新辅助化疗前后乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19表达变化及其临床意义

目的探讨细胞角蛋白（CK）19在乳腺癌新辅助化疗前后表达的变化及其临床意义。方法采用实时定量RT-PCR技术检测86例乳腺癌患者新辅助化疗前后外周血CK19 mRNA的表达变化,将30例乳腺良性疾病患者和20例健康体检志愿者作为对照。对非正态分布或方差不齐的数据采用Wilcoxon非参数秩和检验,用中位数±百分位数之差[M（Q_R）]表示,计数资料组间采用χ~2检验。结果新辅助化疗前乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA阳性表达率为32.56%（28/86）,与腋窝淋巴结转移、临床分期有关（分别P〈0.001）;而新辅助化疗后阳性表达率为13.95%（12/86）,化疗前后CK19mRNA表达差异具有统计学意义（P=0.004）;新辅助化疗后CK19 mRNA阳性表达的患者中,57.14%（16/28）获得临床完全缓解成部分缓解,低于CK19 mRNA阴性患者的93.10%（54/58）,差异有统计学意义（P〈0.001）,这提示CK19 mNRA表达水平变化可能与新辅助化疗疗效有关。结论 CK19可作为新辅助化疗疗效判定的早期预测指标之一。     

喉癌患者治疗前后外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达及临床意义

目的探讨喉癌患者根治性治疗前后外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达及临床意义。方法采用巢式RT—PCR技术检测48例喉癌患者术前和术后6、12、24个月外周血中CK19mRNA、CK20mRNA的表达情况。结果48例喉癌患者外周血术前CK19mRNA、CK20mRNA阳性率分别为37．5％（18／48）、45．8％（22／48）;患者术后6、12、24个月外周血CK19mRNA与CK20mRNA的表达均较术前下降（P〈0．05）;复发组CK19mRNA、CK20mRNA术前表达均高于无复发组（P〈0．05）;4例复发患者术前与术后6、12个月外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论检测喉癌患者治疗前后外周血CK19mRNA和CK20mRNA的表达水平有助于评估喉癌微转移及临床疗效,从分子生物学方面为喉癌局部复发的预测提供帮助。     

乳腺癌新辅助化疗前后外周血中微转移癌细胞的变化及其临床意义的研究

目的：观察乳腺癌患者新辅助化疗前后外周血微转移的变化，并探讨其临床意义。方法：44例乳腺癌患者首先经半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测外周血CK-20 mRNA为阳性表达，给予CEF方案行新辅助化疗后，再次检测外周血CK-20 mRNA的表达，并评价化疗对肿瘤的疗效。结果：新辅助化疗后14例（31．8％）乳腺癌患者外周血CK-20 mRNA表达转为阴性，21例（47．7％）表达下降，9例（20．5％）未见明显变化，与化疗前相比差异有统计学意义，P=0．006；化疗疗效临床完全缓解3例（6．8％），部分缓解34例（77．3％），疾病稳定7例（15．9％），无疾病进展病例；CK-20表达下降与新辅助化疗疗效显著相关，r=0．942。结论：新辅助化疗可明显降低乳腺癌患者外周血微转移的发生，并可作为化疗疗效判定的早期预测指标。     

密集方案新辅助化疗对44例乳腺癌bcl-2 mRNA水平的影响

[目的]探讨密集方案新辅助化疗临床效果及对乳腺癌细胞bcl-2mRNA表达的影响。[方法]44例乳腺癌患者随机分成CEF14组和CEF21组,分别接受CEF14方案和CEF21方案新辅助化疗,观察其临床结果;使用实时定量RT-PCR法测定各组标本化疗前后bcl-2mRNA表达强度。[结果]最终35例患者完成了既定方案化疗,CEF14组临床有效率为50%（9/18）,CEF21组临床有效率为41.18%（7/17）（P〈0.05）。CEF14组、CEF21组化疗前bcl-2mRNA表达强度无差异（P〉0.05）;化疗后CEF14组bcl-2表达强度低于CEF21组bcl-2mRNA表达强度（P〈0.05）。[结论]密集方案新辅助化疗与常规方案新辅助化疗有相似的临床效果,密集方案新辅助化疗较常规方案新辅助化疗更易下调bcl-2mRNA表达。     

术前5-FU化疗对结直肠癌患者血液微转移的影响

目的：检测术前5-FU化疗及手术对结直肠癌患者血液CK20mRNA含量的影响,并探讨其临床意义。方法：收集本院普通外科2009年5月至2010年12月病理证实的结直肠癌患者30例,随机分为对照组与术前化疗组各15例。术前化疗方案：CF 200mg ivgtt d1-d3、5-FU 500mg ivgtt d1-d3,化疗结束次日进行手术。两组患者均取术前（化疗组为化疗前1日及术前）、术中癌灶回流至门静脉血,术后首日清晨空腹外周静脉血各5ml;另设15份健康体检者外周血标本作为正常人群对照。以实时定量RT-PCR法检测血标本中CK20mRNA含量。结果：15例健康体检者中,CK20mRNA均未检出;30例结直肠癌患者治疗前外周血指标检出率如下：CK20mRNA为80.0%,其含量与肿瘤浸润深度（T）、淋巴结转移（N）、远处转移（M）、术后病理分期（TNM）、脉管或淋巴管癌栓正相关（P〈0.05）,而与分化程度、神经侵犯、性别、年龄无关。化疗组患者化疗前后CK20mRNA（P=0.055）含量降低,但差异不具有显著性意义。对照组手术前后外周血中CK20mRNA含量差异无统计学意义。比较两组患者术中血与术前外周血中CK20mRNA含量,化疗组指标降低病例数多于对照组,且CK20mRNA含量的变化具显著意义（P=0.004）。结论：外周血CK20mRNA为结直肠癌微转移检测的敏感指标。就观察术前化疗效果而言,CK20mRNA有明显下降。术前5-FU化疗可以降低外周血及回流入门静脉血中微转移的程度,提示对TNM II、III期结直肠癌患者开展规范新辅助化疗研究的必要性。     

CK-19mRNA表达与乳腺癌关系的研究

目的：探讨乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19mRNA（CK-19mRNA）的表达与手术、化疗、临床病理的关系及其临床意义。方法：应用实时荧光定量PCR检测60例Ⅱ、Ⅲ期乳腺癌患者手术及化疗前后外周静脉血CK-19mRNA的含量。选择20例乳腺良性疾病手术患者做为对照。结果：对照组外周血中未检出CK-19mRNA。术前乳腺癌组外周血CK-19mRNA阳性率为30．0％（18／60），与对照组比较有显著差异（P〈0．05）。术后1周内及术后化疗1周期后CK-19mRNA阳性率分别降至25．0％（15／60）和13．3％（8／60）。Ⅲ期乳腺癌CK-19mRNA的阳性表达率高于Ⅱ期（P〈0．05），CK-19mRNA的表达与激素受体、HER2表达无关（P〉0．05）。有神经及脉管受侵或淋巴结转移者CK-19mRNA的阳性表达率增高，与无神经及脉管受侵或淋巴结转移者有显著差异（P〈0．05）。结论：CK-19mRNA的表达与神经及脉管受侵以及淋巴结转移有关，与激素受体及HER2表达无关。随着肿瘤分期的增高，微转移检出率将升高。     

外周血CK19 mRNA在乳腺癌治疗中的意义

目的 探讨乳腺癌患者外周静脉血CK19 mRNA检测对判断乳腺癌微转移的应用价值.方法 采用RT-PCR法检测110例乳腺癌及45例乳腺良性疾病患者外周血中CK19 mRNA,并比较乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性表达率与乳腺良性疾病患者的差异,以及不同分期及治疗前后乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性表达率的差异.结果 乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性表达率明显高于乳腺良性疾病者,Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者;乳腺癌患者治疗前CK19 mRNA阳性表达率明显高于治疗后;有淋巴结转移者CK19 mRNA阳性表达率明显高于无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 外周血CK19 mRNA检测可以预测乳腺癌发生的远处转移及微转移.     

早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性循环细胞检测及其临床意义

 目的　探讨早期乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性细胞检测的临床意义及其预后价值。方法　应用RT-PCR检测50例早期乳腺癌患者、24例良性乳腺病变患者及20名健康体检志愿者外周血有核细胞CK19 mRNA的表达,并根据基因标志物结果随访。结果　早期乳腺癌患者术后辅助治疗前外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率40.0 %（20／50）,与良性乳腺疾病患者[12.5 %（3／24）]及健康体检志愿者[5 %（1／20）]比较,差异均有统计学意义（P＝0.018,P＝0.004）;外周血有核细胞CK19 mRNA阳性率与患者年龄、月经状况、TNM分期、肿瘤大小、淋巴结转移状况、病理分化、激素受体状况、Her-2、血清CA153、血清CEA水平异常升高无关（P＞0.05）;20例外周血有核细胞CK19 mRNA阳性的患者中有11例随访期出现转移复发（P＝0.002）,中位无瘤生存期明显缩短（P＝0.007）。结论　CK19 mRNA可以作为循环肿瘤细胞基因标志物。检测CK19 mRNA阳性循环肿瘤细胞,可能作为早期乳腺癌术后判断复发转移的辅助指标。     

CK19和hMAM及SBEM检测乳腺癌微转移价值分析

目的：探讨生物学标志乳腺上皮小黏蛋白（smallbreastepithelialmucin,SBEM）、乳腺珠蛋白（humanmamma—globin,hMAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin19,CK19）检测乳腺癌外周血及淋巴结微转移的临床应用价值。方法：收集2012-04—13—2012-10—10广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科首诊的患者外周血及组织标本。采用巢式PCR技术对47例乳腺癌患者和45例乳腺良性肿瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的mRNA进行检测;采用半定量PCR技术对10例乳腺癌组织及对应的癌旁组织,以及10例乳腺良性肿瘤患者组织mRMA进行检测;采用免疫组化技术对其中27例乳腺癌患者的109个淋巴结进行检测。结果：乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血SBEM表达率分别为82．98％（39／47）和62．22％（28／45）,χ2=5．005,P=0．021;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血hMAM表达率分别为65．96％（31／47）和42．22％（19／45）,差异有统计学意义,χ2=5．220,P=0．022;乳腺癌和乳腺良性肿瘤患者的外周血CK19表达率分别为89．36％（42／47）和80．00％（36／45）,差异无统计学意义,χ2=1．562,P=0．211。免疫组化CK19在52个转移性淋巴结中强阳性表达,在57个常规病理检查未发现的转移性淋巴结中检出5个淋巴结存在转移灶;hMAM及SBEM在转移性淋巴结中表达比CK19弱,而且阳性细胞染色不均一。结论：SBEM、hMAM和CK19作为乳腺癌外周血微转移生物学标志具有较高的灵敏性,但缺乏特异性,联合检测可以提高特异性,对发现早期乳腺癌微转移有一定临床意义;CK19可用于检测乳腺癌腋窝淋巴结的微小转移灶。     

大肠癌患者外周血CK19和MUC-1 mRNA水平及其临床意义

目的 探讨大肠癌（CRC）患者外周血中角蛋白（CK）19、黏蛋白（MUC）-1 mRNA水平并分析两者与临床病理特征的关系。方法 采用巢式逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测20例健康体检者（健康组）、20例大肠良性腺瘤患者（良性疾病组）及90例CRC患者（CRC组）的外周血CK19和MUC-1 mRNA水平,并分析两者与CRC临床病理参数（Dukes分期、分化程度、远处转移及组织学类型）的关系。结果CRC组CK19 mRNA阳性率为58.9％（53／90）,均高于健康组的0和良性疾病组的5.0％（1／20）,差异有统计学意义（P＜0.05）;CRC组MUC-1 mRNA阳性率为52.2％（47／90）,与健康组的60.0％（12／20）和良性疾病组的50.0％（10／20）比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;健康组和良性疾病组CK19 mRNA、MUC-1 mRNA阳性率的差异无统计学意义（P＞0.05）。CRC中CK19 mRNA和MUC-1 mRNA阳性率均与Dukes分期、分化程度及远处转移有关（P＜0.05）,但与组织学类型无关（P＞0.05）。 结论 CRC患者外周血中CK19 mRNA阳性率明显升高,且外周血中CK19mRNA、MUC-1 mRNA与Dukes分期、分化程度及远处转移有关,提示两者可能在CRC发生发展中均有重要意义。     

转移性乳腺癌循环肿瘤细胞的上皮间质转化水平对化疗疗效的预测意义

目的 检测转移性乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞（CTCs）不同亚型相关基因的表达,探讨其对化疗疗效的预测意义。方法 应用免疫磁性分选（MACS）技术联合逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR）法检测58例转移性乳腺癌患者和10例健康人外周血中CTCs上皮型标志物上皮角蛋白（CK18、CK19）和间质型标志物（波形蛋白、纤连蛋白）mRNA的表达。分析上皮型标志物及间质型标志物表达与不同亚型乳腺癌之间的关系,并分别评估具有不同表型CTCs患者之间疗效的差异。结果 在10例健康志愿者的血液样本中,未检测出CK18、CK19、波形蛋白和纤连蛋白mRNA的表达。在58例转移性乳腺癌患者的血液样本中,检测出36例（62.1％）上皮角蛋白表达,19例（32.8％）间质型标志物表达。Luminal A组和HER-2阳性组的上皮型标志物阳性表达率高于三阴性乳腺癌组（P=0.008）,而间质型标志物阳性表达率则低于三阴性乳腺癌组（P＜0.001）。根据不同标志物的表达情况,将患者分为CKs+／EMT-组、CKs-／EMT-组、CKs+／EMT+组和CKs-／EMT+组,4组有效率依次为76.7％、55.6％、33.3％和15.4％,差异有统计学意义（P=0.002）。间质型标志物阴性者的化疗有效率高于间质型标志物阳性者（71.8% vs. 15.8%,P=0.000）。结论 转移性乳腺癌患者中部分CTCs将发生上皮间质转化而丢失上皮型细胞的表型,获得间质型细胞表型。间质型CTCs因具有更强的抵抗化疗药物的能力而存活,这可能是三阴性乳腺癌疗效不佳的原因之一。     

细胞角蛋白19mRNA在非小细胞肺癌外周血中的表达及其对微转移的临床意义

目的通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血CK19 mRNA的表达,探讨其对外周血微转移的意义。方法 NSCLC患者170例,肺良性疾病患者20例和健康志愿者20例作为对照,均在治疗前抽取外周血,通过RT-PCR法检测CK19 mRNA的表达,结合随访资料和生存时间进行分析。结果 NSCLC患者的CK19 mRNA阳性率为46.5%(79/170),对照组为5%(2/40),差异有统计学意义(P<0.01)。外周血CK19 mRNA阳性患者的远处转移发生率为32.4%(24/74),高于阴性患者的发生率(17.1%,14/82;P<0.05)。全组无瘤生存时间为37个月,外周血CK19 mRNA阳性组和阴性组的无瘤生存时间分别为30个月和45个月(P=0.003)。结论 CK19 mRNA是一种检测NSCLC外周血微转移的较好方法,对判断病程发展和指导临床治疗具有重要意义,是预测复发转移和预后不良的辅助指标。     

检测细胞角蛋白在食管癌外周血和骨髓微转移中的意义

目的：探讨食管癌患者外周血和骨髓中CK18mRNA基因表达及临床意义。方法：采用巢式RT—PCR方法检测50例M0、10例M0的食管癌患者及10例食管良I生病变患者外周血及肋骨骨髓中细胞角蛋白CK18mRNA基因的表达。结果：50例M0食管癌患者外周血、骨髓中CK18mRNA阳性表达率分别为38．0％（19／50）和42．0％（21／50）;10例M,的食管癌患者外周血、骨髓中CK18mRNA阳性表达率分别为90．0％（9／10）、100％（10／10）;食管良性病变患者的外周血和骨髓中K18mRNA阳性表达率均为0％（0／10）,CK18mRNA阳性表达在三组间差异有显著性（P〈0．01）。CK18mRNA在Ⅳ期食管癌患者外周血和骨髓中阳性表达率与III期以前患者相比,有显著性差异（P〈0．05）。CK18mRNA在外周血和骨髓中表达无差异（P〉0．05）,但呈正相关性（r=0．704,P〈0．01）。结论：应用RT—PCR法检测食管癌患者外周血或骨髓中CK18mRNA微转移有助于食管癌的分期和预后的判断。     

联合检测乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19及人乳腺球蛋白mRNA的意义

目的通过检测分析乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)及人乳腺球蛋白(human mammaglobin,hMAM)mRNA表达,探讨其作为判断乳腺癌的相关指标。方法应用荧光定量PCR(Fluorescence Quantification-Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)技术对40例乳腺癌患者及10名健康志愿者外周血中CK19及hMAM mRNA的表达进行测定。运用χ2检验和Fisher确切概率法对各组间差别进行统计学分析;乳腺癌患者CK19和hMAM表达相关性分析采用Kappa检验。结果乳腺癌患者中CK19和hMAM阳性率分别为52.5%(21/40)和55%(22/40),均显著高于正常对照组(CK19阳性为1/10,hMAM均为阴性)(P0.050)。乳腺癌患者CK19和hMAM阳性表达具有相关性(Kappa=0.849,P=0.000)。CK19阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移和PR有密切关系(P0.050),与ER、HER-2无关;hMAM阳性表达与肿瘤大小、淋巴结转移、ER、HER-2有关(P0.050),与PR无关。结论联合检测乳腺肿瘤患者外周血中CK19及hMAM应用于临床动态监测,可起到帮助临床诊断的作用。     

食管癌放疗患者外周血CK19mRNA检测的临床意义

背景与目的肿瘤细胞在侵袭转移的早期阶段就可能进入血液循环,本研究检测食管癌根治性放疗前后外周血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)标记细胞角蛋白19(Cytokeratin 19,CK19)mRNA的表达,探讨其临床意义。方法收集72例食管癌患者根治性放疗前后外周血,应用巢式RT-PCR检测CK19 mRNA的表达,分析其与临床病理特征及两年无进展生存(progerssion-free survival,PFS)的关系。结果放疗前后CK19 mRNA阳性者分别占44.4%(32/72)与30.6%(22/72),差别无统计学意义(P=0.085)。放疗前后CK19 mRNA阳性与淋巴结转移相关(P值分别为0.037和0.031)。生存分析也表明放疗前后CK19 mRNA阳性与不良PFS有关(P值分别为0.040和0.001),Cox回归模型则进一步证实放疗后CK19 mRNA阳性是独立预后指标。结论放疗后外周血CK19 mRNA阳性可望成为食管癌根治性放疗预后判断的有效分子标记。     

肺癌患者外周血CK19mRNA与微转移的实验研究

目的：检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CK19mRNA的表达情况,探讨其诊断NSCLC外周血微转移的临床意义。方法：选取初治NSCLC患者40例及健康志愿者50例,用实时荧光定量RT—PCR方法检测外周血CK19mRNA,相对定量分析结果。结果：肺癌组与健康对照组CK19mRNA阳性表达率分别为72．5％（29／40）、14．0％（7／50）,差异显著（P〈0．05）;相对表达量分别为1．69±0．44、0．28±0．12,有显著差异（P〈0．05）。阳性表达率与原发肿瘤部位、原发肿瘤大小、临床分期、分化程度及病理类型无相关性;相对表达量在中央型、T3＋T4、Ⅲ期＋Ⅳ期及低分化患者数值较高,但不具有统计学意义,鳞癌患者高于腺癌,且有显著差异（P〈0．05）。结论：CK19mRNA作为Real—time RT—PCR法检测NSCLC外周血微转移的分子标记物,具有一定临床应用价值,但特异性仍需提高,应进一步扩大样本进行研究及随访。相对定量分析是一种值得推荐、准确简便的荧光实时相对定量方法。