诱骗受体3与肿瘤关系的研究进展

诱骗受体3(DcR3)是新近发现的肿瘤坏死因子受体超家族新成员,是一种可溶性受体,在一些疾病尤其是恶性肿瘤中过表达,与死亡受体3(DR3)相反,DcR3缺乏死亡结构域.过去对于DCR3的研究集中肿瘤,即DcR3可阻断细胞的凋亡进而造成免疫逃逸和化疗耐受,近来对于DcR3的研究多集中于炎症,以及DcR3及其类似物在特定疾病如自身免疫性疾病中的预防和治疗作用,本文综述了DcR3在肿瘤、炎症及其临床应用中的研究进展.     

肝癌发展中FasL及其受体Fas/DcR3的表达分析

目的研究小鼠肿瘤发生早期肿瘤坏死因子超家族成员FasL及其受体的表达特点,及其与免疫调节相关分子表达的时空关系,探讨其在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法建立小鼠实体瘤模型,采用RT-PCR方法检测肿瘤组织中可溶型FasL、Fas及DcR3、TGF-β、IL-10在肿瘤发生不同时相的表达,同时,应用ELISA方法定量检测血清中TGF-β、IL-10的表达。结果在早期的肿瘤组织中,Fas的表达先于DcR3,其后DcR3大量表达,而Fas的表达则下调直至丢失,DcR3、FasL同时表达并上调,TGF-β和IL-10也随肿瘤的表达而上调。TGF-β同DcR3的表达具有空间位置的一致性。FasL、DcR3、TGF-β和IL-10的表达水平同肿瘤的生长呈正相关。结论随着肿瘤不断的生长,肿瘤局部的免疫应答逐渐趋向于负调节,FasL、DcR3在诱导肿瘤免疫耐受的过程中可能发挥着重要作用。     

DcR3重组蛋白对糖尿病大鼠心肌组织凋亡相关分子的表达及细胞凋亡的作用

目的:研究诱骗受体3(DcR3)在正常大鼠、糖尿病(DM)大鼠心肌组织的表达,DcR3重组蛋白对心肌组织凋亡相关分子表达以及心肌细胞凋亡的影响,探讨DcR3对DM大鼠心肌细胞凋亡的作用。方法:一次性腹腔注射链脲佐菌素建立大鼠DM模型,尾静脉注射不同剂量的DcR3重组蛋白[1.2 mg/(鼠·d)、0.8 mg/(鼠·d)、0.4 mg/(鼠·d)]40 d。RTPCR检测心肌组织DcR3 mRNA、Fas mRNA、FasL mRNA的表达。Wester blot分析凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-8的表达。双抗夹心ELISA检测血液中IL-1β、TNF-α及LFN-γ水平的变化,HE染色观察心肌细胞凋亡的百分率。结果:DcR3治疗组大鼠与DM组比较心肌组织DcR3 mRNA高表达,Fas mRNA、FasL mRNA表达下调。Caspase-8蛋白水平下调,Bcl-2蛋白水平上调,以中剂量组的作用最明显。各DcR3治疗组血清IL-1β、TNF-α和IFN-γ水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01)。心肌细胞凋亡的百分率下降(P<0.05)。结论:DcR3重组蛋白有抑制DM大鼠心肌细胞凋亡的作用,其机制与竞争Fas,阻断FasL诱导细胞凋亡,心肌细胞表达DcR3,凋亡相关因子Caspase-8下调、Bcl-2上调及细胞因子水平的降低有关。     

慢性乙肝患者外周血单个核细胞TRAIL受体表达及其临床意义

目的探索慢性乙肝患者外周血单个核细胞(PBMC)肿瘤细胞坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)受体在PBMC凋亡中的作用,及其与机体肝脏损伤的相关性。方法用RT-PCR和流式细胞术检测55例慢性乙肝患者(包括轻度、中度、重度)外周血单个核细胞TRAIL各受体(DR4、DR5、DcR1和DcR2)表达水平,同时检测肝功能相关指标,并进行相关性分析。以30例正常人作为对照。结果诱骗受体DcR1在慢性乙肝患者中的表达显著低于对照组(P<0.05)。DcR1的表达随慢性乙肝病情的加重而逐渐降低。慢性乙肝患者的DcR1表达与转氨酶(ALT)呈显著负相关,与血清白蛋白成显著正相关。结论慢性乙肝患者外周血单个核细胞DcR1表达下调可能是其细胞凋亡增加的机制之一,且DcR1表达情况可从一定程度上反映肝脏的损伤程度。     

蝎素组分Ⅲ对Jurkat细胞CCR5表达的影响

全蝎是中国传统医学中用于治疗肿瘤的一味重要药物,蝎毒是全蝎发挥药理作用的重要成分,其在抗肿瘤方面的研究有较多报道[1,2].近年来,蝎素作为生物应答调节剂调节免疫系统功能的研究已引起广泛重视.蝎素组分Ⅲ(Scorpion venom crude Ⅲ,SVC-Ⅲ)是从河南马氏钳蝎毒中分离纯化出来的一种活性成分,我们以前的研究显示SVC-Ⅲ能够促进T淋巴细胞的转化和肿瘤坏死因子的分泌[3].C-C趋化因子受体5(CC-chemokine receptor 5,CCR5)是一种G蛋白偶联受体,是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染淋巴细胞的主要辅助受体,协同CD4受体促进HIV的感染,CCR5的表达水平是HIV传播和疾病进展的-个重要因素.本研究观察SVC-Ⅲ对T淋巴细胞CCR5表达及细胞活化有关的信号分子的影响,以探讨蝎素是否可能用于抗HIV病毒感染的治疗.     

TNF-α对体外培养奶牛乳腺成纤维细胞α-SMA mRNA及蛋白表达的影响

肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)主要来源于活化的巨噬细胞、肥大细胞和T细胞等,参与炎症反应和免疫调节过程,并能够刺激成纤维细胞的增殖过程[1].TNF-α通过与细胞的肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)结合发挥作用,TNFR一般分为TNFR1 (CD120a)和TNFR2 (CD120b)两型.TNFR1分布于多种正常细胞或肿瘤细胞表面,TNFR1被认为是TNF-α的主要受体[2-3].TNF-α能促进人3～4代成纤维细胞增殖,对人皮肤成纤维细胞的增殖也有明显促进作用,并促进其Ⅰ、Ⅲ胶原和糖胺多糖合成[4].     

诱骗受体DcR3的基因构建、表达及特异性鉴定

目的:构建适于原核表达的人诱骗受体DcR3基因,并进行重组蛋白的表达纯化及特异性鉴定。方法:查得人DcR3cDNA全序列,将其分段设计引物,通过重叠PCR获得DcR3基因。构建pET-22b( )/DcR3表达载体,转化大肠杆菌Rosseta-gami,IPTG诱导表达,Ni柱纯化。采用ELISA进行特异性鉴定。结果:通过重叠PCR获得了编码正确氨基酸序列的目的基因。目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。纯化后,蛋白纯度达95%以上。ELISA结果表明所纯化的蛋白可与抗DcR3抗体发生特异结合。结论:诱骗受体DcR3基因的成功构建、表达及纯化,为进一步的功能研究奠定了基础。     

类风湿关节炎滑膜组织及关节液中DcR3表达的研究

目的:观察研究人诱骗受体3(DcR3)在类风湿关节炎(RA)关节液及滑膜组织中的表达及其与滑膜炎性病变程度的相关性.方法:用免疫组织化学的方法对12例RA患者、6例骨关节炎(OA)患者及4例无关节病变的骨折患者滑膜组织中DcR3的表达进行描述分析,并对DcR3表达情况与RA患者滑膜炎性病变程度相关性进行分析.同时用ELISA的方法检测了26例RA及19例OA患者关节液中DcR3的表达.结果:DcR3在RA滑膜组织主要分布于血管翳周围炎性细胞及部分滑膜细胞中,DcR3阳性细胞数约为72％.OA滑膜组织细胞中DcR3也呈现少量的阳性表达,但与RA比较阳性程度较弱,阳性细胞数量较少:对DcR3表达与RA滑膜炎性程度的相关性分析发现,DcR3与RA滑膜炎性程度呈正相关(r=0.832,P＜0.01),同时发现RA患者关节液中表达也明显高于OA患者.结论:DcR3在RA滑膜组织炎性细胞及滑膜细胞上的异常表达可能是其参与RA滑膜炎及滑膜组织侵袭等病理过程,从而导致滑膜损伤的一个重要机制.     

CXCL16/CXCR6与炎症性疾病

多种临床疾病(包括肿瘤的发生)与炎症相关,因而趋化因子及其受体愈来愈受到广泛关注.近年有研究发现:人CXC型趋化因子配体16(CXC chemokine ligand 16,CXCL16)及其受体CXC型趋化因子受体6 (CXC chemokine receptor 6,CXCR6)在肾炎、肺部疾患、动脉粥样硬化、冠状动脉疾病、类风湿性关节炎等多种炎症性病变组织中表达;并且,在前列腺癌、结肠癌、乳腺癌等炎症相关肿瘤的肿瘤细胞或浸润性淋巴细胞上也有表达.CXCL16通过CXCR6介导免疫细胞向病变组织趋化,影响疾病转归,甚至参与肿瘤细胞增殖或血管生成.对CXCL16/CXCR6的深入研究,将为炎症性疾病的诊断和炎症相关肿瘤的预后提供参考.     

乳腺癌预后/预测因子

乳腺癌是一组异质性极高的肿瘤[1],目前大多数乳腺癌的预后/预测因子,如患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、淋巴/血管侵犯、转移肿瘤大小,以及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、HER2的表达水平,都是病理诊断的重要组成部分[2-3].     

人DcR3融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的:制备DcR3融合蛋白及其多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:将亚克隆构建的pET28a( )/DcR3重组表达质粒转化入大肠杆菌(E.coli)BL21菌株,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析蛋白产物,将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果:pET28a( )/DcR3重组表达质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为33000的目的蛋白,表达量约占菌体蛋白总量的38%,纯化后的目的蛋白纯度达98%。Western blot显示纯化蛋白与抗DcR3单克隆抗体(mAb)具有良好的反应性。纯化后多克隆抗体效价达1.28×10-6。结论:DcR3蛋白在E.coli中得到高效表达,成功制备高纯度DcR3蛋白及高效价抗DcR3多克隆抗体,为研究DcR3在组织中的表达、分布,研制ELISA试剂盒以检测恶性肿瘤及自身免疫性疾病等患者血清DcR3表达水平提供实验基础。     

肝细胞癌中DcR3表达与癌细胞凋亡的关系研究

目的探讨诱捕受体3（decoy receptor 3,DcR3）蛋白在原发性肝细胞癌（HCC）中的表达及其与癌细胞凋亡和HCC预后的关系。方法应用免疫组织化学（EnVision法）及和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）技术检测43例HCC,16例非癌肝组织（单纯性肝硬化及肝血管瘤周围正常肝组织）中DcR3蛋白的表达及凋亡情况,并分析其与临床病理参数的关系。结果DcR3明确定位于肝细胞胞质内;HCC组织中的DcR3蛋白的阳性率为74．42％（32／43）,明显高于非癌肝组织43．75％（7／16,P〈0．05）;HCC中有转移癌组DcR3阳性率为100％（22／22）,明显高于无转移组52．94％（9／17,P〈0．01）;DcR3蛋白的表达与AFP水平（r=0．444,P〈0．01）、门静脉癌栓（r=0．414,P〈0．01）有关,与年龄、性别、有无肝硬化、包膜浸润、肿瘤结节数及分化程度无关（P〉0．05）。HCC中细胞凋亡指数[AI（0．78±0．64）％]明显低于非癌肝组织[（3．32±1,81）％,P〈0．01];HCC临床TNM分期Ⅰ、Ⅱ期AI（1．03±0．69）％高于Ⅲ、Ⅳ期[（0．52±0．48）％,P〈0．01];HCC无转移组AI（1．10±0．72）％高于转移组[（0．44±0．27）％,P〈0．01];AI与AFP水平（r=-0．468,P〈0．01）、门静脉癌栓（r=-0．434,P〈0．01）、包膜浸润（r=-0,331,P〈0．05）有关,与年龄、性别、有无肝硬化、肿瘤结节数及分化程度无关（P〉0．05）。在HCC和非癌肝组织中,DcR3阳性者的AI均分别低于阴性者的AI（均P〈0．01）。结论DcR3表达可影响凋亡并在HCC的发生发展中起重要作用;检测DcR3蛋白与AI有助于判断HCC患者预后。     

核受体PXR与耐药相关基因在结肠癌中的表达及意义

目的检测核受体PXR和耐药相关基因在人结肠癌中表达,初步探讨其相互关系在肿瘤免疫和肿瘤耐药中意义。方法分别用RT-PCR和western blot方法检测PXR、MRP2、MRP3、ABCG2、MDR1和CYP3A4在17例结肠癌组织中的表达,并进行半定量统计分析。结果与相应正常组织相比,结肠癌组织中PXR、MRP2和MRP3 mRNA水平和蛋白水平均显著增强(P<0.05)。而结肠癌组织中ABCG2、MDR1和CYP3A4 mRNA水平与相应正常组织相比没有显著差异。在癌组织和正常组织中,MRP3 mRNA水平与PXR mRNA水平呈正相关性(P<0.05)。结论 PXR、MRP2和MRP3可能在结肠癌耐药中具有重要作用,PXR调控MRP3表达可能涉及其耐药机制。     

结肠癌组织中Ski的表达及其与临床病理因素的关系

目的 研究Ski在结肠癌组织中的表达与临床病理因素的相关性.方法 采用免疫组化检测癌旁和结肠癌组织中Ski蛋白表达情况.结果 结肠癌组织中Ski蛋白表达阳性率[61.76％(21/34)]明显高于癌旁组织[38.24％(13/34)],差异具有统计学意义(P=0.02).Ski阳性表达与肿瘤的浸润深度(P=0.03)、有无淋巴结转移(P=0.005)和患者的预后有关(P=0.005),而与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度无关(P＞0.05).结论 Ski在结肠癌组织中的表达明显增强,并且与肿瘤的浸润、转移和患者的预后有关.     

绒毛中TRAIL及其受体的表达与不明原因反复自然流产的相关性的探讨

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在不明原因早期反复自然流产患者(URSA)绒毛中的表达及二者的相关性。方法选择实验组妊娠45～60 d的URSA患者15例,对照组健康人工流产15例。两组分别取绒毛组织采用免疫组化法检测TRAIL及其受体的表达,进行方差分析和t检验比较两组绒毛组织中TRAIL及其受体蛋白表达水平的差异。结果实验组绒毛组织中TRAIL及其受体DR4、DR5蛋白表达较强,而诱骗受体DcR1及DcR2蛋白与正常对照相比表达较少,P值均小于0.05。结论TRAIL及其受体可能是造成自然流产的机制之一。     

GITR/GITRL信号系统在单核巨噬细胞免疫调节中的作用

糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)蛋白是TNFR超家族的新成员,它最初于1997年在杂交瘤细胞株上由Nocentini 等克隆出来[1],1999年又分别由两组科学家克隆得到与鼠GITR类似的人GITR以及其配体(GITR ligand,GITRL)[2].但到目前为止.人们对GITR信号在后天免疫系统的作用研究较多,但对于先天免疫的研究有限,而先天免疫是机体免疫重要组成部分,单核巨噬细胞在处理抗原,激活淋巴细胞,吞噬细菌等方面具有重要的功能[3].现对GITR/ GITRL信号在具有代表性的单核巨噬细胞中的作用予以综述.     

激素受体相关的微小RNA和乳腺癌

一、微小RNA(miRNA)在乳腺癌中的表达和调控 乳腺癌是一种激素依赖性肿瘤,雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)已作为预测内分泌治疗疗效的关键指标.近年来的一些研究显示,乳腺癌的发生、浸润、转移和耐药与一些miRNA关系密切,miRNA通过调节mRNA的翻译在转录后水平对基因的表达进行调控.研究还显示,雄激素受体(AR)的转录活化可调节miRNA的表达,与乳腺癌的进展和预后有着重要的潜在相关性[1].     

非小细胞肺癌EGFR基因第19外显子突变的特征分析

吉非替尼(gefitinib)是针对肺癌表皮生长因子受体(epiddermal growth factor receptor,EGFR)设计的肿瘤靶向药物,已使众多的非小细胞肺癌(NSCLC)患者获益,但其疗效与EGFR基因突变相关[1-3].通过EGFR基因第19外显子可筛选gefitinib药物的最适合患者进行个体化治疗,提高疗效,减少盲目用药.我们检测了62例NSCLC患者的EGFR基因第19外显子突变,并分析突变DNA特征及氨基酸变化规律.     

DcR3 对肝纤维化动物模型的影响

目的:研究DcR3 基因对肝纤维化大鼠的预防性治疗的作用。方法:SPF 级健康雄性Wistar 大鼠30 只,体重范围180 ~220 g,随机分为3 组,每组10 只,分别为正常对照组、DcR3 基因预防性治疗组(1% DMN+DcR3 组)、造模组(1%DMN 组)。采用1%DMN 诱导大鼠肝纤维化模型,腹腔注射DcR3 质粒进行预防性干预。分别采用HE 染色和Masson 染色观察肝组织病理情况;qRT-PCR 和Western blot 法检测DcR3、Fas、FasL、-SMA 和TGF-1 的mRNA 和蛋白表达水平。结果:与模型组相比,DcR3 预防治疗组大鼠肝组织炎性细胞浸润及胶原类物质沉积有所改善;DcR3 基因可显著降低肝纤维化大鼠Fas、FasL、 SMA 和TGF-1 mRNA 和蛋白表达水平,DcR3 基因预防性治疗组与对照组和造模组有显著性差异(P<0.05);同时DcR3 基因预防性治疗组DcR3 mRNA 和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:DcR3 基因可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能是DcR3 通过降低肝脏炎症反应,减少胶原类物质沉积,抑制 SMA 和TGF-1 表达,从而抑制HSC 活化;下调Fas和FasL 表达,抑制Fas/ FasL 途径诱导的肝细胞凋亡。     

选择性表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂--ZD1839对NK和LAK细胞毒作用的影响

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGF受体)在某些实体瘤表达增加，包括非小细胞肺癌(non．smallcelllungcancer，NSCLC)、乳腺癌、头颈部肿瘤和胃癌等，EGF受体表达与肿瘤的进展、治疗抵抗有关；它的信号转导通路的活化与肿瘤细胞增殖、血管生成、抑制肿瘤细胞凋亡和肿瘤转移有关，因此，EGF受体成为抗癌治疗的靶向分