脑梗死与血小板膜表面P-选择素及纤维蛋白原的生物表达

目的 探讨脑梗死急性期血小板活化在血栓形成中的作用.方法 采用流式细胞术检测脑梗死患者全血标本血小板膜表面P选择素(CD62P)与纤维蛋白受体(FIB-R)的生物表达.结果 与正常对照组比较,脑梗死组(43例)及腔隙性脑梗死组(47例)于发病1～3 d内CD62P与FIB-R的表达(阳性细胞百分率)均有显著增高(P＜0.05或P＜0.001).脑梗死组的FIB-R表达增加明显高于腔隙性梗死组(P＜0.001),至病程第7日FIB-R表达显著高于病程1～3 d,差异有显著性(P＜0.001).两组患者中发病前服用阿司匹林与否对检测结果无显著影响.结论 脑梗死与腔隙性梗死急性期均存在血小板活化;阿司匹林对血小板膜表面表达CD62P及FIB-R无影响.     

单采血小板存储时间及温度对血小板体外功能及炎性细胞因子的影响

目的分析不同温度以及不同存储时间单采血小板对体外功能及炎性因子的影响。方法选择2018年7月-2019年7月山东省血液中心自愿捐献血小板的献血员100人,采集制备100袋单采血小板,分别在储存1、3、5、7 d时检测聚集功能及活化功能P-选择素(CD62p)、低渗休克反应(HSR)指标水平,以及白细胞介素-8(IL-8)、γ干扰素(IFN-γ)、调节激活正常T细胞表达和分泌细胞因子(RANTES)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,统计并比较各项指标变化。结果与4℃储存条件比较,22℃下储存相同时间时(1、3、5、7 d)聚集强度、HSR水平明显降低(P0.05),CD62p阳性表达率明显升高(P0.05)。同一储存温度下,与第1天比较,第3、5、7天血小板计数、聚集强度、HSR水平明显降低(P0.05),且随时间的延长逐渐降低;CD62p阳性表达率明显升高(P0.05),且随时间的延长逐渐升高。与4℃储存条件比较,22℃下储存相同时间时IL-8、IFN-γ、RANTES、VEGF水平明显升高(P0.05)。同一储存温度下,与第1天比较,第3、5、7天IL-8、IFN-γ、RANTES、VEGF水平明显升高(P0.05),且随时间的延长逐渐升高。结论 4℃保存单采血小板代谢功能更慢,且能一定程度减少细胞因子释放速度,进一步降低输注风险。     

单采血小板血浆低密度脂蛋白在保存期间对血小板免疫活化的影响

目的：探讨单采血小板血浆低密度脂蛋白（low-density lipoprotein,LDL）升高是否对血小板免疫活化产生影响。方法：选取符合国家献血标准的单采血小板献血员血小板标本35例,于血小板保存箱（22℃±2℃）振摇保存,其中LDL正常组（LDL＜3.4 mmol/L）30例,LDL升高组（LDL≥3.4 mmol/L）5例,流式细胞术检测血小板表面活化指标CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平,比较不同LDL水平对单采血小板免疫活化的影响。结果：随着保存时间的延长,血小板CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平无显著改变（P＞0.05）,不同保存时间LDL升高组与LDL正常组比较,CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平的差异无统计学意义（P＞0.05）。保存第2、3、4、5天的血小板经室温不同静置时间,LDL升高组与LDL正常组比较,CD63、CD36、CD40以及CD62p表达水平的差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论：健康献血者单采血小板血浆LDL水平对血小板保存期间的免疫活化无显著影响,LDL水平较高的单采血小板不会激发血小板免疫活化,从而不影响临床输注效果。     

当归多糖对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞的影响

目的 研究当归多糖(Angelica polysaccharides,APS)对辐射损伤小鼠骨髓基质细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)的保护作用.方法 BALB/c小鼠按随机数字表法分为10组,每组24只,共计240只.正常组不作任何处理,其余9组经X射线照射后分别给予生理盐水(NS)、2 mg/kg APS和8 mg/kg APS,给药至第7、14、21天计数小鼠外周血白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)及骨髓单个核细胞(BMNC);观察BMSC生长达80％贴壁所需时间及形成的成纤维细胞集落(CFU-F)数量;流式细胞术检测BMSC细胞周期、凋亡率及表面黏附分子CD54、CD106的表达水平.结果 与正常组比较,NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数明显减少(P＜0.05);BMSC达80％贴壁所需时间明显延长,CFU-F数明显减少(P ＜0.05);G0/G1期细胞比例显著增加,S期细胞比例显著降低(P ＜0.05);BMSC细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);CD54、CD106表达明显降低(P＜0.05).2 mg/kg APS、8 mg/kg APS组与NS组相比,外周血各指标、BMNC数及CFU-F数明显增加(P＜0.05);BMSC达80％融合时间显著缩短(P＜0.05);G0/G1期比例明显降低,S期比例显著增加(P＜0.05);凋亡率显著降低(P＜0.05);CD54、CD106表达明显增高(P＜0.05).第21天8 mg/kg APS组各指标均恢复正常.结论 APS可能是通过提高BMSC贴壁及增殖能力,加速BMSC由G0/G1期向S期转换,降低BMSC凋亡率,上调CD54、CD106表达来促进辐射损伤后小鼠造血功能的恢复.     

流式细胞仪双色术检测机采血小板活化方法

目的 探讨一种流式细胞仪检测机采浓缩血小板悬液活化状态的方法。方法 用CD41—FTTC、CD62—PE双色标记，避光反应15min后加入1ml 1％多聚甲醛固定，上机分析。结果 采用此方法测定22℃保存下不同时间的血小板CD62P表达，表明随着时间的延长CD62P阳性率增加，保存达到3d及以上，CD62P阳性率增加非常显著。标本以多聚甲醛固定在24h对CD62P测试结果无明显影响，样品不固定处理，不同时间测定对结果影响非常大。结论 双色标记流式细胞术检测机采血小板活化敏感、特异，重复性好，操作简便，能较好地反映储存中血小板的CD62P的变化。可方便应用于血小板的保存及输注的质量监控。     

流式细胞术检测冠心病患者血小板表面糖蛋白的变化

目的 观察冠心病患者及其亚组的血小板膜P选择素(CD62P)和糖蛋白Ⅱb/Ⅲa(PAC-1)的变化及其意义.方法 采用流式细胞仪三色荧光标记技术来测定急性冠脉综合征、慢性心肌缺血综合征患者及22名健康对照组的血小板表面糖蛋白(CD62p/PAC-1)的表达率,并比较其变化.结果 病例组的血小板表面糖蛋白表达率显著高于对照组,其中急性冠脉综合征患者的PAC-1:(15.54±6.43)%,CD62p:(9.83±6.06)%,与对照组相比(P＜0.001),慢性心肌缺血综合征PAC-1:(5.38±2.62)%,CD62p:(11.00±6.37%),较对照组也有显著升高(P＜0.001).急性冠脉综合征组的PAC-1水平显著高于慢性心肌缺血综合征CIS组P＜0.001.结论 冠心病患者处于血小板高度活化状态,其中急性冠脉综合征患者血小板处于活化的早期阶段,而慢性心肌缺血综合征患者血小板处于慢性激活状态,CD62P和PAC-1是血小板功能检测非常敏感的指标.     

脂多糖诱导血小板活化的方法

目的 建立LPS刺激血小板活化的方法,为研究血小板TLR4受体的生物学活性提供实验基础.方法 使用1～100 ng/ml不同浓度的LPS,在35℃,5%CO2,湿度96%条件下对机采血小板进行刺激,并于不同时间采用流式法检测血小板活化分子CD154及CD62P的表达.结果 实验组血小板活化分子表达率明显高于对照组.30 ng/ml的LPS刺激血小板10 h,血小板活化分子表达率最高,对照组为(6.61±0.41)%,实验组为(12.72±0.74)%.结论 使用30 ng/ml的LPS刺激血小板,在35℃,5%CO2,湿度96%条件下刺激10 h,可使机采血小板高效表达活化分子.     

混合手工与机采血小板聚集反应和体外激活程度的研究

目的 比较混合手工浓缩血小板与机采血小板聚集反应性和体外激活程度的差别.方法 分别用血小板聚集仪和流式细胞仪测定混合手工血小板组与机采血小板组血小板对血小板聚集反应诱导剂ADP的最大聚集率与膜表面糖蛋白分子CD62p和PAC-1的表达率.结果 两组血小板对ADP的最大聚集率分别为(84.1 9.0)%和(87.9±11.1)%,P＞0.05;两组血小板膜表面糖蛋白分子CD62p和PAC-1的表达率分别为CD62p(13.4±4.6)%,(11.6±2.9)%,P＞0.05及PAC-1(9.3±3.7)%,(8.1±2.9)%,P＞0.05.结论 混合手工浓缩血小板与机采血小板的聚集反应性和激活程度无显著性差异.     

血小板活化标志物CD62P、CD63在糖尿病患者早期肾脏微血管病变中的表达

目的 观察糖尿病肾病患者血小板活化标志物CD62P、CD63表达情况,探讨其在糖尿病早期肾脏微血管病变中的作用.方法 选择单纯糖尿病48例,早期糖尿病肾病50例,正常对照组49例.应用流式细胞仪检测各组CD62P、CD63的阳性表达率.结果 早期糖尿病组CD62P、CD63阳性表达率高于单纯糖尿病组和正常对照组;单纯糖尿病组CD62P、CD63阳性表达率高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).早期糖尿病肾病组与单纯糖尿病组β2微球蛋白高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 血小板活化标志物CD62P、CD63在糖尿病早期肾损害中有着重要的临床意义.     

维持性血透患者血浆活化血小板CD62P表达率的变化

目的探讨血透患者血浆活化血小板CD62P表达率的变化及意义.方法用流式细胞仪检测50例健康人和42例血透患者CD62P表达率.结果透析后CD62P表达率明显高于透析前和对照组(P＜0.01).结论血透过程中血小板活化可能是导致微血栓形成、内瘘闭塞的部分原因.     

单采血小板的储存时间与CD62P的相关性研究

目的探讨单采血小板的储存时间与血小板膜蛋白CD62P表达之间的相关性。方法招募自愿献血的健康献血者30名,按照血站标准采集30袋单采血小板,每袋200mL,血小板计数>2.5×1011/袋,置于22℃血小板保存箱保存7d,分别在保存的第1d、第3d、第5d、第7d通过流式细胞仪检测血小板膜蛋白CD62P。结果随着保存时间的延长,CD62P表达明显增强(P<0.05),两者呈现正相关关系。结论随着保存时间的延长,血小板体外活化程度增高。     

糖尿病患者血小板膜糖蛋白CD62p、CD63表达及其临床意义

目的观察2型糖尿病患者血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的变化及其临床意义.方法全血和单克隆抗体直接免疫荧光标记,应用流式细胞仪(FCM)观察44例2型糖尿病患者及10例正常人血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的阳性表达率,用血小板聚集仪测定血小板最大聚集率(PAgR).结果FCM测得的血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的表达阳性率,糖尿病组明显高于对照组(P＜0.01),糖尿病伴血管病变组明显高于对照组(P＜0.01),有血管病变组明显高于无血管病变组(P＜0.01);PAgR,糖尿病组高于对照组(P＜0.05);糖尿病组PAgR与CD62p和CD63阳性表达率呈显著正相关r1=0.382,r2=0.329,P均＜0.05.结论血小板膜糖蛋白CD62p、CD63的阳性表达及PAgR的测定对判断糖尿病患者血小板活化与提示在血管病变有重要的参考价值.     

γ射线辐照和保存期对血小板的影响

目的了解γ射线辐照和保存期对单采血小板的影响。方法单采血小板分为两组:一组25Gy剂量辐照,一组不辐照处理,作为对照组;在贮存的第0、5天分别检测单采血小板计数、pH和表达CD62P的特异性荧光结合阳性血小板百分率(%)。结果保存过程中,辐照组血小板计数及pH值与对照组无显著差异(P>0.05);5天的贮存可显著增加了血小板表达CD62P百分率(P<0.05),但辐照组与对照组的血小板在贮存第5天时表达CD62P百分率无显著差异(P>0.05)。结论25Gy的辐照对血小板制品的质量无明显影响,与普通血小板制品相同,辐照单采血小板可保存5天。     

脑梗死患者血小板活化状态及功能的研究

目的:探讨脑梗死患者的血小板活化及血小板功能的变化与意义.方法:用流式细胞仪测定56例脑梗死患者及20例正常对照组外周血血小板活化指标P选择素(CD62P)和溶酶体蛋白(CD63)的表达,同时用玻球法测定血小板黏附率(PAdT);用多智能血液凝集仪检测血小板聚集率(PagT).结果:脑梗死患者急性期CD62P、CD63、PAdT及PagT较对照组以及恢复期患者显著升高(P＜0.01);2周后血小板活化指标CD62P和CD63明显下降,但较对照组高;PAdT和PagT均降至正常水平.结论:脑梗死患者的血小板大量激活及血小板黏附率和血小板聚集率的升高参与了脑梗死的病理过程,血小板膜糖蛋白CD62P和CD63比PadT和PagT更准确地反映脑梗死的病情程度.     

老年肾脏病患者血小板膜糖蛋白的改变及其临床意义

目的：探讨血小板在老年肾脏病患者的活化状态及其临床意义。方法：利用流式细胞仪检测了180例老年肾脏病患者及30例健康自愿者外周血小板的膜糖蛋白CD62P、CD63、CD41和CD61的表达。结果：高血压肾病组、糖尿病肾病组、肾病综合征组和高尿酸血症肾病组CD62P、CD63的表达均较对照组显著增高（P＜0.05)，而尿毒症组CD62P和CD63的表达均较对照组显著降低（P＜0.05)，各组CD41和CD61的表达与对照组比较无显著差异（P＞0.05)。结论：高血压肾病、糖尿病肾病、肾病综合征和高尿酸血症肾病患者的血小板活化均增强，而尿毒症期血小板活化功能低下。     

川崎病血小板活化标志物CD62p和CD63的变化及其临床意义

目的 探讨川崎病(KD)血小板活化标志物CD62p和CD63的变化及其临床意义. 方法 应用流式细胞技术检测32例KD患儿和15例正常对照儿的血小板活化标志物CD62P、CD63阳性表达率,同时检测BPC值. 结果 KD患儿全血CD62P、CD63阳性表达率及BPC值较正常对照儿明显增高;合并冠状动脉异常者CD62P、CD63阳性表达率增高更加显著,其中以CD62P阳性表达率增高最具有统计学意义;CD62P和CD63的阳性表达率经大剂量丙种球蛋白[400 mg/(kg·d)×5 d]和阿斯匹林治疗后能明显减低,但仍高于正常对照儿. 结论 血小板活化过程参与了川崎病免疫性血管炎的病理损害过程.大剂量丙球和阿斯匹林治疗能抑制KD患儿血小板膜糖蛋白的高表达,降低血小板的活化程度.因此在川崎病病程中动态检测血小板活化标志物CD62p、CD63阳性表达率和BPC值,对KD的诊断及疗效判定具有重要的临床意义,尤其是检测CD62p阳性表达率,对预测心脏和冠脉异常是否发生更具有价值.     

多种耐药相关蛋白在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨低浓度DMSO(2%)和第二信使调节剂混合物(thrombosol)低温保存血小板的效果.方法:应用6%DMSO(对照组)、2%DMSO thrombosol(实验组)为新鲜浓缩血小板的冰冻保护剂-80℃保存,1周后复温检测血小板计数、肾上腺素或凝血酶诱导的聚集反应、血小板表面CD41、CD42b、CD62p和CD35分子改变.结果:复温后,实验组血小板计数和凝血酶诱导的聚集反应明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),但仍然低于新鲜血小板(P＜0.01).冰冻血小板CD62p表达较新鲜血小板显著升高(P＜0.05,P＜0.01),但实验组显著低于对照组(P＜0.05).与新鲜血小板相比,冰冻血小板肾上腺素诱导的聚集反应和CD42b表达均下降(P＜0.05,P＜0.01),但实验组与对照组间比较无明显差异.结论:与常规6%DMSO低温保存血小板相比,2%DMSO加第二信使调节剂混合物低温保存血小板的效果有明显改善.     

不同抗血小板治疗对急性脑梗死患者血小板活化聚集状态的比较

目的:探讨不同抗血小板治疗对脑梗死急性期患者血小板活化及聚集状态的影响?方法:97例脑梗死患者随机入组不同的抗血小板治疗组(阿司匹林治疗组?氯吡格雷治疗组?阿司匹林联合氯吡格雷治疗组),在入院第1天(治疗前)和第10天采用流式细胞仪检测血小板CD62P?比浊法检测花生四烯酸(arachidonic acid,AA)诱导的血小板最大聚集率(MARAA)和二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导的血小板最大聚集率(MARADP)?结果:3组患者入院第1天CD62P?MARAA?MARADP无显著差异,治疗10 d后3组的CD62P?MARAA?MARADP值均下降,与入院第1天的CD62P?MARAA?MARADP值比较,差异有统计学意义?3组脑梗死患者血小板MARADP下降程度组间比较有差异,氯吡咯雷治组MARADP下降明显,阿司匹林联合氯吡格雷治疗组下降更明显?血小板MARAA?血小板CD62P下降程度组间比较无显著差异?结论:阿司匹林?氯吡格雷?阿司匹林联合氯吡格雷3种抗血小板治疗方法均能有效减少脑梗死急性期的血小板活化,降低血小板最大聚集率,提示临床治疗均有效;氯吡格雷和阿司匹林联合治疗更能抑制血小板的聚集,抗血小板疗效更好?     

急性等容血液稀释对高龄全髋关节置换术患者围术期血小板活化功能的影响

目的 观察急性等容血液稀释(acute isovolemic hemodilution,ANH)对高龄全髋关节置换术患者围术期血小板活化功能的影响及临床意义.方法 择期在全身麻醉下行全髋关节置换术患者40例,美国麻醉学会(ASA)Ⅰ或Ⅱ级,随机分为ANH组和对照组(n=20).采用流式细胞仪检测患者在麻醉诱导前、ANH后30min、术毕、术后1天和术后3天PAC-1和CD62P的表达.结果 两组患者除麻醉诱导前,其他各时间点纤维蛋白原受体(platelet activation complement-1,PAC-1)、P-选择素(P-selectin,又命名CD62P)和PLT水平差异均有统计学意义(P＜0.05).ANH组血液稀释后30min、PAC-1、CD62P和PLT水平都降低;术毕PAC-1和CD62P进一步活化,与麻醉诱导前比较差异有统计学意义(P＜0.05);术后1天PAC-1和CD62P逐步下降,术后3天恢复到术前水平.而PLT术后各时间点,逐步回升,与麻醉诱导前比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 术前行ANH能抑制高龄全髋关节置换术患者围术期血小板的过度活化,对预防老年患者围术期血栓形成有一定的作用.     

低温体外保存对血小板活化和凋亡的影响

目的 观察保存温度对血小板活化和凋亡的影响,评估低温体外保存血小板的效果.方法 取20份单采血小板,一分为三,一份于(22±2)℃振荡保存(对照组),另两份悬浮于血小板添加液(65％)与自体血浆(35％)的混合液中分别静置于10℃储血冰箱(实验Ⅰ组)和(22±2)℃振荡仪(实验Ⅱ组),于1、3、4、5、7d检测血小板计数(platelet count,PLT)、血小板P选择素(cluster of differentiation 62 platelet,CD62p)表达率、血小板线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potentia,△Ψm).结果 随着时间延长,3组PLT比较平稳,在组间、时点间以及组间·时点间交互作用差异均无统计学意义(P＞0.05);随着时间延长CD62p逐渐升高,而△Ψm％逐渐下降,3组CD62p、△Ψm在组间、时点间以及组间·时点间交互作用差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 血小板添加液混合血浆10℃低温保存比(22±2)℃保存血小板的活化和凋亡程度均较低.