HGF基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用

 目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的促进作用及其机制。方法：采用HGF基因重组质粒pVITRO2-HGF转染的Raji细胞建立裸鼠皮下人淋巴瘤移植瘤模型,动态监测裸鼠体重和肿瘤大小;8周后获取瘤组织,分别采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL) 和免疫组化检测移植瘤组织的细胞凋亡和微血管密度（MVD）,并进行相关分析。结果：造模成功率为96.7%。HGF转染组的瘤体积明显大于HGF转染+VP-16组(P<0.01)、未转染组与空载体组(P<0.01),HGF转染+VP-16组也大于对照组(P<0.01),未转染组与空载体组间无显著差异(P>0.05)。pVITRO2-HGF转染组凋亡指数显著低于对照组(P<0.01),经VP-16诱导后凋亡增加(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.01)。pVITRO2-HGF转染组的MVD显著高于对照组(P<0.01),但经VP-16诱导后血管增生降低（P<0.01）,但仍高于对照组 (P<0.05),对照组间无显著差异(P>0.05) 。结论：HGF基因转染可显著促进裸鼠人淋巴瘤移植瘤的生长,明显抑制凋亡的发生,这一效应可能与其促进肿瘤血管新生和抑制肿瘤细胞凋亡有关。     

Decorin 基因转染抑制高糖培养的大鼠肾系膜细胞细胞外基质mRNA表达

目的： 观察核心蛋白聚糖Ⅱ（DCN）基因转染对高糖培养的大鼠肾系膜细胞（RMCs）细胞外基质（ECM）mRNA表达的影响。方法： 用已构建的AD-DCN腺病毒感染高糖环境培养的大鼠肾系膜细胞，采用半定量RT-PCR测定decorin、转化生长因子β₁（TGF-β₁）、纤维粘连蛋白（fibronectin）和IV型胶原（collagen IV） mRNA水平。结果： 高糖培养的RMCs感染AD-DCN后，DCN mRNA水平显著增高，24 h至第7 d，该组DCN mRNA水平始终显著高于高糖组及AD－LacZ感染组(P<0.05)，decorin mRNA水平增高后表现出对TGF-β₁ mRNA 水平的抑制作用，在mRNA水平，AD-DCN感染的RMCs细胞外基质fibronectin和collagen IV随TGF-β₁ mRNA水平下降而下降。结论： DCN重组腺病毒感染大鼠肾系膜细胞后能高效表达目的基因decorin并拮抗 TGF-β₁ 的生物活性，其下调ECM成分 mRNA水平的作用与使用TGF-β抗体的效果相似。     

缬沙坦对大鼠肾间质纤维化的影响

肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)是各种原因引起的肾脏疾病进展至终未期肾功能衰竭的共同病理特征.     

胃癌患者血清血管内皮生长因子和转化生长因子β1表达的关系及其临床意义

目的探讨胃癌患者血清血管内皮生长因子（VEGF）和转化生长因子β1（TGF—β1）的表达及二者联合检测的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）定量检测84例胃癌患者和40例健康人血清VEGF和TGF—β1水平,并分析其与临床病理因素之间的关系。结果胃癌患者血清VEGF和TGF—β1水平明显高于健康人血清水平[（392．33±118．54）pg／mlVS（139．64±72．31）pg／ml,t=12．4098,P〈0．01;（692．8±14.5）mg／LVS（62．3±6.5）mg／L,t=262．3721,P〈0．01],其水平与浸润深度、分化程度、有无转移、TNM分期有关（P〈0．01）,与性别、年龄、肿瘤大小无统计学意义（P〉0．05）,胃癌患者血清VEGF与TGF-β1水平呈显著正相关（r=0．475,P〈0．01）。结论血清VEGF和TGF-β1。水平与胃癌蛳曼润、转移密切相关,术前检测血清VEGF、TGF—β1水平对预测胃癌的侵袭和转移具有重要的临床意义。     

血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9的表达与胰腺癌侵袭转移的关系

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)与基质金属蛋白酶 - 9(MMP - 9)在胰腺癌中的表达与胰腺癌侵袭转移的关系。方法 :采用免疫组化ABC法对 30例胰腺癌手术切除标本的VEGF及MMP- 9蛋白表达进行检测。结果 :VEGF和MMP - 9在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为 83 3 % (2 5/ 30 )和60 % (1 8/ 30 ) ,在正常胰腺组织中分别为 45 % (9/ 2 0 )和 2 5 % (5/ 2 0 ) ,癌组织与正常组织间存在显著差异 (P <0 0 5) ;VEGF和MM - 9的阳性表达率与胰腺癌的侵袭转移显著相关。结论 :VEGF和MMP - 9在胰腺癌生长、侵袭和转移过程中起着重要的作用 ,对预测胰腺癌复发、转移具有一定的意义     

TGF-β1基因转染对大鼠树突状细胞生物学特性的影响

目的 研究转化生长因子β1(TGF-β1)基因转染对大鼠树突状细胞生物学特性的影响。方法 将TGF-β1基因导入体外培养的大鼠树突状细胞，经过G418筛选后，采用Western blot和水貂肺上皮细胞(Mv1)生长抑制试验，了解转染细胞TGF-β1的表达及其生物学活性。通过混合淋巴细胞反应，观察转染的树突状细胞对T淋巴细胞增殖的影响。结果 FGF-β1基因转染的树突状细胞可以分泌TGF-β1，而且具有特异性抑制Mv1增长的生物学活性。在混合淋巴细胞反应中，TGF-β1基因转染的树突状细胞对T淋巴细胞的增殖有抑制作用，而空载体pcDNA3对照组与未转染组的树突状细胞具有强烈的激发T细胞增殖的能力。结论 利用构建的TGF-β1表达质粒转染大鼠树突状细胞，转入的TGF-β1基因可以在树突状细胞内稳定表达，并且使树突状细胞的生物学特性发生相应的改变。     

沉默基因CD147对骨肉瘤细胞生物学行为的影响

目的观察RNA干扰技术沉默CD147基因对骨肉瘤MG-63细胞生物学行为的影响。方法实验分为正常细胞组(mock)、阴性对照组(Ad-si Control)及RNA干扰组(Ad-CD147-si RNA)。应用MTT法实验检测骨肉瘤MG-63细胞的增殖率变化,应用Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力变化,应用ELISA方法检测MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白变化。结果 Ad-CD147-si RNA抑制MG-63细胞增殖;RNA干扰CD147基因表达后MG-63细胞的运动侵袭能力下降,穿过人工基底膜细胞数量明显减少,MG-63细胞分泌VEGF、MMP-2、MMP-9能力显著降低,结论 AdCD147-si RNA抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖和侵袭可能与下调MMP-2、MMP-9、VEGF表达相关。     

转血管内皮生长因子基因对血管损伤后重塑的影响及机制探讨

目的观察局部转染pAdtrackCMV-VEGF165对血管球囊拉伤后重塑的影响并探讨可能机制.方法 90只新西兰大白兔随机分为3组,Ⅰ组(30只)单纯拉伤腹主动脉和右髂动脉;Ⅱ组(30只)拉伤后局部转染真核表达质粒pAdtrackCMV;Ⅲ组(30只)拉伤后局部转染pAdtrackCMV-VEGF165;每组按实验终点(术后3 d、1周、2周、4周和8周)随机分为5个亚组,术前1周开始给予高脂饮食,继以高脂饮食喂养至实验终点.取拉伤段腹主动脉用于总RNA提取,拉伤段髂动脉4%甲醛原位灌注固定后用于组织病理和免疫组织化学检测.结果 3组动物血脂水平保持在正常的5～10倍,组间血管损伤程度评分相似(P>0.05).术后2周时,Ⅲ组血管内膜加中膜面积明显小于Ⅰ、Ⅱ组[(0.50±0.32) mm2比(0.94±0.34) mm2、(0.92±0.43) mm2, P<0.05],4周时Ⅲ组血管外弹力板下围绕面积明显大于Ⅰ、Ⅱ组[(1.89±0.31) mm2比(1.40±0.20) mm2、(1.36±0.21) mm2, P<0.05],狭窄程度明显低于Ⅰ、Ⅱ组[(11.1±3.1) mm2比(54.2±7.6) mm2、(57.4±7.7) mm2, P<0.01];术后3 d时,Ⅲ组血管组织可检测到VEGF165、基质金属蛋白酶(MMP)1,2,9及其组织抑制因子(TIMP)1,2表达,2周时达高峰,8周时无表达;而Ⅰ、Ⅱ组整个观察过程中可检测到MMP2、TIMP1、2持续表达,MMP1表达低下,TIMP1/MMP1比值明显大于Ⅲ组(P<0.01).结论病理性重塑是血管损伤后再狭窄的主要原因,局部转染VEGF165基因选择性改变局部MMPs表达,促进基质降解和适应性重塑,有效防止再狭窄.     

重组hTGF-β1基因转染人脂肪干细胞对其向软骨分化的影响

目的研究重组hTGF-β1腺病毒(AdhTGF-β1)转染人脂肪干细胞(ADSCs)对其向软骨分化的作用。方法重组AdhTGF-β1转染人ADSCs,对照组转染AdLacZ,腺病毒的量以200pfu/细胞计算,体外细胞团聚集连续诱导培养21d,酶联免疫吸附定量检测(ELISA)hTGF-β1蛋白的表达,然后分别从大体观察、组织学和II型胶原蛋白免疫组化的检测对形成组织进行评价。结果 hTGF-β1蛋白量在14d时达最高峰,随后逐渐降低。连续细胞团聚集诱导培养21d,细胞团收缩成近似小球形的组织块,外观成乳白色。HE染色可见细胞团外周为由数层扁平状成纤维样细胞组成的纤维软骨膜,下部区域有巢状软骨样细胞组成,有些区域可见软骨样细胞包埋在软骨陷窝内。Safranin'O染色显示,形成的软骨组织区域有被染成桔红色蛋白多糖类基质分泌。而对照组苏木素-伊红染色观察见无软骨样组织形成或有向软骨分化现象。Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示实验组细胞团出现较明显的阳性染色区域,可见棕黄色的颗粒分布于胞浆内。对照组Ⅱ型胶原免疫组化染色检测显示无明显的阳性染色区。结论重组hTGF-β1腺病毒转染人ADSCs诱导人ADSCs向软骨细胞表型分化形成软骨样组织,为hTGF-β1基因转染的人ADSCs在软骨组织工程应用中奠定了基础。     

核心蛋白聚糖对TGF阻诱导的人肾小管上皮细胞产生胶原的影响

目的：探讨核心蛋白聚糖对转化生长因子β1（TGFβ1）诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）I、Ⅲ型胶原表达的影响。方法：将体外培养的HK-2细胞分为：（1）阴性对照组；（2）10μg／L TGFβ1组；（3）TGFβ1（10μg/L）＋（10μg/L）核心蛋白聚糖组；（4）TGFβ1（10μg／L）＋（100μg/L）核心蛋白聚糖组。倒置显微镜下观察加入刺激因子48h后肾小管上皮细胞的细胞形态学改变；应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）观察不同浓度的核心蛋白聚糖对HK-2细胞I、Ⅲ型胶原表达变化的影响。结果：加入刺激因子48h后，（1）组细胞形态与正常HK-2细胞形态基本一致，大部分仍为椭圆形；（2）组细胞形态发生明显的变化，大部分细胞由椭圆形拉长为长梭形；（3）和（4）组，梭形样细胞明显减少，尤其是（4）组梭形样细胞减少更为明显。（2）组HK-2细胞I型胶原mRNA表达上升到（1）组的27.86倍，Ⅲ型胶原mRNA的表达上升到（1）组的21.83倍。（3）和（4）组与（2）组相比，I型胶原mRNA的表达分别下降了36.39％、53.36％，Ⅲ型胶原mRNA的表达分别下降了26.35％、47.96％（P〈0.05），但仍未下降到正常水平。结论：核心蛋白聚糖能抑制TGFβ1诱导的人近端肾小管上皮细胞I、Ⅲ型胶原的表达，可能是核心蛋白聚糖抑制肾间质纤维化的原因之一。     

NK4基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的抑制作用

目的 探讨NK4基因转染对裸鼠人淋巴瘤移植瘤的抑制作用及其机制.方法 采用NK4基因重组质粒pVITRO2-NK4转染的Raji细胞建立裸鼠皮下人淋巴瘤移植瘤模型,动态监测裸鼠体重和肿瘤大小.8周后获取瘤组织,分别采用免疫组化和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)检测移植瘤组织的细胞凋亡和微血管密度(microvessel density,MVD),并进行相关分析.结果 NK4基因转染组裸鼠移植瘤体积明显小于对照组(P<0.01),而对照组间差异无显著性(P>0.05);各组间裸鼠体重降低,差异无显著性(P<0.01).NK4基因转染组的淋巴瘤细胞AI值达237±10.94,而质粒pVITRO2转染组和未转染Raji组的AI值分别为79.7±30.8和81.7±22.2,NK4基因转染组明显高于对照组(P<0.001),而对照组间差异无显著性(P>0.05);NK4基因转染组MVD为4.7±1.52,而质粒pVITRO2转染组和未转染Raji组MVD分别为12.0±1.00和10.66±1.53,NK4基因转染组明显低于对照组(P<0.001),而对照组间差异无显著性(P>0.05).结论 NK4基因转染可明显抑制裸鼠人淋巴瘤移植瘤的生长,其可能通过抑制肿瘤血管新生和促肿瘤细胞凋亡而发挥其效应.     

Epirubicin-gold nanoparticles suppress hepatocellular carcinoma xenograft growth in nude mice

We sought to investigate the effects of epirubicin-nanogold compounds (EPI-AuNP) on hepatocellular carcinoma xenograft growth in nude mice. EPI-AuNP was prepared and hepatoma xenograft model was established in nude mice. The mice were then randomly divided into four groups: the control group with injection of saline, the AuNP treatment group, the EPI treatment group and the EPI-AuNP treatment group. After two weeks, the hepatoma weight and volume of the xenografts were assessed. Our transmission electron microscopy revealed that epirubicin-gold nanoparticles caused significantly more structural changes of hepatocellular carcinoma cells HepG2. The tumor weight in the Epi-AuNP treatment group (0.80±0.11 g) was significantly lower than that of the control group (2.48±0.15 g), the AuNP treatment group (1.67±0.17 g), and the EPI treatment group (1.39±0.10 g) (P<0.01). Furthermore, the tumor volume of mice in the EPI-AuNP treatment group (0.27±0.06 cm³) was significantly smaller than that of the control group (2.23±0.34 cm³), the AuNP treatment group (1.21±0.25 cm³) and the EPI treatment group (0.81±0.11 cm³) (P<0.01). In conclusion, epirubicin-nanogold compounds (EPI-AuNP) have significant inhibitory effects on the growth of hepatocellular carcinoma cells in vivo.     

Recombinant adenovirus vector-mediated human MDA-7 gene transfection suppresses hepatocellular carcinoma growth in a mouse xenograft model

Hepatocellular carcinoma is one of the most common tumors in the world.The purpose of the present study was to investigate the inhibitory effects of adenoviral transduction of human melanoma differentiation-associated gene-7(MDA-7)gene on hepatocellular carcinoma,so as to provide a theoretical basis for gene therapy of the disease.The human MDA-7 gene was cloned into replication-defective adenovirus specific to HepG2 cells using recombinant virus technology.RT-PCR and Western blotting assays were used to determine the expression of human MDA-7 mRNA and MDA-7 protein in HepG2 cells in vitro.Induction of apoptosis by overexpression of the human MDA-7 gene was determined by flow cytometry.In-vivo efficacy of adenoviral delivery of the human MDA-7 gene was assessed in nude mice bearing HepG2 cell lines in vivo by determining inhibition of tumor growth,VEGF and CD34 expression,and microvascular density(MVD).The results showed that AdGFP/MDA-7 induced apoptosis of HepG2 cells in vitro and significantly inhibited tumor growth in vivo(P < 0.05).The intra-tumoral MVD decreased significantly in the treated tumors(P < 0.05).We conclude the recombination adenovirus AdGFP/MDA-7 can effectively express biologically active human MDA-7,which leads to inhibition of hepatocellular carcinoma growth.     

浅蓝菌素对人结肠癌细胞LoVo在裸鼠体内生长的抑制作用

目的 研究脂肪酸合酶抑制剂－浅蓝菌素对人结肠癌细胞ＬｏＶｏ在裸鼠体内生长的抑制作用。方法 建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,浅蓝菌素每次８０ｍｇ／ｋｇ体重、１６０ｍｇ／ｋｇ体重腹腔注射１０次,动态观察肿瘤体积及抑瘤率,治疗后１７ｄ处死并解剖动物,瘤组织做形态学观察和免疫组织化学ＳＰ法检测。结果 不同浓度浅蓝菌素处理人结肠癌细胞ＬｏＶｏ裸鼠移植瘤模型,低剂量和高剂量浅蓝菌素的体积抑瘤率分别为３７．７％和６３．８％,后者接近常规化疗药物５－Ｆｕ治疗对照组（６５．８％）。瘤体组织学显示为人未分化结肠腺瘤,浅蓝菌素处理的移植瘤组织内瘤细胞出现明显的细胞凋亡的超微结构改变,免疫组织化学显示ｂｃ１－２蛋白表达率低于对照组,ｂａｘ基因蛋白的表达结果则相反。结论 浅蓝菌素能够选择性地抑制人结肠癌细胞ＬｏＶｏ细胞在裸鼠体内的生长,这种     

Peritoneal metastatic model for human scirrhous gastric carcinoma in nude mice

We established a peritoneal-metastatic model for scirrhous gastric carcinoma. Peritoneal metastasis had developed after intraperitoneal inoculation of OCUM-2MD3 cells in nude mice. This cell line was derived from a peritoneal-metastatic nodule at the mesenterium after orthotopic implantation of OCUM-2M cells which developed no peritoneal metastasis after intraperitoneal inoculation. The histologic findings of orthotopic-implanted tumor in the stomach show scirrhous type while those of subcutaneous-implanted tumor show medullary type. There might be factors, in OCUM-2MD3 cells, which are responsible for peritoneal metastasis. We next investigated the differences in the biological behavior of the original OCUM-2M and the derived variant OCUM-2MD3. Morphology and growth activity of the two cell lines were similar to each other. The specific chromosomes, add(6)(g13), del(7)(q21.2) and inv(11)(pl3q21), were found in OCUM-2MD3 cells but not in OCUM-2M cells. While the oncogenes amplification by OCUM-2M cells was found in K-sam and c-myc, that by OCUM-2MD3 cells was found only in c-myc. The expression of E-cadherin by OCUM-2MD3 cells was decreased compared with that of OCUM-2M cells. Expression level of β1-integrin of OCUM-2MD3 cells was higher than that of OCUM-2M cells. The binding and invasion activity of OCUM-2MD3 cells were higher than those of OCUM-2M cells, and were decreased by anti-β1-integrin antibody. The invasion activity of OCUM-2MD3 cells was increased in the presence of peritoneal fibroblast. In this study, it was suggested that orthotopic implantation of cancer cells might have an effect on the acquisition of metastatic ability. β1-integrin and peritoneal fibroblasts might be correlated with peritoneal metastasis. This peritoneal-metastatic model should be useful for analysing the mechanism of peritoneal metastasis of human scirrhous gastric cancer.     

VEGF-ASODN抑制裸鼠胃癌移植瘤微血管生长

目的 研究血管内皮细胞生长因子反义寡核苷酸（VEGF-ASODN）对裸鼠荷人胃癌移植瘤微血管的生长抑制作用。方法 人工合成硫代磷酸化VEGF-ASODN,转染胃癌细胞SGC-7901, 实时荧光定量RT-PCR检测细胞RNA起始拷贝数, ELESA法检测VEGF 蛋白含量,MTT检测细胞生存力,细胞生长曲线检测细胞生长。建立裸鼠荷胃癌移植瘤模型。实验分为4组：（1）VEGF-ASODN组,（2）错义寡核苷酸组,（3）生理盐水组,（4）无荷瘤对照组。结果 VEGF-ASODN能降低胃癌细胞VEGFmRNA的水平,显著降低胃癌细胞及培养液VEGF 蛋白含量,降低细胞生存力、抑制细胞生长。VEGF-ASODN还能显著降低荷瘤裸鼠血清VEGF蛋白水平、减小移植瘤的体积和重量、降低移植瘤微血管密度。结论 VEGF-ASODN抑制移植瘤微血管的生长。     

StathminsiRNA抑制人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长并诱导细胞凋亡

目的: 探讨微管解聚蛋白stathmin对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长和细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法: 将0.1 mL SGC-7901细胞悬液(5×10¹⁰/L)接种于裸鼠背部一侧皮下,建立人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤模型,将其分为3组:PBS组(PBS治疗)、对照siRNA组(接种对照siRNA,终浓度为100 nmol/L)和stathmin siRNA组(接种stathmin siRNA,终浓度为100 nmol/L),治疗方式均为腹腔注射。连续2周观察荷瘤裸鼠的生长情况,免疫组织化学方法检测增殖抗原Ki-67的表达,采用TUNEL研究肿瘤组织中细胞的凋亡,Western blotting检测裸鼠肿瘤组织中stathmin、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果: Stathmin siRNA能明显抑制胃癌裸鼠移植瘤的生长(P<0.05),stathmin siRNA组中裸鼠移植瘤的重量明显低于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。免疫组化结果表明,stathmin siRNA组中Ki-67的增殖指数明显低于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。TUNEL结果显示,stathmin siRNA组的凋亡细胞数显著高于PBS组和对照siRNA组(P<0.05)。Western blotting结果表明,与PBS组和对照siRNA组相比,stathmin siRNA组中stathmin和Bcl-2蛋白的表达显著下调,而Bax蛋白表达明显上升(均P<0.05)。结论: Stathmin在胃癌细胞增殖和细胞凋亡的调控中发挥重要作用,本研究有望为胃癌分子靶向治疗提供理论依据。