应用PAP免疫组化染色法观察输精管结扎16—28月家兔的睾丸组织学变化

日本大耳白雄兔16只，行双侧输精管结扎手术。术后16、22、28个月处死动物，睾丸切片HE染色光镜匀,细精管恢复正常的成精过程，各级精细胞形态无明显异常，并可见灶状分布的萎缩曲细精管，被结缔组织包绕，有淋巴细胞和浆细胞浸润，PAP染色显示，恢复正常生精过程的曲细精管均阴性染色，萎缩的曲细精管与基底膜呈阳性染色。提示输精管结扎术后曲细精管萎缩与免疫损伤有关。     

基础理论

050434　衰老对小鼠睾丸结构和精子发生的影响 /陈秋菊…∥生殖与避孕 —2004, 24 ( 6 ) —326 ~329昆明小鼠分为 18月龄老龄组 15只和 6月龄青年对照组 15只,取睾丸称重,H·E染色,观察睾丸组织结构,计数萎缩曲细精管的比例,定量分析睾丸精子发生的状态。结果:老龄小鼠睾丸有部分曲细精管萎缩,多为局灶性,管内生精细胞减少,生精阻滞常发生在初级精母细胞阶段,或有生精细胞脱落至管腔。老龄组萎缩管的比例高于对照组 (P<0 01)。定量分析显示老龄组曲细精管横截面内球形精子细胞和延长精子细胞与支持细胞的比例均显著低于对照组 (P<0 01 ),…     

经输精管向附睾内注射甲酸棉酚的抗生育研究

对72只Wistar大鼠经输精管向附睾内注射甲酸棉酚,观察附睾中精子数量、形态、移动距离和附睾、睾丸的组织学改变。结果:注射12h后精子移动距离缩短,24h后精子计数下降,组织学观察见附睾管呈无精状态,睾丸曲细精管各级生精细胞出现变性等损伤性改变,精母细胞脱落入曲细精管管腔,注射甲酸棉酚后2～40d内交配的雌鼠全部不孕。     

氩离子激光凝堵输精管后睾丸附睾的形态学观察

对氩离子（Ａｒ＾＋）激光凝堵输精管后不同时期的睾丸和附睾做了形态学观察，发现在术后半月，无论在肉眼和镜下睾丸和附睾均无明显变化，术后１个月，附睾出现淤积现象２～３个月后，睾丸肉眼形态无明显改变，镜下睾丸部分曲细精管生精细胞萎缩，肉眼观附睾体积增大，镜下输出小管和附睾管扩张，个别标志间质内有精子性肉芽肿形成；术后６个月或更长时间，睾丸和附睾的变化基本同前，提示氩离子激光凝堵输精管后，部分睾丸生精细胞     

输精管再通术后的复孕问题

输精管再通术后复孕率不高,其原因还不十分清楚,可能与输精管再通的技术、再通术后精子的质量、吻合口梗阻或附睾梗阻、精道梗阻的时间、精子肉芽肿、支配输精管附睾的神经损伤、精子抗体、原输精管阻断的技术以及配偶的生育力等因素有关。现分述如下。 一、输精管再通的技术:输精管睾丸吻合法偶有成功;常规输精管附睾吻合法效果差,复精率为2～10%,最高仅达50%;显微输精管附睾管吻合法效果较好,复精率为86%,恢复正常精子数者达79%;输精管吻合法效果肯定,方法甚多,效果不同。     

复方明矾液对狗睾丸生精作用的影响

本实验应用复方明矾液进行狗双侧输精管注射,经4、6、8周,输精管局部发生炎症反应,腔内发现有结缔组织包裹的精子肉芽肿.睾丸曲细精管的生精上皮只1—2—3层,除精原细胞外,精母细胞及精子细胞均发生变化,并出现数量不等的多核巨细胞.     

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为探讨输精管结扎对睾丸曲细精管生精细胞凋亡程度的影响，应用流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术，检测大鼠输精管结扎和假手术后２～１２周睾丸生精细胞的凋亡情况。结果：流式细胞仪检测发现结扎组的亚单倍体峰增高，亚单倍体细胞百分率升高；ＴＵＮＥＬ法则显示结扎后总的生精细胞凋亡数较假手术后明显增加（Ｐ＜０．００１）。结扎后不同时间组与同期假手术组比较，２周、６周、１０周组精原细胞和初级精母细胞凋亡数前者均高于后者（Ｐ均＜０．０５），１２周组精原细胞凋亡数前者高于后者（Ｐ＜０．０５）。结果表明输精管结扎会导致生精细胞凋亡增加。     

雷公藤多甙对雄性大鼠生精细胞及其LDH-C_4活性的影响

用HE染色、免疫组织化学及聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳(PAGE)等技术,观察了服用雷公藤多甙(GTW)的雄性大鼠睾丸的细胞形态学与生精细胞中乳酸脱氢酶同工酶C_4(LDH-C_4)的活性变化。结果表明,大鼠服药每日30mg/kg,35d时部分曲细精管上皮已出现异常,60d,睾丸生殖上皮发生退行性变,并见大量多核巨细胞;80d,除支持细胞外,生精细胞几乎全部消失,但间质细胞高度增生。PAGE结果显示服药后,睾丸LDH—C_4含量下降,免疫组化染色曲细精管中残留的生精细胞、多核巨细胞及畸形精子的LDH-C_4仍呈阳性反应。服药35d,与雌鼠合笼,未孕。结果提示GTW具有抗生精作用,但不影响生精细胞合成LDH-C_4。     

长吻海蛇Pelamis platurus(Linnaeus)生殖周期的初步研究

长吻海蛇雄性曲细精管于8月已有生精现象发生,大部分为精母细胞,也有一些精细胞和精子。9月生精功能活跃,产生大量成熟精子。11月生精细胞出现退化现象,生精功能趋缓减弱。精子贮藏于输精管内过冬,供翌年春季交配之用。雌性每年5～6月排卵受精并开始胚胎发育,当年11～12月产仔,每胎仔数1～5条。     

睾丸高表达蛋白质HSD-14对小鼠精子发生的影响

目的 研究睾丸高表达基因HSD-14及其编码蛋白质对小鼠精子发生的影响.方法 利用本实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD-14基因.纯化原核表达的HSD-14蛋白,并制备兔多克隆抗体.通过HE染色观察腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后小鼠睾丸组织的生精变化,并进行TUNEL凋亡检测.结果 电子克隆获得HSD-14基因,在原核表达系统中表达成功.小鼠腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后,均发现曲细精管中生精细胞大量脱落,生精细胞的层次紊乱,管腔内有时可见成团脱落的生精细胞,附睾中几乎观察不到成熟精子.TUNEL凋亡检测结果表明,抗体注射组小鼠曲细精管中生精细胞(以精母细胞为主)凋亡程度较正常小鼠睾丸和免疫前血清注射组明显,且多数细胞停留在精母细胞甚至精原细胞的阶段.结论 HSD-14通过诱导精母细胞凋亡抑制小鼠精子发生.     

白消安诱导小鼠无精子症模型

目的 采用白消安诱导建立小鼠无精子症模型。方法 采用腹腔内单次注射白消安(40mg／kg)，对白消安的毒性、模型的形态学变化，小鼠的生育能力以及免疫功能进行了观察。结果 白消安单次注射可造成半数的小鼠死亡，用药后4周，睾丸曲细精管呈唯支持细胞样表现，3个月有20％的曲细精管恢复生精，存活小鼠中半数小鼠的生育力正常，模型小鼠的免疫学功能正常。结论 该小鼠无精症模型用作生精干细胞移植的受体模型是可行的。     

睾酮致成人精子发生抑制不伴有明显的生精细胞排列疏松

目的确定庚酸睾酮致人精子发生抑制是否伴有生精细胞排列疏松。方法10名正常已生育男性,5人接受庚酸睾酮肌注(200 mg/周)19-24周(睾酮组),5人未作处理(对照组)。取睾丸活检组织块,作甲基丙烯酸树脂包埋切片,观察睾丸的组织学变化。结果与对照组相比,睾酮组的生精小管萎缩,精子发生障碍,长形精子细胞滞留。在两个组的多数生精小管轮廓中,均见有生精细胞团突入生精小管腔,但在两个组均未见生精细胞之间出现明显的裂隙。结论外源性睾酮致成人精子发生抑制,不伴有明显的生精细胞排列疏松。     

Rad18打靶小鼠模型遗传稳定性分析

  目的探讨RAD18在维持遗传稳定性中的作用。方法对Rad18-/-小鼠模型进行生育力检测。观察不同月龄Rad18-/-雄小鼠睾丸质量、结构以及精子发生和形态的变化。结果Rad18-/-小鼠具有生育能力,但随着年龄增加睾丸质量和生育力下降。组织学检测显示Rad18-/-小鼠睾丸的生精小管有正常的精子发生,睾丸特异性tH2B分布正常。但在12月龄时,25%的生精小管中仅残留已分化的生殖细胞,缺失精原细胞,并且附睾中的精子形态无异常。结论含有精原干细胞的精原细胞耗尽导致了Rad18-/-小鼠随年龄增加而生育力下降。     

Rictor/mTORC2调节小鼠睾丸血睾屏障与精子发生

目的 研究Rictor/mTORC2在睾丸血睾屏障形成、睾丸发育和精子发生中的作用及相关机制.方法 采用Cre-loxP重组酶系统,构建睾丸支持细胞中rictor基因敲除小鼠.比较敲除鼠和对照鼠的生殖器官外观和质量.HE染色观察睾丸和附睾的组织形态.采用流式细胞技术检测生精小管的细胞周期.采用免疫荧光技术检测增殖蛋白(Ki-67)和分离酶蛋白的表达.采用免疫组化和Western blot技术检测血睾屏障相关蛋白表达.结果 相比对照鼠,敲除鼠的睾丸和附睾体积和重量都明显变小(P<0.01);敲除鼠的生精细胞中二倍体细胞显著上升(P<0.01),单倍体细胞显著下降(P<0.01),而四倍体细胞、Ki-67和分离酶蛋白无显著差异;血睾屏障相关蛋白出现严重的位置错乱,而蛋白表达量不受影响.结论 睾丸支持细胞中rictor基因的正常表达,在血睾屏障结构完整性维持和功能发挥以及精子正常发生中起着至关重要作用.     

基因重组细胞生长肽和精氨酸拮抗环孢霉素A的睾丸毒性

目的 探讨基因重组细胞生长肽（bFGF)和精氨酸对环孢霉素A（CsA)在血和睾丸中药物浓度及其睾丸毒性的影响。方法 将80只大鼠随机分为4组：N组,正常对照组;A组,CsA;B组,CsA 精氨酸;C组,CsA bFGF。每天腹腔注射给药,连续3周后取血及睾丸测定CsA浓度,按抗精子发生效应积分评定法作生精功能的评价,测定曲细精管直径及作病理学检查。结果 血药浓度B组明显高于A组（P＜0．05）;A,B,C组睾丸的发生明显障碍,而B,C组比A组的精子发生障碍要轻（P＜0．05）,曲细精管的直径A,B、C组明显小于N组（P＜）．05）,但B组大于A组（P＜0．01）。结论 CsA影响睾丸的生精功能,精氨酸和bFGF能明显降低CsA对睾丸的毒性作用,精氨酸还能提高血中CsA的浓度。     

壬基酚对成年雄性SD大鼠生殖功能的影响

目的 研究壬基酚对SD雄性大鼠生殖功能的影响。方法 将成年雄性SD大鼠经口染毒壬基酚（50，100，200mg/kg)28d后，处死，测定生殖功能相关指标，并作睾丸组织病理学检查。取成年雄性大鼠睾丸细胞进行体外培养，壬基酚染毒，测定睾丸酚分泌量的变化，并对其间质细胞，支持细胞的生精细胞的超微结构进行电镜观察。结果 经口染毒壬基酚剂量≥100mg/kg可引起大鼠精子计数和活力的显著降低，睾丸组织病理学切片显示曲精管萎缩，生精能力下降。睾丸细胞体外培养研究显示，壬基酚能抑制睾酮的分泌，且电镜观察可见间质细胞内质网肿胀，表明合成功能减弱。结论 壬基酚在高浓度时能明显损伤雄性大鼠的生殖功能。     

减数分裂特异基因sycp_1在小鼠精母细胞中的表达

目的 检测减数分裂基因sycp1在小鼠精子发生过程中的特异表达及其蛋白产物在小鼠精母细胞中的定位.方法 利用半定量RT-PCR技术分析了sycp1基因在1,2,3,5,8周龄小鼠睾丸发育过程中的阶段特异性表达,以及脑、心脏、肺、肝脏、肾脏、脾、胸腺和睾丸中的组织特异性表达;采用免疫组织化学染色方法检测了SYCP1在小鼠曲细精管中的细胞定位;通过间接免疫荧光染色初步显示了SYCP1在粗线期精母细胞中的分布.结果 RT-PCR分析证实sycp1 mRNA具有明显的组织特异性和阶段特异性表达特征;免疫组织化学染色结果显示,SYCP1只存在于减数分裂期的精母细胞核内;间接免疫荧光分析表明SYCP1在粗线期精母细胞核内的分布与核染色体的分布相一致.结论 SyCp1为减数分裂特异基因,其编码蛋白在雄性小鼠精母细胞核内的表达与SC的形成和成熟同步,参与了同源染色体之间的联会和重组.     

切除精索上神经诱发大鼠生殖细胞凋亡的研究

目的：探讨精索上神经对精子发生的调控作用。方法：SD大鼠分为实验组和假手术组，实验组分离并切除睾丸精索上神经，假手术组分离但不切除该神经，运用光镜和电镜观察睾丸组织病理学变化；脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测生殖细胞凋亡。结果：切除精索上神经导致生精上皮萎缩、生精功能退化，电镜下生殖细胞内染色质出现浓缩、断裂等改变，TUNEL进一步显示切除精索上神经诱发精原细胞和间质细胞大量凋亡。结论：精索上神经参与对精子发生的调控，其对于生精过程的正常进行是不可缺少的。     

小白鼠生精上皮周期的形成

在小白鼠生后第1天到第56天,根据细胞核及精细胞顶体的形态变化,分别观察睾丸生精上皮周期的形成。结果表明,小白鼠在生后第1天睾丸的生精上皮由原始生殖细胞和支持细胞组成。生后7天出现精原细胞。生后14天出现分裂前期的初级精母细胞。生后21天出现发育早期的精细胞。生后35天少数曲细精管内出现了成熟精子,生精上皮周期已经形成,并与成鼠一样,生精上皮周期由12种时相组成。     

Immunolocalization of Epidermal Growth Factor in Human Fetal, Adult and Cryptorchid Testes and Seminoma

EGF was localized in human fetal, adult and eryptorchid testis and seminoma using an immunohistoehemical method. Leydig cells of adult testes stained intensely for EGF while those of fetal testes showed weak staining reaction. In addition, some spermatogonia and occasional peritubular myoid cells of adult testis stained positively. In cryptorchid testis, there were clusters of Leydig cells interspersed between seminiferous tubules with varying staining intensities. The number of positiuely stained cells in the cryptorchid testis were fewer than that in adult testes. The decrease in the number of Leydig cells pruducing EGF may account for the spermatogenesis arrest and infertility, associated with this disorder.Intense staining of the cytoplasm of seminoma cells was obserued, suggesting that the high production of EGF may be related to their invasive property. In conclusion, EGF is produced by human testis and Leydig cells are the principal source of this cytokine.