1在SB202190存在时,微弱上调PGC-1蛋白表达,但Rg1和茴香霉素同时作用时蛋白表达量明显增加。结论复苏加Rg1可明显上调PGC-1 mRNA及其蛋白表达。提示PGC-1 mRNA上调可以促进PGC-1蛋白表达,PGC-1蛋白合成在转录后水平的调节非常重要。     

幽门螺杆菌对胃癌细胞线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ表达的影响

目的观察幽门螺杆菌(H.pylori)作用于胃癌细胞后线粒体编码基因COXⅠmRNA及蛋白的表达变化,探讨H.pylori致胃癌的分子机制。方法H.pylori培养滤液分别作用于胃癌细胞4、8和12 h后,收集细胞,应用RT-PCR和W estern b lot法检测各时相点COXⅠ基因和蛋白表达变化。结果H.pylori培养滤液作用4 h后,线粒体COXⅠmRNA的表达开始降低,8 h下降更明显,12 h下降速度减缓。各时相点的表达量明显低于对照组(P<0.05)。COXⅠ蛋白表达呈现出相同的趋势,各时相点的表达量明显低于对照组(P<0.05)。结论H.pylori可下调胃癌细胞线粒体编码基因COXⅠmRNA及蛋白的表达,影响线粒体功能。     

微波对大鼠脑线粒体细胞色素C氧化酶亚基转录水平的影响

目的 观察微波辐照对大鼠大脑皮层和海马组织线粒体编码基因COX I和核编码基因COXⅣmRNA表达水平的影响，探讨微波辐照是否影响线粒体能量代谢。方法 平均功牢密度为3mW／cm^3和30mW／cm^2微波急性辐照大鼠1h后，应用RT-PCR检测大鼠大脑皮层和海马组织COXI和COXⅣ基因转录水平的变化。结果 3mW／cm^2微波辐照后0、3、24h，大鼠脑海马和大恼皮层COXI、COXⅣ mRNA表达无显著变化。30mW/cm^2微波辐照后0、3、24h，大鼠脑海马和大恼皮层COXI mRNA表达均明显降低，而COXⅣ mRNA表达无显著变化。结论 微波辐照下调大鼠大脑皮层和海马线粒体编码基因COXI mRNA表达，并存在剂量依赖关系，表明微波辐照可能会引起线粒体能量代谢障碍。     

幽门螺杆菌对食管癌COXⅠ表达的影响

目的观察幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)作用于食管癌细胞后细胞色素氧化酶Ⅰ(cytochrome oxidaseⅠ,COXⅠ)mRNA及其蛋白表达的变化,探讨Hp在肿瘤发生发展中可能的作用机制。方法将Hp与食管癌细胞分别作用4、8、24 h,收集细胞,应用Real-Time PCR和Western blot法检测各时间点COXⅠmRNA及其蛋白表达。结果 Hp与食管癌细胞共培养4、8、24 h后,COXⅠmRNA表达量逐渐减少,4 h的表达量显著低于对照组,其后下降速度减慢,24 h后表达量不再有明显改变。COXⅠ蛋白表达呈现相似的趋势。结论 Hp与食管癌细胞共培养后,可导致线粒体编码基因COXⅠmRNA及其蛋白表达障碍,从而影响线粒体功能。     

失血性休克大鼠心肌细胞线粒体ND1、ND2亚基编码基因改变的研究

目的探讨失血性休克大鼠心肌细胞线粒体呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2编码基因改变.方法通过建立失血性休克大鼠模型,提取心肌细胞线粒体DNA,经PCR扩增呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2基因后测序检测其序列组成改变.结果测序结果显示,失血性休克大鼠心肌细胞线粒体的ND1和ND2基因碱基序列无缺失、突变等改变;本实验中使用的Wistar大鼠ND1、ND2基因可能与NCBI提供的基因序列存在多个位点的单核苷酸多态性现象.结论心肌细胞ND1、ND2基因在失血性休克引起的缺血缺氧性损害中较为稳定.     

过氧化氢对肠上皮细胞线粒体编码基因mRNA的影响

目的：观察过氧化氢处理对体外培养肠上皮细胞株SW－480线粒体编码基因mRNA的影响。方法：以400μmol/L和4mmol/L的过氧化氢处理人肠上皮细胞细胞株（SW－480)3h后，分离RNA,应用RT－PCR检测ATPase6、ATPase8、COI、COII及COIII mRNA的变化。结果：过氧化氢对肠上皮细胞线粒体编码基因mRNA的表达具有明显影响，但是这种改变不与过氧化氢的剂量呈现出一种一致的变化。结论：过氧化氢引起肠上皮细胞线粒体编码基因mRNA的明显改变。     

益肾调督针灸法对AD模型大鼠海马线粒体COXⅣ的影响

目的：观察益肾调督针灸法对AD大鼠海马线粒体COXⅣ的影响,探讨针灸防治AD的具体作用机制。方法：将Wistar大鼠按随机数字表分为4组,即正常组、假手术组、模型组和针灸治疗组,采用双侧海马注射Aβ1-42的模型复制方法,针灸治疗组采用先针刺再艾灸“百会”和“肾俞”穴,通过免疫组化法观察大鼠海马线粒体中COXⅣ的表达水平。结果：大鼠行为学观察可见针灸治疗组大鼠进食量及饮水量正常,对外界刺激反应尚可,较模型组有所改善。同时通过免疫组化法对大鼠海马线粒体中COXⅣ平均光密度及平均灰度的统计学分析发现,模型组COXⅣ的表达明显低于正常组和假手术组（P〈0．01）,而针灸治疗组COXⅣ的表达显著性提高,与模型组比较具有统计学意义（P〈0．01）。结论：益肾调督针灸法可以有效地提高海马线粒体COXⅣ表达,从而改善线粒体呼吸链功能,增加ATP产生,减少线粒体损伤,进而在AD防治中发挥作用。     

幽门螺杆菌对食管癌COXI表达的影响

目的 观察幽门螺杆菌(H.pylori,Hp)作用于食管癌细胞后细胞色素氧化酶I(cytochrome oxidase I,COX I)mRNA及其蛋白表达的变化,探讨Hp在肿瘤发生发展中可能的作用机制.方法 将Hp与食管癌细胞分别作用4、8、24 h.收集细胞,应用Real-Time PCR和Western blot法检测各时间点COX I mRNA及其蛋白表达.结果 Hp与食管癌细胞共培养4、8、24 h后,COX I mRNA表达量逐渐减少,4 h的表达量显著低于对照组,其后下降速度减慢,24 h后表达量不再有明显改变.COX I蛋白表达呈现相似的趋势.结论 Hp与食管癌细胞共培养后,可导致线粒体编码基因COX I mRNA及其蛋白表达障碍,从而影响线粒体功能.     

肝细胞色素氧化酶Ⅰ在非酒精性脂肪肝大鼠形成中的作用

目的研究肝脏线粒体DNA细胞色素氧化酶Ⅰ(COXⅠ)在非酒精性脂肪肝大鼠的表达及其意义.方法Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组和高脂饲料2、4、8、12周组(其中每组各8只);紫外分光光度法测定肝脏细胞色素氧化酶活性,Western blot方法研究高脂饲料诱导的大鼠脂肪肝形成中肝细胞COX Ⅰ蛋白的表达变化,逆转录聚合酶链反应测定肝细胞COX Ⅰ mRNA表达变化.结果脂肪肝2、4、8和12周细胞色素氧化速率分别为(0.88±0.32)、(0.76±0.37)、(0.48±0.26)、(0.39±0.21)/win,与正常对照组(0.98±0.37)/min较明显降低(P＜0.01),肝细胞COX Ⅰ基因及蛋白表达随着脂肪肝程度的加重亦明显增强.结论非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素C氧化酶活性下降以及线粒体编码呼吸链相关的细胞色素C氧化酶COX Ⅰ基因和蛋白质降低,与脂肪肝引起的肝脏损害密切相关.     

四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的克隆及序列分析

目的 探讨四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的特征.方法 根据已经报道的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome c oxidase subunit Ⅰ, COXⅠ)基因设计引物、PCR扩增和直接测序,并用软件对四川黑熊及其他几个物种的COXⅠ基因序列及COXⅠ蛋白的氨基酸序列进行了分析.结果 四川黑熊COXⅠ基因长1605 bp,编码含514个氨基酸残基的前体蛋白.碱基的含量分别为:A: 26.9%, C: 23.1%, G: 18.3 %, T: 31.8 %.起始密码子为"ATG",终止密码子为"TAA".蛋白质等电点为6.29,分子质量为57.2×103.以四川黑熊和已报道的其他6种动物的COXⅠ基因序列为数据构建的分子系统发育树表明在所比较的其他3种熊类中,四川黑熊和美洲黑熊的亲缘关系最近;在牛,狗和大鼠中,四川黑熊与狗的亲缘关系最近.结论 四川黑熊COXⅠ基因的DNA序列和蛋白的氨基酸序列和其他动物的相应序列有很高相似性,表明COX基因在所比较的几个物种中具有高度保守性.     

高浓度腺苷对脑缺血再灌注线粒体编码基因表达的影响

目的针对线粒体的半自主特性,采用高浓度腺苷对脑缺血再灌注线粒体自体编码基因表达进行干预,探讨高浓度腺苷对缺血再灌注神经元能量代谢环节的影响。方法颈动脉分流法制备大鼠脑缺血再灌注模型,提取各实验组脑线粒体,采用Fernandez-Silva的细胞器体外3H-UTP掺入法建立脑线粒体体外RNA转录体系,根据最新线粒体基因序列进行引物设计,用PCR仪对RNA转录体系产物进行PCR扩增及定性、定量分析。结果在腺苷浓度2mmol/L的情况下线粒体编码基因-Cox Ⅰ mRNA、Cox Ⅱ mRNA、ATPase6 mRNA的相对表达量与缺血再灌注组的Cox Ⅰ、Cox Ⅱ、Cox Ⅲ、mRNA相对表达量相比均有明显降低(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。在腺苷浓度2mmol/L的情况下线粒体编码基因-Cox ⅢmRNA、ATPase8 mRNA相对表达量与缺血再灌注后相对表达量差别无统计学意义(P>0.05)。结论脑缺血再灌注后,过高浓度的胞外腺苷会导致线粒体自身编码基因的不正常表达,可能会导致脑能量代谢障碍加重。     

缺氧过程中大鼠脑mtDNA编码12S rRNA和COXⅠ mRNA表达的变化

目的　探讨大鼠经不同时间低压缺氧暴露后脑皮质mtDNA编码 12SrRNA和细胞色素氧化酶 (Cytochromeoxi dase ,COX)亚基ⅠmRNA表达的变化。方法　健康雄性Wistar大鼠在模拟海拔 5 0 0 0m高原低压舱内每天缺氧暴露 2 3 5h ,分别连续缺氧 2、5、15、3 0d ,对照组不做缺氧处理。断头活杀后取脑皮质 ,提取组织总RNA ,以 β actin为内参照 ,反转录PCR法分析 12SrRNA和COXⅠmRNA的表达量。结果　缺氧 2d ,12SrRNA的表达比对照组显著升高 5 7%(P <0 0 5 ) ,缺氧 5d以后恢复至正常对照组水平 (P >0 .0 5 ) ;COX亚基ⅠmRNA表达在缺氧 2d和 5d显著升高 (P <0 .0 1) ,分别比对照组升高 5 5 %和 10 6%,缺氧 15d和 3 0d恢复至正常 ,与对照组无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　缺氧暴露可同时影响mtD NA蛋白编码基因和核糖体基因的表达 ,提示缺氧可在转录与翻译两个水平上影响氧化磷酸化基因的表达 ,且其变化与缺氧暴露时间有关。     

四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的克隆及序列分析

目的探讨四川黑熊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因的特征。方法根据已经报道的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（cytochrome c oxidase subunitⅠ,COXⅠ）基因设计引物、PCR扩增和直接测序,并用软件对四川黑熊及其他几个物种的COXⅠ基因序列及COXⅠ蛋白的氨基酸序列进行了分析。结果四川黑熊COXⅠ基因长1605bp,编码含514个氨基酸残基的前体蛋白。碱基的含量分别为A26.9%,C23.1%,G18.3%,T31.8%。起始密码子为“ATG”,终止密码子为“TAA”。蛋白质等电点为6.29,分子质量为57.2×10^3。以四川黑熊和已报道的其他6种动物的COXⅠ基因序列为数据构建的分子系统发育树表明在所比较的其他3种熊类中,四川黑熊和美洲黑熊的亲缘关系最近；在牛,狗和大鼠中,四川黑熊与狗的亲缘关系最近。结论四川黑熊COXⅠ基因的DNA序列和蛋白的氨基酸序列和其他动物的相应序列有很高相似性,表明COX基因在所比较的几个物种中具有高度保守性。     

亚低温对大鼠脑缺血再灌注损伤后COX2和NMDAR1表达的影响

目的 研究大脑中动脉缺血(MCAO)模型给予亚低温干预后COX2、NMDAR1变化,探讨亚低温对其影响的部分机制.方法 65只大鼠随机分为假手术组、常温缺血组及亚低温缺血组.建立大鼠局灶脑缺血再灌注损伤模型,缺血后病变侧给予亚低温4h.分别于缺血2h再灌注0h、2h、6h、24h、48h、72h后取脑,HE染色及COX2、NMDAR1免疫组化染色.结果 亚低温组与常温组相应时间点相比COX2蛋白表达明显减少(P＜0.05);再灌注早期(24h以内)NMDAR1蛋白表达明显减少.结论 亚低温可通过降低COX2表达途径抵抗脑缺血损伤,早期通过抑制NMDAR1蛋白的表达减轻Glu对神经细胞毒性作用.     

颞叶癫痫大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅲ和Ⅳ表达的变化

目的:探讨癫痫对大鼠海马线粒体细胞色素氧化酶（COX）的mtDNA和nDNA编码亚基Ⅲ、Ⅳ表达的影响。方法:将成年雄性Wistar大鼠40只随机分为生理盐水对照组,癫痫持续状态（SE）后急性期（3h）、静止期（7d）、慢性期（45d）组和注射匹鲁卡品（PILO）但未出现SE组,每组8只。荧光实时定量PCR和Western blot分别检测海马线粒体COX Ⅲ、Ⅳ mRNA和蛋白的表达。结果: COX Ⅲ mRNA和蛋白在SE后3h表达明显升高(P<0.001, P<0.01),7d时降到对照水平,45d显著降低(P<0.001, P<0.01);COX Ⅳ mRNA和蛋白在3h时表达较对照组升高,但差异无统计学意义（P＞0.05),7d和45d时下降至对照水平。注射PILO但无SE组与对照组结果类似。结论: 颞叶癫痫海马cox功能紊乱与痫性发作相关,线粒体编码的基因更易受痫性发作的影响。     

肺癌组织中线粒体转录因子A的表达与线粒体DNA拷贝数变化的关系

目的 探讨肺癌组织中线粒体转录因子A的表达与线粒体DNA拷贝数变化的关系.方法 采用实时荧光定量PCR和RT-PCR方法 ,对肺癌及相应正常肺组织中mtTFA mRNA的表达及其与线粒体DNA拷贝数变化的关系进行了检测和分析.结果 癌组织和癌旁正常组织mtTFA mRNA 的表达量之间无明显差异(P= 0.221).线性回归分析结果 表明,癌旁正常组织中,mtTFA mRNA 的表达量和线粒体DNA拷贝数之间有直接的相关性(r=0.910,P＜0.01);而在癌组织中,线粒体DNA拷贝数和mtTFA mRNA 的表达水平无关(r=0.135,P＞ 0.05).结论 mtDNA转录、复制的核调节因子mtTFA的表达水平和肺癌线粒体DNA拷贝数之间无相关性.     

失血性休克肠上皮细胞线粒体DNA ATPase 6,8亚基基因的改变

目的 观察失血性休克大鼠肠上皮细胞mtDNA ATPase6，8亚基基因的改变。方法 将6只Wistar大鼠分成单纯手术组、休克组。分别提取mtDNA，采用PCR技术扩增后测序，检测突变点。结果 Wistar大鼠mtDNA ATPase6，8亚基基因存在多态性，休克组存在A 7797缺失和一定数量点突变：A7863G，G7950T，C8294G，T8505G。结论 失血性休克5h，肠上皮细胞mtDNA ATPase 6，8亚基基因会发生突变，由此可导致所编码的氨基酸的改变，有可能是酶活性改变的原因。     

缺血再灌注大鼠肠上皮细胞线粒体DNA ATPase 6,8亚基基因的改变

目的观察缺血再灌注大鼠肠上皮细胞mtDNA ATPase 6,8亚基基因的改变情况.方法将6只Wistar大鼠分成对照组、缺血再灌注组.分别提取mtDNA,采用PCR技术扩增后测序,检测突变点.结果 Wistar大鼠mtDNA ATPase 6,8亚基基因存在多态性,在缺血再灌注组存在a7797缺失和一定数量点突变:A7 779T,T8 515G,T8 520G,C8 535G.结论缺血再灌注后,肠上皮细胞mtDNA ATPase 6,8亚基基因存在损伤,由此可能导致所编码的氨基酸改变.