小鼠11β-HSD1基因过表达的前成骨细胞系的建立

目的:探索小鼠11β-HSD1基因过表达的前成骨细胞系的建立方法?方法:构建过表达小鼠11β-HSD1基因的慢病毒载体,包装?收集?纯化慢病毒,感染小鼠MC3T3-E1前成骨细胞系,用BSD(一种核苷抗生素)筛选出感染成功的细胞,荧光定量PCR及Western blot检测11β-HSD1过表达情况,诱导成骨分化后用茜素红染色法染色矿化结节?结果:成功构建了小鼠11β-HSD1基因过表达慢病毒载体,高效感染MC3T3-E1细胞系?荧光定量PCR及Western blot结果显示,11β-HSD1过表达病毒组细胞11β-HSD1 mRNA水平是空载病毒对照组的17.4倍,蛋白表达量比空载病毒对照组增加?茜素红染色结果表明慢病毒感染的细胞成骨分化良好,细胞正常成骨分化功能未受影响,11β-HSD1过表达细胞成骨分化减少?结论:本研究成功建立了过表达小鼠11β-HSD1的前成骨细胞系,为研究11β-HSD1对成骨细胞的具体作用提供了研究基础?     

11β-羟基类固醇脱氢酶通过改变糖皮质激素活性参与机体多个病理环节

11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)是糖皮质激素的代谢酶,该酶分为11β-HSD1与11β-HSD2两种亚型。11β-HSD1使无活性的可的松转化为有活性的氢化可的松,参与了肥胖、高血脂、高血糖、高血压等代谢综合征的病理生理过程。另外,高水平的糖皮质激素暴露与神经系统功能紊乱及年龄相关性认知功能障碍有关。11β-HSD2通过使糖皮质激素失活起到保护盐皮质激素受体的作用。反之,11β-HSD2基因缺陷或突变会导致高盐皮质激素综合征,表现为水钠潴留、高血压、低血钾。通过对11β-HSD的功能及其作用机制的深入研究,为代谢综合征及其相关疾病提供了新的治疗方法。     

11β-羟类固醇脱氢酶1型在小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系NIT-1中的表达

目的 探讨 11β-羟类固醇脱氢酶 1 型(11β-HSD1)在 C57BL/6J 小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系 NIT-1 中的表达及其生物学意义.方法 以11β HSD1 肝脏组织中的表达为阳性参照,RT-PCR 法和 Western blot 法检测小鼠胰腺组织中 11βHSD1 mRNA 和蛋白表达.细胞免疫化学法检测 NIT-1 细胞中 11β-HSD1 的分布与表达,RT-PCR 法和Western blot 法检测 NIT-1 细胞中 11β-HSD1 mRNA 和蛋白表达.结果 ①在正常 C57BL/6J 小鼠胰腺组织中有 11β-HSD1 mRNA 和蛋白表达,其表达量均低于肝脏组织(均P<0.01).②细胞免疫化学染色示 NIT-1 细胞胞质见棕黄色染色阳性颗粒,同时 NIT-1 细胞中有11β-HSD1 mRNA 和蛋白表达.结论 小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系 NIT-1 中有11β-HSD1 基因表达,为研究糖皮质激素代谢对胰岛细胞功能的影响以及其它潜在的生理功能,提供了一条研究途径.     

11β-羟基类固醇脱氢酶1在炎症调控中的作用

11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)是调节糖皮质激素(GC)作用的关键酶。11β-HSD有两个同工酶:11β-HSD1和11β-HSD2,催化具有活性的皮质醇与无活性的可的松之间的相互转化。1βl-HSD1主要表达于GC的靶器官,如肝脏、肺、脂肪组织、卵巢、脑组织等,在体内主要作为还原酶起作用,催化可的松还原为皮质醇。11β-HSD1在下丘脑-垂体-肾上腺轴及代谢综合征、肥胖、胰岛素抵抗、炎症调控等众多领域中有重要作用。11β-HSD1的作用越来越受到重视,现阐述11β-HSD1在炎症调控中的意义。     

人股骨头不同区域骨微血管内皮细胞11β-羟基类固醇脱氢酶表达的差异

目的探讨人股骨头内不同区域骨微血管内皮细胞(BMECs)11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)基因表达水平及活化差异。方法选用于2017年1月至2018年6月在中日友好医院接受髋关节置换术切除的人新鲜股骨头组织标本,分别对人股骨头松质骨区与软骨下骨区的BMECs进行分离、纯化、鉴定和培养,用一系列低浓度梯度氢化可的松(0、0.03、0.06、0.10 mg/ml)分别对两个区域BMECs进行干预,观察股骨头不同区域的BMECs的细胞表型与功能状态,划痕实验检测细胞迁移能力,观察血管生成能力。应用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测比较不同部位BMECs内11β-HSD1、11β-HSD2 mRNA的表达,采用Western蛋白印迹法检测11β-HSD1、11β-HSD2蛋白表达情况。结果随着氢化可的松浓度升高,股骨头松质骨区和软骨下骨区BMECs 11β-HSD1 mRNA及蛋白相对表达量均明显增加,软骨下骨区BMECs 11β-HSD1 mRNA及蛋白相对表达量明显低于松质骨区(均P<0.05)。11β-HSD2 mRNA及蛋白相对表达量在股骨头松质骨区BMECs...     

不同浓度葡萄糖对血管内皮细胞11β-羟基类固醇脱氢酶基因表达的影响

目的:观察葡萄糖下对大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的影响,及11β-HSD1与TGF-β1,ET-1等细胞因子之间的关系;同时观察反义寡核苷酸对高糖条件下大动脉内皮细胞11β-HSD1,11β-HSD2表达的干预作用.方法:猪髂动脉内皮细胞分别培养于不同浓度葡萄糖(5.6,10.0,20.0,30.0 mmol/L)中,用RT-PCR法检测11β-HSD1,11β-HSD2,TGF-β1,ET-1 mRNA的表达,Western-blot方法检测11β-HSD1,11β-HSD2蛋白表达情况.结果:高糖状态干预48 h后,11β-HSD1,TGF-β1mRNA表达随葡萄糖浓度的增加而增加,呈现一定的相关性;11β-HSD1蛋白表达随葡萄糖浓度增加而增加.采用11β-HSD1与11β-HSD2反义寡核苷酸干预后11β-HSD1与11β-HSD2 mRNA和蛋白质表达完全被抑制,同时TGF-β1的表达降低.结论:葡萄糖刺激血管内皮细胞11β-HSD1 mRNA和蛋白质表达增加,且在高糖状态下,11β-HSD1 mRNA的表达与TGF-β1RNA表达有直线相关性,11β-HSD1可能与糖尿病及其血管并发症相关.     

11β-羟基类固醇脱氢酶与代谢综合征的相关性

代谢综合征（MetS）是多种代谢成分异常聚集的病理状态,是导致心血管疾病和糖尿病的危险因素。糖皮质激素失调是MetS的重要特征,11β-羟基类固醇脱氢酶（11β-HSD）在体内主要负责活性糖皮质激素向其无活性前体转换,调节局部糖皮质激素浓度。11β-HSD参与了包括胰岛素抵抗、肥胖、2型糖尿病及高血压在内的MetS的病理生理环节,11β-HSD抑制剂在MetS中的应用将为治疗MetS提供新的途径。     

11β-羟基类固醇脱氢酶1与2型糖尿病

糖皮质激素在糖、蛋白质、脂肪、水盐代谢及应激反应中发挥着重要作用.糖皮质激素过多或者缺乏都会给机体带来异常.糖皮质激素可以诱导胰岛素抵抗,而胰岛素抵抗是2型糖尿病发病的中心环节.局部组织器官中糖皮质激素的水平与11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)的活性及2种亚型的比例有关.其中1型11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD1)活性的变化与胰岛素抵抗(IR)、2型糖尿病等的发展有密切联系.本文就11β-HSD1与2型糖尿病的关系作一综述.     

11β-HSD1参与海马和下丘脑-垂体-肾上腺轴的神经内分泌调节

11β-羟类固醇脱氢酶1型(11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1, 11β-HSD1)是糖皮质激素(glucocorticoid, GC)代谢酶,调节局部组织中有活性的糖皮质激素水平.     

11β-HSD1和11β-HSD2在妊娠期糖尿病患者胎盘组织中的差异表达及临床意义

目的 研究妊娠糖尿病患者胎盘组织中11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD1)和11β-HSD2基因和蛋白表达的变化及意义.方法 选择妊娠期糖尿病(GDM)和糖耐量正常孕妇(NGT)各30例,化学发光法测定皮质醇、胰岛素的水平,免疫组织化学法检测11β-HSD1和11β-HSD2在胎盘的表达部位,分别运用荧光定量PCR(real time PCR)和Western blot法测试11β-HSD1和11β-HSD2基因和蛋白水平的差异表达.结果 与NGT组相比,GDM组空腹胰岛素、HOMA-IR、胰岛素分泌指数、母血皮质醇水平明显增高(P<0.05),而空腹血糖、胎儿脐血皮质醇则差异无统计学意义(P>0.05).1β-HSD1和11β-HSD2均在胎盘中有表达,表达部位及水平不同.real time-PCR和Western blot检测结果提示GDM组胎盘11β-HSD1 mRNA和蛋白的表达明显低于NGT组(P<0.05),11β-HSD2 mRNA明显高于NGT组(P<0.05),而蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 妊娠期糖尿病胎盘组织11β-HSD1和11β-HSD2差异表达调整免除母体不佳的妊娠环境将会给胎儿造成的长远伤害.     

医疗机构“管办分离”的经济法原理分析

目的:探讨高浓度葡萄糖刺激下糖皮质激素对大动脉内皮细胞11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)基因表达的影响.方法:将猪髂动脉内皮细胞培养于高糖(30 mmol/L)中,分别加入不同浓度糖皮质激素刺激,用RT-PCR法检测11β-HSDI,11β-HSD2mRNA表达情况,Western-blot方法检测11β-HSD1,11β-HSD2蛋白表达情况.结果:正常对照组中,仅有少量的11β-HSD1 mRNA及蛋白表达,高糖状态下,11β-HSD1 mRNA和蛋白表达升高,且随着可的松浓度的增加而增加(P<0.05);高糖状态下,11β-HSD2 mRNA和蛋白表达元明显变化.结论:糖皮质激素使高糖培养下的动脉内皮细胞11β-HSD1表达增加,可能与糖尿病血管病变的发生发展有关.     

11β-羟基类固醇脱氢酶2与炎性疾病的关系

11β-羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)是糖皮质激素代谢的关键酶,可以促进有活性的皮质醇转化为可的松,从而降低有活性的糖皮质激素浓度。机体处于患有溃疡性结肠炎、风湿性疾病、呼吸系统炎性疾病等病理状态时,在炎性因子的刺激下11β-HSD2发生变化。炎性刺激可以通过调节11β-HSD2的表达促进细胞内糖皮质激素的活化,提高局部糖皮质激素的浓度,有助于为未来的临床干预提供一个新靶点。     

11β-羟基类固醇脱氢酶在人肠癌细胞株中的表达及甘草次酸的作用

目的:在大肠癌肿瘤细胞中,11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)与肿瘤生物学行为密切关联,其抑制剂甘草次酸具有抗肿瘤增殖作用,具体机制尚不清楚.文中研究11β-HSD 2种同工酶在人肠癌细胞株中的表达情况,同时观察糖皮质激素及11β-HSD抑制剂甘草次酸对肠癌细胞增殖的影响. 方法:用RT-PCR、Western blot检测肠癌细胞株HCT-8中11β-HSD 2种同工酶mRNA及蛋白的表达.HCT-8分别培养于糖皮质激素及甘草次酸单用和联合用药环境中,用MTT法观察细胞增殖能力. 结果:11β-HSD1 mRNA及蛋白在HCT-8中未见表达,11β-HSD2 mRNA及蛋白在HCT-8中均表达.活性糖皮质激素氢化可的松及甘草次酸对肠癌细胞生长具有抑制作用且呈时间、剂量依赖性.100μmol/L氢化可的松应用后12h肠癌细胞生长抑制率(40.87±1.47)% ,加入11β-HSD2辅酶NAD 0.5mmol/L后细胞生长抑制率(5.79±0.20)%,差异有统计学意义(P<0.01).氢化可的松、NAD联合甘草次酸后肠癌细胞生长抑制率(45.55±1.01)% ,明显高于单药各组(P<0.05). 结论:11β-HSD2可能通过灭活糖皮质激素促进肠癌细胞增殖.甘草次酸可抑制11β-HSD2活性,提高氢化可的松的抗肠癌细胞增殖作用,并与自身抗细胞增殖有协同作用,可用于抗肿瘤治疗.     

小鼠11β- HSD1基因真核表达载体的构建及应用

构建小鼠11β-羟类固醇脱氢酶（11β- HSD1）基因的慢病毒真核表达载体PLJM1-11β-HSD1-GFP,建立小鼠前体脂肪细胞（3T3-L1）高表达11β-HSD 1 基因的稳定感染细胞株,为11β- HSD1基因的功能研究奠定基础。方法利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）从小鼠肝脏cDNA 中扩增11β-HSD1开放阅读框ORF,构建针对11β-HSD 1 基因的真核表达载体,转化感受态DH5α菌株,抽提质粒并进行测序鉴定。用测序成功的质粒和慢病毒包装质粒共同转染293T细胞,产生慢病毒并转染3T3-L1 细胞。根据绿色荧光效率挑取单克隆细胞团筛选出稳定细胞株,通过Western blot鉴定PLJM1-11β-HSD1-GFP转染成功。结果经酶切、PCR 及测序验证,PLJM1-11β-HSD1-GFP 真核表达载体构建成功,并包装慢病毒,绿色荧光效率90%以上,并利用其慢病毒悬液成功感染3T3-L1 细胞,筛选出的稳定感染细胞株的3T3-L1细胞成功高表达11β-HSD1 蛋白。结论成功构建了11β-HSD 1 基因的真核表达载体,并建立高表达11β-HSD 1 的稳定感染细胞株PLJM1-11β-HSD1-GFP-3T3-L1,为进一步研究11β-HSD 1 基因的功能,特别是在肥胖中的研究奠定了基础。     

11-β羟基类固醇脱氢酶在人类胎盘对糖皮质激素的屏障作用的研究进展

11-β羟基类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD)是胎盘分泌的糖皮质激素(glucoeorticoids,GC)代谢酶,对胎盘与胎膜的作用有重要影响,同时阻挡着母体GC过多的进入胎儿,避免造成胎儿体质下降、日后并发糖尿病的危害.11β-HSD有两种亚型,11β-HSD1是一种亲和力较低的氧化还原酶,并且主要表现还原酶活性,主要是活化无活性的17-羟-11-脱氢皮质酮(cortisone,E)为有活性的皮质酮(cortisol,F),因此具有GC再生和增效的作用;11β-HSD2是一种亲和力较高的依赖性脱氢酶,表现单一氧化酶作用,它主要是催化皮质醇将其由有活性状态转化为无活性状态,从而阻挡母体浓度高于胎儿水平5~10倍的GC进入胎盘中,形成保障胎儿正常生长发育的GC屏障.     

内毒素上调血管内皮细胞11β-HSD2基因的表达

目的探讨内毒素对血管内皮细胞内11β羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2) mRNA 的影响,以及p38 丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK) 在其中所起的作用.方法应用逆转录-聚合酶链反应,测定血管内皮细胞在不同剂量内毒素作用时11β-HSD2 mRNA 的量以及采用p38 MAPK特异性抑制剂SB20358(10 mmol/L) 抑制p38 MAPK后11β-HSD2 mRNA 的量.结果内毒素1.0、10、20、50、100 μg/L 与血管内皮细胞共培养24 h后11β-HSD2 mRNA/β-actin mRNA均不同程度高于正常培养水平,而SB203580 抑制p38 MAPK后可部分抑制内毒素引起的11β-HSD2 mRNA水平增高.结论内毒素可诱导11β-HSD2基因转录增强,激活p38 MAPK可能是一种重要机制.     

腺病毒过表达及 siRNA 干扰人肝癌 HepG2细胞对11β-羟基类固醇脱氢酶 I表达的影响

目的：观察腺病毒（Ad-11β-HSD1）过表达系统及特异性siRNA（siRNA-11β-HSD1）干扰人肝癌HepG2细胞对11β-羟基类固醇脱氢酶I（11β-HSD1）表达的影响。方法应用Ad-11β-HSD1以及siRNA-11β-HSD1转染人肝癌HepG2细胞,用实时荧光定量PCR及Western Blot 检测11β-HSD1表达。结果转染72 h后,对照组及腺病毒过表达组细胞中均可见明显 GFP荧光,且转染48 h后蛋白水平明显升高;siRNA干扰48 h后,mRNA及蛋白水平均明显降低。结论腺病毒转染可有效过表达11β-HSD1,而siRNA干扰可有效抑制11β-HSD1表达。     

甘草酸、甘草次酸假性醛固酮作用和药物相互作用研究进展

甘草酸及甘草次酸作为甘草生物活性成分,通过抑制11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD1)和11β-HSD2等活性产生假性醛固酮增多的副作用,该文对其产生原因及长期用药安全性,可能因竞争或诱导代谢酶使药物产生相互作用等方面进行总结。甘草酸作为临床治疗肝炎常用药,甘草次酸作为代谢产物,其副作用及其药物相互作用应得到重视,保证临床用药安全的同时,可开发为小分子靶向修饰剂。     

11β－羟化类固醇脱氢酶1促进3T3-L1前脂肪细胞分化

目的:应用3T3-L1细胞模型研究11β-羟化类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)与前脂肪细胞分化的关系,探讨11β-HSD1在前脂肪细胞分化及肥胖中的作用.方法:构建11β-HSD1-SiRNA表达质粒pGCsi1encerTMH1/TetO1-11β-HSD1并稳定转染3T3-L1细胞,采用油红染色观察脂滴堆积情况,采用Western blot方法检测11β-HSD1在正常3T3-L1细胞分化过程中的表达;并用Real-time PCR检测脂肪细胞分化相关标志基因的变化,阐明11β-HSD1对前脂肪细胞成脂分化的影响.结果:正常3T3-L1前脂肪细胞在上述三联诱导分化后脂滴堆积随着分化过程逐渐增加;在pGCsilencerTMH1/TetO1-11β-HSD1转染的3T3-L1诱导分化过程中可见脂滴堆积的减少.在3T3-L1前脂肪细胞分化模型中(days 0,2,4,6,8),11β-HSD1蛋白水平是上调的.3T3-L1前脂肪细胞分化模型中GR在分化模型早期(D4及D6)是上调的,但是在分化后期(D8)很快又下降.在正常3T3-L1前脂肪细胞分化早期LPL上调,随着分化后期FAS、PPARγ等明显上升,Pref-1作为脂肪细胞分化抑制因子,在分化早期升高,在分化后期明显下调.在pGCsilencerTM H1/TetO1-11β-HSD1转染后的3T3-L1细胞分化模型中上述有关标志基因发生变化.结论:11β-HSD1作为受体前调节剂促进前脂肪细胞分化,与肥胖和胰岛素抵抗相关.     

11β⁃羟化类固醇脱氢酶敲除对高脂饮食喂养小鼠认知功能的影响

目的：探究11β-羟化类固醇脱氢酶1（11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD1）基因敲除对小鼠整体代谢和认知功能的影响。方法：将C57BL/6J为遗传背景的野生对照组及11β-HSD1基因敲除组各15只小鼠高脂喂养20周,代谢笼评估能量代谢,行为学评估观察小鼠认知功能,电镜评估海马体的线粒体结构,免疫荧光及PCR确定其认知功能、线粒体功能相关基因及炎症基因的变化。结果：11β-HSD1基因敲除能够提高高脂喂养小鼠学习和记忆能力,改善握力,改善海马体的微结构、线粒体含量变多,认知相关基因、线粒体呼吸功能相关基因上调,炎症相关基因改变。结论：11β-HSD1敲除后高脂饮食喂养小鼠认知功能显著改善,握力显著提高,可能是治疗认知功能障碍的有效靶点。