树突状细胞疫苗抗肿瘤免疫研究进展

树突状细胞(dendritic cell,DC)生物学功能的进一步研究显示了其在免疫系统中的关键作用,也为以DC为基础的肿瘤免疫疗法提供了理论依据。但DC疫苗还处于初级阶段,近年来,已经发现了许多扩增DC及其负载抗原的方法,使DC疫苗在肿瘤患者身上开始临床研究成为可能。本文就DC疫苗的临床应用及进展做一综述。     

转输树突状细胞疫苗免疫脾淋巴细胞对小鼠骨髓瘤的继承性免疫 …

研究树突在瘤苗免疫小鼠淋巴细胞对实验性骨髓瘤的继承性免疫预防与治疗治疗的作用。方法先前用骨髓ＤＣ作为佐剂,研制了ＤＣ与肿瘤细胞的融合瘤苗,以及用灭活肿瘤细胞及其裂解产物体外脉冲的ＤＣ疫苗,并成功地诱导宿主产生抗肿瘤的免疫保护性反应,且对荷瘤动物具有免疫治疗作用。     

肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞表位多抗原肽负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究

目的研究肝素酶(heparanase,Hpa)细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位多抗原肽(multi-ple antigen peptides,MAP)疫苗能否诱导更强的Hpa特异性CTL反应。方法 HLA-A2.1限制性肝素酶CTL表位多抗原肽负载正常人外周血来源(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)树突状细胞(dendritic cell,DC),诱导CTL,采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应;采用ELISPOT实验检测效应细胞分泌IFN-γ的能力。结果肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的CTL对Hpa阳性且HLA-A2.1匹配的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大效应细胞/靶细胞(effector/target,E/T)时高出率均大于16%;其对HLA-A2.1阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但是对MCF-7/Hpa乳腺癌细胞和HepG2/HLA-A2肝癌细胞具有杀伤效应,且其杀伤效应强于相应的单肽,在最大E/T时高出率均大于18%;其对自体淋巴细胞和DC不具有杀伤效应。另一方面人肝素酶CTL表位MAP疫苗诱导的IFN-γ分泌水平强于相应的单肽。结论肝素酶CTL表位MAP疫苗能激发较相应单肽更强的特异性和非特异性抗肿瘤效应。     

OVA基因修饰的树突状细胞疫苗抗裸鼠肺肿瘤效应研究

目的 探讨OVA基因修饰的树突状细胞疫苗(DC-OVA)在肿瘤模拟抗原OVA(ovabumin)的裸鼠肺癌模型体内抗肺肿瘤的效应。方法 裸鼠右肺原位接种携带OVA的Lewis肺癌细胞(Lewis lung cancer cell-OVA, LLC-OVA)悬液,建立裸鼠肺癌模型。获取DC,经基因转导制备DC-OVA疫苗。Western 印迹法检测OVA蛋白的表达。获取T细胞,进而制备DC疫苗系统(DC-OVA/T)。CCK8试剂检测DC-OVA刺激后T细胞的增殖。模型建立2周后,尾静脉注射DC-OVA/T。Micro-CT扫描荷瘤裸鼠的胸部,观察肺部影像。H-E染色观察肺部及肿瘤组织形态结构。IHC方法观察脾、淋巴结、肿瘤组织中CD8的表达;观察肿瘤组织中SOX2、BMI1的表达。ELISA法检测血清中IL-12水平。结果 Western印迹法在样本中检测出清晰的OVA条带。DC-OVA强有效地刺激了T细胞的增殖(P<0.05)。DC-OVA/T治疗4周,疫苗组裸鼠肺micro-CT未见明显肿瘤阴影;取材,裸眼可见疫苗组病灶减小,H-E染色显示疫苗组的肿瘤组织较少,肺组织形态较完整。疫苗组裸鼠的脾、淋巴结、肿瘤组织内CD8阳性表达均明显高于对照组(P<0.05,P<0.05,P<0.01),肿瘤组织中的SOX2、BMI1阳性表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.05);血清中的IL-12含量较对照组明显升高(P<0.001)。结论 基因修饰的DC疫苗在裸鼠体内具有强大的抗肺癌效应,为临床治疗肺癌提供了新的实验依据。     

树突状细胞肿瘤疫苗的研究进展

树突状细胞(DC)是目前发现功能最强的专职抗原呈递细胞(APC)，DC疫苗的开发研制尚处于早期阶段，但已获得的大量有价值的实验数据可以表明，DC在启动抗肿瘤免疫的抗原呈递中发挥出强大的功能。DC体外培养的方法渐趋成熟，提高DC生物学功效的手段多彩纷呈，日益增多的临床研究工作推动着该领域的迅速发展。作者就DC肿瘤疫苗制备方法及其在临床试验中的应用作一综述，并提出该免疫治疗中尚存在的一些问题。     

小干扰RNA抑制胃癌细胞肝素酶表达及侵袭的实验研究

目的 利用RNA干扰（RNAi）技术封闭胃癌细胞系SGC7901肝素酶表达,观察其对肿瘤细胞侵袭能力的影响。方法 体外转录合成小干扰RNA（siRNA）,经脂质体转染胃癌细胞系;结合逆转录（RT）-PCR,Western印迹检测类肝素酶mRNA及蛋白质表达;通过体外侵袭实验评价肝素酶RNAi后胃癌细胞系的侵袭能力变化。结果 肝素酶siRNA分子可以特异性地抑制SGC7901细胞肝素酶mRNA,抑制率达（70±6）％;肝素酶RNAi后SGC7901细胞的侵袭抑制率达（61±36）％。结论 靶向肝素酶基因的siRNA分子能特异性抑制其蛋白表达水平,降低肿瘤细胞的侵袭能力。肝素酶是促进胃癌细胞侵袭转移的关键分子,并可为抑制胃癌侵袭转移提供新策略。     

树突状细胞肿瘤疫苗治疗恶性肿瘤的研究进展

肿瘤的免疫治疗是肿瘤学研究的热点,并被称为继手术、化疗、放疗之后的第4种治疗模式,随着对树突状细胞(DCs)在抗肿瘤免疫中所起中心作用的认识的加深,以及体外大量培养DCs方法的建立,以DCs为平台的肿瘤免疫治疗受到广泛关注。在体外制备负载肿瘤抗原的肿瘤特异性的DCs肿瘤疫苗,再注射回体内以激发机体产生主动性抗肿瘤免疫反应,是具有良好前景的生物治疗方案,目前已应用多种肿瘤的临床治疗。     

肿瘤抗原脉冲致敏的树突状细胞疫苗抗肿瘤作用的实验研究

进一步研究体外肿瘤抗原脉冲致敏的骨髓树突状细胞瘤苗主动免疫诱导小鼠体内抗肿瘤免疫应答，并观察其抵抗野生性肿瘤攻南听免疫保护作用及对荷瘤小鼠模型的免疫应答。方法采用本室建立的骨髓树状细胞分离与细胞因子体外扩增培养方法，并在体外经灭活ＮＳ１骨髓瘤细胞及其裂解产物脉冲刺激后直接作为疫功苗。     

树突状细胞疫苗与肿瘤免疫

抗原脉冲的树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌ，ＤＣ）的潜能和新颖的肿瘤靶的鉴定，重新激起对恶性肿瘤治疗型疫苗的研究兴趣，已成为许多研究课题的热点。本文综述ＤＣ在肿瘤免疫治疗中的开发应用。１引言人体免疫系统具有抵御恶性细胞失控制性生长的能力，其核心是...     

胃癌对老年患者骨密度的影响

目的评估骨质疏松和（或）骨量减少在老年胃癌患者中的发生率,寻找老年胃癌患者发生严重骨密度下降的主要因素。方法回顾分析经病理确诊为胃癌、行股骨及腰椎骨密度（BMD）检测的35例老年患者,并与同期住院、无胃癌等恶性肿瘤病史、行BMD检测的35例老年患者（对照组）比较。结果老年胃癌患者股骨及腰椎骨的BMD均明显低于对照组,组间比较有统计学差异（P〈0.05）;BMD与患胃癌年限呈显著负相关,与体质量指数呈显著正相关（P〈0.05）。结论胃癌可引起老年人骨量减少,提示在治疗胃癌的同时应加强对骨质疏松的防治。     

自体树突状细胞疫苗诱导胃癌患者术后肿瘤特异性免疫反应的作用

目的探讨胃癌术后患者应用树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗治疗后机体肿瘤特异性免疫反应的变化.方法采用外周血单个核细胞及自体肿瘤抗原在体外制备DCs疫苗,皮下注射胃癌术后患者,每周1次,共治疗4次.在治疗前后相应各时相点检测针对自体肿瘤抗原的迟发性超敏反应(delayed-type hypersensitivity,DTH),外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应(mixedlymphocyte reacion,MLR)及细胞上清IFN-γ及IL-4的水平.结果疫苗治疗后可以明提高外周血单个核细胞混合淋巴细胞反应的强度.治疗前及治疗后第2、4、8周患者外周血单核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)分泌IFN-γ的水平分别为(184±20)、(467±55)、(700±88)、(257±38)pg/ml,各组差异显著;而分泌IL-4的水平分别为(66±8)、(69±9)、(66±7)、(61±7)pg/ml.各组之间无明显变化.有16例疫苗注射后患者DTH反应呈阳性.结论树突状细胞疫苗可改善胃癌术后患者免疫功能状态,并诱导出了肿瘤特异性的免疫反应.     

胃癌组织中HSP_(70)基因高表达与癌变关系分析

目的 :探讨胃癌组织中 HSP70 基因高表达与癌变关系。方法 :采用人的 HSP70基因探针 P17与从胃癌患者手术切除组织中采取的癌组织、癌旁组织、正常组织分别提取的RNA进行 northern杂交。结果 :杂交信号的强度为癌组织 >癌旁组织 >正常组织。结论 :HSP70 基因在组织癌变过程中表达活性明显不同 ,热休克蛋白在癌组织中显示高表达。     

老年人胃癌的临床分析

目的探讨老年胃癌患者的临床表现、手术及预后特点。方法将我院干部病房收治的209例胃癌患者分为老年组（≥65岁）与非老年组（〈65岁）,对比两组的临床资料。结果老年组胃癌占63．2％,无症状者明显多于非老年组（23．5％比16．9％,P〈0．05）。老年组伴随病多于非老年组（81．8％比64．9％,P〈0．05）。两组手术切除率（90．9％比97．4%、根治性切除率为（73．5％比89．6%）、围手术期并发症率（14．4％比7．8％）、围手术期死亡率（3．0％比0％）有明显差异（P〈0．05）,5年生存率差异无统计学意义（59．7％比61．1％,P〉0．05）。多因素分析TNM分期和手术根治度是独立的预后影响因素（P〈0．05）。结论老年胃癌中无症状患者多见,伴随病多见,手术风险较非老年组大;老年胃癌预后与非老年患者无明显差别,其预后与TNM分期和手术根治度有关。     

负载NY-ESO-1多肽的树突状细胞激发特异性细胞毒性T淋巴细胞反应

目的:探讨以NY-ESO-1为靶抗原、树突状细胞(dendritic cell,DCs)为抗原载体激发特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTLs)反应的能力,以明确特异性CTLs的抗肿瘤免疫功能.方法:在临床前实验基础上选择2014年11月至2015年10月于中国医学科学院肿瘤医院治疗的符合入选标准的15例Ⅱ～Ⅲ期HLA-A0201+NY-ESO-1+胃癌患者外周血,分离单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocytes,PBLs),并诱导出成熟DCs (mature dendritic cell,mDCs);将人工合成的NY-ESO-1多肽负载mDCs后通过流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分析细胞表型,检测体外反复致敏PBLs后负载NY-ESO-1的DCs激发特异性CTLs的能力以及CTLs对NY-ESO-1+胃癌细胞的体外杀伤活性,同时患者回输CTLs细胞,每2周1次,共回输2次,检测回输前后患者外周血细胞因子和特异性CTLs水平变化.结果:采用FCM分析DCs细胞表型显示HLA-DR+ CD11c+细胞为93.6％±1.2％,其中CD80+细胞为87.3％±3.6％,CD83+细胞为82.8％±2.5％,CD86+细胞为93.4％±6.4％.患者外周血分离的PBLs经NY-ESO-1多肽负载的DCs反复诱导后,细胞不断增殖,其中未负载多肽的DCs也能促进PBLs增殖,但细胞增殖指数(proliferation index,PI)明显低于负载多肽的DCs,两者比较差异有统计学意义(P＜0.05).负载NY-ESO-1多肽DCs诱导的NY-ESO-1多肽特异性的CTLs比例较未负载NY-ESO-1多肽DCs诱导的对照组明显升高(5.2％±1.2％vs0.4％±0.1％,P＜0.05),且致敏后CTLs对NY-ESO-1+胃癌细胞及负载NY-ESO-1+多肽T2靶细胞的杀伤率明显高于对照组.输注CTLs细胞后,患者体内血清中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-12水平较治疗前显著升高[(132.9±10.2)μg/Lvs.(46.4±3.1)μg/L;(101.3±6.4) μg/Lvs.(26.7±1.2) μg/L;(51.3±2.6) μg/Lvs.(26.4±1.1) μg/L;P均＜0.05],且患者外周血特异性CTLs细胞比例明显升高.结论:负载NY-ESO-1多肽的DCs体内外均具有激发特异性CTLs反应的能力,可诱导明显的抗肿瘤免疫效应.     

MAGE-3抗原肽脉冲树突状细胞对小鼠胃癌移植瘤的免疫防护作用

目的观察MAGE3抗原肽脉冲的树突状细胞(DC/MAGE3)作为肿瘤疫苗抑制小鼠胃癌移植瘤生长的作用。方法检测了MAGE3抗原肽诱导出的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对小鼠前胃癌细胞株MFC细胞的杀伤活性。在免疫保护实验中先用DC/MAGE3(1×106个细胞/只)于小鼠皮下注射免疫两次,然后接种MFC细胞(5×105个细胞/只);在免疫治疗实验中先接种MFC细胞(5×105个细胞/只),然后在皮下注射DC/MAGE3(1×106个细胞/只)两次,并以感冒病毒核蛋白抗原肽脉冲的DC(DC/Nup)及空白DC作为对照,观察小鼠肿瘤的生长情况及其存活期并进行统计学处理。结果(1)MAGE3抗原肽诱导出的CTL细胞对MFC细胞有较高的杀伤活性;(2)在免疫保护实验和免疫治疗实验中DC/MAGE3可以明显地延缓肿瘤的生长,延长小鼠的生存时间(P<0.05)。结论MAGE3抗原肽脉冲的DC可通过加强抗原递呈激活肿瘤特异性CTL而具有明显的抗肿瘤活性。     

塞来昔布联合奥曲肽抑制胃癌转移的体内试验研究

目的探讨塞来昔布联合奥曲肽能否抑制人胃癌细胞转移。方法75例胃癌患者被随机分为3组,每组25例。(1)对照组:术前不用任何抗肿瘤药物。(2)塞来昔布组:术前口服塞来昔布200mg/d,7d。(3)联合组:术前口服塞来昔布200mg/d(7d)+奥曲肽100μg/d(皮下注射7d)。免疫组化显示胃癌上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)及基质金属蛋白酶(MMP)的表达,免疫印迹法定量检测胃癌组织MMP-2及MMP-9蛋白表达。术后胃癌组织经消化、免疫磁珠分离而得原代胃癌细胞,用改良的BodyenChamber膜侵袭系统比较3组术后胃癌细胞运动能力。结果胃癌组织E-Cad异常表达率在联合组(28·0%)及塞来昔布组(44·0%)明显低于对照组(56·0%,P<0·05)。3组MMP-2、MMP-9蛋白条带面积光密度积分值分别为99±20、260±15、314±11及89±13、180±13、241±12,联合组及塞来昔布组也都明显低于对照组(P<0·05)。联合组胃癌细胞迁移力较对照组低了38%(P<0·05)。结论塞来昔布联合奥曲肽有助于抑制胃癌细胞在人体内的转移。