核小体结合蛋白调控CXCR4抑制前列腺癌PC-3细胞的侵袭作用

目的 探讨抑制人核小体结合蛋白1(NSBP1)基因后抑制非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3侵袭能力的作用机制.方法 通过慢病毒lentivirus-NSBP1转染非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3后,MTT法观察细胞活性变化,Transwell实验观察细胞侵袭能力的变化,应用Western-blot技术检测NSBP1、CXCR4蛋白的变化情况.结果 抑制NSBP1表达水平后非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3细胞活性降低,侵袭能力降低,同时伴有CXCR4蛋白的表达降低.结论 通过慢病毒转染抑制NSBP1的表达可以抑制非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3的侵袭能力,NSBP1可能是通过调控CXCR4蛋白的变化影响细胞侵袭能力的.     

核小体结合蛋白1在膀胱癌中的表达和意义

目的通过检测核小体结合蛋白1（NSBP1）在膀胱癌组织和正常黏膜组织中的表达,探讨其与膀胱癌发生、发展的关系。方法采用逆转录PCR检测NSPB1在20例膀胱癌组织和正常黏膜组织中RNA水平的表达差异,采用免疫组织化学染色方法检测NSBP1在80例膀胱癌组织和正常黏膜组织中的表达差异,采用Western blot方法检测NSBP1在20例膀胱癌组织和正常黏膜组织中的蛋白表达差异。用配对t检验比较两种组织的逆转录PCR和Western blot的结果,用卡方检验比较两种组织免疫组织化学染色阳性率的差异。用Spearman相关性分析验证免疫组织化学结果与膀胱癌病理分期和组织学分级之间的关系。结果在膀胱癌组织和正常黏膜组织中,NSBP1的mRNA平均相对表达量分别为0.555±0.146和0.411±0.111（t=5.647,P〈0.01）。膀胱癌组织的免疫组织化学染色的阳性率、弱阳性率和阴性率分别为58.8%（47/80）、26.2%（21/80）和15.0%（12/80）,正常膀胱黏膜组织染色均为阴性,两种组织的染色阳性率存在明显差异（χ^2=66.55,P〈0.01）。Western blot提示两种组织中NSBP1蛋白的相对表达量分别为0.127±0.044和0.089±0.019（t=5.615,P〈0.01）。Spearman相关性分析显示NSBP1的表达与膀胱癌的病理分期及组织学分级存在正相关（P〈0.01）。结论NSBP1在膀胱癌中高表达,其表达与膀胱癌的病理分期、组织学分级呈正相关,可能参与了膀胱癌的发生与发展过程。     

抑制核小体结合蛋白对人膀胱癌细胞增殖的影响

目的探讨核小体结合蛋白（NSBPI）对人膀胱癌细胞增殖的影响。方法采用脂质体转染法将NSBP1基因转入膀胱癌EJ细胞系,分别通过CCK8、流式细胞仪、Real—TimePCR及Westernblot法观察EJ细胞的增殖,细胞周期时相的分布、凋亡以及CyclinDl、CyclinBl、Bcl-2蛋白的表达。结果Real．TimePCR及Western blot结果显示经转染后EJ细胞的NSBPl显著地受到抑制（P〈0．01）。CCK8结果提示EJ细胞转染后随着时间的延长,抑制率越大（P〈0．01）。流式细胞仪检测发现,经转染干预后EJ细胞G2期比例增加（P〈0．01）,而凋亡细胞并没有显著变化（P〉0．05）。Western blot结果再次验证周期蛋白CyclinBl显著下调（P〈0．05）,而CyclinD1没有统计学意义（P〉0．05）,凋亡蛋白Bcl-2也没有统计学意义（P〉0．05）。结论NSBPl是通过调控周期蛋白CyclinB1进而阻断或延缓细胞周期,而非通过细胞凋亡抑制膀胱癌细胞增殖。NSBPl在膀胱癌细胞增殖中起着重要作用。     

增殖诱导配体基因短发夹RNA慢病毒表达载体的构建

目的 构建针对人的增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)基因的短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)慢病毒表达载体,并在感染293T细胞后检测病毒滴度及适合的感染复数(multiplicity of infection,MOI)值.方法 以人APRIL基因为靶点,筛选出3条shRNA靶序列:shAPRIL1210、shAPRIL1754、shAPRIL1604;各自合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA后分别与经酶切的pGEL-GFP载体连接,构建3个慢病毒表达载体LV-shAPRIL1210、LV-shAPRIL1754、LV-shAPRIL1604;将连接产物分别转化到DH5α感受态细胞,经PCR及DNA测序鉴定.再用LV-shAPRIL与包装质粒pHelper 1.0、pHelper 2.0共转染293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞绿色荧光蛋白的表达水平确定病毒滴度及适合的MOI值.结果 PCR和测序结果与构建的3个慢病毒载体LV-shAPRIL1210、LV-shAPRIL1754、LV-shAPRIL1604的预期结果一致,经包装产生的慢病毒滴度分别为5×107、6×107、4×107转导单位(TU)/ml;适合高效感染的MOI值为5.结论 成功构建人APRIL基因3个慢病毒表达载体LV-shAPRIL,为后继的在相关靶细胞中诱导特异性的APRIL基因沉默奠定基础.     

抑制人BI-1基因表达shRNA重组慢病毒表达载体的构建

背景: 慢病毒介导的RNAi技术以其专一性、抑制效率高、作用持久等优点已广泛应用于基因功能研究中.该技术病毒包装、转染、以及shRNA序列设计都会对抑制效率产生影响.因此实验以人的Bax抑制子1 (BI-1)为目的基因进行RNA干扰实验来探讨其影响因素.目的:为了利用慢病毒Lentivirus介导的RNAi技术寻找抑制人BI-1基因表达的siRNA.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-09/2008-12在北京大学医学部基础医学院医学遗传学系完成.材料:293T细胞、SH-SY5Y细胞为实验室保存;用Ambion公司(www.ambion.com)提供的网络在线工具设计了4个shRNA.方法:构建带有绿色荧光蛋白(EGFP)标签的、针对人BI-1基因不同区域设计的shRNA重组表达载体,然后与包装蛋白表达载体共转染293T细胞以包装成4种shRNA病毒粒子.通过流式细胞仪检测GFP的表达情况来摸索最佳包装条件.Real-time PCR以β-肌动蛋白mRNA被用作内参,将4种重组病毒和对照组病毒上清液侵染SH-SY5Y,检测内源性BI-1基因的敲低效率,筛选到最佳RNAi有效序列.主要观察指标:被不同包装病毒侵染的细胞内GFP的表达率.结果:pLentiLox3.7、rev、vsvg、rre等4质粒包装系统的最佳包装比例为2∶1:1∶1,包装48 h收获的病毒粒子的感染效率最高,并且在包装后的24 h之后换液会提高包装效率.靶定到人BI-1基因-2-17核苷酸(起始编码区域)的shRNA RNA干扰效率最高.能够抑制40%正常基因表达.结论:实验摸索出Lentivirus介导的RNAi技术病毒包装的重要影响因素.为建立稳定的人BI-1基因表达敲低的神经细胞模型和研究BI-1异常表达参与的神经元凋亡疾病的病理研究打下基础.     

Jagged1RNA干扰慢病毒载体抑制舌癌Cal-27细胞增殖、侵袭作用的研究

目的:观察Jagged1RNA干扰慢病毒载体抑制舌癌Cal-27细胞增殖、侵袭作用.方法:采用RTPCR和Western Blot检测Jagged1 siRNA对Cal-27细胞Jagged1基因和蛋白表达水平的敲减效果;克隆形成实验检测干扰后细胞群体依赖性和增殖能力;流式细胞仪检测细胞周期的变化;Tranwell检测RNA干扰后侵袭率变化.结果:KD组较NC组Jagged1基因和蛋白表达受到明显的敲减.KD组细胞克隆形成率明显降低,较NC组下降42.42％.S期细胞比率均明显下调,约62.98％,G1期细胞比率上调,凋亡率明显增高.72 hKD细胞生长抑制率为32.50％.Jagged1 RNAi慢病毒载体感染后,KD组侵袭率无下降.结论:下调Jagged1基因和蛋白的表达,可使舌癌细胞克隆形成率明显降低、增殖活性降低、S期细胞比率下降、凋亡率升高、成瘤能力下降.     

SGK1基因沉默对人前列腺癌细胞生长的抑制作用

目的探究糖皮质激素诱导蛋白激酶1(serum and glucocorticoid-inducible kinase 1,SGK1)基因沉默对人前列腺癌细胞生长抑制的作用。方法选取人前列腺癌PC-3细胞,将RNAi重组质粒(PSGK1-RNAi)通过脂质体转染至PC-3细胞,再用G418筛选稳定转染的SGK1基因沉默的PC-3细胞作为SGK1基因沉默组,并将正常培育的PC-3细胞和空质粒稳定转染的PC-3细胞分别作为阴性对照组与阳性对照组。检测培育48 h、72 h、96 h的细胞增殖能力,计算培育48 h的不同细胞周期表达水平和细胞凋亡情况。结果培育48 h、72 h及96 h,三组PC-3细胞水平差异有统计学意义(P 0. 05);与SGK1基因沉默组比较,培育48 h、72 h及96 h的阳性对照组、阴性对照组PC-3细胞水平升高,差异具有统计学意义(P 0. 05)。三组G1期和S期细胞所占比例比较差异有统计学意义(P 0. 01);与SGK1基因沉默组比较,阳性对照组、阴性对照组G1期细胞所占比例下降,S期细胞所占比例升高,差异具有统计学意义(P 0. 01)。三组PC-3细胞凋亡率比较差异有统计学意义(P 0. 01);与SGK1基因沉默组比较,阳性对照组、阴性对照组细胞凋亡率下降,差异有统计学意义(P 0. 001)。结论 SGK1基因沉默能抑制PC-3细胞增殖,诱发PC-3细胞凋亡,可作为基因治疗前列腺癌的有效靶点。     

特异性小干扰RNA靶向沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨RNA干扰沉默RIP1基因表达对人大肠癌Lovo细胞生物学行为的影响。方法将人大肠癌【刖。细胞常规分为空白对照、阴性对照组和实验转染组。体外化学合成RIP1基因序列特异性小干扰RNA（siRNA）,Hegene介导转染人大肠癌细胞株Lovo细胞;采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测特异性siRNA对RIP1基因在mRNA水平上沉默效果;转染后采用噻唑蓝（MrI’r）比色法检测siRNA对细胞增殖的影响;流式细胞周期法检测siRNA对细胞周期的影响;Transwell试验体外检测细胞迁移和侵袭能力。结果成功转染RIP1siRNA的大肠癌Lovo细胞,RT-PCR显示RIP1mRNA和蛋白表达在相应的癌细胞中明显下降;与阴性对照组比较,细胞增殖明显抑制（P〈0．05）;GO～G1期细胞[（54．68±1．54）％]明显多于阴性对照组[（48．48±1．96）％]和空白对照组[（43．92±1．68）％];RNA干扰明显抑制Lovo细胞迁移力和侵袭力（21±2．731掷．43±2．064）。结论RIP1siRNA可有效抑制大肠癌Lovo细胞RIP1基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖。促进细胞凋亡,抑制细胞迁移和侵袭,RIP1siRNA能有效调控Lovo细胞恶性生物学行为。     

siRNA沉默Slug基因抑制体外胰腺癌AsPC l细胞生长的实验研究

有研究发现Slug在恶性肿瘤中过度表达,并与肿瘤的发生、发展,患者预后有关[1].最近发现,S1ug是PUMA的强烈抑制基因,而PUMA是促凋亡基因.本文旨在研究S1ug基因沉默后对胰腺癌AsPC 1细胞的增殖和凋亡的影响,探讨胰腺癌基因治疗的新靶点.     

核转运蛋白2慢病毒RNA干扰载体的构建及鉴定

目的探索构建针对人类核转运蛋白2(KPNA2)基因的重组慢病毒干扰RNA(sh RNA)载体的方法,研究其对人骨肉瘤细胞株MG63的沉默效率。方法针对KPNA2基因设计小片段干扰序列。加入AgeⅠ酶和Eco RⅠ酶酶切位点,根据设计好的序列合成单链DNA oligo并退火合成双链DNA oligo。将合成好的双链DNA oligo与GV115载体重组,形成GV115-sh RNA慢病毒载体。聚合酶链式反应(PCR)法鉴定筛选出阳性重组子,经测序后包装慢病毒载体。荧光法测定病毒滴度,重组慢病毒感染骨肉瘤细胞株MG63,通过显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达来计算其转染效率。RT-PCR法检测重组慢病毒RNA干扰载体对人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2表达的沉默效率。实验结果数据以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS 13.0统计软件分析,两组均数间的比较采用t检验,以P<0.05为差异有统计意义。结果经PCR分析和测序证实,成功构建KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体;荧光法测定病毒滴度为4×108 TU/ml;荧光显微镜下观察GFP,显示细胞感染效率达到80%以上;RT-PCR检测对照组及实验组KPNA2 m RNA表达分别为0.991±0.087 vs.0.216±0.012,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 KPNA2基因重组慢病毒RNA干扰载体构建成功,并有效干扰人骨肉瘤细胞株MG63中KPNA2 m RNA的表达。     

利用siRNA靶向沉默Jeko-1细胞survivin mRNA基因的实验研究

本研究旨在探讨Survivin基因在淋巴瘤细胞中的生物学作用,为将来以Survivin为靶点治疗套细胞淋巴瘤提供实验室证据。体外化学合成针对survivin mRNA基因的siRNA片段,通过DMRIE-C转染Jeko-1细胞,以无关siRNA、未转染的细胞为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测siRNA的抑制效果,利用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用CCK-8法检测转染24、48、72 h对细胞增殖的影响。结果表明,与未转染的空白组相比,siRNA转染Jeko-1细胞后24、48、72 h survivin mRNA的相对表达量分别为0.49±0.03、0.38±0.02和0.17±0.02;细胞增殖抑制率分别为(31.2±2.1)%、(43.3±3.4)%和(52.6±2.5)%;细胞凋亡率分别为(6.3±0.5)%、(13.5±1.1)%和(23.6±1.6)%;survivin蛋白表达水平逐步减低。结论:靶向survivin的siRNA能在体外特异性下调目的基因survivin mRNA和蛋白的表达,表现出抑制Jeko-1细胞增殖和促使其凋亡的生物学效应,survivin基因有望成为淋巴瘤治疗的一个药物靶点。     

Reversal of multidrug resistance by small interfering RNA (siRNA) in doxorubicin-resistant MCF-7 breast cancer cells

Purpose

Resistance to anticancer drugs is a serious obstacle to cancer chemotherapy. A common form of multidrug resistance (MDR) is caused by the overexpression of transmembrane transporter proteins P-glycoprotein (P-gp) and multidrug resistance-associated protein-1 (MRP1), encoded by MDR1 and MRP1 genes, respectively. These proteins lead to reduced intracellular drug concentration and decreased cytotoxicity by means of their ability to pump the drugs out of the cells. Breast cancer tumor resistance is mainly associated with overexpression of P-gp/MDR1. Although some chemical MDR modulators aim to overcome MDR by interfering functioning of P-gp, their toxicities limit their usage in clinics. Consequently, RNA interference mediated sequence specific inhibition of the expression of P-gp/MDR1 mRNA may be an efficient tool to reverse MDR phenotype and increase the success of chemotherapy. Aim of this study was resensitizing doxorubicin-resistant breast cancer cells to anticancer agent doxorubicin by selective downregulation of P-gp/MDR1 mRNA.

Methods

The effect of the selected MDR1 siRNA, and MRP1 expression after MDR1 silencing was determined by qPCR analysis. Intracellular drug accumulation and localization was investigated by confocal laser scanning microscopy after treatment with MDR1 siRNA. XTT cell proliferation assay was performed to determine the effect of MDR1 silencing on doxorubicin sensitivity.

Results

The results demonstrated that approximately 90% gene silencing occurred by the selected siRNA targeting MDR1 mRNA. However, the level of MRP1 mRNA did not change after MDR1 downregulation. Silencing of P-gp encoding MDR1 gene resulted in almost complete restoration of the intracellular doxorubicin accumulation and relocalization of the drug in the nuclei. Introduction of siRNA resulted in about 70% resensitization to doxorubicin.

Conclusions

Selected siRNA duplex was shown to effectively inhibit MDR1 gene expression, restore doxorubicin accumulation and localization, and enhance chemosensitivity of resistant cells, which makes it a suitable candidate for therapeutic applications.     

Intravesical administration of small interfering RNA targeting PLK-1 successfully prevents the growth of bladder cancer

The mainstay in the management of invasive bladder cancer continues to be radical cystectomy. With regard to improvement of quality of life, however, therapies that preserve the bladder are desirable. We investigated the use of intravesical PLK-1 small interfering RNA (siRNA) against bladder cancer. Patients with bladder cancers expressing high levels of PLK-1 have a poor prognosis compared with patients with low expression. Using siRNA/cationic liposomes, the expression of endogenous PLK-1 could be suppressed in bladder cancer cells in a time- and dose-dependent manner. As a consequence, PLK-1 functions were disrupted. Inhibition of bipolar spindle formation, accumulation of cyclin B1, reduced cell proliferation, and induction of apoptosis were observed. In order to determine the efficacy of the siRNA/liposomes in vivo, we established an orthotopic mouse model using a LUC-labeled bladder cancer cell line, UM-UC-3(LUC). PLK-1 siRNA was successfully transfected into the cells, reduced PLK-1 expression, and prevented the growth of bladder cancer in this mouse model. This is the first demonstration, to our knowledge, of inhibition of cancer growth in the murine bladder by intravesical siRNA/cationic liposomes. We believe intravesical siRNA instillation against bladder cancer will be useful as a therapeutic tool.     

RNA干扰沉默急性白血病细胞SUV39H1基因表达的实验研究

目的 应用小干扰RNA(siRNA)干扰人急性髓系白血病细胞株KG-1细胞SUV39H1(suppressor of variegation 3-9 homolog 1)基因的表达,研究SUV39H1基因沉默对KG-1细胞增殖、抑癌基因p15表达及组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点.方法 用LipofectamineTM2000将体外合成针对SUV39H1基因的siRNA片段转染到KG-1细胞后,采用RT-PCR方法检测siRNA对SUV39H1 mRNA表达的抑制效果,用四唑氮化合物(MTS)法绘制细胞增殖抑制曲线,Western blot法检测目的 基因SUV39H1和抑癌基因p15的表达及对组蛋白甲基化、乙酰化修饰的影响.结果 SUV39H1 siRNA转染KG-1细胞可沉默该基因;沉默SUV39H1基因表达可抑制细胞增殖,30、60、120、240 nmol/L SUV39H1 siRNA转染48 h后,KG-1细胞的增殖抑制率分别为(23.57±1.98)%、(48.69±1.84)%、(62.69±1.61)%、(81.06±3.22)%,差异有统计学意义(P<0.05);沉默SUV39H1基因可上调p15基因的表达,下调组蛋白H3K9三甲基化,上调组蛋白H3K9、H3的乙酰化.30、60、120 nmol/L SUV39H1 siRNA处理KG-1细胞48 h后,组蛋白H3K9三甲基化水平较对照组分别减少25%、33%、49%;组蛋白H3K9乙酰化水平增强,分别为对照组的1.83、2.16、3.07倍;组蛋白H3乙酰化水平逐渐升高为对照组的1.35、1.87、2.37倍;p15表达水平呈递增趋势,分别为对照组的1.52、2.89、3.08倍;而组蛋白H4、H3K14、H3K27的乙酰化水平未见显著变化.结论 沉默SUV39H1基因表达可能通过改变抑癌基因启动子区域的组蛋白修饰,即上调组蛋白H3K9乙酰化及下调H3K9甲基化,使p15基因重新表达,从而抑制细胞增殖.     

Bmi-1 shRNA慢病毒表达载体的构建及稳转U266细胞株的建立

本研究构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立U266-li稳定细胞株,为下一步Bmi-1的功能研究及应用RNAi技术治疗打下基础。设计、合成1对针对Bmi-1 mRNA的shRNA序列,退火后连接到pLVTHM干扰载体上,与psPAX2、PMD2G共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染U266细胞,建立稳定细胞株;应用实时PCR和Western blot技术分别检测U266稳定细胞中Bmi-1及P14 mRNA和蛋白水平的表达,并与对照组进行比较。结果表明,成功构建了针对Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,病毒滴度为5×107 TU/ml;建立稳定转染的U266细胞株。有效干扰验证显示,shBmi-1能明显降低Bmi-1的mRNA及蛋白水平,而P14的mRNA及蛋白水平则都上调,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建Bmi-1基因的shRNA慢病毒表达载体,建立稳定干扰Bmi-1表达的U266细胞株。     

长链非编码RNA ZFAS1在非小细胞肺癌患者组织中表达及作用

目的检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中锌指结构反义转录本1(zinc finger antisense 1,ZFAS1)表达水平,探讨ZFAS1在NSCLC进展中的生物学作用。方法实时荧光定量RT-PCR检测ZFAS1在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中的表达水平。RNA干扰ZFAS1在A549细胞中表达,细胞计数和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式分析检测细胞周期和细胞凋亡,Transwell迁移和基质胶侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量RT-PCR检测Cyclin D1、Bcl2、N-cadherin、ZEB1、Slug和Twist基因表达水平变化。结果 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中的平均表达水平[0.01(0.002,0.054)]较癌旁组织[0.002(0.001,0.012)]明显升高(Z=-2.638,P0.01)。ZFAS1基因敲减后,A549细胞增殖能力明显减弱(P0.01);A549细胞周期G1期比例升高,S期比例下降(P0.01);A549细胞凋亡比例明显增加(P0.01);A549细胞迁移和侵袭能力明显下降(P均0.01);A549细胞中Cyclin D1、Bcl2、N-cadherin、ZEB1、Slug和Twist基因表达水平均降低(P均0.05)。结论 ZFAS1在NSCLC患者癌组织中呈高表达。ZFAS1基因敲减诱导细胞周期阻滞、凋亡和抑制上皮-间质转变(EMT),减弱NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

Knockdown of c-Met by adenovirus-delivered small interfering RNA inhibits hepatocellular carcinoma growth in vitro and in vivo

c-Met is highly expressed and constitutively activated in various human tumors. We employed adenovirus-mediated RNA interference technique to knock down c-Met expression in hepatocellular carcinoma cells and observed its effects on hepatocellular carcinoma cell growth in vitro and in vivo. Among the five hepatocellular carcinoma and one normal human liver cell lines we analyzed, c-Met was highly expressed and constitutively tyrosine phosphorylated in only MHCC97-L and HCCLM3 hepatocellular carcinoma cells. Knockdown of c-Met could inhibit MHCC97-L cells proliferation by arresting cells at G0-G1 phase. Soft agar colony formation assay indicated that the colony forming ability of MHCC97-L cells decreased by approximately 70% after adenovirus AdH1-small interfering RNA (siRNA)/met infection. In vivo experiments showed that adenovirus AdH1-siRNA/met inhibited the tumorigenicity of MHCC97-L cells and significantly suppressed tumor growth when injected directly into tumors. These results suggest that knockdown of c-Met by adenovirus-delivered siRNA may be a potential therapeutic strategy for treatment of hepatocellular carcinoma in which c-Met is overexpressed.     

Survivin siRNA沉默对非小细胞肺癌细胞生物学的影响

目的探讨凋亡抑制蛋白(Survivin)对非小细胞肺癌(NSCLC)H1299细胞株的生物学影响。方法通过脂质体介导将Survivin基因siRNA瞬时转染H1299细胞。采用RT-PCR及Western blot检测转染后H1299细胞内Survivin基因的表达水平。MTT比色法、流式细胞术(FCM)及Western blot观察细胞增殖、凋亡、周期及Caspase-9蛋白表达变化情况。结果 RT-PCR及Western blot证实,siRNA沉默的H1299细胞中Survivin mRNA、蛋白的表达水平较未转染组明显降低(t=10.970,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。MTT、细胞凋亡及周期结果表明,siRNA沉默的H1299细胞其增殖能力明显减弱、细胞凋亡明显升高,G2/M期阻滞,Caspase-9蛋白表达增加(t=8.162,P=0.001;t=10.800,P=0.000;t=9.192,P=0.003)。结论 Survivin参与NSCLC细胞增殖、凋亡、周期这一生物学过程。