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1.
宫颈癌组织蛋白质组图谱分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:检测宫颈癌组织与正常宫颈上皮组织中差异蛋白质的表达,寻找与宫颈癌相关的肿瘤标记物.方法:采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术,应用铜离子结合芯片(IMAC-Cu)以及配套软件,对33例宫颈癌组织、29例正常宫颈上皮组织进行检测分析,筛选出有分类意义的差异蛋白,构建决策树分类模型.结果:宫颈癌与正常对照共有72种蛋白质质谱峰强度差异有统计学意义(P<0.01),有分类意义的蛋白质有8种,其中质/核比为M5929.87、M3630.52、M10335.39、M6793.00、M7365.78、M4498.06的蛋白质在宫颈癌组织中低表达,质/核比为M8856.45、M9586.27的蛋白质在宫颈癌组织中高表达.用质/核比为M5929.87、M3630.52和M10335.39的蛋白质建立的决策树分类模型的分类正确率为95.16%(59/62),宫颈癌诊断敏感性为93.94%(31/33),特异性为96.55%(28/29).结论:利用SELDI-TOF-MS技术筛选出的具有分类意义的8种蛋白质,有可能成为宫颈癌诊断及预后判断的-组生物学指标.  相似文献   

2.
目的 应用双向电泳和质谱技术研究人睾丸胚胎性癌蛋白质组.方法 利用固相PH梯度双向凝胶电泳技术进行分离,凝胶经银染显色后,用PDQuest 7.30软件分析2-DE图谱.选择在睾丸胚胎性癌图谱中高表达的3个蛋白点酶解,应用基质辅助激光解析电离飞行时间/飞行时间(MALDI-TOF/TOF)仪器进行串联质谱(MS/MS)鉴定.结果 双向电泳成功有效筛选出差异蛋白点,并成功鉴定3种蛋白质.结论 双向电泳和质谱技术可有效研究睾丸胚胎性癌总蛋白质,为从蛋白质组水平研究睾丸胚胎性癌蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径.
Abstract:
Objective To separate and identify human testicular embryonal carcinoma proteomics using two-dimensional electrophoresis (2-DE) and mass spectrometry. Methods Immobilized pH gradient two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis was used to separate the total proteins of the samples. After silver staining, PDQuest 7.30 image analysis software was applied to analyze the 2-DE images. Three of the proteins highly expressed in human testicular embryonal carcinoma were identified by matrix-assisted laser adsorption/ionization-time of flight-tandem mass spectrometry (MALDI-TOF-MS/MS). Results 2-DE effectively screened the differentially expressed proteins in the carcinoma tissues.Three proteins highly expressed in the carcinoma were successfully identified. Conclusion The proteins of human testicular embryonal carcinoma can be effectively separated and analyzed using 2-DE and mass spectrometry. Proteomic analysis offers a new means for further study of this carcinoma.  相似文献   

3.
目的利用双向凝胶电泳-MALDI-TOF质谱技术进行胶质瘤组织中蛋白质表达谱的研究,并进行胶质瘤组织中疾病相关蛋白质的筛选。方法分别提取6例胶质瘤患者脑组织、6例相对正常脑组织的总蛋白质,进行双向凝胶电泳、银染,两组凝胶图像差异分析,得到差异蛋白质。对目的差异蛋白质进行MALDI-TOF质谱分析。结果获得了分辨率较高的胶质瘤和相对正常脑组织双向凝胶电泳图谱,鉴定了29个差异蛋白质点中的18个蛋白质,得到15个阳性结果。在鉴定中得到阳性结果的差异蛋白质中,胶质瘤组织上调的蛋白质有:γ-肌动蛋白、三联基元蛋白5的环指蛋白、假想蛋白、RAS结合蛋白、T细胞识别的鳞状细胞癌抗原、SMC1结构维持染色体1样1、ATP结合盒转运载体蛋白1和果糖二磷酸醛缩酶;下调的蛋白质有:β-球蛋白、脑肌酸激酶、类似S期激酶活化剂、CUG-BP和ETR-3样因子、类似磷酸二酯酶4D相互作用蛋白、CD2抗原和肌动蛋白结合蛋白。结论利用双向凝胶电泳-MALDI-TOF质谱技术进行胶质瘤组织中疾病相关蛋白质的研究得到差异蛋白质,其中上调蛋白质功能为细胞的骨架结构形成、细胞的侵袭性生长、肿瘤耐药性和促进细胞增殖等;下调蛋白质功能为免疫调节、细胞周期调节、抑制细胞迁移、在脑组织中参加细胞能量代谢和调节细胞特异性和发育等;还有一些未知功能蛋白质。所得结果为胶质瘤疾病蛋白质组学的进一步研究打下了一定的工作基础。  相似文献   

4.
目的:研究喉癌及癌旁喉正常黏膜组织蛋白质组的差异表达.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离喉癌及癌旁喉正常黏膜组织总蛋白质,考马斯亮蓝染色显色、ImageMaster 2D软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱,找出差异表达的蛋白质点.取差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定.结果:获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱,并找出在喉癌和癌旁喉正常黏膜组织差异表达的33种蛋白质.其中有22种蛋白质在喉癌组织中表达上凋,11种蛋白质表达明显下调.随机取10个在喉癌组织中表达上调的蛋白点进行质谱指纹图分析,查询数据库初步鉴定出了8个蛋白质.结论:本研究建立了分辨率和重复性较强的喉癌及喉正常黏膜组织蛋白质组表达图谱,且两者蛋白质的表达明显不同,差异表达的蛋白质可能成为潜在的诊断喉癌的肿瘤标志物和治疗靶分子,对探讨喉癌的发生机制有重要意义.  相似文献   

5.
目的:测定蝎毒素ITX样品中17种氨基酸的含量,分析并鉴定其中某些蛋白质组成成分.方法:将常压柱分离得到的蝎毒素蛋白ITX利用L-8800氨基酸分析仪进行氨基酸含量分析;以17 cm pH 3~10固相pH梯度胶条(IPG)为第一向IEF,18%SDS聚丙烯酰胺凝胶为第二向进行双向电泳;PDQuest 7.1.1分析软件分析电泳图谱,筛选目的蛋白,然后对重现性和稳定性良好的蛋白点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-Ms)和串联质谱(MS/MS)分析,得到肽质量指纹图谱(PMF)数据,登录网站http://www.matrixscience.com.用Mas-cot程序检索NCBInr数据库,鉴定蛋白质.结果:ITX 17种氨基酸的含量从0.14%-11.35%不等;从蝎毒素ITX蛋白样品中共筛选出9个等电点不同,相对分子质量约为5800的蛋白点,其中蛋白点1、2、3、4位于酸性区,蛋白点5、6、7、8、9位于碱性区.获得了4、6号蛋白点多肽的PMF数据.结论:测定了蝎毒素ITX蛋白的氨基酸含量;建立蝎毒素ITX蛋白质组学研究方法,为后续工作奠定了基础.  相似文献   

6.
【目的】研究低剂量三氯乙烯对人L-02肝细胞蛋白质表达谱的影响,以助于阐明三氯乙烯引起细胞早期应答反应的分子机制。【方法】L-02肝细胞暴露于低剂量(3μmol/L)三氯乙烯24h后,提取细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质,软件分析凝胶图像,基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF-MS)对相关异常变化斑点进行鉴定。【结果】和对照组比较,低剂量三氯乙烯处理后L-02肝细胞蛋白质表达发生改变,初步鉴定出7个差异蛋白。低剂量三氯乙烯刺激后,上调的蛋白有核糖体样蛋白(similar to ribosomal protein)和SET protein,下调的蛋白有异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,NADP)和腺苷二磷酸-核糖基化因子鸟苷酸因子6(ADP-ribosylation factor guanine nucleotide factor 6),微管-肌动蛋白交叉连接因子1(microtubule-actin crosslinking factor 1)特异表达,肽基脯氨酰顺-反异构酶PPI(peptidyl pmlyl cis/tralls isomerase)缺失。【结论】低剂量的三氯乙烯处理后,L-02肝细胞中的蛋白表达谱发生明显变化,这为三氯乙烯毒作用机制的进一步研究提供了线索。  相似文献   

7.
目的:比较吗啡成瘾与正常大鼠前额叶皮质(prefrontal cortex,PFC)蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定吗啡成瘾大鼠PFC中的差异表达蛋白质。方法:以固相pH梯度等电聚焦为第一向和垂直SDS-PAGE为第二向,分别对正常对照大鼠和吗啡成瘾大鼠的PFC蛋白质样品进行二维分离,2-DE图谱经ImageMaster 2D Platinum v5.0软件分析,选取4个差异蛋白点用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定。结果:通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与吗啡成瘾相关的差异表达蛋白斑点为87个;经质谱鉴定出2个有意义的差异表达的蛋白斑点:snap25亚型β-snap25突触相关蛋白25、核不均一核糖核蛋白U。结论:吗啡成瘾组与正常对照组大鼠PFC蛋白质组存在差异;初步鉴定出了2种大鼠前额叶皮质中与吗啡成瘾相关的差异蛋白,其表达的变化可能通过多种途径影响PFC神经元功能,为研究阿片类物质依赖作用机制提出了新的思路和方向。  相似文献   

8.
林英姿  陈仁  杨文  李翠 《医学争鸣》2008,29(1):40-43
目的:应用双向凝胶电泳和质谱技术分析HBV相关性HCC癌组织与非癌肝组织蛋白质组之间的差异,鉴定肝组织蛋白质组中与HBV相关性HCC癌变相关的蛋白.方法:收集HBV相关性HCC患者手术切除的癌组织和癌周组织标本,固相pH梯度2-DE,凝胶银染、扫描图像、ImageMaster 2-DE Elite4.01软件分析差异表达的蛋白质;应用质谱仪得到相应的肽质指纹图谱(PMF),联网到ExPASY服务器查询相关数据库鉴定获得的差异蛋白质点.结果:癌组织、肝硬化组织和慢性肝炎组织平均每张蛋白斑点数为(1281±51),(1188±41)和(1235±31)个,重复性分析发现在等电聚焦(IEF)方向上平均偏差为(2.47±0.25)mm,在垂直板SDS-PAGE电泳方向上的平均位置偏差为(2.86±0.31)mm.47个差异蛋白质点经质谱分析获得28张PMF,初步鉴定了其中的17张PMF.结论:HBV相关性HCC的癌组织、肝硬化组织、慢性肝炎组织蛋白质组之间存在较明显的差异,鉴定出的差异蛋白质可能有助于研究HBV相关性HCC.  相似文献   

9.
[摘要] 目的 应用蛋白质组学实验方法对在异体异位生长发育的新生小鼠睾丸组织进行差异蛋白分析,从而对睾丸组织体外移植模型用于生精细胞发育研究的可行性提供进一步的理论依据。方法 以新生小鼠睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植,移植8周后收集移植物组织,采用双向凝胶电泳(2-DE)分离移植物组织总蛋白,同时分离8周正常小鼠睾丸组织总蛋白作对比分析,运用ImageMaster 2D Elite 5.0图象分析软件识别移植物组织与正常组织差异表达的蛋白质点,应用基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获取肽质量指纹图谱(PMF),检索数据库鉴定差异表达的蛋白质点。结果 正常睾丸组织和移植物组织双向电泳图谱的平均蛋白质点数分别为(1 326±15)个和(1 561±20)个,3次重复实验的蛋白质点位置重复性较好。通过比较两者的双向凝胶电泳图谱,得到表达差异量较大的蛋白质点21个。选取6个仅在正常睾丸组织中有表达的蛋白质点进行质谱和生物信息学分析,鉴定出的6种蛋白质,除血红蛋白α1链(Hba-a1)外,其他5种蛋白均为在小鼠睾丸中有较高表达的蛋白质,包括A激酶锚定蛋白结合的精子蛋白(ASP)、磷脂过氧化氢物谷胱甘肽过氧化物酶(GPX4)、精子蛋白(Sp17)、天门冬酰胺酶样蛋白(ASRGL1)和过氧化物氧化还原因子4(Prdx4)。结论 在本实验中,从异体异位生长发育成熟的新生小鼠睾丸组织中检测到5种在睾丸中特异性高表达蛋白质的缺失,这些蛋白质主要在精子运动、精子顶体形成以及精子的受精等功能中发挥作用。  相似文献   

10.
血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立   总被引:3,自引:3,他引:3  
目的建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术.方法对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化.结果建立了稳定的2-DE技术.结论已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础.  相似文献   

11.
目的:应用比较蛋白质组学方法分析正常乳腺与乳腺癌组织的差异表达核基质蛋白,为人乳腺癌发病机制及其早期诊断的研究提供理论依据.方法:应用双相电泳(2-DE)每组分离4例乳腺组织核基质蛋白;应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得差异蛋白点的肽质量指纹图谱(PMF);通过Mascot软件查询NCBI数据库鉴定蛋白质.结果:每张图谱约检测到900个蛋白质点,共发现27个差异表达蛋白,选择背景清晰、重复性及分辨率较好、蛋白表达差异明显的点进行质谱分析,结合表观分子质量及等电点,初步鉴定了12种蛋白质.结论:这些差异蛋白质部分有望成为乳腺癌诊断及治疗的分子标志物.  相似文献   

12.
目的:筛选肺鳞癌淋巴结转移相关的蛋白质。方法:采用激光捕获显微切割技术(lasercapture microdissection,LCM)分别从肺鳞癌原发灶组织和匹配的淋巴结转移灶癌组织中切割纯化鳞癌细胞;应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质;图像分析识别差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点,Western印迹验证差异蛋白Rho-GDIα在LCM纯化的肺鳞癌原发灶肿瘤细胞(lung primary tumor cells,LPTC)和匹配的淋巴结转移灶肿瘤细胞(lymph node metastatic tumor cells,LNMTC)中的表达。结果:建立了LCM纯化的LPTC和匹配的LNMTC的2-DE图谱,质谱鉴定了22个差异蛋白质,与LPTC相比,8个蛋白质在LNMTC中表达明显增高。结论:22个差异蛋白可能与肺鳞癌淋巴结转移有关,为筛选肺鳞癌转移标志物奠定了基础。  相似文献   

13.
目的:筛选肺鳞癌淋巴结转移相关的蛋白质。 方法:采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)分别从肺鳞癌原发灶组织和匹配的淋巴结转移灶癌组织中切割纯化鳞癌细胞;应用二维凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)分离LCM纯化细胞的蛋白质;图像分析识别差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点,Western印迹验证差异蛋白Rho-GDIα在LCM纯化的肺鳞癌原发灶肿瘤细胞(lung primary tumor cells, LPTC)和匹配的淋巴结转移灶肿瘤细胞(lymph node metastatic tumor cells, LNMTC)中的表达。结果:建立了LCM纯化的LPTC和匹配的LNMTC的2-DE图谱,质谱鉴定了22个差异蛋白质,与LPTC相比,8个蛋白质在LNMTC中表达明显增高。结论:22个差异蛋白可能与肺鳞癌淋巴结转移有关,为筛选肺鳞癌转移标志物奠定了基础。  相似文献   

14.
目的对三亚市2022年7月15日发生一起食源性暴发事件进行同源性分析,为临床治疗和防控提供科学依据,探讨脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)技术和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术在沙门菌同源分析中的应用可行性。方法通过传统的细菌检验方法、PFGE和MALDI-TOF MS技术与临床症状、流行病特征相结合,准确对食物中毒事件溯源分析。结果本起事件中出现发热、恶心、呕吐等中毒症状共14例,均有在同一餐厅就餐经历,发病过程和临床表现相似,其中1例为该餐厅制蛋炒饭厨师。经病原学培养鉴定显示为猪霍乱沙门菌和鼠伤寒沙门菌共同引起,其中采集患者14例,检出猪霍乱沙门菌5例,鼠伤寒沙门氏菌3例,阳性率为57.14%(8/14)。环境样本检出1份,食品样本2份。PFGE图谱结果显示9种PFGE型,7株菌株同源性为95.0%,4株菌株同源性为94.0%。结论此次食物中毒原因是食用被猪霍乱沙门菌的蛋炒饭和含鼠伤寒沙门菌污染的猪肉肠。今后应加强食品污染和有害因素风险监测,从食品供应源头保证食品安全,严防食源性感染事件发生。同时规范相关人员健康体检,多渠道宣教食源性疾病危害和预防知识也至关重要。  相似文献   

15.
目的 探讨复发性卵巢癌早期筛查的血清标志物.方法 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析21例复发性卵巢癌和18例完全临床缓解期卵巢癌的血清蛋白质质谱差异. 结果在Mr 1 000~12 000 D区段,Mr 1944、1980、2080、2661、2993、4450、4659、535...  相似文献   

16.
目的:研究基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在鼠伤寒沙门菌同源性分析中的应用价值.方法:利用MALDI-TOF MS对分离于广州市的44株鼠伤寒沙门菌进行分型,与脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)进行比较,并分析主要质谱型的质谱图.结果:对PFGE结果聚类分析可以将44株鼠伤寒沙门菌分为15型.在聚类相似度为80%时,44株鼠伤寒沙门菌被分为8个MALDI-TOF MS型,与PFGE分型较一致.其中MS1型(52.3%)为主要的质谱型,MS1型包含多个PFGE型.结论:MALDI-TOF MS方法分型结果显示了广州市鼠伤寒沙门菌相对集中的亲缘关系,是一种简便、快速、高通量的方法.  相似文献   

17.
目的观察人乳头瘤病毒(HPV)感染子宫颈组织后蛋白质组表达情况,探讨高、低危基因型感染子宫颈组织后表达的差异及意义。方法采用比较蛋白组学研究技术,对HPV高危基因型感染的子宫颈上皮内瘤变、低危基因型感染的子宫颈尖锐湿疣和正常对照的子宫颈上皮组织进行两两比较,筛选差异表达蛋白质,并对差异蛋白质点进行质谱分析。结果对3组26个差异蛋白质点的分析共获得了22张肽质量指纹图,搜索后得到18个与其相匹配的蛋白质点。通过查询NCBInr数据库获得初步鉴定的18个蛋白质功能信息,主要与细胞代谢、信号传导、细胞分泌、细胞骨架构建及细胞增殖、分化与凋亡等相关。结论高、低危基因型HPV感染子宫颈组织后蛋白质组表达存在明显差异。  相似文献   

18.
目的 采用联合磁性微球和基质辅助的激光解吸/离子化-飞行时间(MALDI-TOF-MS)技术筛选肾细胞癌患者血清差异蛋白峰.方法 采用弱阳离子磁性微球从99份血清标本(肾细胞癌62份,肾脏良性占位病变37份)捕获血清蛋白,MALDI-TOF-MS质谱仪检测蛋白峰,Biomarker Wizard 3.1和Biomarker Patterns Software 5.0分析数据,以47例肾细胞癌及26例肾脏良性占位病变标本建立肾细胞癌诊断模型,15例肾细胞癌和11例肾脏良性占位病变标本进行盲法验证.结果 发现7个蛋白峰具有统计学差异(P<0.05),以质荷比2945.35、15340.8、6984.51、5819.23的4个蛋白峰建立肾细胞癌诊断模型,该模型区分肾细胞癌与肾脏良性占位病变的敏感性为83.0%,特异性为84.6%;盲法验证,该模型诊断肾细胞癌的敏感性为80.0%,特异性为81.8%.结论 采用磁性微球与MALDI-TOF-MS技术可以检测肾细胞癌血清中的差异蛋白峰,并建立敏感性、特异性较高的肾细胞癌诊断模型.  相似文献   

19.
目的评估基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(VITEK-MS)仪直接检测BacT/ALERT 3D仪阳性培养瓶微生物方法的可行性与准确性。方法选取2016 年9 月-2016 年11 月安徽医科大学第一附属医院微生物室BacT/ALERT 3D全自动培养仪当天报告阳性的血培养瓶,差速离心法处理后直接用VITEK-MS 进行检测,并与常规鉴定法进行比较。结果150 例阳性培养瓶中,除13 例培养瓶中无细菌生长外,VITEK-MS 直接鉴定法正确检测出97 例(70.8%)菌株,错误检测出10 例(7.3%)菌株,30 例(21.9%)鉴定无结果。其中,革兰阴性杆菌正确鉴定出61 例(88.4%)菌株,鉴定无结果8 例(11.6%);革兰阳性球菌正确鉴定出36 例(52.9%)菌株, 鉴定错误10 例(14.7%),鉴定无结果22 例(32.4%)。结论利用VITEK-MS 直接鉴定阳性血培养瓶的方法准确性高、特异性强,革兰阴性杆菌鉴定准确率远高于革兰阳性球菌,且鉴定时间短(只需2 h)。该方法可以作为快速诊断阳性血培养瓶的新方法。  相似文献   

20.
胃癌及慢性胃炎幽门螺杆菌的蛋白质组学研究   总被引:1,自引:1,他引:1  
目的:建立胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌的双向凝胶电泳图谱,识别鉴定其差异表达的蛋白质,探讨细菌本身因素在发病过程中的作用.方法:利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌菌株的总蛋白质,凝胶经蓝银显色后,采用PDQuest图像分析软件比较、分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点.结果:获得分辨率较高、重复性较好的胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌双向凝胶电泳图谱,鉴定出14个差异蛋白质,包括抗氧化作用、分子伴侣、解毒和DNA修复相关蛋白质、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号传导相关蛋白质.结论:建立了分辨率高且重复性较好的胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出了两种不同疾病来源幽门螺杆菌差异表达的蛋白质,其蛋白质表达的差异可能在胃癌的发生中起重要作用.  相似文献   

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