乙型肝炎疫苗联合B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠抗HBsAg免疫应答的影响

目的:研究B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠免疫应答的影响,探索治疗慢性乙型肝炎的新方法。方法:用不同剂量的乙型肝炎疫苗和B7-H1蛋白疫苗联合免疫HBV转基因小鼠,应用ELISA法检测转基因小鼠在不同时间点血清抗B7-H1抗体滴度,同时在免疫后第14周末处死小鼠取脾细胞,检测不同的免疫方法对小鼠脾细胞产生HBsAg特异性Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)、对HBsAg特异性分泌IFN-γT细胞数量及对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果:成功完成小鼠的免疫计划,5周起血清中即能测到B7-H1抗体,同一时间点各组之间的抗体滴度值并无明显差异。加B7-H1蛋白免疫各组与相同剂量单用HBsAg蛋白免疫各组相比:IL-2均明显减低(P<0.05),分泌IFN-γT的T细胞数量下降,但脾淋巴细胞分泌IFN-γ的水平各组间无明显差异;MTT法测定的淋巴细胞增殖能力各组间也无明显变化。结论:B7-H1蛋白疫苗可诱导HBV转基因小鼠产生明显的抗B7-H1抗体应答,但不能增强抗HBsAg的免疫应答。较小剂量的HBsAg即可引起HBV转基因小鼠Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)的分泌以及淋巴细胞增殖。     

树突状细胞负载Tα146-162对实验性自身免疫性重症肌无力的治疗作用

目的研究不成熟髓源树突状细胞（iMDC）负载Tα146-162对实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）的治疗作用及其机制.方法Tα146-162负载于体外培养的iMDC,获得Tα146-162-iMDC.20只EAMG评分1～2分的C57BL/6小鼠随机分为治疗组和对照组.治疗组第0、7、14天皮下注射Tα146-162-iMDC,对照组则皮下注射1 ml PBS.对EAMG小鼠进行肌力评分,入组后第21天结束观察.3H-TdR掺入法检测淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测淋巴细胞培养液上清中IFN-γ、Ⅱ-6、TGF-β的含量.结果与对照组相比,治疗组平均临床评分和抗原特异性淋巴细胞增殖反应显著降低（P＜0.01）,淋巴细胞抗原特异性IFN-γ、IL-6分泌显著减少（P＜0.01）,TGF-β的分泌两组差异无统计学意义.结论Tα146-162-iMDC能改善EAMG发病小鼠的临床表现,其诱导免疫耐受可能与抗原特异性的抑制淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-6的分泌有关,TGF-β在耐受诱导中可能不发挥主要作用.     

B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠HBsAg免疫效果影响的初步研究

目的:应用HBV转基因小鼠动物模型,研究B7-H1对HBsAg免疫效果的影响.方法:用重组人B7-H1与血源性HBsAg联合免疫HBV转基因小鼠,采用ELISA方法观察对转基因小鼠所诱生的HBsAg特异性Th1类细胞因子的影响,ELISPOT方法检测不同免疫方案对小鼠HBsAg特异性分泌IFN-γ T细胞数量的影响,同时检测对小鼠淋巴细胞增殖及血清HBsAb水平的影响.结果:HBsAg组及HBsAg+B7-H1组免疫后脾细胞产生的Th1类细胞因子(IFN-γ、IL-2)、HBsAg特异性分泌IFN-γ T细胞、T细胞增殖及血清HBsAb水平较对照组显著增加(P<0.05),但HBsAg组及HBsAg+B7-H1组之间无显著性差异.结论:HBsAg可以诱导乙肝转基因小鼠产生高水平Th1类细胞因子,并诱导小鼠产生特异性的体液免疫,打破免疫耐受.B7-H1对HBsAg在HBV转基因小鼠中的免疫效果无影响.     

pBudCE4.1/PPE68DNA疫苗诱导Balb/c小鼠产生Th1免疫应答

目的构建结核分枝杆菌PPE68 DNA疫苗,并探讨其在小鼠体内诱导的Th1免疫应答。方法将结核分枝杆菌PPE68基因和复制子OriM基因亚克隆入真核表达质粒pBudCE4.1中构建穿梭质粒,并用其免疫Balb/c小鼠,于第3次免疫后2周处死小鼠,分别检测免疫小鼠血清IgG2a水平、IFN-γ和IL-12水平;特异性蛋白刺激后淋巴细胞增殖状态;小鼠肺、脾组织病理改变情况。结果 PPE68 DNA疫苗免疫小鼠后血清中的IgG2a水平、IFN-γ和IL-12均有意义的提高,脾淋巴细胞增殖显著。脾肺未见明显病理改变。结论 PPE68DNA疫苗可有效诱导小鼠Th1免疫应答,为进一步研究其抗MTB的免疫保护作用奠定了基础。     

铜绿假单胞菌重组Bb-OprF疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的研究

目的研究铜绿假单胞菌重组双歧杆菌(rBb)-OprF疫苗免疫小鼠,PAO1株攻击后产生的细胞免疫应答。方法将rBb-OprF疫苗分别采用皮下注射、肌肉注射、鼻腔黏膜和口服灌胃4种途径免疫Balb/c小鼠,免疫后8周用5×106CFU的PAO1株攻击,攻击1周后杀鼠取脾,MTT法检测特异性脾淋巴细胞增殖,流式细胞术检测脾CD4+T和CD8+T细胞比率,用ELISA法检测脾细胞培养上清IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10的水平。结果脾T淋巴细胞增殖明显;脾细胞CD4+和CD8+T细胞亚群显著增加;脾细胞培养上清IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10的水平显著升高,其中IFN-γ最为显著。结论铜绿假单胞菌rBb-OprF疫苗可诱导小鼠产生混合型的Th1和Th2免疫应答。     

口服Ⅱ型胶原蛋白对血清抗体和派氏集结细胞因子表达的影响

目的:探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(cⅡ)对派[伊尔]氏集结(PP结)的形态学、细胞因子表达水平和血清特异性IgG、IgA、IgM含量的影响.方法:连续10 d给小鼠口服不同剂量的CⅡ,第11天和第21天用佐剂或CⅡ进行免疫,分别于第11天、第21天和第31天采集血液和PP结.PP结经HE染色后,镜下观察其增生的情况.用荧光实时定量RT-PCR法,检测PP结中IL-17、TNF-α、IFN-γ和TGF-β1 mRNA 的水平.采用ELISA法检测血清抗CⅡIgG、IgA、IgM的水平.结果:口服CⅡ10 d后,PP结增生活跃,高剂量组可见清晰的帽状结构;血清中出现IgA,未见IgG和IgM水平增加;IL-17、TNF-α、IFN-γ mRNA的表达受到抑制.以CⅡ初次免疫后,实验组IgA、IgM、IL-17的水平均低于对照组(P＜0.05或P＜0.01),TGF-β1的水平显著增加(P＜0.05).以C Ⅱ加强免疫后,高剂量组IgA的水平显著增加(P＜0.05),实验组IgM的水平仍受到抑制(P＜0.05或P＜0.01),TGF-β1的水平高于对照组(P＜0.05).以佐剂免疫时PP结中细胞因子的表达与CⅡ免疫时相似,未见血清抗CⅡ IgG、IgA、IgM 水平的变化.结论:口服CⅡ能使血清中产生特异性IgA,抑制PP结IL-17、TNF-α、IFN-γ的基因表达,对CⅡ免疫后IgA、IgM的产生和IL-17 mRNA的表达具有一定的抑制作用.以上结果表明,血清特异性抗体的水平和细胞因子表达的变化在口服CⅡ诱导免疫耐受对类风湿性关节炎的治疗作用方面发挥着重要的作用.     

大肠杆菌麦芽糖结合蛋白（MBP）诱导小鼠Th1细胞的活化作用

目的:探讨MBP对小鼠T细胞的调节作用.方法:采用淋巴细胞分层液分离小鼠脾脏淋巴细胞,在体外用MBP刺激淋巴细胞,通过MTT法测定淋巴细胞增殖反应;ELISA检测脾细胞培养上清中细胞因子的分泌水平;MBP免疫小鼠后,ELSPOT检测MBP刺激脾淋巴细胞分泌IFN-γ的细胞频数;免疫组化检测MBP与T细胞的结合作用.结果:MBP以剂量依赖关系促进小鼠淋巴细胞的增殖,促进淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ,轻微抑制IL-4的分泌;ELSPOT检测细胞分泌IFN-γ结果显示,MBP可诱导特异性Th1活化,也可刺激非特异性Th1活化;免疫组化结果显示,抗MBP抗体可与经MBP刺激的淋巴细胞发生反应,阳性细胞占总淋巴细胞的37.7%,当MBP采用 1∶2 000抗MBP抗体中和后,再与淋巴细胞反应,结果未见阳性细胞.结论:MBP可作用于淋巴细胞诱导非特异性Th1活化,也可通过免疫诱导大量特异性Th1活化;MBP可作为新的免疫增强剂开发利用.     

Jagged-1对骨髓来源树突状细胞生成细胞因子的影响

目的:探讨可溶性Jagged-1/Fe嵌合蛋白(Jagged-1)对重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)产生细胞凶子的影响.方法:建立rmCM-CSF和rmIL-4体外诱导DC的模型,观察Jagged-1/Fc对DC分化的形态学影响.通过Luminex蛋白液相芯片技术和ELlSA检测其细胞因子的表达水平,藉MTT法测定可溶性Jagged-1/Fc诱导的DC对同种异基因淋巴细胞增殖的刺激能力.结果:除了TGF-β,Jag-ged-1/Fc诱导的DC与细菌脂多糖(LPS)或酵母聚糖A诱导的DC不同,表现为生成TNF-α的水平明显降低,IL-4显著增高,而IL-10、IL-6、IL-2、IL-12和IFN-γ的水平与对照组无明显差异.γ分泌酶抑制剂DAFT能逆转Jagged-1/Fc抑制DC生成TNF-α.混合淋巴细胞反应显示Jagged-1/Fc诱导的DC对T细胞增殖的刺激能力最弱,LPS诱导的DC的刺激能力最强.结论:Jagged-1/Fc诱导的DC倾向介导免疫耐受,指导初始T细胞向Th2细胞偏离.     

IL-12、IL-18基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导的免疫应答的影响

目的 研究IL-12、IL-18基因对HIV-1外膜蛋白基因疫苗诱导免疫应答的影响，以探求HIV-1核酸疫苗的新策略。方法 pVAX1GP120联合IL-12、IL-18基因或者pVAX1GP120单独免疫BALB／c小鼠，采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN-γ水平，以NIT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细脯增殖，用乳酸脱氢酶（LDH）试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞（CIL）的应答。结果 与pVAX1GP120免疫组比较，pVAX1GP120联合IL-12、IL-18基因免疫组小鼠血清的抗HIV-1 gp120抗体滴度升高，IFN-γ升高，小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数（SI）以及特异性CTL活性均高，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论 IL-12、IL-18基因联合HIV-1核酸疫苗免疫小鼠，有可能增强特异性TH1细胞和CTL反应，IL-12、IL-18基因对体液免疫可能有抑制作用。因此，IL-12、IL-18基因对于治疗性HIV-1核酸疫苗可能是具有较好应用前景的免疫佐剂。     

GM-CSF与TGF-β联合处理小鼠供体骨髓细胞诱导特异性免疫耐受

目的:观察用GM-CSF和TGF-β在体外处理供体骨髓细胞(BM)后,输给受体鼠,观察能否诱导受体鼠对供体鼠淋巴细胞的特异性耐受。方法:体外用GM-CSF与TGF-β联合处理供体BM细胞诱导非成熟树突状细胞(iDC),并检测其成熟度。将BALB/c受体鼠随机分为3组,进行不同的预处理:(1)BM预免疫组:经尾静脉输入体外诱导的iDC,1×105细胞/只;(2)脾细胞预免疫组:经尾静脉输入C57BL/6供体鼠脾细胞,1×105/只;(3)阴性对照组:经尾静脉输入同体积的PBS。每组小鼠均需经过2次预免疫,每次间隔1周。第2次处理后1周,所有组的小鼠均接受相同剂量的C57BL/6来源的脾细胞腹腔注射,1×105/只。脾细胞攻击后3d,检测各组小鼠对C57BL/6小鼠脾细胞的同种异体反应水平,检测指标包括:采用单向混合淋巴细胞培养方法检测受体鼠淋巴细胞对供体鼠淋巴细胞的增殖指数;采用双抗体夹心ELISA检测受体鼠血清中IFN-γ和IL-10水平、FCM检测脾脏CD4+CD25highTreg细胞含量、及NK细胞抑制性受体KLRG1的表达、采用乳酸脱氢酶释放法检测NK细胞杀伤功能。结果:经GM-CSF和TGF-β体外处理的供体BM细胞能够抵抗脂多糖(LPS)促成熟的作用;与脾细胞预免疫组相比,经此BM细胞预处理的小鼠,再次遭遇供体小鼠淋巴细胞时,血清IL-10的含量降低(P0.05)、脾脏中CD4+CD25highTreg细胞的比例明显升高、对C57BL/6小鼠淋巴细胞增殖反应减弱(P0.01);NK细胞杀伤率降低。结论:用GM-CSF与TGF-β联合处理供体小鼠BM细胞在一定程度上能够诱导小鼠对供体小鼠脾细胞的免疫耐受,除Treg外,NK细胞可能也参与了诱导免疫耐受。     

鼻黏膜诱导免疫耐受预防实验性自身免疫性脑脊髓炎机制的研究

目的：探讨鼻黏膜免疫耐受对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的预防机制以及与耐受原相关的剂量依赖性。方法：建立Lewis大鼠EAE模型，用不同种属和剂量髓鞘碱性蛋白（MBP）诱导免疫耐受，评估EAE临床发病情况；检测特异性淋巴细胞增殖反应ELISPOT检测特异性单个核细胞IFN-γ表达及原位杂交方法检测相关细胞因子的变化。结果：经鼻黏膜给予低剂量（30μg／rat）和高剂量（600μg／rat）特异性抗原可诱导免疫耐受，抑制EAE的发生。淋巴细胞增殖实验显示，高、低剂量耐受组与对照组相比均可抑制特异性淋巴细胞增殖反应（P〈0．001；P〈0．01）。ELISPOT结果表明，与对照组相比高、低剂量耐受组单个核细胞IFN-γ表达数量明显降低（P〈0．01；P〈0．001）。原位杂交结果显示，与对照组相比，低剂量组IL-4mRNA的表达水平明显增高（P〈0．001），高剂量组未见明显增高（P〉0．05）。结论：经鼻黏膜可诱导机体产生免疫耐受，预防EAE的发生。给予低剂量抗原可引起Th1／Th2分泌的细胞因子发生偏离，产生免疫耐受。     

可溶性Jagged1/Fc对DC-T细胞共培养中细胞因子表达的影响

目的:研究可溶性Jagged1/Fc对DC-T细胞共培养体系中TGF-β1、IL-10、IL-4、IL-2、IFN-γ及TNF-α表达水平的影响.方法:应用IL-4和GM-CSF诱导培养小鼠骨髓细胞,流式细胞术检测髓系树突状细胞(DC)分化标志CD11c;将等量的淋巴细胞与之共培养,ELISA检测共培养上清TGF-β1的含量,Luminex100检测IL-10、IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的含量.结果:可溶性Jagged1/Fc处理组TGF-β1和IL-10的水平与DAPT对照组之间无统计学意义(P>0.05),而IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平升高(P<0.05).结论:Jagged1/Fc能促进DC-T细胞相互作用导致IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平上调.     

热休克蛋白60口服耐受对小鼠动脉粥样硬化斑块的影响

目的:探讨热休克蛋白60(HSP60)口服诱导的免疫耐受对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块的影响.方法:8周龄ApoE-/-小鼠分别口服重组鼠HSP60 PBS溶液和单纯PBS,连续5天后高脂饲养12周.观察各组斑块面积;分析脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞百分比;脾细胞抗原特异性T细胞增殖反应,ELISA法检测上清液细胞因子浓度.结果:与对照组比较,口服HSP60组斑块面积显著减小,口服HSP60组脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞百分比显著升高(P<0.01).HSP60刺激脾细胞后,口服HSP60组T细胞增殖反应下降,上清液中TGF-β浓度显著升高,而IFN-γ显著下降.结论:口服HSP60可预防动脉粥样硬化形成;口服HSP60诱导调节性T细胞介导的抗原特异性免疫耐受可能是动脉粥样硬化的机制.     

PD-L1-GPI分子膜表面修饰胰岛细胞抑制反应性T细胞的攻击

目的： 构建PD-L1表达腺病毒载体,研究其对反应性T细胞的免疫抑制效应,以探讨预防1型糖尿病患者的胰岛β细胞的免疫损伤机制。方法: 用含目的基因的腺病毒载体pAd5/ PD-L1-GPI感染小鼠胰岛瘤细胞株NIT细胞, 提取膜蛋白经Western blotting证实靶细胞高效表达目的蛋白PD-L1-GPI。取小鼠外周血非贴壁的淋巴细胞, 与靶细胞混合淋巴细胞培养,进行淋巴细胞增殖和反应性T细胞功能检测,并检测细胞培养液中IL-2、TNF-α和IFN-γ水平。 结果: 与对照组NIT细胞比较,用PD-L1-GPI修饰的NIT细胞能够更有效地抑制已致敏的淋巴细胞增殖,且下调反应性T细胞分泌的IL-2、IFN-γ和TNF-α等细胞因子水平(P<0.05)。 结论: PD-L1基因在胰岛细胞中表达可有效地抑制已活化的反应性T细胞,阻断自身免疫性T细胞的胞毒作用,诱导免疫耐受,将成为治疗糖尿病的一个有价值的方向。     

GLS和IL-12偶联重组耻垢分枝杆菌免疫效果的观察

目的：研究携带编码人天然颗粒溶素（GLS）和小鼠IL-12基因质粒（pZM03）偶联重组耻垢分枝杆菌（ATCC607）经鼻黏膜免疫小鼠后,小鼠体内的免疫状况.方法：BALB/c小鼠36只,随机分为生理盐水、pZM03、ATCC607、卡介苗（BCG）、重组ATCC607（即携带pZM03的ATCC607）、灭活重组ATCC607组;采用滴鼻法免疫小鼠,BCG组0、14天各1次,其它组0、4、14天各1次,第0天免疫后4周处死小鼠,用ELISA检测血清中IFN-γ、IL-12、IgG2a、lL-4的分泌水平和淋巴细胞PPD诱导的IFN-γ分泌水平以及肺泡灌洗液特异性SIgA的水平,用MTS法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况.结果：重组ATCC607血清中IFN-γ、IL-12水平与BCG组无明显差异但明显高于其他组（P＜0.05）,IgG2a水平重组ATCC607组高于BCG组和其他组（P＜0.05）,各组间IL-4水平差异无统计学意义.重组ATCC607、BCG、灭活重组ATCC607及ATCC607组用PPD均可诱导小鼠脾淋巴细胞增殖,各组间差异无显著意义,但与生理盐水和pZM03组间差异有显著意义（P＜0.05）.重组ATCC607组PPD诱导淋巴细胞IFN-γ明显高于其它组（P＜0.05）,与BCG组比较无显著差异.重组ATCC607等含菌组经鼻黏膜免疫可产生黏膜特异性SIgA.结论：重组ATCC607经鼻黏膜免疫小鼠后,机体特异性免疫特别是细胞免疫和黏膜免疫增强,为重组ATCC607治疗结核病的研究奠定了基础.     

川明参多糖及其硫酸化物对免疫低下小鼠的影响

目的:研究川明参多糖(Chuanmingshen violaceum polysaccharides,CVP)及硫酸化川明参多糖(Solfated chuanmingshen violaceum polysaccharides,SCVP)对免疫低下小鼠部分免疫指标的影响。方法:采用环磷酰胺来诱导小鼠免疫低下;胸腺指数和脾脏指数来衡量免疫器官变化;MTT法检测CVP及SCVP不同剂量对静息期脾脏淋巴细胞、伴刀豆球蛋白A(Con A)处理的脾脏淋巴细胞、脂多糖(LPS)处理的脾脏淋巴细胞增殖活性的影响;血清IFN-γ和IL-2采用ELISA试剂盒检测。结果:CVP和SCVP可以通过提高免疫低下小鼠免疫器官指数、各处理脾脏淋巴细胞增殖活性和血清IFN-γ和IL-2含量,从而提高机体的免疫力。结论:CVP和SCVP可作为免疫增强剂开发应用于临床。     

乳杆菌对原代淋巴细胞中Th1/Th2细胞平衡的影响

目的:分析7种乳杆菌对原代淋巴细胞增殖和细胞因子(CK)分泌的作用,进而探讨其对Th1/Th2细胞平衡的影响。方法:用不同种属、不同浓度的活的/热致死的乳杆菌体外作用于小鼠脾淋巴细胞培养60 h后,采用MTT比色法检测淋巴细胞的增殖效果。用ELISA法检测Th1型细胞因子(IL-12、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)和调节型细胞因子(TGF-β)的分泌量。结果:活的/热致死的乳杆菌单独作用,就能促进淋巴细胞体外增殖并表现出剂量依赖关系(P<0.05)。当菌的浓度为107集落形成单位(CFU)/mL(即细菌与细胞的比例为10∶1)时,热致死的发酵乳杆菌和嗜酸乳杆菌的免疫活性近似于活菌。而且,这两株热致死菌还可适当提高淋巴细胞分泌IL-12和IFN-γ,抑制IL-4、IL-10和TGF-β的分泌,使其IFN-γ/IL-4的比值(代表Th1/Th2细胞平衡)均显著高于刀豆蛋白A(ConA)对照组(P<0.05)。结论:乳杆菌可通过提高淋巴细胞的IFN-γ/IL-4分泌率来促进Th1优势状态的Th1/Th2细胞平衡,并具有菌株特异性。     

口服重组β2糖蛋白1的实验性抗磷脂综合征小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞及Foxp3 mRNA表达变化

目的:观察口服重组人β2糖蛋白1(rhβ2GP1)的实验性抗磷脂综合征(EAPS)小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)数量和功能变化,探讨EAPS口服耐受机制。方法:以rhβ2GP1主动免疫BALB/c小鼠建立EAPS模型,口服耐受组在EAPS小鼠免疫10天前经胃肠道给予rhβ2GP1,在免疫12周后检测各组小鼠抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2-GP1)、抗心磷脂抗体(aCL)、流产率(%)、活化部分凝血活酶时间(aPTT)、血小板计数(PLTPBC);以流式细胞术检测各组小鼠PBMC中CD4+CD25+Treg细胞百分率;RT-PCR检测转录因子Foxp3mRNA的表达。结果:耐受组小鼠与模型组相比,anti-β2-GP1、aCL水平明显降低,aPTT缩短,PLTPBC升高,流产率降低,均具有显著性差异(P0.05);耐受组小鼠PBMC中Foxp3mRNA表达在第4、8、12周均高于对照组(P0.05),此后下降,20周时与正常对照组无明显差异(P0.05),4周时与模型组无差异(P0.05),8周后模型组逐渐降低,12周后降低明显(P0.05);耐受组PBMC中CD4+CD25+Treg细胞百分率与对照组相比,未见显著性差异(P0.05)。结论:CD4+CD25+Treg在口服耐受的诱导中发挥作用。     

下调T细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)促进T细胞增殖并增强其免疫活性

目的利用RNA干扰技术沉默小鼠脾脏T淋巴细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)基因表达,观察TIPE2基因沉默对T淋巴细胞增殖及免疫活性的影响。方法磁珠分选T739小鼠脾脏T细胞,采用Western blot法筛选能有效沉默T淋巴细胞TIPE2基因的小干扰RNA(siRNA)序列。采用TIPE2特异性siRNA、阴性对照siRNA转染T细胞,在转染24 h后,流式细胞术检测T细胞表面CD69水平;转染72 h后,CCK-8法检测转染T淋巴细胞增殖情况,同时,ELISA检测转染T细胞上清液中白细胞介素2(IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)分泌水平。结果成功筛选出特异性沉默TIPE2水平的siRNA序列,下调TIPE2基因表达后,T细胞CD69水平增加;T淋巴细胞增殖能力显著增强,IL-2和IFN-γ水平增加。结论下调TIPE2基因水平,促进T淋巴细胞增殖和免疫活性。     

β2 GP1诱导的EAPS小鼠Treg/Th17细胞比率变化的研究

目的:观察EAPS疾病进展过程中小鼠外周血Th17细胞与CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的比率变化。方法:以重组人β2糖蛋白1(rhβ2GP1)主动免疫BALB/c小鼠建立EAPS模型,免疫12周后检测外周血浆抗β2糖蛋白1抗体(anti-β2GP1)、抗心磷脂抗体(a CA)、IL-17、IL-2、IL-6、TGF-β、活化部分凝血活酶时间(APTT)和血小板计数(PLT)及流产率。流式细胞术(FCM)检测小鼠PBMC中CD4+CD25+Treg及Th17细胞的比率。结果:与对照组相比,模型小鼠anti-β2GP1、a CA、IL-17、IL-2、IL-6水平明显升高,APTT延长,TGF-β降低,PLT升高,流产率提高,差异有统计学意义(P<0.05)。PBMC中CD4+CD25+Treg细胞频率8周前与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),12周后逐渐减少,明显低于对照组(P<0.05);Th17细胞频率逐渐升高,明显高于对照组(P<0.05);CD4+CD25+Treg/Th17比值明显低于对照组(P<0.05)。结论:EAPS小鼠外周血Th17/Treg细胞比率失衡可能在EAPS的发生发展中起重要作用。