用荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌病人外周血CK-19 mRNA的表达

【目的】探讨鼻咽癌病人外周血中CK-19mRNA表达与鼻咽癌临床的关系。【方法】用荧光定量RT-PCR方法检测97例鼻咽癌病人及26例正常人外周血中CK-19 mRNA的表达量。【结果】鼻咽癌病人外周血中CK-19mRNA阳性表达94％(91／97)，健康对照组阳性表达8％(2／26)；T4期病人及远处转移病人外周血中CK-19mRNA拷贝数显著升高，CK-19mRNA拷贝数与鼻咽癌临床分期呈正相关。【结论】荧光定量RT-PCR方法检测鼻咽癌病人外周血CK-19mRNA表达，方法简单、准确，在预测鼻咽癌远处转移及准确临床分期方面有一定可行性。     

MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA在原发性肝细胞癌患者外周血中的表达及临床意义

目的 探讨基质金属蛋白酶 2（MMP-2）mRNA、基质金属蛋白酶9 （MMP-9）mRNA在原发性肝细胞癌（primary hepatocelluar carcinoma,PHC）患者外周血中的表达水平及其在PHC血源性播散诊断中的临床意义。方法 应用实时荧光定量PCR（FQ－PCR）检测120例临床上确诊的不同病理分期分级的PHC患者、60例肝良性病变患者及60例健康体检者外周血中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA 的表达水平。结果 PHC组MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA 表达水平明显高于肝良性病变组和健康对照组（P < 0.05）,而肝良性病变组和健康对照组中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA 表达水平差异无统计学意义（P > 0.05）;随着PHC临床病理分期分级的升高MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA 表达水平呈现增高趋势（P <0.05）;PHC 患者中有肝外转移者其MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达水平明显高于无肝外转移者（P < 0.05）。结论 MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA的差异性表达与PHC不同临床病理分期分级密切相关,具有重要的临床意义。     

宫颈癌CD44v6和MMP-9的表达及其临床意义

目的:探讨宫颈癌组织中CD44v6和MMP9蛋白的表达及临床意义。方法:采用免疫组化SP法分析65例Ⅰ、Ⅱ期术后宫颈癌组织中CD44v6和MMP9蛋白的表达情况。结果:CD44v6和MMP9在伴有淋巴结转移宫颈癌中的阳性表达率为84.6%和92.3%,无淋巴结转移为67.3%和69.2%,两组间差异有显著意义,P<0.05;CD44v6和MMP9表达与病理类型和临床分期无明显相关。结论:检测宫颈癌转移相关基因表达并分析其表达的相互关系有助于判断宫颈癌的转移潜能及指导术后干预治疗。     

实时荧光定量PCR检测胎膜早破胎膜组织中MMP-9 mRNA表达

目的：通过实时突光定量PCR检测胎膜早破胎膜组织中基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase, MMP-9） mRNA 的表达,探讨MMP-9在胎膜早破中的作用。方法：利用实时荧光定量PCR方法测定胎膜早破组35例（足月胎膜早破25例, 足月前胎膜早破10例）和未胎膜早破组25例胎膜组织中MMP-9 mRNA的表达水平。结果：（1）两组胎膜组织中均表达MM-mRNA。（2）胎膜早破组胎膜组织中MMP-9 mRNA明显高于未胎膜早破组（P〈0. 01）,足月胎膜早破和足月前胎膜早破 两组间比较差异无统计学意义（P 〉0.05）。结论：胎膜早破患者胎膜组织中MMP-9 mRNA表达水平高于未胎膜早破组,提 示MMP-9可能参与了胎膜早破的发生。     

实时定量RT-PCR检测不同肝病患者外周血甲胎蛋白mRNA的表达水平

甲胎蛋白 (AFP)mRNA是肝组织的一个特异性表达基因 ,近年来发现其在部分肝癌患者外周血中呈阳性表达 ,引起了许多学者的关注[1,2 ] 。我们采用实时定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术对不同肝病患者的外周血AFPmRNA进行了定量检测 ,以探讨其在诊断肝癌微转移病灶的可行性。一、对象与方法1.对象 :111例肝病患者为新乡医学院第一附属医院普外科住院患者 ,男 74例 ,女 37例 ,平均年龄 4 2 7岁 ,均经血清学检测、B型超声、CT、病理学等确诊 ,其中原发性肝癌患者 5 6例 ,慢性活动性肝炎 17例、肝硬化患者 2 1例、肝血管瘤患者 5例、…     

喉癌病人外周血单个核细胞中MMP-9 mRNA的表达

①目的　探讨喉癌病人外周血单个核细胞 (PBMC)中基质金属蛋白酶 9(MMP 9)mRNA的表达情况。②方法　提取PBMC中的总RNA ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术 ,检测 5 8例喉癌病人PBMC中MMP 9mRNA表达 ,并以 2 0例正常人作为对照。③结果　不同分期喉癌病人PBMC中MMP 9mRNA表达均明显高于对照组 ,差异有极显著性 (F =187.75 ,q =6 .13～ 33.38,P <0 .0 1) ,并随临床分期及病理组织分级增加而表达增强 (F =187.75、193.12 ,q=8.94～ 30 .95 ,P <0 .0 1)。④结论　喉癌病人PBMC中MMP 9mRNA表达水平可作为喉癌预后的一项预测指标     

RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19mRNA的表达

目的探讨乳腺癌患者外周血中CK-19 mRNA的表达,建立检测外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法.方法采取65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用巢式RT-PCR技术进行CK-19 mRNA的检测.结果以巢式RT-PCR终产物出现460 bp带定为阳性.65例乳腺癌患者CK-19 mRNA有24例表达,总阳性率为36.92%.37例乳腺良性疾病者CK-19 mRNA无一例表达.两组有统计学意义 (χ2=7.41,P<0.001).结论 RT-PCR可以用于临床检测乳腺癌患者外周血中微转移,有可能成为判断预后和指导治疗的指标.     

实时RT-PCR定量检测前列腺癌患者外周血DD3 mRNA及其临床意义

目的探讨前列腺癌（PCA）患者外周血DD3mRNA的检测方法及其临床意义。方法建立SYBRGreenⅠ实时RT-PCR定量检测DD3mRNA,分别检测39例不同分期PCA患者（PCA组）、32例前列腺良性增生（BPH组）患者和26名健康男性（健康组）外周血中DD3mRNA含量,并进行对比分析。结果建立的SYBR Green实时RT-PCR方法最少可检测到10拷贝的核酸,在原始模板101-107拷贝范围内,CT值与起始模板浓度具有良好的线性关系;扩增后仅有的溶解曲线峰显示很好的特异性;批间变异系数范围为6.0%～14.8%。健康组DD3mRNA均为阴性,27例BPH组患者中4例结果检测在101数量级,而39例PCA组中26例阳性。PCA组未治疗患者和去势治疗患者DD3mRNA阳性率及定量值比较差异均有统计学意义（P〈0.01）,PCA组无骨转移患者和骨转移患者阳性率和定量值比较差异也均有统计学意义（P〈0.05）。结论基于双链嵌合染料SYBRGreen建立的RT-PCR定量检测DD3mRNA方法具有敏感性高、线性检测范围广、特异性强及重复性较好的特点。外周血DD3mRNA的丰度与前列腺癌的发生、发展及转归都有密切关系。     

定量RT-PCR检测结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达

目的:检测结直肠癌患者外周血中细胞角蛋白20(CK20)mRNA的表达水平,并探讨其临床价值.方法:采用实时荧光定量RT-PCR法检测51例经病理学确诊的结直肠癌患者和30例健康对照者外周血CK20 mRNA的表达水平.结果:结直肠癌患者中CK20 mRNA阳性率为27.45%,而健康对照组阳性率为6.67%,两者相比差异有统计学意义(P<0.025).随着临床分期的提高,患者外周血中CK20 mRNA的表达率随之提高,但各分期间阳性率相比无显著统计学意义(P>0.05).Dukes'C期与D期患者中>10拷贝/ml者高于A期与B期患者.结论:检测结直肠癌患者外周血CK20 mRNA的表达水平可发现早期脱落的肿瘤细胞,对肿瘤微转移的诊断有一定的提示意义.     

AECOPD患者治疗前后外周血单个核细胞NGAL mRNA、MMP-9 mRNA表达差异及临床意义

目的:探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者治疗前后外周血单个核细胞NGAL mRNA、MMP-9 mRNA的表达差异及临床意义。方法:前瞻性纳入AECOPD患者25例,其中男18例,女7例,年龄50～86岁,平均(72.1±8.3)岁。采用实时荧光定量PCR技术检测AECOPD患者治疗前后外周血单个核细胞NGAL mRNA、MMP-9 mRNA的表达水平,同时收集患者体质指数、吸烟指数、血常规、肺功能等临床指标,分析NGAL mRNA和MMP-9mRNA与临床指标间的相关性。结果:AECOPD患者治疗后NGAL mRNA和MMP-9 mRNA相对表达量均较治疗前下降,差异有统计学意义(P<0.01)。AECOPD合并呼吸衰竭组患者NGAL mRNA和MMP-9 mRNA相对表达量均高于AECOPD未合并呼吸衰竭组,差异有统计学意义(P<0.05)。NGAL mRNA和MMP-9 mRNA相对表达量间呈显著正相关,差异有统计学意义(r=0.831,P<0.01)。NGAL mRNA和MMP-9 mRNA相对表达量与外周血白细胞总数、中性粒细胞总数和中性粒细胞百分比均呈正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NGAL和MMP-9极有可能参与COPD的发病,其相对表达水平或可用来评估AECOPD病情严重程度和监测患者对治疗的反应。     

实时荧光定量RT—PCR检测乳腺癌患者外周血CK19及hMAMmRNA表达的临床意义

目的动态监测乳腺癌患者外周血液中CK19及hMAMmRNA的表达,探讨其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术,动态检测40例经病理证实的乳腺癌及10例健康对照组外周血液中CK19及hMAM的表达。结果40例乳腺癌循环血液中CK19及hMAM的表达显著高于正常人群。在治疗过程中,乳腺癌患者循环血液中上述指标表达的阳性率呈下降趋势。不同分期乳腺癌在治疗前、中期的表达无显著性差异,但在治疗后期不同分期乳腺癌表达的阳性率差异有统计学意义（CK19：P=0．044;hMAM：P=0．005）,对持续阳性的乳腺癌患者,其复发转移率较高,差异有显著性统计学意义（P〈0．001）。结论实时荧光定量PCR技术可检测出各期乳腺癌患者外周血中CK19及hMAM的表达,有较高的敏感性和特异性,在判断乳腺癌预后、监控复发中的应用具有一定的可行性。     

免疫磁珠联合定量RT-PCR检测胃癌外周血微转移的临床意义

目的研究免疫磁珠联合定量RT-PCR检测胃癌患者外周血微转移的临床意义.方法提取41例胃癌患者外周血有核细胞RNA,先后加入抗人CD45免疫磁珠和抗人Ber-EP4免疫磁珠,再用定量RT-PCR检测癌胚抗原(CEA)mRNA和β 2微球蛋白(MG)mRNA,计算出相对CEA mRNA值(CEA mRNA/β2MG mR-NA).比较CEA mRNA的检出与患者性别、年龄、病变部位、组织学类型、pTNM分期、淋巴转移以及肝转移的关系.结果良性对照组与正常对照组均未见扩增;41例胃癌患者中有27例CEA mRNA阳性,其中贲门3例/6例,胃体10例/16例,胃窦14例/19例;腺癌19例/26例,粘液腺癌2例/7例,低分化癌6例/8例;Ⅰ期2例/7例,Ⅱ期5例/8例,Ⅲ期7例/10例,Ⅳ期13例/16例;淋巴转移19例/29例,肝转移8例/8例.结论正常人外周血中无CEA mRNA的表达;早期胃癌外周血可检测到CEA mRNA;CEA mRNA表达的差别在不同pTNM分期、组织学类型、有无肝转移时有显著性意义,与性别、年龄、肿瘤部位、淋巴转移的关系无显著性意义.     

RT-PCR测定肺癌患者外周血中CEA-mRNA的临床意义

目的研究肺癌外周血CEA-mRNA表达的临床价值。方法采用荧光定量RT-PCR检测外周血CEA-mRNA的表达。结果肺癌患者外周血CEA-mRNA平均水平(1.52±1.44)×104copies/ml,阳性率58.46%,BLD患者外周血CEA-mRNA平均水平624±632copies/ml;在小细胞癌、大细胞癌、鳞癌、腺癌中表达阳性率为50%、41.7%、43.5%、78.6%;健康对照组未检测到CEA-mRNA。结论外周血CEA-mRNA可作为肺癌辅助诊断指标,定量检测外周血CEA-mRNA可作为肺癌微转移的一个监测指标。     

乳腺癌患者外周血CEA mRNA的表达

目的　检测乳腺癌患者外周血CEAmRNA的表达 ,建立取材于外周血早期诊断乳腺癌转移的方法。方法　用巢式RT -PCR检测乳腺癌患者和乳腺良性肿瘤患者的外周血中CEAmRNA的表达。结果　 5 6例乳腺癌患者CEAmRNA有 2 1例表达 ,阳性率为 3 7.5 0 % ;42例乳腺良性疾病者CEAmRNA没有一例表达。两组有高度显著性差异 (χ2 =2 0 .0 4 ,P <0 .0 1 )　结论　巢式RT -PCR检测CEAmRNA阳性结果提示其具有形成转移的倾向 ,并可作为判断预后的辅助参考指标     

乳腺癌外周血乳腺上皮粘蛋白mRNA的检测及其临床意义

目的:研究乳腺癌外周血乳腺上皮粘蛋白(SBEM)的表达及临床意义.方法:用RT-PCR法检测58例乳腺癌患者外周血SBEM mRNA的表达,并用健康志愿者及乳腺良性肿瘤患者各10例作为对照.结果:78例标本全部确认转录为cDNA,SBEM在乳腺癌患者外周血的阳性表达率为25.9%,乳腺良性肿瘤和正常对照均无阳性表达,SBEM阳性表达与患者的腋淋巴结状况,TNM临床分期均有明显相关(P＜0.05),而与患者的原发肿瘤大小及激素受体状况均无明显相关.结论:SBEM特异性表达于乳腺癌外周血,可作为标志物检测乳腺癌外周血微转移,并有可能成为诊断乳腺癌和判断预后的一个独立指标.     

结直肠癌患者血清中MMP-2、MMP-9和MMP-14检测的临床意义

目的探讨MMP-2、MMP-9及MMP-14在结直肠癌患者血清中的表达水平,并分析其与结直肠癌分化程度、Dukes分期及淋巴结转移等病理参数的关系,以更好的指导临床工作。方法应用ELISA(酶联免疫吸附实验)分别检测200例结直肠癌患者(观察组)、60例健康成人(对照组)血清中MMP-2、MMP-9和MMP-14的含量。结果观察组血清中MMP-2、MMP-9及MMP-14表达量显著高于对照组(P<0.01),观察组中不同临床特征患者血清MMP-2、MMP-9和MMP-14的表达与肿瘤分化程度、Dukes分期以及淋巴结转移有关(P<0.01),经相关性分析,MMP-2和MMP-9、MMP-9和MMP-14的表达呈正相关(P均<0.05)。结论MMP-2、MMP-9和MMP-14在结直肠癌患者血清中高表达,三者可能在结直肠癌发生发展中起重要作用;早期联合检测MMP-2、MMP-9和MMP-14可能对判断患者的预后及指导临床治疗有重要价值。     

MMP-9在胰腺癌组织中的表达及意义

目的探讨MMP-9在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学技术检测73例胰腺癌、37例胰腺正常组织中MMP-9蛋白的表达,并对其与临床病理因素的关系进行相关性分析。结果胰腺癌与正常胰腺组织MMP-9蛋白表达阳性率差异有统计学意义,分别为65．75％和10．81％（P〈0．05）。胰腺癌组中,中高分化病例MMP-9蛋白表达阳性率为45．45％,低分化病例为74．51％,二者比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;A＋B期病例MMP-9蛋白表达阳性率为43．59％,明显低于C＋D期（91．18％）（P〈0．05）;≤60岁病例MMP-9蛋白表达阳性率为59．52％,〉60岁病例阳性率为74．19％,二者比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论MMP-9蛋白的表达在胰腺癌组织中明显增高,且与其组织分化、临床分期有关,与患者年龄大小无关。MMP-9蛋白表达与胰腺癌的发生发展密切相关,在胰腺癌的诊断方面可能是比较好的协助诊断分型、判断预后因子。     

NGAL和MMP-9蛋白在浸润性乳腺癌中的表达及临床意义

摘要：目的 探讨浸润性乳腺癌组织中NGAL和MMP-9蛋白的表达模式及临床意义。方法 应用免疫组化PV-9000两步法检测85例浸润性乳腺癌、30例乳腺增生症及30例乳腺癌旁组织中NGAL和MMP-9蛋白的表达情况。结果 85例浸润性乳腺癌组织中NGAL的阳性表达率为77.6%（66/85）,明显高于乳腺增生症13.3%（4/30）及乳腺癌旁组织3.3%（1/30）（P<0.05）;NGAL的表达在腋窝淋巴结转移、术后复发、HER-2受体及ER受体等分组间差异均有显著性意义（P<0.05）,与其它临床特征之间差异均无统计学意义（P>0.05）;MMP-9蛋白在浸润性乳腺癌、乳腺增生症组织及乳腺癌旁组织中的阳性表达率分别为80.0%（68/85）、16.7%（5/30）和6.7%（2/30）,其中在浸润性乳腺癌组织的阳性表达率明显高于乳腺增生症及乳腺癌旁组织（P<0.05）;MMP-9的表达在腋窝淋巴结转移、术后复发及ER受体及HER-2受体等分组间差异均有显著性意义（P<0.05）,而在与其它临床特征之间差异均无统计学意义（P>0.05）;NGAL和MMP-9蛋白在浸润性乳腺癌的表达呈正相关（r=0.508,P=0.000）。结论 NGAL和MMP-9蛋白表达异常可能与浸润性乳腺癌的发生发展有关,二者联合检测可能对判断患者的预后有一定作用。