骨髓间质干细胞治疗心肌梗死的研究

心血管系统疾病是影响人类健康的主要疾病之一,虽然心血管疾病的药物治疗已经取得了许多重大突破,但是心肌梗死的并发症,例如慢性充血性心力衰竭仍然是一个严重的世界性问题。骨髓干细胞移植为修复梗死的心肌,阻止梗死后充血性心力衰竭提供了一个好的前景。因为,越来越多的证据表明骨髓间质干细胞(MSCs)可以在人类和动物体内产生新的心肌细胞。在这篇综述中将探讨MSCs移植治疗心肌梗死这一重要问题。     

胚胎骨髓间质干细胞抑制淋巴细胞增殖反应的初步研究

目的：研究骨髓问质于细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的免疫调节作用。方法：从胚胎股骨中分离培养间质干细胞,经克隆化分选出形态均一的细胞,用流式细胞术检测其表面标志以鉴定其纯度。将分离培养的骨髓间质干细胞接种于96孔板,待其长满孔面积的80%～90％时用直线加速器以30GY剂量照射,然后与分离的外周血淋巴细胞共培养3d,以单独培养的淋巴细胞为对照,加入ConA刺激68h,MTT加入后继续温育4h,用酶标仪检测以观察MSCs对外周血淋巴细胞增殖反应的影响。结果：MSCs对外周血淋巴细胞的转化有明显抑制作用(抑制率为28％)。结论：MSCs具有抑制体外淋巴细胞增殖的作用。     

间质干细胞和肿瘤

间质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）存在于多种组织,主要包括骨髓、脂肪组织、骨骼肌、肝脏、脐血及外周血等,骨髓是最常用的MSCs体外分离培养的组织来源,脐血及外周血仅含有少量的MSCs。MSCs在体外扩增能力强,具有广泛的多向分化潜能,在临床再生医学、组织工程及基因治疗中具有潜在的应用前景,已成为目前成体干细胞研究的一个热点.然而,最新研究表明MSCs与肿瘤有某些相关性,一定条件下,MSCs可突变为肿瘤细胞且在体内促进肿瘤细胞生长,MSCs的长期临床应用可能存在致瘤的安全性问题。本文就MSCs对肿瘤细胞的作用及关系作一文献综述。     

骨髓间质干细胞移植治疗缺血性卒中

骨髓基质细胞内有一类具有多向分化潜能的千细胞称作间质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSC），MSC在体内或体外（在诱导剂的诱导下）可转化为神经元和星形胶质细胞等。MSC治疗卒中目前还处于动物实验阶段，其可能的机制为：（1）MSC在新环境下表达神经细胞表型替代损伤细胞，（2）可分泌促进神经功能恢复的各种因子；（3）有新生血管生成。     

条件培养液改进小鼠胚胎干细胞嵌合体制备效率的观察

目的:探讨如何通过改善小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES)的培养条件来维持其未分化状态,提高嵌合体的制备效率.方法:以普通ES细胞培养液为对照,以TX-WES培养液为ES细胞条件培养液分别对15代以上的未工程化ES细胞和糖皮质激素受体(GR)工程化ES细胞进行培养并筛选,通过囊胚注射制作嵌合体来比较2种不同培养液培养ES细胞后嵌合体制备效率的差别.结果:未工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为25.0%,以TX WES培养液培养其嵌合率提高到53.8%(P＜ 0.05);GR工程化ES细胞以普通培养液培养其嵌合率为15.0%,以TX-WES培养液培养其嵌合率提高到52.3%(P＜0.05).结论:应用TX-WES培养液改善小鼠ES细胞的培养条件可提高嵌合体的制备效率,该方法为基因剔除小鼠研究的顺利开展奠定了良好的基础.     

大鼠骨髓间质干细胞的体外分离培养及初步鉴定

目的探讨并建立一种简便有效的体外分离纯化及扩增大鼠骨髓间质干细胞的方法,并研究其生物学特性,对其进行初步鉴定,为进一步诱导分化为胃黏膜上皮细胞奠定基础。方法利用贴壁培养法分离纯化SD大鼠骨髓间质干细胞,体外培养,传代扩增,在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化,并用免疫组化方法鉴定骨髓间质干细胞表面CD29,CD44,CD34的表达。将加入成骨、成脂肪诱导剂的骨髓间质干细胞体外培养2～3周,观察细胞形态变化,并做油红0染色,鉴定成骨及成脂肪分化的结果。结果原代培养8—10d后可分离得到骨髓间质干细胞,且骨髓间质干细胞体外培养生长状况良好,呈均一的成纤维细胞样,传代周期为3～4d。免疫组化显示90％以上的骨髓间质干细胞CD29、CD44阳性,CD34阴性,且可以将其定向诱导为脂肪细胞和成骨细胞。结论利用贴壁培养法可分离培养出大量大鼠骨髓间质干细胞,且此方法简便易行。     

骨髓和脐血间质干细胞联合移植治疗杜氏型进行性肌营养不良症269例疗效研究

目的 观察骨髓间质干细胞(BMSCs)和脐血间质干细胞(CMSCs)联合移植治疗杜氏型进行性肌营养不良症(DMD)的临床疗效.方法 2007年6月-2009年3月对269例DMD患者行自体BMSCs和CMSCs联合移植方案进行治疗,患者均使用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF),5～10 μg/kg,2次/d,皮下注射动员骨髓干细胞4 d,于第5天行骨髓采集术,局部麻醉下从髂后上棘抽取骨髓100～180 ml.将采集的骨髓液经Ficoll密度梯度离心后,分离单个核细胞2.0×109,用Uitra cul Ture 培养液调节细胞数量为1×105/ml～1×106/ml,接种于75 mm2培养瓶中,24 h换液,7～10 d后收集全部细胞,总数为4.0×108/ml～1.5×109/ml.将BMSCs移植到患者四肢近端肌肉内.采集脐血80～160 ml,Ficoll密度梯度离心,分离单个核细胞并诱导分化为CMSCs.将CMSC(1.0～4.8)×107细胞悬液,经静脉缓慢输注,每5～7 d 1次,共3次.移植后6个月对患者的肌力、步行10 m和推轮椅10 m所需时间、肌酸激酶水平、肌电图等进行观察.结果 269例患者移植后6个月时随访,218例患者(81.0%)肌力有不同程度的增加.干细胞移植后235例患者复查心肌酶谱,其中188例(80%)患者步行10 m及推轮椅10 m所需时间明显缩短,与移植前比较差异有统计学意义(P<0.05),干细胞移植后患者肌酸激酶水平较移植前明显下降(P<0.01).51例患者复查肌电图,32例(62.7%)患者波幅不同程度增高,运动单位增多,多相波减少.47例患者复查大腿肌肉磁共振成像,肌肉影像较移植前变化不明显.结论 BMSCs和CMSCs移植治疗DMD,对肌肉组织有一定的修复作用,使DMD患者的运动功能得到改善,肌力有所提高,肌酸激酶较移植前下降.移植后复查肌电图波幅不同程度增高,运动单位增多,多相波减少.MSCs移植无不良反应,患者依从性好,是治疗DMD的新手段.     

大鼠骨髓间质干细胞多向分化研究

目的:分离和培养大鼠骨髓间质干细胞(BMSCs),并进行多向分化研究。方法:体外分离培养大鼠骨髓单个核细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD44、CD90、CD45)的表达。传至第3代后,分别进行成脂肪细胞、成骨细胞、成软骨细胞及成肝细胞的诱导。结果:通过流式细胞仪器检测表明培养的细胞为大鼠BMSCs。BMSCs经诱导后分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞及肝细胞。结论:大鼠BMSCs具有多向分化潜能,可作为组织工程的种子细胞。     

骨髓间质干细胞移植治疗膝骨性关节炎的对比研究

目的对比非甾体类药物（NSAIDs）、透明质酸钠（HA）、骨髓间质干细胞（BMSCs）三种方法治疗膝骨关节炎各个时期的疗效。方法对60例关节镜下确诊为膝骨关节炎的病人随机分3组,分别用：（1）术后用NSAIDs治疗2—4周;（2）术后注射HA1～2疗程;（3）术后取髂脊骨髓进行分离培养出BMSCs再进行回植到膝关节中等3种方法治疗。分别在术后3个月、1年、3年的时间进行随访、并用WOMAC指数评分法对膝关节功能进行评价,两两对比组间的治疗效果。结果3个月随访显示3组在治疗结果方面差异无统计学意义（P〉0．05）;1年随访显示HA组和BMSCs组与NSAIDs组相比治疗结果差异有统计学显著意义（P〈0．05）;3年随访显示3组间治疗效果都有统计学显著差异。结论3种方法对骨关节炎的早期疗效都较好,但BMSCs的长期效果要优于其他2种方法。     

骨髓间质干细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究

目的通过两种不同移植途径研究骨髓间质干细胞治疗急性心肌梗死可行性及疗效对比。方法骨髓间质干细胞培养传至5代后,制备成浓度4×106/ml悬液备用。39只SD大鼠均结扎冠状动脉左前降支,制备成急性心肌梗死模型,随机分为3组每组各13只。Ⅰ为对照组:从尾静脉注射生理盐水。Ⅱ为直接经心外膜移植组:模型制备成功后1~3 h梗死周边区分六点注射骨髓间质干细胞,每点50μl。Ⅲ为通过静脉移植组:模型制备成功后24h,从尾静脉注射骨髓间质干细胞0.5 ml(含2×106个)连续7 d,Ⅰ和Ⅱ组注射等量生理盐水7 d作为对照。5周后,观察3组的大鼠死亡率以及心脏的结构和功能。结果Ⅰ组有3只大鼠死亡,其他组无死亡。与Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组的左心室结构与功能明显改善(P<0.05),Ⅱ组和Ⅲ组相比无明显差别(P>0.05)。结论骨髓间质干细胞移植治疗急性心肌梗死有效;静脉注射与直接经心外膜心肌注射两种途径无明显差别,静脉注射移植相对简单易行。     

骨髓间质干细胞的临床应用

1986年由Friedenstein等首先提出骨髓间质干细胞(mesenchymal sterm cells,MSCs)的概念。MSC是一类存在于骨髓网状间质内的非造血干细胞,具有分化成各种间叶组织细胞的潜能。近年来研究表明,MSCs体外分离培养后,在一定的诱导条件下,具有向成骨细胞、软骨细胞、神经细胞、脂肪细胞、心肌细胞等多向分化的能力。因此,     

慢病毒转染人骨髓间质干细胞研究

目的:分离培养人骨髓来源间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)并进行慢病毒载体介导的基因转染研究。方法:采取全骨髓贴壁培养法分离培养人骨髓MSCs。利用脂质体法进行慢病毒感染人骨髓MSCs。结果:分离培养出人骨髓来源的MSCs,并用携带绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的慢病毒成功感染人骨髓MSCs。结论:获得人骨髓MSCs并进行慢病毒载体介导的基因修饰,为间质干细胞基因工程和组织工程研究奠定了基础。     

扩张型心肌病与骨髓间质干细胞

心血管疾病是全球发病率和死亡率居先的疾病之一.各种原因所致的心肌细胞丢失、瘢痕形成及心室重构是造成心肌功能恶化的主要因素,也是最终导致慢性心力衰竭的病理基础.     

间质干细胞在肾脏疾病治疗中的应用

间质干细胞(MSCs)特有的生物学特性,使其成为再生医学中干细胞治疗的理想细胞之一。MSCs移植可通过分化及旁分泌作用有效促进肾损伤的修复,改善肾脏组织的结构和功能,疗效较显著。但是,MSCs治疗肾损伤的机制仍不明确,尚待进一步研究,影响治疗的因素以及移植安全问题也需重视,在综合考虑各方面条件后,MSCs有望成为临床肾脏疾病的一种新的治疗手段,发挥重要价值。     

人骨髓间质干细胞向成骨细胞诱导分化条件的建立

目的:探讨体外诱导培养人骨髓间质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的方法和技术,为骨组织工程研究提供理想的种子细胞.方法:抽取无系统疾病自愿捐献骨髓患者的骨髓,体外分离诱导培养BMSCs,按照诱导条件加入时间的先后次序分为早期诱导组(A组)和延迟诱导组(B组),镜下观察2组细胞形态学变化,计算倍增时间,并测定2组骨钙素的含量和Ⅰ型胶原的表达,研究该细胞生物学特性及其体外成骨能力.结果:(1)镜下观察:A组细胞贴壁,呈菱形,5～7 d融合,成纤维细胞集落样生长;B组细胞贴壁,呈梭形,3～5 d融合,呈指纹状生长方式.(2)倍增时间:A组第1、2、3、4代倍增时间分别为18.86、17.45、18.71、20.99 h;B组第1、2、3代倍增时间分别为17.54、19.59、25.46 h,第4代停止生长,2组各代倍增时间差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)骨钙素:A组各代均可检测到骨钙素,Ⅰ型胶原自原代就有阳性表达,第3、4代细胞达到最强;B组原代、第1代细胞中未检测到骨钙素,诱导后才分泌骨钙素,Ⅰ型胶原各代均有阳性表达,但不均匀,第4代细胞停止增殖,无阳性表达.结论:应用成骨细胞条件培养液在体外能够促进人BMSCs向成骨细胞分化,验证了BMSCs是一种比较理想的骨组织工程种子细胞.早期诱导是较为完善的体外诱导培养条件和方法.     

缺血性脑损伤的骨髓间质干细胞移植治疗研究

目的:研究骨髓间质干细胞(MSCs)移植对大鼠缺血性脑损伤的治疗作用及机制。方法:采用线拴法制作成年雄性Sprague-Dawleye大鼠脑缺血再灌注模型40例,随机分成磷酸盐缓冲液(PBS)对照组和MSCs移植治疗组。在1w后分别经颈外动脉将标记5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)的2×106MSCs悬液和等体积PBS液植入脑缺血大鼠体内。术后每天采用神经功能缺损评分检测大鼠神经系统功能,大鼠脑缺血再灌注后1w、2w、3w、4w分别取受损伤脑组织,HE染色,并在不同时间点行体感诱发电位与组织病理学检测。结果:MSCs移植治疗组在移植后各时间点神经功能缺损评分(1W:9.77±2.54;2W:7.31±1.88;3W:6.97±2.46;4W:4.89±1.14)均明显低于PBS对照组(1W:15.78±2.65;2W:14.42±3.23;3W:11.42±3.30;4W:9.82±2.19)(P<0.05);与PBS对照组相比,大鼠脑组织病理学检查显示,MSCs治疗组神经细胞变性坏死的数量减少,水肿明显减轻,体感诱发电位在各时间点恢复显著(P<0.05);MSCs治疗组各时间点在梗塞半球有大量Brdu阳性细胞,对侧半球仅可见少量Brdu阳性细胞,主要存在于大脑皮质、皮质下和海马等处,在血管内皮细胞处也可见到Brdu阳性细胞;MSCs治疗组脑源性神经营养因子(BDNF)的表达水平在2W、3W、4W明显高于PBS对照组(P<0.05)。结论:经颈动脉移植MSCs可在大鼠脑内存活、迁移,分泌BDNF等神经保护性因子,减轻缺血性脑损伤,促进神经功能的恢复,对治疗缺血性脑损伤有一定效果。     

骨髓间质干细胞与心脏病的治疗

心血管疾病导致的心功能障碍广泛分布并为成人发病率和死亡率增加的重要因素。一般认为，机体缺少心肌修复和再生的有效的内在机制，心肌细胞无增殖分化能力，受损后不能再生，只能由成纤维细胞填充，最终为瘢痕组织替代，并逐步发生心室重构形成慢性心力衰竭。传统的药物、介入治疗等虽然保护了心功能，患者生活质量亦提高，但并不能从根本上逆转心血管疾病引起的心肌细胞数量减少；     

大鼠骨髓间质干细胞的分离培养及生物学特性研究

目的建立大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)最佳的体外分离培养方法,并研究其基本的生物学特性。方法采用密度梯度离心和贴壁培养两种方法分离大鼠的MSCs,进行形态学观察及增殖生长方面的测定;免疫细胞化学染色鉴定表面标志。结果大鼠MSCs体外培养呈梭形;细胞生长曲线为“S”型;密度梯度离心法原代培养15d达到80%～90%的融合,而改良的直接贴壁法只需要5d;细胞周期显示G0/G1期88.29%;免疫细胞化学染色显示CD44表达阳性,CD34、CD45为阴性。结论两种方法均可获得骨髓间质干细胞,但贴壁培养法操作更简便、快速,具有对细胞活性影响较小,更利于其贴壁和增殖的优点。MSCs体外培养条件下生长性状稳定,适于做组织工程的种子细胞。     

经静脉移植骨髓间质干细胞治疗脑梗死

目的 观察经静脉移植骨髓间质干细胞(MSC)治疗脑梗死时神经功能缺损的恢复情况,以及MSC在脑梗死灶的分布、迁移与分化情况.方法 经尾静脉将标记的大鼠骨髓间质干细胞(rMSC)或磷酸缓冲液(PBS)植入脑梗死鼠体内,于不同时程对动物神经功能状况进行评分.应用荧光标记及免疫组织化学方法检测移植细胞在脑内存活、迁移及分化情况,细胞化学染色观察rMSC体外分化情况.结果 与PBS组相比,rMSC组大鼠神经功能改善明显(P＜0.001),在显微镜下可见脑移植细胞在梗死区及其周边区聚集并存活,有部分植入细胞分化表达神经细胞表面标志物,而在体外同时程培养的rMSC未见类似分化表达.结论 rMSC经静脉移植后能够在宿主脑内存活、迁移并分化表达神经细胞表型,有促进脑梗死后神经功能恢复的作用.经静脉路移植可以避免脑组织损伤,同时植入的rMSC能更均匀分布并聚集在脑梗死灶.     

人卵黄囊间质干细胞多向分化潜能的实验研究

[目的]分离纯化及体外观察人卵黄囊间质干细胞(hYS-MSC)的多向分化潜能.[方法]卵黄囊单细胞悬液经贴壁培养、传代纯化得到hYS-MSC,并从细胞表型及生物学特性等方面对其进行鉴定;采用地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C作成骨诱导剂、β-巯基乙醇或复方丹参注射液作为神经诱导剂、地塞米松、消炎痛、胰岛素作为成脂诱导剂诱导hYS-MSC向成骨细胞、神经细胞及脂肪细胞定向分化.组织化学方法作成骨检测;免疫组化方法检测NSE、NF及GFAP在经神经诱导hYS-MSC中的表达;油红O染色检测中性脂肪.[结果]hYS-MSC易于纯化,在培养过程中保持正常核型,具有较大增殖能力.hYS-MSC CD29、CD44、CD166及CD105表达阳性,CD34、CD45和CD86为阴性;AKP弱阳性.hYS-MSC经成骨诱导AKP强阳性,诱导两周后形成钙盐沉积形成的矿化区.hYS-MSC经神经诱导可见NSE、NF或GFAP阳性细胞,符合神经元及胶质细胞的生物学特征.hYS-MSC经成脂诱导转化为大小不等的园形或椭圆形细胞,胞浆内可见脂滴形成,胞核被挤于细胞的一侧,经油O染色脂滴染橘红色,符合脂肪细胞的生物学特征.[结论]hYS-MSC与成体MSC表型一致,具有较大增殖及多向分化潜能,在体外可以诱导分化为成骨细胞、神经元、胶质细胞及脂肪细胞.