1株中国人HCV—2a型基因组部分cDNA序列的种系发生树分析

用反转录套式PCR（RT－PCR）法从陕西地区1例NANB型肝炎患者血清中扩增出部分E区的cDNA片段,克隆于PGEM－T载体中用全自动序列分析仪进行双向测序,测得的序列以及已发表的同一分离株5′NRC、C区序列,分别同Genbank中注册的36株已知基因型的HCV相应区段的序列比较,构建种系发生树。结果：5′NCR区相应序列构建的种系发生树表明该分离株为2型,而用C驱和E区构建的种系发生树均表明该分离株为2a型,提示该分离株为2a型;对同一病原体来说,其基因区段的变异度不同,则种系发生树分析的结果不完全相同,变异度大的结果较准确。     

丙型肝炎病毒超变区的研究进展

不同来源分离的ＨＣＶ株，经氨基酸序列分析，在Ｅ２／ＮＳ１区的氨基端有一高度变异的超变区。本文就当前Ｅ２／ＮＳ１区中超变区的特征、功能及其生物学意义的研究进展作一综述。     

庚型肝炎病毒杭州株E2／NS1基因区的克隆及序列分析

目的 获得散发性庚型肝炎病毒杭州株E2／NS1区部分核酸序列。方法 选择1例浙江杭州散发性庚型肝炎患,从其血清中分离HGVRNA,通过逆转录套式聚合酶链反应（RT－nPCR)法,扩增该散发性HGV（HZ－2株）E2／NS1区部分cDNA片段,然后克隆到质粒pGEX-4T-3中,并进行核苷酸序列分析。结果 HGV杭州株与河北株（HGVC964、美国株）（HGU44402）的核苷酸同源性为92．5％和89．8％,氨基酸同源性为98．0％和93．9％。结论 该项研究将为HGV诊断试剂盒的研制及基因工程疫苗的研制提供资料。     

庚型肝炎病毒杭州株E_2/NS_1基因区的克隆及序列分析

目的　获得散发性庚型肝炎病毒杭州株E2 /NS1区部分核酸序列。方法　选择 1例浙江杭州散发性庚型肝炎患者 ,从其血清中分离HGVRNA ,通过逆转录套式聚合酶链反应(RT nPCR)法 ,扩增该散发性HGV(HZ 2株 )E2 /NS1区部分cDNA片段 ,然后克隆到质粒 pGEX 4T 3中 ,并进行核苷酸序列分析。结果　HGV杭州株与河北株 (HGVC96 4、美国株 )(HGU44 40 2 )的核苷酸同源性为 92 5 %和 89 8% ,氨基酸同源性为 98 0 %和 93 9%。结论　该项研究将为HGV诊断试剂盒的研制及基因工程疫苗的研制提供资料     

不同地区HCV感染病人同一基因型(1b)膜区(E2)序列比较和分析

用采自中国河南省、河北省及瑞典ＨＣＶ感染者的血清标本，研究不同地区ＨＣＶ感染病人同一基因型膜区基因变化。利用ＲＴ－ＰＣＲ对ＨＣＶ膜区基因扩增并测定序列。结果显示不同地区分离的同一基因型ＨＣＶ膜区序列各异，相同地域基因同源性较高。变化最大的区域是ＨＶＲ区，核苷酸变化导致了氨基酸序列改变，提示区域性变化可能是ＨＣＶ变异的一个重要方面。     

1株中国人HCV一2a型基因组部分cDNA序列的种系发生树分析

用反转录套式PCR(RT-PCR)法从陕西地区1例NANB型肝炎患者血清中扩增出部分E区的cDNA片段,克隆于PG-EM-T载体中用全自动序列分析仪进行双向测序,测得的序列以及已发表的同一分离株5＇NRC、C区序列,分别同Genbank中注册的36株已知基因型的HCV相应区段的序列比较,构建种系发生树.结果5＇NCR区相应序列构建的种系发生树表明该分离株为2型,而用C区和E区构建的种系发生树均表明该分离株为2a型.提示该分离株为2a型;对同一病原体来说,其基因区段的变异度不同,则种系发生树分析的结果不完全相同,变异度大的结果较准确.     

合并感染HIV对1b型HCV E2/NS1包膜区基因影响

目的研究人类免疫缺陷病毒(HIV)感染对1 b型丙型肝炎病毒(HCV)E2/NS1包膜区基因变异的影响,探讨2组间E2/NS1区基因序列同源性差异,为HCV/HIV合并感染者中HCV的治疗提供依据。方法对河南省某有偿献血村进行随访,将得到的所有HCV阳性病例255例根据合并HIV感染的情况分成2组,并对其基因分型,然后进行逆转录(RT)-巢式PCR扩增1 b型HCV E2/NS1包膜区基因,继而进行单链构象多态性分析(SSCP)、纯化后测序。结果 HCV单纯感染组和HIV/HCV合并感染组SSCP平均条带数分别为(3.4±0.55)、(2.6±0.55)条,差异有统计学意义(t=2.32,P=0.049);HCV单纯感染组和HIV/HCV合并感染组HCV E2/NS1包膜区同源性分别为76.7%和87.6%,差异有统计学意义(χ²=20.13,P<0.001);2组第一高变区(HVR-1)同源性分别为59.3%和81.9%,差异有统计学意义(χ²=10.39,P=0.001);2组第3高变区(HVR-3)同源性分别为71.7%和83.9%,差异有统计学意义(χ²=4.60,P=0.03);单纯HCV组中变异性较高的氨基酸位点在HCV/HIV合并感染组中表现出较高的保守性。结论 HIV感染对1b型HCV E2/NS1包膜区基因变异具有抑制作用,且其主要体现在HVR-1和HVR-3区。     

戊型肝炎病毒中国XT-179株系S蛋白基因组cDNA克隆及其免疫原性表位的血清学研究

本文报道对中国新疆东部一起戊型肝炎(HE)流行中2例HE患者粪便中分离到的HEV中国XT-179株系基因组进行cDNA分子克隆和其免疫原性表位的血清学研究结果。cDNA序列分析表明中国XT-179株与缅甸ET1.1株之间有94.3％的核苷酸和99.6％的氨基酸具有同源性。但也有5.7％的核苷酸区别于其他HEV地理株和散发株,提示在中国流行型HEV可能存在独特的基因型,可将此毒株序列作为鉴别HEV不同毒株的病毒学依据之一。本研究还按上述HEV地理株之间共有的免疫原性表位氨基酸序列合成了多肽抗原,用于检测来自中国XT-179株系流行区的29例HEV感染者和8例正常人血清抗-HEV,与应用HEV中国XT-179株系颗粒抗原相比,两组血清抗-HEV阳性和阴性的符合率分别为92.6％和100％。证实本项研究所克隆的HEV基因组可用于制备HEV重组基因疫苗和免疫诊断制剂。     

登革2型病毒B株E基因部分序列原核蛋白表达及单克隆抗体制备

目的 通过构建登革2型病毒B株E基因区1～476 bp的原核表达载体,进行原核表达,并制备单克隆抗体,为研制登革病毒诊断试剂奠定基础.方法 将登革2型病毒B株E基因序列克隆入原核表达载体pET28a(+),构建原核表达重组体pET28a(+)-E,将重组表达载体转化BL21(DE3)菌株进行原核表达.纯化后的蛋白免疫B...     

2型糖尿病肾功能衰竭患者血液透析丙型肝炎病毒感染的相关因素分析

目的探究2型糖尿病肾功能衰竭患者在血液透析中发生丙型肝炎病毒(HCV)感染的相关因素,以降低HCV感染率。方法选取2011年1月-2014年5月于医院行维持性血液透析治疗的76例2型糖尿病慢性肾功能衰竭患者的临床资料进行回顾性分析,采用logisitic回归分析HCV感染的危险因素。结果 76例2型糖尿病慢性肾衰竭患者中发生HCV感染31例,感染率为40.79%;单因素分析显示,血液透析持续时间、每周血液透析次数、输血史、透析设备破膜、行透析治疗医院数5个因素与行血液透析治疗的2型糖尿病肾功能衰竭患者发生HCV感染有关(P<0.05);多元回归分析显示,血液透析持续时间(OR=2.010)、透析设备破膜(OR=2.131)以及行透析治疗医院数(OR=2.980)等均是2型糖尿病肾功能衰竭患者在血液透析中发生HCV感染的独立影响因素(P<0.05)。结论行维持性血液透析治疗的2型糖尿病慢性肾功能衰竭患者的HCV感染率较高,与血液透析持续时间、透析设备破膜及行透析治疗医院数等因素密切相关。     

乙型肝炎病毒前C区变异患者血清Ⅳ型胶原/层粘连蛋白和一氧化氮的分析

目的：分析乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区基因变异在肝纤维化形成中的作用,探讨肝纤维化与一氧化氮的关系。方法：利用错配ＰＣＲ限制片段多态性分析,检测ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变,并检测慢性乙肝患者血清Ⅳ型胶原／层粘连蛋白（ＣⅣ／ＬＮ）和ＮＯ。结果：Ａ组３１例前Ｃ区变异或变异优势患者ＣⅣ（１２７．３５±２４．３３）μｇ／Ｌ,ＬＮ（１６９．１０±２８．２３）μｇ／Ｌ明显高于Ｂ组３０例无前Ｃ区基因变异患者ＣⅣ（８６．８４±１２．６６）μｇ／Ｌ,ＬＮ（９４．２０±１５．２９）μｇ／Ｌ（Ｐ＜０．００１）,且Ａ组ＮＯ－２／ＮＯ－３（４８．５５±４．０３）μｍｏｌ／Ｌ明显高于Ｂ组ＮＯ－２／ＮＯ－３（３６．６０±４．０２）μｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．００１）。结论：ＨＢＶ前Ｃ区变异与肝纤维化、肝硬化发生发展有关系,且血清ＮＯ随ＣⅣ和ＬＮ增高而增高。     

中药联合前列腺素E1治疗2型糖尿病早期肾病的分析

目的 探讨丹参穴位注射配合前列腺素E1治疗2型糖尿病早期肾病的效果.方法 80例2型糖尿病早期肾病病例根据治疗药物与方法的不同分为观察组与对照组各40例,两组都给予基础治疗与前列腺素E1治疗,在此基础上观察组给予中药丹参穴位注射治疗.结果 观察组总有效率为100.0 %,对照组总有效率为85.0 %,组间对比有明显差异（P〈0.05）.治疗后观察组24 h尿蛋白、BUN和SCr值明显高于对照组,对比差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 中药联合前列腺素E1干预有利于糖尿病早期肾病治疗效果的提高,同时改善肾功能,值得推广应用.     

登革2型病毒浙江分离株的鉴定与分子流行病学研究

目的 为了对2004年浙江省报告的输入性疑似登革热病例查明病因，从分子水平分析流行毒株的生物学特征，追踪传染源，为疾病的预防控制提供实验室依据。方法 对疑似患者血清标本采用ELISA、IFA和荧光RT—PCR方法分别检测登革病毒IgM、IgG抗体和病毒核酸，并用C6／36和BHK-21细胞分离登革病毒。采用RT—PCR方法扩增病毒E基因和NS1基因后分别进行序列测定，并与不同国家和地区的登革热毒株进行同源性和进化树分析。结果 从患者血清中检测到登革病毒IgM、IgG抗体和登革2型病毒核酸，并分离到登革2型病毒；浙江省登革2型病毒分离株（ZJ／01／04）与登革2型国际标准株Jamaica、国内Fujian／10／99株和Saudi／92株在E基因上氨基酸的同源性分别为97．1％、99．2％和99．6％，而与登革1、3、4型毒株相同区域氨基酸同源性分别为68．7％、66．9％和63．6％。基因进化树显示ZJ／OI／04分离株与Saudi／92株亲缘关系最近，在进化树的同一分支上。结论 从病原学、血清学和分子生物学特征上均证实该输入病例是由登革2型病毒引起，该毒株最有可能来源于沙特阿拉伯。     

外周静脉血中脂蛋白a与2型糖尿病患者勃起功能障碍的相关性分析

目的探讨外周静脉血脂蛋白a[LP(a)]与2型糖尿病勃起功能障碍(ED)的相关性,为糖尿病ED患者的治疗和预防提供理论依据。方法采用免疫透射比浊法测定31例2型糖尿病合并ED患者(ED组)和31例2型糖尿病未伴ED患者(对照组)的外周静脉血中LP(a)水平,并进行血脂和阴茎血流检测。采用Pearson相关分析LP(a)与阴茎海绵体动脉直径(CAD)、阴茎深动脉血流最大值(PSV)和国际勃起功能指数(IIEF-5)的关系。结果 ED组LP(a)及总胆固醇(TC)水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析结果显示,ED组LP(a)与PSV(r=-6.24)、CAD增粗的百分率(r=-8.20)、IIEF-5(r=-8.11)呈负相关(P<0.01)。结论 LP(a)是糖尿病患者发生ED的危险因素,可能通过造成阴茎海绵体动脉硬化导致ED的发生。     

血浆纤维蛋白原、脂蛋白a、D-二聚体与2型糖尿病合并心绞痛的相关性分析

目的探讨血浆纤维蛋白原、脂蛋白a、D-二聚体与2型糖尿病合并心绞痛的相关性。方法选择2015年6月~2018年12月青海省康复医院收治的2型糖尿病的患者157例,将存在冠状动脉狭窄的患者纳入A组共85例,将未合并心绞痛的患者纳入B组共72例,同时选择76例明确冠心病心绞痛诊断未合并糖尿病的患者纳入C组,同时期健康体检的正常健康人群80例纳入健康对照组,对比4组患者的血浆纤维蛋白原(FIB)、脂蛋白a[Lp(A)]、D-二聚体(D-D)水平。根据Gensini积分将A组和C组患者分为3个亚组,<30分组、30~60分组、>60分组,比较各组患者的基本资料,并对影响糖尿病患者合并心绞痛的危险因素进行logistic回归分析,采用Spearman相关性分析Gensini积分与FIB、D-D、Lp(A)水平的相关性。结果A组患者的FIB、Lp(A)、D-D水平显著高于其余3组,B组、C组的FIB、Lp(A)、D-D水平高于健康对照组,C组Lp(A)高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。经过单因素及多因素回归分析,糖化血红蛋白(HbA1c)、Lp(A)、D-D、FIB是影响糖尿病患者合并心绞痛的危险因素(P<0.05)。相关性分析结果,FIB、Lp(A)、D-D与Gensini评分呈正线性相关(r=0.426,0.382,0.315,P<005)。结论2型糖尿病合并心绞痛的患者的FIB、Lp(A)、D-D水平升高,并且高于单纯糖尿病和单纯冠心病患者。此外HbA1c也是影响糖尿病患者合并心绞痛的危险因素,对于2型糖尿病患者应关注其FIB、Lp(A)、D-D水平变化,预防冠心病发生。